CN105535267A - 玫瑰茄-绿茶组合物在改善饮食诱导的代谢紊乱中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及玫瑰茄-绿茶组合物在改善饮食诱导的代谢紊乱中的应用。具体而言,本发明提供一种水提物或含该水提物的组合物,其中,该水提物为玫瑰茄花与绿茶混合物的水提物,或者为玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物。本发明发现玫瑰茄和绿茶的水提物可以显著的减缓高脂高糖饮食诱导的小鼠体重和附睾脂肪重量增加,降低血糖血脂,改善小鼠肝脏脂肪沉积,增加胰岛素敏感性,但对其饮食量及饮水量没有明显的影响。并且还发现玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液可以通过增加肝脏脂肪酸氧化和降低脂质合成,从而降低脂肪肝;另外,其可以通过抑制mTORC1/S6K途径降低胰岛素抵抗。
Description
技术领域
本发明涉及玫瑰茄-绿茶组合物在改善饮食诱导的代谢紊乱中的应用。
背景技术
随着生活水平的提高和膳食结构的改变,以肥胖、非酒精性脂肪肝、高胰岛素、高血压、高血脂等为表型的代谢综合征(metabolismsyndrome,MS)的发病率逐年升高并且具有年轻化的趋势,成为了危害人类健康的一类疾病〔Alberti,K.G.,P.Zimmet,和J.Shaw,Metabolicsyndrome--anewworld-widedefinition.AConsensusStatementfromtheInternationalDiabetesFederation,DiabetMed,2006,23(5):p.469-80〕。其中糖脂代谢与健康的关系越来越受到重视。由于脂肪代谢紊乱引起的高血脂是脂肪肝、肥胖、冠心病和动脉粥状硬化等其他慢性病的重要因素〔Kadowaki,T.等,Adiponectinandadiponectinreceptorsininsulinresistance,diabetes,andthemetabolicsyndrome,JClinInvest,2006,116(7):p.1784-92〕,因此寻找到有效预防和控制代谢紊乱的药物,对于防治代谢病具有重要的现实意义。另外,如果寻找到可以预防脂代谢紊乱的食物或者饮品,不仅有助于人类慢性代谢疾病防患于未然,而且还能有效缓解对人类健康带来的危害。
茶叶及代茶类饮品在饮料、食品、保健品中占据重要的地位。茶叶的化学组成:蛋白质(15-20%干重),碳水化合物(5-7%干重),矿物质和微量元素(5%干重)和少量的脂类等。绿茶是茶叶中最为普遍的一种,其作为一种饮料具有广大的市场,尤其在亚洲国家。绿茶是未经发酵的茶,保留了鲜叶的天然物质,其富含茶多酚、儿茶素、叶绿素、咖啡碱、氨基酸、维生素等营养成分。已有研究表明绿茶中的这些天然营养成分具有抗氧化、抗癌、保护心脏等作用〔Geleijnse,J.M.等,Teaflavonoidsmayprotectagainstatherosclerosis:theRotterdamStudy,ArchInternMed,1999,159(18):p.2170-4〕,并且其在调节能量稳态方面起到降低体重和体脂含量的作用〔SudanoRoccaro,A.等,Epigallocatechin-gallateenhancestheactivityoftetracyclineinstaphylococcibyinhibitingitseffluxfrombacterialcells,AntimicrobAgentsChemother,2004,48(6):p.1968-73〕。另外,绿茶中还含有丰富的类黄酮,已有流行病学调查证实,富含类黄酮食物的摄入量与动脉粥样硬化的发生率和死亡率呈负相关,而荷兰另一项流行病学调查研究则表明茶叶类黄酮可以明显预防缺血性心脏病,这可能与其降血脂、促纤溶、抗血小板聚集、防治动脉粥样硬化、保护心肌的作用相关〔Geleijnse,J.M.等,Teaflavonoidsmayprotectagainstatherosclerosis:theRotterdamStudy,ArchInternMed,1999,159(18):p.2170-4〕。
近年来人们对养生保健的认知和需求逐步提高,而花茶则在时尚爱美人群中备受推崇。花茶,即将植物的花或其果实泡制而成的茶,是中国特有的一类再加工茶。其主要以绿茶、红茶或者乌龙茶作为茶坯,配以能够吐香的鲜花作为原料,并采用窖制工艺制作而成。事实上,我国鲜花资源丰富,饮用花茶的历史悠久,而且人们对花茶的医疗保健作用也有了一定认识。比如玫瑰花茶有健脾、强肝、降血糖等作用〔周达、鲁晓翔和罗成,“玫瑰花黄酮对糖尿病小鼠的降血糖作用”,《食品工业科技》,2011(02):p.319-321〕;茉莉花茶有滋阴、降血糖的等作用;金盏花茶有抗氧化、降血糖、降血脂等作用〔孙曼等,“金盏花药学研究概况”《安徽农业科学》,2011(34):p.20982-20983〕。由此可见,花茶具有广阔的市场前景。食品工业中,已经有对花和绿茶组合而成饮料的研究。比如耿敬章等研究了金银花和绿茶的复合饮料〔耿敬章和芦智远,“金银花绿茶复合饮料的工艺优化”,《食品工业》,2010(04):p.69-71〕;周慧恒等研究了玫瑰花、玫瑰茄、滇红茶、绿茶复合饮料〔周慧恒、吴荣书和王亚沉,“玫瑰花、玫瑰茄、滇红茶、绿茶复合饮料的研制”,《饮料工业》,2011(07):p.25-27〕;任红等研究了绿茶与杭白菊的复合饮料〔任红等,“鹧鸪茶、绿茶、杭白菊复合饮料的研制”,《食品研究与开发》,2013(07):p.81-84〕等,但是对绿茶及花茶保健作用的机制研究相对不足。
玫瑰茄HibiscussabdariffaL.(Roselle又名洛神花或芙蓉茄)系锦葵科一年生草本植物,原产西非至南亚,现在广泛分布在全球热带和亚热带地区,我国云南、福建、两广等地区也已经大面积种植。玫瑰茄的化学组成主要有有机酸、碳水化合物、粗蛋白、粗脂肪、花青素、多酚和类黄酮类物质。其富含维生素C、氨基酸、有机酸、黄酮类花青苷等大量营养成分,对高血压、炎症和肝脏性疾病具有良好的改善作用〔Herrera-Arellano,A.等,EffectivenessandtolerabilityofastandardizedextractfromHibiscussabdariffainpatientswithmildtomoderatehypertension:acontrolledandrandomizedclinicaltrial,Phytomedicine,2004.11(5):p.375-82;Ali,B.H.,H.M.Mousa和S.El-Mougy,TheeffectofawaterextractandanthocyaninsofhibiscussabdariffaLonparacetamol-inducedhepatoxicityinrats,PhytotherRes,2003,17(1):p.56-9〕。玫瑰茄中的多酚物质可通过胞外信号调节激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)信号通路起到了化学防癌的作用〔Chen,C.C.等,Hibiscussabdariffaextractinhibitsthedevelopmentofatherosclerosisincholesterol-fedrabbits,JAgricFoodChem,2003,51(18):p.5472-7;Lin,H.H.等,Hibiscuspolyphenol-richextractinducesapoptosisinhumangastriccarcinomacellsviap53phosphorylationandp38MAPK/FasLcascadepathway.MolCarcinog,2005.43(2):p.86-99;Peng,C.H.等,Hibiscussabdariffapolyphenolicextractinhibitshyperglycemia,hyperlipidemia,andglycation-oxidativestresswhileimprovinginsulinresistance.JAgricFoodChem,2011,59(18):p.9901-9〕。研究证明,玫瑰茄浸提物的冻干粉可以改善高脂饮食诱导的仓鼠(Hamster)的体重和脂肪肝,同时抑制3T3前体脂肪细胞分化〔Kao,E.S.等,PolyphenolicextractfromHibiscussabdariffareducesbodyfatbyinhibitinghepaticlipogenesisandpreadipocyteadipogenesis,FoodFunct,2015〕。另外,玫瑰茄浸提物的冻干粉还能降低肥胖患者的体重〔Chang,H.C.等,Hibiscussabdariffaextractinhibitsobesityandfataccumulation,andimprovesliversteatosisinhumans.FoodFunct,2014,5(4):p.734-9〕。
本发明将传统的绿茶与新兴的玫瑰茄进行复合制成饮料,利用高脂高糖(High-Fat,HighSucrosediet,HFHS)饮食诱导的小鼠肥胖和高胰岛素模型研究其功效与作用机制。从而阐明玫瑰茄及其组合物对降低体重、脂肪肝和血脂,以及胰岛素抵抗的保健作用,同时对玫瑰茄和龙井茶组合物在改善肝脏和全身代谢平衡的分子机制方面做了一定的探索。
发明内容
本发明第一方面提供一种水提物或含该水提物的组合物,其中,该水提物为玫瑰茄花与绿茶混合物的水提物,或玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物。
在一个或多个实施方式中,所述水提物中属于玫瑰茄花的成分的浓度在1~50g/L的范围之内,例如1~30g/L。
在一个或多个实施方式中,所述水提物中属于绿茶的成分的浓度在1~30g/L的范围之内,例如1~20g/L。
在一个或多个实施方式中,以干重计,所述玫瑰茄花水提物为每克玫瑰茄花用10~200ml的水进行水提获得的水提物。
在一个或多个实施方式中,以干重计,所述绿茶水提物为每克绿茶使用50~500ml的水进行水提获得的水提物。
在一个或多个实施方式中,所述玫瑰茄花与绿茶的水提物使用玫瑰茄花与绿茶的混合物水提获得,其中,以干重计,混合物中玫瑰茄花与绿茶的重量比例在10:1~3:1的范围之内,每克混合物使用20~200ml的水来提取获得该提取物。
本发明第二方面提供一种茶叶产品,该产品含有玫瑰茄花与绿茶的混合物,其中,以干重计,混合物中玫瑰茄花与绿茶的重量比例在10:1~3:1的范围之内。
在一个或多个实施方案中,所述茶叶产品为茶叶包或茶叶袋,以干重计,每包或每袋含1~15g的干玫瑰茄花和0.5~5g的绿茶。
本发明第三方面提供玫瑰茄花的水提物或含该水提物的组合物,绿茶的水提物或含该水提物的组合物,玫瑰茄花与绿茶的混合物的水提物或含该水提物的组合物,玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物或含该混合物的水提物,或含玫瑰茄花与绿茶的混合物的茶叶产品在制备改善饮食诱导的代谢紊乱的组合物或产品中的用途。
具体而言,本发明涉及玫瑰茄花的水提物或含该水提物的组合物,绿茶的水提物或含该水提物的组合物,玫瑰茄花与绿茶的混合物的水提物或含该水提物的组合物,玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物或含该混合物的水提物,或含玫瑰茄花与绿茶的混合物的茶叶产品用于下述任意一个或多个目的的组合物或产品中的用途:
减缓饮食诱导的动物体重增加,尤其是高脂高糖饮食诱导的体重增加;
降低动物体内脂肪含量;
降低脂肪占体重的比例;
减少动物腹部脂肪堆积;
改善高脂高糖饮食诱导的动物肝脏体积变大和肝脏脂肪沉积;
降低动物血清和肝脏中甘油三酯水平;
改善高脂高糖饮食诱导的高血脂现象;
增加肝脏脂肪酸氧化和降低脂质合成,从而降低脂肪肝;和
降低动物血清中胰岛素水平和胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性和调节全身血糖平衡(如降低动物血糖,如空腹血糖)。
在一个或多个实施方案中,本申请包括本申请水提物、组合物或茶叶产品,尤其是所述玫瑰茄花的水提物或含该水提物的组合物,玫瑰茄花与绿茶的混合物的水提物或含该水提物的组合物,玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物或含该混合物的组合物,以及所述茶叶产品的下述用途:
(1)在制备降低动物血糖(如空腹血糖)的组合物或产品中的应用;
(2)在制备降低动物血清高胰岛素的组合物或产品中的用途;
(3)在制备降低动物胰岛素抗性和增加胰岛素敏感性的组合物或产品中的应用;或
(4)在制备降低动物高血糖和2型糖尿病的发生的组合物或产品中的应用;
(5)在制备提高过氧化物酶体增殖体激活受体γ辅激活因子α、降低脂肪酸合成酶的组合物或产品中的应用;
(6)在制备降低营养感应关键途径mTORC1的下游分子核糖体S6蛋白的磷酸化水平的组合物或产品中的应用。
在一个或多个实施方案中,所述动物为哺乳动物,尤其是人。
在一个或多个实施方案中,所述人是对咖啡碱敏感的人,所述用途为玫瑰茄花的水提物或含玫瑰茄花的茶叶产品的上述用途。
附图说明
图1:玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液抑制饮食诱导的小鼠肥胖。(A)实验处理期间小鼠体重变化。Bar代表标准误(对照、玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物小组中小鼠数量为n=4,4,4,6)。(B)三个月实验处理后小鼠体重。*代表与HFHS组相比有显著性差异P<0.05,下同。小鼠体成分分析,各组小鼠脂肪和瘦肉含量(C)和其脂肪与瘦肉所占体重比(D)。(E)实验处理对小鼠附睾脂肪重量的影响,取其附睾脂肪进行称重计算,并且计算其所占体重比(F)。(G)和(H)对不同处理组小鼠进食量和饮水量进行测定。
图2:小鼠实验时间和处理模式。
图3:玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液可以改善高脂高糖饮食诱导的小鼠表型变化。小鼠处死后对其腹部(A)、肝脏(B)、附睾脂肪(C)进行拍照比较,观察其形态上的变化。小鼠处死之前采用清醒小动物成分分析与成像系统对其进行成像分析,(D)小鼠不同层面背侧(DorsalSide)、中侧(Mid-Side)、腹侧(VentralSide)成像结果均显示玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液处理后与对照组相比均可以降低其脂肪含量。(E)采用活体成像技术对小鼠肝脏横切面进行分析,表明实验组处理后都可以不同程度的降低小鼠肝脏内脂肪沉积。注:活体成像中红色为脂肪含量最高部分。
图4:玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液改善高脂高糖饮食诱导的小鼠肝脏脂肪沉积,降低小鼠血清和肝脏中甘油三酯水平。A:不同处理组小鼠肝脏HE染色和油红O染色。B,C:小鼠肝脏中甘油三酯和总胆固醇检测结果。D:小鼠肝脏重量统计结果。E,F:小鼠血清中甘油三酯和总胆固醇检测结果。
图5:玫瑰茄-龙井茶复合饮料对高脂高糖饮食诱导肥胖小鼠血糖的影响。A:实验处理两个月后小鼠空腹血糖检测。B,C:小鼠血清中胰岛素含量。
图6:玫瑰茄龙井茶复合饮料对高糖高脂饮食诱导肥胖小鼠脂质代谢相关基因的影响。A:玫瑰茄龙井茶复合饮料增加高糖高脂饮食诱导肥胖小鼠肝脏中过氧化物酶体增殖体激活受体γ辅激活因子α(PGC1a)的表达水平。B:该复合物抑制小鼠肝脏脂质从头合成相关蛋白FAS的表达水平。C:该复合物降低小鼠肝脏中核糖体S6磷酸化水平。
附图中,“Roselle”代表玫瑰茄花水提物,“Longjing”代表龙井茶水提物,“Roselle+Longjing”代表玫瑰茄-龙井茶组合物。
具体实施方式
本申请提供的水提物包括:玫瑰茄花的水提物,绿茶的水提物,玫瑰茄花与绿茶的混合物的水提物,玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物。本申请还包括含有前述水提物的组合物。
本文中,绿茶包括本领域周知的各种绿茶,例如龙井茶等。玫瑰茄(HibiscussabdariffaL.)(Roselle,又名洛神花或芙蓉茄)系锦葵科一年生草本植物。本发明使用玫瑰茄的干花萼来提取。
可采用本领域已知的方法进行水提。例如,可参照以下文献所述的方法进行水提:曹丽萍、丁炜东和殷国俊,“玫瑰茄水提物对t-BHP诱导原代培养异育银鲫肝细胞损伤生化指标的影响”,《浙江农业学报》,2011(02):p.273-277;周慧恒、吴荣书和王亚沉,“玫瑰花、玫瑰茄、滇红茶、绿茶复合饮料的研制”,《饮料工业》,2011(07):p.25-27。
例如,可先用水浸泡玫瑰茄花或绿茶或其混合物5~60分钟,然后煮5~60分钟,倒出浸出液。剩余茶渣再加水煮5~60分钟,取上清后将两次液体合并。可根据实际情况用水提取多次。之后,合并各次提取获得的提取液,过滤,由此可制备得到本发明的水提物。
或者,可将合并所得液体浓缩后过滤,由此可制备得到本发明水提物的浓缩液。可以将该浓缩液提供给使用者,使用时再根据所需口味、使用者年龄、使用者体重、每天饮用的量等因素稀释。通常而言,以干重计,每克玫瑰茄花(例如花萼)可使用10~200ml的水来进行水提;每克绿茶可使用50~500ml的水来提取。当使用玫瑰茄花与绿茶的混合物时,以干重计,混合物中两者的重量比例可以在10:1~1:1的范围之内,例如,8:1~1:1、6:1~2:1、6:1~3:1等,此时,每克混合物可使用20~200ml的水来提取。上述水量为总的用水量。如前所述,提取可分两次或多次进行。因此,数次提取的水量之和应在上述范围之内。通常,第二次提取所用的水量可多于第一次提取所用的水量。
或者,以浓度计,水提物中属于玫瑰茄花的成分的浓度通常在1~50g/L的范围之内,例如1~30g/L、3~30g/L、5~25g/L、5~20g/L等;属于绿茶的成分的浓度通常在1~30g/L的范围之内,例如1~20g/L、1~15g/L、1~10g/L、1~5g/L等。当水提物为玫瑰茄花与绿茶混合物的水提物,或者为玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物时,该水提物中属于玫瑰茄花的成分的浓度以及属于绿茶的成分的浓度通常也在上述范围之内。
此外,由于玫瑰茄花水提物可替代绿茶水提物的功能,因此,可适当减少玫瑰茄花与绿茶混合物的水提物或玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物中属于绿茶的成分的浓度。
在某些实施方式中,可按照食品或饮料行业的要求对所得水提物进行灭菌,包装。
本发明的组合物可含有上述任一种水提物,即玫瑰茄花的水提物,绿茶的水提物,玫瑰茄花与绿茶的混合物的水提物,玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物,或其浓缩液。组合物可以是饮料,其中还可含有饮料中常规添加的其它添加剂,包括但不限于食品级酸、着色剂、防腐剂、抗坏血酸、能量促进剂和维生素等。
另一方面,本发明也提供一种茶叶产品,该产品含有玫瑰茄花和绿茶茶叶。该产品可以是例如一次性的茶叶包/袋。以干重计,茶叶产品中玫瑰茄花和绿茶茶叶的重量比例可以在10:1~3:1的范围之内。通常,以干重计,一次性的茶叶包/袋中,玫瑰茄花的量为1~15g,例如1~10g、1~8g、3~15g、3~10g等;绿茶茶叶的量为0.5~5g,例如0.5~3g、1~3g、0.5~2g等。
该茶叶产品中还可含有本领域周知的其它茶叶成分,例如,不同的花茶等。当含有其它茶叶成分时,这些茶叶成分的量通常较少,以不至于影响到本发明茶叶产品的下述性能和用途。
同样地,由于玫瑰茄花水提物可代替绿茶水提物的功能,因此,可适当减少茶叶产品中绿茶的含量。
使用者可使用开水煮本发明的产品5~30分钟,或者用开水泡本发明的产品5~30分钟后,即可饮用。如前所述,水量可多可少,可根据饮用者本人的习惯自行确定,通常,依据每袋茶叶中玫瑰茄花和绿茶茶叶的量,每袋茶叶产品可用100ml到1000ml甚至更多的开水浸泡。
利用本发明的水提物、组合物和茶叶产品可以改善动物中饮食(尤其是高脂高糖饮食)诱导的代谢紊乱。具体而言,利用本发明的水提物、组合物和产品可以:减缓饮食诱导的动物体重增加,尤其是高脂高糖饮食诱导的体重增加;降低动物体内脂肪含量;降低脂肪占体重的比例;减少动物腹部脂肪堆积;改善高脂高糖饮食诱导的动物肝脏体积变大和肝脏脂肪沉积;降低动物血清和肝脏中甘油三酯水平;改善高脂高糖饮食诱导的高血脂现象;增加肝脏脂肪酸氧化和降低脂质合成,从而降低脂肪肝;降低动物血清中胰岛素水平和胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性和调节全身血糖平衡(如降低动物血糖,如空腹血糖)。
因此,本申请还包括上述水提物、组合物或茶叶产品的下述用途,或在制备用于下述任一种或多种目的的组合物或产品中的用途:减缓饮食诱导的动物体重增加,尤其是高脂高糖饮食诱导的体重增加;降低动物体内脂肪含量;降低脂肪占体重的比例;减少动物腹部脂肪堆积;改善高脂高糖饮食诱导的动物肝脏体积变大和肝脏脂肪沉积;降低动物血清和肝脏中甘油三酯水平;改善高脂高糖饮食诱导的高血脂现象;增加肝脏脂肪酸氧化和降低脂质合成,从而降低脂肪肝;降低动物血清中胰岛素水平和胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性和调节全身血糖平衡(如降低动物血糖,如空腹血糖)。
尤其是,本申请包括本申请水提物、组合物或茶叶产品,尤其是所述玫瑰茄花的水提物,玫瑰茄花与绿茶的混合物的水提物,玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物,含所述水提物的组合物,以及所述茶叶产品的下述用途:
(1)在制备降低动物血糖(如空腹血糖)的组合物或产品中的用途;
(2)在制备降低动物血清高胰岛素的组合物或产品中的用途;
(3)在制备降低动物胰岛素抗性和增加胰岛素敏感性的组合物或产品中的用途;
(4)在制备降低动物高血糖和2型糖尿病的发生的组合物或产品中的用途;
(5)在制备提高动物过氧化物酶体增殖体激活受体γ辅激活因子α、降低脂肪酸合成酶的组合物或产品中的用途;
(6)在制备降低动物营养感应关键途径mTORC1的下游分子核糖体S6蛋白的磷酸化水平的组合物或产品中的用途。
本文中,动物主要指哺乳动物,尤其是人。适合使用本申请水提物、组合物、产品的动物(如人)包括进行各种饮食的动物,尤其包括高脂和/或高糖饮食的动物。换言之,本申请的水提物、组合物和产品特别适合用于改善日常生活中摄入高脂和/或高糖摄入的动物的代谢紊乱,具体包括但不限于前文所述各种目的的应用。
应理解,本文所述的“高脂”、“高糖”、“高血脂”等具有本领域所通常理解的含义。
绿茶中的咖啡碱能促使人体中枢神经兴奋,增强大脑皮层的兴奋过程,适量或在适当的时候饮用能够起到醒脑提神的作用,但过量或睡前饮用,及对咖啡碱敏感的人群饮用则会引起失眠。而本申请表明,玫瑰茄可以作为代替富含咖啡碱的饮料,比如绿茶,对咖啡碱敏感的人群,服用玫瑰茄能有效地降低代谢性疾病的发生。
因此,在某些实施方案中,所述人指对咖啡碱敏感的人。在某些实施方案中,本申请提供玫瑰茄花水提物或其组合物,或含玫瑰茄花的茶叶产品在制备用于如下任意一种或多种目的的组合物或产品中的用途:减缓饮食诱导的动物体重增加,尤其是高脂高糖饮食诱导的体重增加;降低动物体内脂肪含量;降低脂肪占体重的比例;减少动物腹部脂肪堆积;改善高脂高糖饮食诱导的动物肝脏体积变大和肝脏脂肪沉积;降低动物血清和肝脏中甘油三酯水平;改善高脂高糖饮食诱导的高血脂现象;增加肝脏脂肪酸氧化和降低脂质合成,从而降低脂肪肝;降低动物血清中胰岛素水平和胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性和调节全身血糖平衡(如降低动物血糖,如空腹血糖);其中,所述动物为对咖啡碱敏感的动物,如对咖啡碱敏感的人。本文中,对咖啡碱敏感指服用含咖啡碱导致失眠等副作用。
此外,本申请也包括玫瑰茄花水提物或其组合物,或含玫瑰茄花的茶叶产品在制备用于提神醒脑、改善代谢、降低摄入咖啡碱引起的失眠等副作用的组合物或产品中的用途。
下文将以具体实施例的方式阐述本发明。应理解,这些实施例仅仅是阐述性的,并非限制本发明的保护范围。实施例中所用的方法、试剂和条件,除非另有说明,否则为本领域常规的方法、试剂和条件。本文中,“含有”、“包括”等类似措辞也包括“由……组成”、“由……构成”。
1、材料与仪器
1.1实验动物和食物
八周龄雄性C57Bl/6小鼠,购买于上海斯莱克公司。小鼠被随机分为四组,分别给予高脂高糖(HFHS)饮食饲养。其中三组小鼠分别同时给予玫瑰茄浸提溶液;龙井茶浸提溶液;玫瑰茄和龙井茶组合物浸提溶液饲喂作为实验组;另一组小鼠同时给予纯净水饲喂作为对照组。即:高脂高糖饮食加玫瑰茄浸提溶液(HFHS+Roselle),高脂高糖饮食加龙井茶浸提溶液(HFHF+Longjing),高脂高糖饮食加玫瑰茄和龙井茶组合物浸提溶液(HFHS+Roselle+Longjing),以及对照组高脂高糖饮食小鼠(HFHS+纯净水)。
小鼠食用的高脂高糖饲料来自于美国ResearchDiet公司。玫瑰茄,选购自杭州艺福堂茶叶有限公司,花萼干品。龙井,上海茗丰茶叶有限公司。
1.2主要试剂、仪器和设备
甘油三酯检测试剂盒(InfinityTriglyceridesReagent,TG)、胆固醇检测试剂盒(InfinityCholesterolReagent,TC)购自ThermoScientific公司;UltrasensitiveMouseInsulinELISA试剂盒(Mercodia);血糖仪Freestyle和血糖试纸(Abbott):重组人胰岛素注射液(EliLillyandCompany);葡萄糖(Sigma)。
核磁共振(NMR)体成分分析(Bruker磁共振脂肪含量测量仪Mq7.5);清醒小动物成分分析与成像系统MiniQMR23-060H-I(NiuMag);酶标仪(Tecan-200-酶标仪Infinite200PRO)。
1.3实验方法
1.3.1提取液的制备
(1)玫瑰茄提取液:取4g干花萼,用150mL水浸泡30min,然后加热煎煮30min,倒出浸出液。剩余茶渣再加250mL水,再次煎煮30min,取上清。将两次液体合并,用文火浓缩至200mL(浓度约为20g/L),滤纸过滤,将提取液分装至小鼠饮水瓶〔曹丽萍、丁炜东和殷国俊,“玫瑰茄水提物对t-BHP诱导原代培养异育银鲫肝细胞损伤生化指标的影响”,《浙江农业学报》,2011(02):p.273-277〕。
(2)龙井提取液:取1.6g西湖龙井,用150mL水浸泡30min,然后加热煎煮30min,倒出浸出液。剩余茶渣再加250mL水,再次煎煮30min,取上清。将两次液体合并,用文火浓缩至200mL(浓度约为8g/L),滤纸过滤,将提取液分装至小鼠饮水瓶〔周慧恒、吴荣书和王亚沉,“玫瑰花、玫瑰茄、滇红茶、绿茶复合饮料的研制”,《饮料工业》,2011(07):p.25-27〕。
(3)复合饮料(玫瑰茄-龙井混合液):取2.5g玫瑰茄和0.9g龙井混合,用150mL水浸泡30min,然后加热煎煮30min,倒出浸出液。剩余茶渣再加250mL水,再次煎煮30min,取上清。将两次液体合并,用文火浓缩至200mL(玫瑰茄和龙井浓度分别约为12.5g/L和4.5g/L),滤纸过滤,将提取液分装至小鼠饮水瓶〔朱茂祥等,“绿茶对小鼠Lewis肺癌生长的抑制及免疫调节”,《中华预防医学杂志》,1997(06):p.7-11〕。
1.3.2动物分组
将八周龄的C57雄性小鼠进行随机分组,分组情况如表1:
表1:小鼠分组情况及处理方式
组号 | 饮食 | 数量 |
1 | HFHS+纯净水 | 4只 |
2 | HFHS+龙井提取液 | 4只 |
3 | HFHS+玫瑰茄提取液 | 4只 |
4 | HFHS+玫瑰茄龙井混合液 | 6只 |
1.3.3实验小鼠模型构建
所有的小鼠均自由饮食饮水。对实验小鼠进行三个月的HFHS饮食饲喂,同时分别给与纯净水、玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液作为饮用水。
1.3.4其它方法
(1)小鼠指标测定:每个星期测定小鼠的体重、进食量,并记录数据,每隔一天更换小鼠饮用水,并且称重记录饮水量。
(2)小鼠实验处理两个月后测其空腹血糖。
(3)小鼠身体组分分析:利用核磁共振系统mini-specnuclearmagneticresonance(NMR)spectrometer(BrukerCorp)测定小鼠在清醒、自由饮食状态下的的身体组分,包括脂肪量(FatMass)、瘦组织量(LeanMass)和体液成分(bodyfluid)等。
(4)小鼠成像实验:对小鼠进行麻醉,然后利用清醒小动物成分分析与成像系统MiniQMR23-060H-I(NiuMag)对其全身成像,得到腹侧面、中侧面和背侧面小鼠成像图片。然后再对小鼠肝脏部分横截面采图成像,得到肝脏部分图片。
(5)小鼠处死:实验三个月后将小鼠处死。
处死方法:异氟烷麻醉致深度昏迷,然后打开胸腔进行心脏取血,血液放入采血管中,3000rpm离心15min,取上清。取血后对小鼠腹侧面拍照。快速摘取其肝脏,拍照后称重。取部分肝脏进行甲醛固定和冰冻(OCT)包埋,用于观察实验小鼠肝脏病理性变化,剩余肝脏组织用于WesternBlot实验。打开小鼠腹腔取出所有附睾脂肪,拍照称重。
(6)小鼠其它指标检测
小鼠血液各种理化指标测定:使用OneTouchUltra血糖仪测定血糖浓度。
小鼠实验时间和处理模式如图2所示。
2、结果
2.1玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液减缓饮食诱导的小鼠体重增加
八周龄小鼠自由采食高脂高糖饲料(HFHSDiet)并且同时给与纯净水、玫瑰茄浸提溶液、龙井茶浸提溶液,玫瑰茄和龙井茶组合物浸提溶液。每周对小鼠体重进行测定,发现三个实验组均可以减缓高脂高糖饮食诱导的体重增加(图1,A)。实验三个月后,各实验组小鼠平均体重都显著低于对照组小鼠(图1,B)。
小鼠实验处理三个月后对其进行体成分分析,结果显示三个不同的实验处理组与对照组相比均可不同程度的降低小鼠体内脂肪含量(图1,C),降低小鼠脂肪占体重的百分比(图1,D)。实验结束后取小鼠附睾脂肪进行称重比较,发现玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液处理组的小鼠其附睾脂肪重量明显低于给予纯净水饲喂的对照组小鼠(图1,E),并且可以显著降低附睾脂肪在体重中的比例(图1,F)。
为了进一步验证玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液处理是否对小鼠的进食量和饮水量产生了影响,实验期间每周对小鼠进食进行测定计算,结果显示三组实验处理都对小鼠的进食量没有产生明显的影响(图1,G)。每隔两天对小鼠饮用水进行称量并且更换,通过计算比较显示不同的实验处理间其饮水量没有明显差异(图1,H),说明了实验组小鼠体重的差异不是由于进食量和饮水量引起的。其可能是由于三种浸提溶液中物质对小鼠自身代谢起到了有益的调节作用。
2.2玫瑰茄-龙井茶组合物可以改善高脂高糖饮食诱导的小鼠表型变化
四组小鼠经过三个月的实验处理后采用异氟烷麻醉,心脏取血,对其腹腔、肝脏和附睾脂肪进行拍照比对。发现玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液处理与对照组小鼠相比,均可减少其腹部脂肪堆积(图3,A)。同时我们还对其肝脏(图3,B)比较发现,实验处理后小鼠肝脏体积明显减小,同样的结果出现在其附睾脂肪的表型中(图3,C)。
同时我们在处死小鼠之前采用清醒小动物成分分析与成像系统对其进行了成像。在全身成像中对其背侧、中侧和腹侧进行分别成像。结果发现三个不同层面中,玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液处理后均可降低成像中脂肪的含量(图3,D)。同时我们对其肝脏部位进行横切面成像,结果显示三种浸提溶液处理后均可以显著的降低肝脏中脂肪沉积现象(图3,E)。以上实验说明玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液处理均可以改变小鼠体内组成成分比例,减少小鼠腹部脂肪堆积,改善高脂高糖饮食诱导的小鼠肝脏体积变大和肝脏脂肪沉积。
2.3玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液改善高脂高糖饮食诱导的小鼠肝脏脂肪沉积,降低小鼠血清和肝脏中甘油三酯水平。
取甲醛固定的肝脏组织石蜡包埋切片,进行苏木精-伊红染色(HE染色)观察小鼠肝脏病理变化。结果显示与对照组相比玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提物三组实验小鼠的肝脏切片中肝小叶结构清晰,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状分布,且肝细胞大小一致,细胞核清晰,胞浆均匀等,并且通过脂滴的数量与大小可以判断三组实验处理均可以降低肝脏脂肪沉积。然后我们又通过对肝脏冰冻切片进行油红染色得到了相同的实验结果(图4,A)。利用甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)检测试剂盒对小鼠肝脏和血清中的甘油三酯和总胆固醇进行测定,结果显示玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液三组实验处理中小鼠肝脏和血清中甘油三酯水平与对照组相比均显著降低(P<0.05)(图4,B,E),而总胆固醇则均没有明显变化(图4,C,F)。同时对各组小鼠肝脏称重,发现各实验组小鼠较对照组小鼠肝脏重量均有明显降低(图4,D)。由此证明,玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液对小鼠进行自由饲喂,可以改善高脂高糖饮食诱导的小鼠肝脏脂肪沉积,降低小鼠血清和肝脏中甘油三酯水平。
2.4玫瑰茄-龙井茶复合饮料对高脂高糖饮食诱导肥胖小鼠血糖的影响。
以上实验证明了玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液对高脂高糖饮食诱导的肥胖小鼠腹部和肝脏中脂肪沉积、肝脏和血清甘油三酯水平有显著的改善作用。同时我们也观察到这三种实验处理对小鼠的血糖存在影响。
实验处理两个月时我们对小鼠禁食16h测定其空腹血糖,结果发现玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液处理的三组小鼠其血糖都明显低于对照组小鼠(图5,A)。实验处理三个月后通过对小鼠血清中胰岛素含量测定,发现玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液均可以显著降低小鼠血清中胰岛素水平和胰岛素抵抗指数(homeostasismodelassessmentofinsulinresistance,HOMA-IR)(图5,B,C),改善高脂高糖饮食诱导的高胰岛素抵抗现象,证明玫瑰茄、龙井茶、玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液不仅可以改善高脂高糖饮食诱导的高血脂现象,同样也可以起到调节血糖稳态的作用。
2.5玫瑰茄-龙井茶复合饮料对高脂高糖饮食诱导肥胖小鼠脂质代谢相关基因的影响。
为了研究玫瑰茄和龙井茶组合物浸提溶液对改善肥胖小鼠代谢的分子机制,我们将小鼠的肝脏进行westernblot测试分析。如图6(A,B)所示,玫瑰茄-龙井茶组合物喂养组的过氧化物酶体增殖体激活受体γ辅激活因子α(Peroxisomeproliferator-activatedreceptorgammacoactivator-1alpha,PGC1α)表达量显著升高,并且降低脂肪酸合成酶(fattyacidsynthase,FAS)(图6,A)的表达。该结果表明该组合物能够通过促进肝脏脂肪酸氧化和降低脂肪酸合成,从而降低脂肪肝。
另外,如图6(C)所示,玫瑰茄-龙井茶组合物能够显著降低营养感应关键途径mTORC1的下游分子核糖体S6蛋白(ribosomalS6,S6)的磷酸化水平,表明该组合物可能通过抑制mTORC1-S6K的负反馈作用而增加肝脏胰岛素敏感性和调节全身血糖平衡。
3、讨论
本研究发现玫瑰茄和龙井茶的浸提液可以显著的减缓高脂高糖饮食诱导的小鼠体重和附睾脂肪重量增加,降低血糖血脂,改善小鼠肝脏脂肪沉积,增加胰岛素敏感性,但对其饮食量及饮水量没有明显的影响。并且还发现玫瑰茄-龙井茶组合物浸提溶液可以通过增加肝脏脂肪酸氧化和降低脂质合成,而降低脂肪肝;另外,其可以通过抑制mTORC1途径降低胰岛素抵抗、增加肝脏胰岛素敏感性。
与之前的关于玫瑰茄在仓鼠和人群中的研究相比〔Kao,E.S.等,PolyphenolicextractfromHibiscussabdariffareducesbodyfatbyinhibitinghepaticlipogenesisandpreadipocyteadipogenesis,FoodFunct,2015;Chang,H.C.等,Hibiscussabdariffaextractinhibitsobesityandfataccumulation,andimprovesliversteatosisinhumans,FoodFunct,2014.5(4):p.734-9.〕,本研究:
1)首次发现玫瑰茄和龙井茶组合物具有良好的改善代谢的作用。龙井茶等绿茶在改善代谢方面已有较为全面的研究,但是,绿茶中的咖啡碱能促使人体中枢神经兴奋,增强大脑皮层的兴奋过程,适量或在适当的时候饮用能够起到醒脑提神的作用,但过量或睡前饮用,及对咖啡碱敏感的人群饮用则会引起失眠。而本研究表明,玫瑰茄可以作为代替富含咖啡碱的饮料,比如绿茶和咖啡等,对咖啡碱敏感的人群,服用玫瑰茄能有效地降低代谢性疾病的发生。也可以利用玫瑰茄-龙井茶制作复合饮料,既能够起到提神醒脑和改善代谢的作用,同时又能降低过量摄入咖啡碱引起的失眠等副作用。
2)首次发现玫瑰茄及玫瑰茄和龙井茶组合物能够显著改善小鼠血糖和胰岛素抵抗,表明该饮料能够降低高血糖和2型糖尿病的发生。
3)在给药方式上,本研究首次使用饮水的方式对小鼠进行长达18周的处理。与之前报道的将玫瑰茄浸提液的真空干燥粉剂直接服用和添加到仓鼠饲料中不同,饮水给药这一处理方法更符合日后玫瑰茄及其复合饮料在我们日常生活中的饮用习惯。
4)利用核磁共振技术(NMR)对小鼠进行体成分分析和成像处理,首次得到玫瑰茄和龙井茶处理对小鼠脂肪含量和分布影响的数据。
5)研究对象采用的是代谢病学研究中经常使用的C57小鼠模型,以及用高脂高糖(HFHS)饲料代替之前研究中所用的单纯的高脂饲料〔Kao,E.S.等,PolyphenolicextractfromHibiscussabdariffareducesbodyfatbyinhibitinghepaticlipogenesisandpreadipocyteadipogenesis,FoodFunct,2015;Chang,H.C.等,Hibiscussabdariffaextractinhibitsobesityandfataccumulation,andimprovesliversteatosisinhumans,FoodFunct,2014,5(4):p.734-9;Huang,T.W.等,EffectofHibiscussabdariffaextractonhighfatdiet-inducedobesityandliverdamageinhamsters,FoodNutrRes,2015,59:p.29018〕等。
6)在分子机制方面,本发明的结果表明玫瑰茄-龙井茶组合物可以通过增强脂肪酸氧化分解,抑制肝脏脂质合成和关键的营养感应途径mTORC1,来起到降低脂肪肝和增强胰岛素敏感性的作用。因此,本研究关于玫瑰茄-龙井茶组合物在调控饮食诱导的肥胖小鼠的代谢紊乱方面的功能和分子机制方面的研究,对促进基础研究的转化具有重要意义。
综上所述,本研究探讨了一种新的花茶在减肥、降糖降脂、改善脂肪肝等方面的作用,并寻求绿茶与该花茶的组合物,其可以实现在达到上述功效的同时,又能降低过量饮用绿茶产生的失眠等不良反应。同时,玫瑰茄色泽艳丽、气微清香、味酸,形色、口感俱佳,通过适当的调配制作产品,还能提高人们的生活品质。另外,本研究探索了玫瑰茄-龙井茶改善代谢的分子机制,为其开发、制作相关饮料和保健品提供有力的理论依据。
Claims (10)
1.一种水提物或含该水提物的组合物,其中,该水提物为玫瑰茄花与绿茶混合物的水提物,或者为玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物。
2.如权利要求1所述的水提物或组合物,其特征在于,所述水提物中属于玫瑰茄花的成分的浓度在1~50g/L的范围之内,例如1~30g/L。
3.如权利要求1或2所述的水提物或组合物,其特征在于,所述水提物中属于绿茶的成分的浓度在1~30g/L的范围之内,例如1~20g/L。
4.如权利要求1-3中任一项所述的水提物或组合物,其特征在于,
以干重计,所述玫瑰茄花的水提物为每克玫瑰茄花用10~200ml的水进行水提获得的水提物;
以干重计,所述绿茶的水提物为每克绿茶使用50~500ml的水进行水提获得的水提物;
以干重计,所述玫瑰茄花与绿茶混合物中玫瑰茄花与绿茶的重量比例在10:1~3:1的范围之内,每克混合物使用20~200ml的水来提取获得该混合物的水提物。
5.一种茶叶产品,该产品含有玫瑰茄花与绿茶的混合物,其中,以干重计,混合物中玫瑰茄花与绿茶的重量比例在10:1~3:1的范围之内。
6.如权利要求5所述的茶叶产品,其特征在于,所述茶叶产品为茶叶包或茶叶袋,以干重计,每包或每袋含1~15g的干玫瑰茄花和0.5~5g的绿茶。
7.玫瑰茄花的水提物或含该水提物的组合物,绿茶的水提物或含该水提物的组合物,玫瑰茄花与绿茶的混合物的水提物或含该水提物的组合物,玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物或含该混合物的水提物,或含玫瑰茄花与绿茶的混合物的茶叶产品在制备用于下述任意一个或多个目的的组合物或产品中的用途:
减缓饮食诱导的动物体重增加,尤其是高脂高糖饮食诱导的体重增加;
降低动物体内脂肪含量;
降低脂肪占体重的比例;
减少动物腹部脂肪堆积;
改善高脂高糖饮食诱导的动物肝脏体积变大和肝脏脂肪沉积;
降低动物血清和肝脏中甘油三酯水平;
改善高脂高糖饮食诱导的高血脂现象;
增加肝脏脂肪酸氧化和降低脂质合成,从而降低脂肪肝;和
降低动物血清中胰岛素水平和胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性和调节全身血糖平衡(如降低动物血糖,如空腹血糖)。
8.玫瑰茄花的水提物或含该水提物的组合物,玫瑰茄花与绿茶的混合物的水提物或含该水提物的组合物,玫瑰茄花水提物与绿茶水提物的混合物或含该混合物的组合物,以及含玫瑰茄花与绿茶的混合物的茶叶产品的下述用途:
(1)在制备降低动物血糖(如空腹血糖)的组合物或产品中的用途;
(2)在制备降低动物血清高胰岛素的组合物或产品中的用途;
(3)在制备降低动物胰岛素抗性和增加胰岛素敏感性的组合物或产品中的用途;
(4)在制备降低动物高血糖和2型糖尿病的发生的组合物或产品中的用途;
(5)在制备提高动物过氧化物酶体增殖体激活受体γ辅激活因子α、降低脂肪酸合成酶的组合物或产品中的用途;
(6)在制备降低动物营养感应关键途径mTORC1的下游分子核糖体S6蛋白的磷酸化水平的组合物或产品中的用途。
9.玫瑰茄花水提物或其组合物,或含玫瑰茄花的茶叶产品在制备用于动物提神醒脑、改善代谢并降低摄入咖啡碱引起的失眠等副作用的组合物或产品中的用途。
10.如权利要求7-9中任一项所述的用途,其特征在于,所述动物为哺乳动物,尤其是人,更优选为对咖啡碱敏感的人。
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