CN105541856A - 利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，包括以下步骤：1)将博落回提取物溶解后过滤；2)配置相应的缓冲液A和缓冲液B；3)将过滤得到的博落回溶液注入装有SP-Sepharose？FF填料的层析柱中进行吸附；4)先用所述缓冲液A对所述层析柱冲洗1～3个柱体积，然后利用所述缓冲液B洗脱掉所述层析柱中的杂质，之后再利用所述缓冲液B把目标物从层析柱中洗脱下来。本发明的方法操作简单，能耗小，成本低，纯度高，可得到纯度达98％以上的血根碱和白屈菜红碱。

Description

利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法
技术领域
本发明涉及一种提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，特别是一种利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，属于医药工业提纯技术领域。
背景技术
博落回是罂粟科博落回属多年生高大草本，具有治疗疥癣、疔毒及杀虫灭蛆等多种作用，在我国有悠久的历史，最早记载博落回的文献为《本草拾遗》，现统一命名为博落回，广泛用于医药、生物农药、兽医兽药、精细化工产品原料。博落回中主要化学成分为生物碱，以血根碱和白屈菜红碱的含量最高。
化学农药对人及环境的危害促使农药行业向新型的环境友好型农药开发方向转变，植物源农药的开发就是方向之一。但是，植物源性产品，特别是植物提取物由于本身的特点所限，开发植物农药不是很成功。博落回总生物碱是植物提取物开发成为植物农药的少数成功产品之一。该产品在欧美主要用于蔬菜及水果采摘前期的防虫防菌保护，属于绿色型植物农药的范畴。在药品和口腔护理用品领域，博落回中的血根碱和白屈菜红碱的应用也在日益扩大。
目前，获得血根碱和白屈菜红碱的主要方法是采用传统的离子交换大孔树脂，这种方法简单，但是制备纯度比较低，无法满足生产上的需要；采用C18反相工艺，在纯度上可以满足，但是存在着上样量小，难以满足大规模生产，制备工艺昂贵等不利条件。因此，采用一种简单的制备工艺，具有重要的意义。
发明内容
本发明目的是：针对上述问题，提供一种利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，该方法操作简单，能耗小，成本低，纯度高，可得到纯度达98％以上的血根碱和白屈菜红碱，其既克服了传统大孔树脂工艺制备纯度不高的缺点，又解决了C18反相工艺中上样量小，成本昂贵等缺点。
本发明的技术方案是：一种利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，包括以下步骤：
1)预处理：将博落回提取物溶解后过滤；
2)配制缓冲液：
利用乙酸将20mol/ml的乙酸铵溶液调节至PH＝5，然后将经过PH值调节后的液体与乙醇以4：1的体积比混合，得到缓冲液A；
首先配制出含有20mol/ml乙酸铵、0.5mol/ml氯化钠的乙酸铵-氯化钠混合溶液，然后利用乙酸将所述乙酸铵-氯化钠混合溶液调节至PH＝5，之后将经过PH值调节后的液体与乙醇以4：1的体积比混合，得到缓冲液B；
所述步骤1)和步骤2)的顺序不分先后；
3)上样：将步骤1)过滤得到的博落回溶液注入装有SP-SepharoseFF填料的层析柱中进行吸附；
4)洗脱：先用所述缓冲液A对所述层析柱冲洗1～3个柱体积，然后利用所述缓冲液B洗脱掉所述层析柱中的杂质，之后再利用所述缓冲液B把目标物从层析柱中洗脱下来。
本发明在上述技术方案的基础上，还包括以下优选方案：
在步骤3)进行之前，采用所述缓冲液A对装有SP-SepharoseFF填料的所述层析柱冲洗1～3个进一步优选为3个柱体积；
在所述步骤4)中，用所述缓冲液A对所述层析柱冲洗2个柱体积。
该方法还包括步骤5)，该步骤5)为：
5)再生：使用再生液对所述层析柱冲洗2个柱体积后，重复所述步骤3)和所述步骤4)。
所述再生液为氢氧化钠溶液。
本发明的优点是：
1、本发明操作简单方便，采用弱阳离子交换凝胶填料，既克服了传统大孔树脂工艺制备纯度不高的缺点，又解决了C18反相工艺中上样量小，成本昂贵等缺点。
2、本发明采用一种新型的分离纯化工艺，同时解决了产品纯度和上样量的问题，操作方法简单，大大降低了经济成本和时间成本，有利于工业大规模生产。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为血根碱的分子结构图；
图2为白屈菜红碱的分子结构图。
图3为本发明实施例中博落回提取物经过步骤4)洗脱处理后的分析图。该图中，横轴表示时间，其单位为min；纵轴表示紫外吸收高度，其单位为紫外吸收值mAu；曲线为紫外吸收波长曲线，上面数据主要是显示样品的保留时间及样品中各组分的含量百分比。这幅图表明了最终做出样品的纯度，图中9.5min的峰为血根碱，16min的峰为白屈菜红碱，可以看出血根碱和白屈菜红碱的纯度之和在98％以上。
具体实施方式
以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体厂家的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。
本实施所公开的这种利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，包括以下步骤：
1)预处理：将博落回提取物溶解后，过滤。
过滤后得到的博落回溶液呈澄清透明状态，无固体杂质。
2)配制缓冲液：
利用乙酸将20mol/ml的乙酸铵溶液调节至PH＝5，然后将经过PH值调节后的液体与乙醇以4：1的体积比混合，得到缓冲液A；
首先配制出含有20mol/ml乙酸铵、0.5mol/ml氯化钠的乙酸铵-氯化钠混合溶液，然后利用乙酸将所述乙酸铵-氯化钠混合溶液调节至PH＝5，之后将经过PH值调节后的液体与乙醇以4：1的体积比混合，得到缓冲液B；
所述步骤1)和步骤2)的顺序不分先后；
3)上样：将上述步骤1)过滤得到的博落回溶液，以合适的流速泵入其内装有SP-SepharoseFF填料的层析柱中进行吸附。上样过程中需保持流速稳定。
作为优选，在该步骤3)进行之前，先采用所述缓冲液A对装有SP-SepharoseFF填料的所述层析柱冲洗1～3个(优选为3个，即冲洗用缓冲液A的体积为层析柱容积的1～3倍，优选为3倍)柱体积，使层析柱维持在合适的PH值范围内。
4)洗脱：先用所述缓冲液A对所述层析柱冲洗1～3个(优选为2个)柱体积，然后利用所述缓冲液B洗脱掉所述层析柱中的杂质，之后再利用所述缓冲液B把目标物从层析柱中洗脱下来，得到含有高纯血根碱和白屈菜红碱的液体。
参照图3所示，经分析，本实施例这种方法所提取出来的高纯血根碱和白屈菜红碱纯度达到了99％以上。
为了让所述层析柱能够反复使用，而继续在新的博落回提取物提取高纯血根碱和白屈菜红碱，本实施例还进行了下述步骤5)，具体为：
5)再生：使用再生液对所述层析柱中冲洗2个柱体积后，重复所述步骤3)和步骤4)。
本例中，所述再生液为氢氧化钠溶液。
当然，上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让人们能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明主要技术方案的精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
1)预处理：将博落回提取物溶解后过滤；
2)配制缓冲液：
利用乙酸将20mol/ml的乙酸铵溶液调节至PH＝5，然后将经过PH值调节后的液体与乙醇以4：1的体积比混合，得到缓冲液A；
首先配制出含有20mol/ml乙酸铵、0.5mol/ml氯化钠的乙酸铵-氯化钠混合溶液，然后利用乙酸将所述乙酸铵-氯化钠混合溶液调节至PH＝5，之后将经过PH值调节后的液体与乙醇以4：1的体积比混合，得到缓冲液B；
所述步骤1)和步骤2)的顺序不分先后；
3)上样：将步骤1)过滤得到的博落回溶液注入装有SP-SepharoseFF填料的层析柱中进行吸附；
4)洗脱：先用所述缓冲液A对所述层析柱冲洗1～3个柱体积，然后利用所述缓冲液B洗脱掉所述层析柱中的杂质，之后再利用所述缓冲液B把目标物从层析柱中洗脱下来。
2.根据权利要求1所述的利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，其特征在于：在步骤3)进行之前，采用所述缓冲液A对装有SP-SepharoseFF填料的所述层析柱冲洗1～3个柱体积。
3.根据权利要求2所述的利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，其特征在于：在步骤3)进行之前，采用所述缓冲液A对装有SP-SepharoseFF填料的所述层析柱冲洗3个柱体积。
4.根据权利要求1所述的利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，其特征在于：在所述步骤4)中，用所述缓冲液A对所述层析柱冲洗2个柱体积。
5.根据权利要求1所述的利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，其特征在于该方法还包括步骤5)，该步骤5)为：
5)再生：使用再生液对所述层析柱冲洗2个柱体积后，重复所述步骤3)和所述步骤4)。
6.根据权利要求5所述的利用层析技术提取高纯血根碱和白屈菜红碱的方法，其特征在于：所述再生液为氢氧化钠溶液。
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