CN109645304A - 一种桑叶健康食品基料的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种桑叶健康食品基料的制备方法;包括:a.粉碎:以桑科桑属植物桑树的叶子为原料,表面清洗,晾干后粉碎得到桑叶粉;b.预酶解:桑叶粉原料中按比例加水和纤维素酶,预酶解;c.超声波辅助酶法提取:再次加入一定体积的水及复合酶,同时施加超声波辐照,提取,得到桑叶粗提液A;d.精制:将桑叶粗提液A先通过分子量10000Da的超滤膜,收集透过液;透过液再通过分子量500Da的超滤膜收集截留液,截留液经减压浓缩、喷雾干燥,即得。本发明制备得到的桑叶健康食品基料,其主要成分为黄酮和N‑糖类化合物;本发明采用酶法预处理及超声波辅助酶法提取技术,可大幅提高桑叶黄酮和生物碱的提取率,且具有工艺简便、绿色高效、效果显著等特点。
Description
技术领域
本发明涉及天然产物提取技术领域,具体涉及一种桑叶健康食品基料的制备方法。
背景技术
桑叶为桑科植物桑(Morus alba L.)的干燥叶,我国大部分地区均有生产,资源极其丰富。桑叶除用作养蚕外,自古以来就是一种优良的中药材,在我国多部医药典籍,如《神农本草经》和《本草纲目》均有记载,有着悠久的临床药用历史。桑叶除含有丰富的蛋白质、维生素、矿物质等营养成分外,还含有黄酮类化合物物,如桑酮X,芦丁、槲皮素、异槲皮苷、儿茶素及紫云英苷等;以及N-糖类化合物(如脱氧野尻霉素(DNJ),荞麦碱等)和多糖等活性成分。现代药理学研究表明,桑叶具有降血糖、抗氧化、降血脂、抗感染及抑菌抗病毒等作用。
随着经济发展、现代化和城市化所推动的环境变化,我国亚健康群体数量庞大,已成为严重的公共健康问题。同时随着人们对“治未病”和“食疗养生”理念的逐渐认同,作为“既是食品又是药品”资源的桑叶越来越收到人们的关注,充分利用桑叶资源开发健康食品基料,用于研制凉茶饮料、保健食品或药品,具有广阔的市场前景和巨大的经济与社会效益。
目前,关于桑叶健康食品基料制备的相关专利还鲜有报道。但关于桑叶活性物质的提取与纯化已有较多相关专利,如CN101862372A 公开了一种利用碱水加热提取并过大孔树脂的方法生产桑叶黄酮的工艺,CN1762428 公开了利用超临界二氧化碳从桑叶中萃取DNJ和黄酮两种有效成分的方法。以上专利是对桑叶中一种或几种具有生物活性物质的提取,提取剂多为乙醇,提取时间长,且成本较高。利用碱水提取则加入了难以除去的杂质,可能污染环境。而利用超临界二氧化碳萃取的方法,具有产量低,能耗高,成本投入大等缺点。
发明内容
鉴于此,本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供一种桑叶健康食品基料的制备方法,该方法工艺简便,绿色高效,可应用于工业化生产。
为了达成上述目的,本发明采用如下技术方案实现:
本发明所述的一种桑叶健康食品基料的制备方法,包括如下步骤:
a. 粉碎:以桑科桑属植物桑树的叶子为原料,将该新鲜桑叶进行表面清洗,除掉桑叶上的尘土,晾干后粉碎称量,得到桑叶粉;
b. 预酶解:将桑叶粉原料装入提取容器中,加入原料5~10倍体积的水,以及为原料重量1~5%的纤维素酶,保持温度50℃,酶解5h,过滤;
c. 超声波辅助酶法提取:再次加入桑叶粉原料5~10倍体积的水,以及为原料重量1~5%的复合酶,同时施加超声波辐照,提取温度50℃,提取时间3h,过滤;合并步骤b,c中的滤液,得到桑叶粗提液A;
d. 精制:将桑叶粗提液A先通过分子量10000Da 的超滤膜,收集透过液;透过液再通过分子量500Da的超滤膜收集截留液,截留液经减压浓缩、喷雾干燥,即得桑叶健康食品基料。
其中,步骤c中所述的复合酶为果胶酶、半纤维素酶、木瓜蛋白酶、β-葡聚糖酶、α-鼠李糖酶五种酶的复配,且果胶酶:半纤维素酶:木瓜蛋白酶:β-葡聚糖酶:α-鼠李糖酶的质量比为6~8:2~4:2~4:1~3:1。
其中,步骤c中采用的超声波频率为30~50KHz,超声波功率为300~500W,每次超声时间为30~50 min,每次间隔时间为10~30 min。
与现有技术相比,本发明的有益效果如下:
1)本发明采用纤维素酶预处理桑叶原料,通过酶的作用裂解桑叶细胞壁,使得活性物质更充分的释放到细胞外,从而降低提取难度。
2)本发明采用超声波辅助酶法提取桑叶中的活性物质,利用超声波的空化作用和机械效应配合酶的裂解作用能极大地加速胞内活性物质的释放、扩散和溶解,显著提高提取效率。同时本发明采用的复合酶还能将原本极性较低、水溶性较差的黄酮苷元转为更高极性、更好水溶性的黄酮苷,从而提高总黄酮在纯水体系中的提取率。且本发明可以避免乙醇等有机溶剂的使用,降低成本。
3)本发明采用多级膜截留法利用超滤膜对桑叶粗提物进行纯化,与传统的大孔树脂纯化工艺相比,效率更高、能耗更小,对环境友好,更易于控制产品质量。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明,以下实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。
本发明实施例所采用的原料均可通过市售得到。
各性能指标的测试方法如下:
黄酮含量:采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法,以芦丁为标准品;
桑酮X含量:采用高效液相色谱-外标法,以桑酮X标准品绘制标准曲线;
1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量:采用高效液相色谱-外标法,以DNJ标准品绘制标准曲线。
实施例1
一种桑叶健康食品基料的制备方法,包括如下步骤:
a. 粉碎:以桑科桑属植物桑树的叶子为原料,将该新鲜采摘的桑叶用去离子水进行表面清洗,然后晾干后粉碎,得到桑叶粉;
b. 预酶解:称取1kg桑叶粉,加入7.5L的水,3%的纤维素酶进行预酶解,保持温度50℃,酶解5h,过滤;
c. 提取:再次加入7.5L的水,3%的复合酶,该复合酶中果胶酶:半纤维素酶:木瓜蛋白酶:β-葡聚糖酶:α-鼠李糖酶 的质量比为7:3:3:2:1,;同时施加超声波辐照,超声波频率为40KHz,超声波功率为400W,每次超声时间为40min,每次间隔时间为20 min,温度50℃,提取时间3h,过滤;
合并步骤b,c中的滤液,得到桑叶粗提液A;
d. 精制:将桑叶粗提液A先通过分子量10000Da 的超滤膜,收集透过液;透过液再通过分子量500Da的超滤膜收集截留液,截留液经减压浓缩、喷雾干燥,得到桑叶健康食品基料,测得黄酮含量为38.33%,桑酮X含量为0.10%,DNJ含量为1.03%。
实施例2
一种桑叶健康食品基料的制备方法,包括如下步骤:
a. 粉碎:以桑科桑属植物桑树的叶子为原料,将该新鲜采摘的桑叶用去离子水进行表面清洗,然后晾干后粉碎,得到桑叶粉;
b. 预酶解:称取1kg桑叶粉,加入5L的水,1%的纤维素酶进行预酶解,保持温度50℃,酶解5h,过滤;
c. 提取:再次加入5L的水,1%的复合酶,该复合酶中果胶酶:半纤维素酶:木瓜蛋白酶:β-葡聚糖酶:α-鼠李糖酶的质量比为6:2:2:1:1;同时施加超声波辐照,超声波频率为30KHz,超声波功率为300W,每次超声时间为30min,每次间隔时间为30 min,温度50℃,提取时间3h,过滤;
合并步骤b,c中的滤液,得到桑叶粗提液A;
d. 精制:将桑叶粗提液A先通过分子量10000Da 的超滤膜,收集透过液;透过液再通过分子量500Da的超滤膜收集截留液,截留液经减压浓缩、喷雾干燥,得到桑叶健康食品基料,测得黄酮含量为31.54%,桑酮X含量为0.06%,DNJ含量为0.72%。
实施例3
一种桑叶健康食品基料的制备方法,包括如下步骤:
a. 粉碎:以桑科桑属植物桑树的叶子为原料,将该新鲜采摘的桑叶用去离子水进行表面清洗,然后晾干后粉碎,得到桑叶粉;
b. 预酶解:称取1kg桑叶粉,加入10L的水,5%的纤维素酶进行预酶解,保持温度50℃,酶解5h,过滤;
c. 提取:再次加入10L的水,5%的复合酶,该复合酶中果胶酶:半纤维素酶:木瓜蛋白酶:β-葡聚糖酶:α-鼠李糖酶的质量比为8:4:4:3:1;同时施加超声波辐照,超声波频率为50KHz,超声波功率为500W,每次超声时间为50min,每次间隔时间为10 min,温度50℃,提取时间3h,过滤;
合并步骤b,c中的滤液,得到桑叶粗提液A;
d. 精制:将桑叶粗提液A先通过分子量10000Da 的超滤膜,收集透过液;透过液再通过分子量500Da的超滤膜收集截留液,截留液经减压浓缩、喷雾干燥,得到桑叶健康食品基料,测得黄酮含量为36.51%,桑酮X含量为0.07%,DNJ含量为0.85%。
对比例1
一种桑叶健康食品基料的制备方法:不使用纤维素酶预酶解,直接水提一次,其余同实施例1,具体步骤如下:
a. 粉碎:以桑科桑属植物桑树的叶子为原料,将该新鲜采摘的桑叶用去离子水进行表面清洗,然后晾干后粉碎,得到桑叶粉;
b. 第一次水提:称取1kg桑叶粉,加入7.5L的水,保持温度50℃,浸提5h,过滤;
c. 超声波辅助酶法提取:再次加入7.5L的水,3%的复合酶,该复合酶中果胶酶:半纤维素酶:木瓜蛋白酶:β-葡聚糖酶:α-鼠李糖酶的质量比为7:3:3:2:1;同时施加超声波辐照,超声波频率为40KHz,超声波功率为400W,每次超声时间为40min,每次间隔时间为20 min,温度50℃,提取时间3h,过滤;
合并步骤b,c中的滤液,得到桑叶粗提液A;
d. 精制:将桑叶粗提液A先通过分子量10000Da 的超滤膜,收集透过液;透过液再通过分子量500Da的超滤膜收集截留液,截留液经减压浓缩、喷雾干燥,得到桑叶健康食品基料,测得黄酮含量为23.33%,桑酮X含量为0.01%,DNJ含量为0.33%。
对比例2
一种桑叶健康食品基料的制备方法:传统热水浸提,采用大孔树脂AB-8纯化,具体步骤如下:
a. 粉碎:以桑科桑属植物桑树的叶子为原料,将该新鲜采摘的桑叶用去离子水进行表面清洗,然后晾干后粉碎,得到桑叶粉;
b. 第一次水提:称取1kg桑叶粉,加入7.5L的水,沸水浸提3h,过滤;
c. 第二次水提:再次加入7.5L的水,沸水浸提2h,过滤;
合并步骤b,c中的滤液,得到桑叶粗提液A;
d. 精制:将桑叶粗提液A以1 BV/h 流速上大孔树脂AB-8柱,然后用10L 水冲洗,冲洗流速为2BV/h,弃去流出液;用70%乙醇水溶液1BV/h解析,当流出液流出1L 后开始接收,最后流出液经减压浓缩、喷雾干燥,得到桑叶健康食品基料,测得黄酮含量为13.05%,桑酮X未检出,DNJ未检出。
对比例3
一种桑叶健康食品基料的制备方法:传统醇提,采用大孔树脂AB-8纯化,具体步骤如下:
a. 粉碎:以桑科桑属植物桑树的叶子为原料,将该新鲜采摘的桑叶用去离子水进行表面清洗,然后晾干后粉碎,得到桑叶粉;
b. 第一次提取:称取1kg桑叶粉,加入7.5L 70%的乙醇水溶液,提取温度50℃,提取3h,过滤;
c. 第二次提取:再次加入7.5L 70%的乙醇水溶液,提取温度50℃,提取2h,过滤;
合并步骤b,c中的滤液,得到桑叶粗提液A;
d. 精制:将桑叶粗提液A减压浓缩去除乙醇后,以1 BV/h 流速上大孔树脂AB-8柱,然后用10L 水冲洗,冲洗流速为2BV/h,弃去流出液;用70%乙醇水溶液1BV/h解析,当流出液流出1L 后开始接收,最后流出液经减压浓缩、喷雾干燥,得到桑叶健康食品基料,测得黄酮含量为21.62%,桑酮X未检出,DNJ含量为0.12%。
结论
1)纤维素酶预酶解对桑叶健康食品基料产品中的黄酮和N-糖类物质影响较大,添加纤维酶预酶解后,产品中黄酮物质的含量较对比例1提高了35.19%。
2)相较传统水提取法(对比例2),本发明公开的一种桑叶健康食品基料的制备方法所制得的产品中黄酮含量提高了141.68%以上,同时特征黄酮物质:桑酮X的含量达到0.06%以上,特征N-糖类物质:DNJ的含量达到0.72%以上。
3)相较传统醇提取法(对比例3),本发明公开的一种桑叶健康食品基料的制备方法所制得的产品中黄酮含量提高了52.96%以上,特征N-糖类物质:DNJ的含量提高了5倍以上。同时减少了乙醇的使用,节约了成本,降低了污染风险。
Claims (3)
1.一种桑叶健康食品基料的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
a. 粉碎:以桑科桑属植物桑树的叶子为原料,将该新鲜桑叶进行表面清洗,除掉桑叶上的尘土,晾干后粉碎称量,得到桑叶粉;
b. 预酶解:将桑叶粉原料装入提取容器中,加入原料5~10倍体积的水,以及为原料重量1~5%的纤维素酶,保持温度50℃,酶解5h,过滤;
c. 超声波辅助酶法提取:再次加入桑叶粉原料5~10倍体积的水,以及为原料重量1~5%的复合酶,同时施加超声波辐照,提取温度50℃,提取时间3h,过滤;合并步骤b,c中的滤液,得到桑叶粗提液A;
d. 精制:将桑叶粗提液A先通过分子量10000Da 的超滤膜,收集透过液;透过液再通过分子量500Da的超滤膜收集截留液,截留液经减压浓缩、喷雾干燥,即得桑叶健康食品基料。
2.根据权利要求1所述的一种桑叶健康食品基料的制备方法,其特征在于,步骤c中所述的复合酶为果胶酶、半纤维素酶、木瓜蛋白酶、β-葡聚糖酶、α-鼠李糖酶五种酶的复配,且果胶酶:半纤维素酶:木瓜蛋白酶:β-葡聚糖酶:α-鼠李糖酶的质量比为6~8:2~4:2~4:1~3:1。
3.根据权利要求1所述的一种桑叶健康食品基料的制备方法,其特征在于,步骤c中采用的超声波频率为30~50KHz,超声波功率为300~500W,每次超声时间为30~50 min,每次间隔时间为10~30 min。
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