CN105541645A

CN105541645A - 提取枳实中辛弗林的方法

Info

Publication number: CN105541645A
Application number: CN201610120050.2A
Authority: CN
Inventors: 单杨; 李高阳; 李绮丽; 张菊华; 刘伟; 苏东林
Original assignee: HUNAN PROV AGRICULTURAL PRODUCT PROCESSING INST
Current assignee: HUNAN PROV AGRICULTURAL PRODUCT PROCESSING INST
Priority date: 2016-03-03
Filing date: 2016-03-03
Publication date: 2016-05-04

Abstract

本发明公开了一种提取枳实中辛弗林的方法，包括以下步骤：将枳实粉碎成枳实粉，然后与水混合，通过由果胶酶和纤维素酶组成的复合酶进行酶解得到酶解混合液；将酶解混合液进行灭酶处理得到灭酶混合液；将灭酶混合液进行超声波提取得到提取液；将提取液经真空抽滤，冷冻干燥得到辛弗林粉末，具有提取效率高、操作简单、设备简单、成本低、处理条件温和、酶法提取专一性强、提取时间短并且能耗低，环保又安全等优势。

Description

提取枳实中辛弗林的方法

技术领域

本发明涉及生物分离技术领域，尤其涉及一种提取枳实中辛弗林的方法。

背景技术

枳实，属芸香科植物酸橙及栽培变种或甜橙的干燥幼果，是一种中药材，主要用于治疗积滞内停、痞满胀痛、大便不通等症状，具有破气消积、化痰散痞的作用。枳实的主要有效成分为生物碱类、黄酮类及挥发油类。其中生物碱类又以辛弗林的为主。辛弗林是枳实提取物中的主要活性成分，是枳实的药理作用中的有效组成。现代研究表明，辛弗林能够促进新陈代谢、收缩血管、升压强心、扩张气管和支气管、氧化脂肪，是一种天然的兴奋剂，无副作用。因此，辛弗林被广泛应用于医药、食品等保健行业。

我国柑橘种植面积广阔，枳实原料来源丰富，价格低廉，具有较大的开发利用价值。随着辛弗林需求量的增加，辛弗林的价值也逐渐提升。利用枳实资源提取辛弗林，将有助于提高枳实的综合利用，充分发挥枳实的药用、食用价值。

辛弗林是生物碱中的麻黄碱类，分子式C₉H₁₃NO，分子结构中存在酚羟基和氨基，因此它具有两性性质。辛弗林难溶于水，但其酸式盐与碱式盐易溶于水。目前从枳实中提取辛弗林的方法主要有浸渍法、渗漉法、煎煮法、热回流法、连续回流法、水提醇沉法、酸提取法，近年来有超临界萃取、树脂色谱法等新型提取工艺，加上微波法、超声法辅助提取，有效地提高了枳实中辛弗林的提取率。传统的煎煮法、回流法提取辛弗林，其加热工序会造成辛弗林损失；渗漉法、浸渍法耗时长、提取率低；有机溶剂提取会造成环境污染；新型提取工艺效果优异但对试验条件有一定限制，且成本高。为了解决这些问题，需要确定一种高效、绿色的辛弗林提取方法。

醇水提取现已成为提取药用植物中活性成分的基本方法，虽提取率较高，但对环境污染大，违背了绿色发展的理念，也不适宜长期工业化生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种水酶法辅助超声耦合无醇提取枳实中辛弗林的方法，枳实中辛弗林的提取率高、操作简单、设备简单、成本低、处理条件温和、酶法提取专一性强、提取时间短并且能耗低，环保又安全。

为解决上述技术问题，提供了一种提取枳实中辛弗林的方法，包括以下步骤：

（1）将枳实粉碎成枳实粉，然后与水混合，通过由果胶酶和纤维素酶组成的复合酶进行酶解得到酶解混合液；

（2）将所述酶解混合液进行灭酶处理得到灭酶混合液；

（3）将所述灭酶混合液进行超声波提取得到提取液；

（4）将所述提取液经减压抽滤，冷冻干燥得到辛弗林粉末。

上述的方法，优选的，所述步骤（1）中，所述粉碎具体为：将枳实粉碎后过40～100目筛，得到枳实粉。

上述的方法，优选的，所述步骤（1）中，所述酶解具体为：将所述枳实粉与水混合，加入相当于所述枳实粉质量0.4wt%～1.0wt%的复合酶进行酶解。

上述的方法，优选的，所述酶解的温度为40℃～60℃；酶解时间为0.5h～2h。

上述的方法，优选的，所述枳实粉与水的质量体积比为1g∶6mL～1g∶12mL。

上述的方法，优选的，所述复合酶中，所述果胶酶与所述纤维素酶的质量比为3∶1～6∶1；所述果胶酶的酶活为30000～100000U/g，所述纤维素酶的酶活力为10000～70000U/g。

上述的方法，优选的，所述步骤（2）中，所述灭酶处理的温度为：80℃～90℃，灭酶处理的时间为20min～30min。

上述的方法，优选的，在所述超声提取之前，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节所述灭酶混合液的pH至5.0～6.0。

上述的方法，优选的，所述步骤（3）中，所述超声波提取的功率为300w～500w，超声波提取时间为10min～40min，超声波提取的温度为40℃～60℃。

上述的方法，优选的，所述步骤（4）中，所述冷冻干燥的温度为﹣20℃～﹣40℃；冷冻干燥时间为10～20小时。

本发明的枳实为芸香科植物酸橙及栽培变种或甜橙的干燥幼果，幼果5～6月采摘，果皮绿色，果实呈球形、半球形或卵圆形，直径0.5～2.0cm。采摘后自中部横切为两半，晒干或低温干燥，较小者直接晒干或低温干燥。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

（1）本发明提供了一种提取枳实中辛弗林的方法，采用水酶法与超声耦合无醇提取相结合，相比目前用的溶剂加热回流、微波提取、超临界CO₂流体萃取、超声波辅助有机试剂提取法，极大程度地提高了辛弗林的提取率，同时，该方法操作简单、设备简单、成本低、处理条件温和、酶法提取专一性强、提取时间短并且能耗低，环保又安全。

（2）本发明提供了一种提取枳实中辛弗林的方法，根据枳实的特征与酶的高度专一性等特点，选用纤维素酶与果胶酶的复合酶提取，因为纤维素酶能水解结构致密的植物细胞壁，果胶酶能将大量的淀粉、蛋白质等不溶物水解，同时，果胶酶可以降解枳实中存在的果胶，使提取液不粘稠，易于分离。双酶联合作用争对性强，不仅可以缩短提取时间，减少溶剂用量，还能有效地提高活性成分的提取率和料液的过滤速度，为超声耦合无醇提取作铺垫。

（3）本发明提供了一种提取枳实中辛弗林的方法，首先，利用双酶联合处理快速水解植物细胞壁，其次，利用辛弗林溶于热酸水的特点，通过调节溶液酸碱度，再结合超声波强烈振动带来的空化、粉碎作用来促进枳实中辛弗林的溶出，从而，极大程度地提高了辛弗林的提取率。

附图说明

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。

图1为提取枳实中辛弗林的工艺流程图。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。

实施例

以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。

实施例1

参见图1，一种本发明的水酶法-超声耦合无醇提取枳实中辛弗林的方法，具体包括以下步骤：

（1）挑选果径为1.5cm的枳实采用粉碎机粉碎、过60目筛得到枳实粉。

（2）将枳实粉和蒸馏水按照重量体积比为1g∶8mL的比例混合，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH值至4.5得到混合溶液。在混合溶液中加入相当于枳实粉重量的0.6wt%的复合酶（复合酶为果胶-纤维素复合酶，其中果胶和纤维素酶的比例为4∶1，果胶酶的酶活为100000U/g，纤维素酶的酶活为70000U/g）；然后置于50℃水浴锅中酶解1h，冷却得到酶解混合液。

（3）将步骤（2）中得到的酶解混合液在在85℃保持30min，进行灭酶处理得到灭酶混合液。

（4）将灭酶混合液用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH值至5.5，在温度为45℃、超声波功率为400w下提取15min，得到提取液。

（5）将提取液过0.45μm有机滤膜减压抽滤后，在冷冻干燥的温度为﹣40℃，冷冻干燥时间为14小时条件下得到枳实辛弗林粉。采用HPLC法测定辛弗林的含量。该实施例条件下测得的枳实中辛弗林提取率为5.87%。

实施例2

（1）挑选果径为1.5cm的枳实采用粉碎机粉碎、过80目筛得到枳实粉。

（2）将枳实粉和蒸馏水按照重量体积比为1g∶6mL的比例混合，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH值至4.0得到混合溶液。在混合溶液中加入相当于枳实粉重量的0.8wt%的复合酶（复合酶为果胶-纤维素复合酶，其中果胶和纤维素酶的比例为5∶1，果胶酶的酶活为100000U/g，纤维素酶的酶活为70000U/g）；然后置于42℃水浴锅中酶解2h，冷却得到酶解混合液。

（3）将步骤（2）中得到的酶解混合液在在90℃保持20min，进行灭酶处理得到灭酶混合液。

（4）将灭酶混合液用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH值至5.0，在温度为50℃、超声波功率为350w下提取30min，得到提取液。

（5）将提取液过0.45μm有机滤膜减压抽滤后，在冷冻干燥的温度为﹣40℃，冷冻干燥时间为14小时条件下得到枳实辛弗林粉。采用HPLC法测定辛弗林的含量。

该实施例条件下的辛弗林提取率为6.01%。

实施例3

（1）挑选果径约为1.5cm的枳实采用粉碎机粉碎、过80目筛得到枳实粉。

（2）将枳实粉和蒸馏水按照重量体积比为1g∶10mL的比例混合，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH至4.5得到混合溶液。在混合溶液中加入相当于枳实粉重量的1.0wt%的复合酶（复合酶为果胶-纤维素复合酶，其中果胶和纤维素酶的比例为3∶1，果胶酶的酶活为100000U/g，纤维素酶的酶活为70000U/g）；然后置于50℃水浴锅中酶解45min，冷却得到酶解混合液。

（3）将步骤（2）中得到的酶解混合液在在80℃保持30min，进行灭酶处理得到灭酶混合液。

（4）将灭酶混合液用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH值至5.5，在温度为60℃、超声波功率为420w下提取15min，得到提取液。

该实施例条件下的辛弗林提取率为5.74%。

实施例4

（3）将步骤（2）中得到的酶解混合液在80℃保持30min，进行灭酶处理得到灭酶混合液。

（4）将灭酶混合液用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH值至5.5，在温度为65℃、超声波功率为600w下提取10min，得到提取液。

该实施例条件下的辛弗林提取率为5.58%。

对比例1

（2）将枳实粉和蒸馏水按照重量体积比为1g∶6mL的比例混合，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH至4.0得到混合溶液。在混合溶液中加入相当于枳实粉重量的1.0wt%的复合酶（复合酶为果胶-纤维素复合酶，其中果胶和纤维素酶的比例为5∶1，果胶酶的酶活为果胶酶的酶活为100000U/g，纤维素酶的酶活为70000U/g）；然后置于42℃水浴锅中酶解2h，冷却得到酶解混合液。

（4）将灭酶混合液过0.45μm有机滤膜减压抽滤后，经冷冻干燥得到枳实辛弗林粉。采用HPLC法测定辛弗林的含量。

该实施例条件下的辛弗林提取率为3.78%。

对比例2

（2）将枳实粉和蒸馏水按照重量体积比为1g∶6mL的比例混合，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节pH至5.0得到混合溶液。

（3）将混合溶液，在温度为50℃、超声波功率为400w下提取40min，得到提取液。

（3）将提取液过0.45μm有机滤膜减压抽滤后，经冷冻干燥得到枳实辛弗林粉。采用HPLC法测定辛弗林的含量。

该实施例条件下的辛弗林提取率为4.46%。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明的精神实质和技术方案的情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。

Claims

1.一种提取枳实中辛弗林的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（2）将所述酶解混合液进行灭酶处理得到灭酶混合液；

（3）将所述灭酶混合液进行超声波提取得到提取液；

（4）将所述提取液经减压抽滤，冷冻干燥得到辛弗林粉末。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述粉碎具体为：将枳实在50℃下烘干至恒重，粉碎后过40～100目筛，得到枳实粉。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述酶解具体为：将所述枳实粉与水混合，加入相当于所述枳实粉质量0.4wt%～1.0wt%的复合酶进行酶解。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述酶解的温度为40℃～60℃；酶解时间为0.5h～2h。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述枳实粉与水的质量体积比为1g∶6mL～1g∶12mL。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述复合酶中，所述果胶酶与所述纤维素酶的质量比为3∶1～6∶1；所述果胶酶的酶活为30000～100000U/g，所述纤维素酶的酶活力为10000～70000U/g。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述灭酶处理的温度为：80℃～90℃，灭酶处理的时间为20min～30min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述超声提取之前，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液调节所述灭酶混合液的pH至5.0～6.0。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述超声波提取的功率为300w～500w，超声波提取时间为10min～40min，超声波提取的温度为40℃～60℃。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中，所述冷冻干燥的温度为﹣20℃～﹣40℃；冷冻干燥时间为10～20小时。