CN105524981B - 目标基因的捕获试剂盒及捕获方法 - Google Patents
目标基因的捕获试剂盒及捕获方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105524981B CN105524981B CN201410508624.4A CN201410508624A CN105524981B CN 105524981 B CN105524981 B CN 105524981B CN 201410508624 A CN201410508624 A CN 201410508624A CN 105524981 B CN105524981 B CN 105524981B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- target gene
- seq
- capture
- probe
- target
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 115
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 105
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 26
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 20
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 17
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 14
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 10
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 9
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 claims description 5
- 108700020463 BRCA1 Proteins 0.000 claims description 5
- 101150072950 BRCA1 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 108700020462 BRCA2 Proteins 0.000 claims description 5
- 102000052609 BRCA2 Human genes 0.000 claims description 5
- 101150008921 Brca2 gene Proteins 0.000 claims description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 101000969812 Homo sapiens Multidrug resistance-associated protein 1 Proteins 0.000 claims description 5
- 208000037065 Subacute sclerosing leukoencephalitis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010042297 Subacute sclerosing panencephalitis Diseases 0.000 claims description 5
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 claims description 5
- 102100033350 ATP-dependent translocase ABCB1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100029361 Aromatase Human genes 0.000 claims description 4
- 102000036365 BRCA1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100028914 Catenin beta-1 Human genes 0.000 claims description 4
- ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F Chemical compound Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 102000038594 Cdh1/Fizzy-related Human genes 0.000 claims description 4
- 108091007854 Cdh1/Fizzy-related Proteins 0.000 claims description 4
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010009392 Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p16 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100035186 DNA excision repair protein ERCC-1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100034157 DNA mismatch repair protein Msh2 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100021147 DNA mismatch repair protein Msh6 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100031480 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 101710146526 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101710105178 F-box/WD repeat-containing protein 7 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100028138 F-box/WD repeat-containing protein 7 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100034553 Fanconi anemia group J protein Human genes 0.000 claims description 4
- 102100023593 Fibroblast growth factor receptor 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 101710182386 Fibroblast growth factor receptor 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100023600 Fibroblast growth factor receptor 2 Human genes 0.000 claims description 4
- 101710182389 Fibroblast growth factor receptor 2 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100027842 Fibroblast growth factor receptor 3 Human genes 0.000 claims description 4
- 101710182396 Fibroblast growth factor receptor 3 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100029974 GTPase HRas Human genes 0.000 claims description 4
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 claims description 4
- 102100036534 Glutathione S-transferase Mu 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100025334 Guanine nucleotide-binding protein G(q) subunit alpha Human genes 0.000 claims description 4
- 102100032610 Guanine nucleotide-binding protein G(s) subunit alpha isoforms XLas Human genes 0.000 claims description 4
- 102100036738 Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-11 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100038970 Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Human genes 0.000 claims description 4
- 101000919395 Homo sapiens Aromatase Proteins 0.000 claims description 4
- 101000916173 Homo sapiens Catenin beta-1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000876529 Homo sapiens DNA excision repair protein ERCC-1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101001134036 Homo sapiens DNA mismatch repair protein Msh2 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000968658 Homo sapiens DNA mismatch repair protein Msh6 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000848171 Homo sapiens Fanconi anemia group J protein Proteins 0.000 claims description 4
- 101000584633 Homo sapiens GTPase HRas Proteins 0.000 claims description 4
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 claims description 4
- 101001071694 Homo sapiens Glutathione S-transferase Mu 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000857888 Homo sapiens Guanine nucleotide-binding protein G(q) subunit alpha Proteins 0.000 claims description 4
- 101001014590 Homo sapiens Guanine nucleotide-binding protein G(s) subunit alpha isoforms XLas Proteins 0.000 claims description 4
- 101001014594 Homo sapiens Guanine nucleotide-binding protein G(s) subunit alpha isoforms short Proteins 0.000 claims description 4
- 101001072407 Homo sapiens Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-11 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000882127 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000916644 Homo sapiens Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Proteins 0.000 claims description 4
- 101000973778 Homo sapiens NAD(P)H dehydrogenase [quinone] 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101001014610 Homo sapiens Neuroendocrine secretory protein 55 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000738901 Homo sapiens PMS1 protein homolog 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101001126417 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor alpha Proteins 0.000 claims description 4
- 101000797903 Homo sapiens Protein ALEX Proteins 0.000 claims description 4
- 101000695187 Homo sapiens Protein patched homolog 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000932478 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 claims description 4
- 101000777277 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase Chk2 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000835995 Homo sapiens Slit homolog 1 protein Proteins 0.000 claims description 4
- 101000651893 Homo sapiens Slit homolog 3 protein Proteins 0.000 claims description 4
- 101000997832 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK2 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000934996 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK3 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000851030 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 3 Proteins 0.000 claims description 4
- 229940124647 MEK inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 229910015837 MSH2 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 102100028198 Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Human genes 0.000 claims description 4
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 claims description 4
- 108010074346 Mismatch Repair Endonuclease PMS2 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100025725 Mothers against decapentaplegic homolog 4 Human genes 0.000 claims description 4
- 101710143112 Mothers against decapentaplegic homolog 4 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100021339 Multidrug resistance-associated protein 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100022365 NAD(P)H dehydrogenase [quinone] 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100023617 Neutrophil cytosol factor 4 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100037482 PMS1 protein homolog 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102000014160 PTEN Phosphohydrolase Human genes 0.000 claims description 4
- 108010011536 PTEN Phosphohydrolase Proteins 0.000 claims description 4
- 102100030485 Platelet-derived growth factor receptor alpha Human genes 0.000 claims description 4
- 102100028680 Protein patched homolog 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 claims description 4
- 102100031075 Serine/threonine-protein kinase Chk2 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100025490 Slit homolog 1 protein Human genes 0.000 claims description 4
- 101100123309 Thermotoga maritima (strain ATCC 43589 / DSM 3109 / JCM 10099 / NBRC 100826 / MSB8) gyrA gene Proteins 0.000 claims description 4
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100033254 Tumor suppressor ARF Human genes 0.000 claims description 4
- 102100033444 Tyrosine-protein kinase JAK2 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100025387 Tyrosine-protein kinase JAK3 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100033179 Vascular endothelial growth factor receptor 3 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010086154 neutrophil cytosol factor 40K Proteins 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 102100037480 Mismatch repair endonuclease PMS2 Human genes 0.000 claims 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 abstract description 28
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 abstract description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 14
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 101100384865 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cot-1 gene Proteins 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 102000008071 Mismatch Repair Endonuclease PMS2 Human genes 0.000 description 3
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 3
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150024940 ABCC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 102000012804 EPCAM Human genes 0.000 description 1
- 101150084967 EPCAM gene Proteins 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 101150057140 TACSTD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150046474 Vhl gene Proteins 0.000 description 1
- 108700025690 abl Genes Proteins 0.000 description 1
- 229910002114 biscuit porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000007373 indentation Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于生物技术领域,公开了一种目标基因的捕获探针、包括目标基因的捕获探针的捕获试剂盒及捕获目标基因的方法。本发明所述目标基因的捕获探针为生物素标记的63个目标基因的特异性探针组,其与全基因组DNA杂交,运用链霉亲和素包被的磁珠,可将与探针结合的DNA片段捕捉下来,在进行二代高通量测序前实现对特定目标基因组区域的富集。本发明所述目标基因的捕获探针覆盖率广,测序深度深,极大的提高了基因组中目标区域的研究效率,显著降低了测序成本。本发明所述目标基因捕获试剂盒组成简单,适用范围广,而且成本低,适用于广大的实验室和科研工作。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种目标基因的捕获探针、包括目标基因的捕获探针的捕获试剂盒及捕获目标基因的方法。
背景技术
快速和准确地获取生物体的遗传信息对于生命科学研究一直具有十分重要的意义。对于每个生物体来说,基因组包含了整个生物体的遗传信息。测序技术能够真实地反映基因组DNA上的遗传信息,进而比较全面地揭示基因组的复杂性和多样性,因而在生命科学研究中扮演了十分重要的角色。
测序技术最早可以追溯到20世纪50年代,早在1954年就已经出现了关于早期测序技术的报导,即Whitfeld等用化学降解的方法测定多聚核糖核苷酸序列。1977年Sanger等发明的双脱氧核苷酸末端终止法和Gilbert等发明的化学降解法,标志着第一代测序技术的诞生。此后在三十几年的发展中陆续产生了第二代测序技术,包括Roche公司的454技术、Illumina公司的Solexa技术和ABI公司的SOLiD技术。相比传统的Sanger测序法,新一代测序技术的推出及普及,使得基因测序的通量和质量大幅提高,而测序成本逐步降低。目前Roche,Illumina等公司推出的小型实验台测序仪价格非常低廉,感兴趣的客户群也非常之多。
目前临床癌症的早期诊断和个性化指导用药需要对病人进行相关基因的测序。然而Roche,Illumina等公司推出的配套测序平台使用的试剂盒仅仅适用于全基因组或者全外显子的测序,而全基组测序或全外显子的测序对于大样本量的研究仍然费用太高,不适合癌症的早期诊断和个性化指导用药。因此要想真正能够把二代测序技术推向临床,能够满足医生的需求,就需要设计针对特定疾病的靶向基因的测序试剂盒。
目前Illumina公司和Life technologies公司都提供靶向基因的捕获试剂盒,然而上述公司的试剂盒产品针对的靶向基因的数目不全,并非全区域覆盖。如Illumina公司的TruSeq Amplicon-Cancer Panel,共检测48个基因,而Life technologies公司的AmpliSeq Cancer Hotspot Panel,共检测50个基因中的热点位点而非全部区域。而且以上商业试剂盒虽然均能达到90%以上的覆盖率,但是仍然有10%区域的缺失,并且每个区域的覆盖深度不同,无法进行定量的分析。
发明内容
有鉴于此,本发明的一个目的是提供一种目标基因的捕获探针,为生物素标记的目标基因的特异性探针组,所述目标基因包括如下63个基因:
ABCC1 | ABL | ALK | APC | ATM | BRAF | BRCA1 | BRCA2 |
BRIP1 | CDH1 | CDKN2A | CHEK2 | CKIT | CSF1R | CTNNB1 | CYP19A1 |
EGFR | EPCAM | ERBB2 | ERBB4 | ERCC1 | EZH2 | FBXW7 | FGFR1 |
FGFR2 | FGFR3 | FLT3 | GNA11 | GNAQ | GNAS | GSTM1 | HRAS |
HGF | JAK2 | JAK3 | KDR | KIT | KRAS | MDR1 | MEK1 |
MET | MLH1 | MRP2 | MSH2 | MSH6 | NCF4 | NQO1 | NRAS |
PDGFRA | PMS1 | PMS2 | PTCH | PTEN | RB1 | RET | RRM1 |
SLIT1 | SMAD4 | SMO | top2A | TP53 | VEGFR3 | VHL |
在一些实施方案中,所述特异性探针组包括至少一条针对每个目标基因的特异性探针序列。
在另一些实施方案中,所述特异性探针组包括两条以上的针对每个目标基因的特异性探针序列。
进一步的,所述的捕获探针中,所述特异性探针序列由通用接头A、目标基因特异性序列和通用接头B组成,其中通用接头A的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示,通用接头B的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
在一个优选实施方案中,所述特异性探针组包括如SEQ ID NO.3-SEQ IDNO.1253示核苷酸序列。
本发明的一个目的是提供一种目标基因的捕获方法,为构建样本基因组DNA文库,与上述目标基因的捕获探针杂交,亲和素包被的磁珠捕捉与目标基因的捕获探针结合的DNA片段。
本发明的另一个目的是提供一种目标基因的捕获试剂盒,包括上述目标基因的捕获探针。
在一些实施方案中,本发明所述目标基因的捕获试剂盒,还包括杂交混合液、杂交缓冲液、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液中的至少一种。
在一个优选实施方案中,所述目标基因的捕获试剂盒中,所述杂交混合液含有浓度为500ng/μL人Cot-1 DNA和浓度为500ng/μL鲑鱼精子DNA,所述杂交缓冲液含有10×SSPE缓冲液、10×邓哈特溶液(Denhardt’s Solution)、10mM EDTA和0.1%SDS,所述洗涤液A含有1×SSC和0.1%SDS,所述洗涤液B含有0.1×SSC和0.1%SDS,所述洗脱液含有0.1M NaOH。
本发明提供了一种目标基因的捕获探针、包括目标基因的捕获探针的捕获试剂盒及捕获目标基因的方法。本发明所述目标基因的捕获探针为生物素标记的63个目标基因的特异性探针组,其与全基因组DNA杂交,运用链霉亲和素包被的磁珠,可将与探针结合的DNA片段捕捉下来,在进行二代高通量测序前实现对特定目标基因组区域的富集。本发明所述目标基因的捕获探针覆盖率广,测序深度深,极大的提高了基因组中目标区域的研究效率,显著降低了测序成本。本发明所述目标基因捕获试剂盒组成简单,适用范围广,而且成本低,适用于广大的实验室和科研工作。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种目标基因的捕获探针,为生物素标记的目标基因的特异性探针组。
其中按照本领域技术人员的理解,本发明所述目标基因为特定疾病的靶向基因。目前已公开报道的特定疾病的靶向基因有很多种,如肺癌的易感基因ABCC1,与遗传性乳腺癌有关的基因BRCA1和BRCA2。
在一些实施方案中,所述目标基因包括如下63个基因:
ABCC1 | ABL | ALK | APC | ATM | BRAF | BRCA1 | BRCA2 |
BRIP1 | CDH1 | CDKN2A | CHEK2 | CKIT | CSF1R | CTNNB1 | CYP19A1 |
EGFR | EPCAM | ERBB2 | ERBB4 | ERCC1 | EZH2 | FBXW7 | FGFR1 |
FGFR2 | FGFR3 | FLT3 | GNA11 | GNAQ | GNAS | GSTM1 | HRAS |
HGF | JAK2 | JAK3 | KDR | KIT | KRAS | MDR1 | MEK1 |
MET | MLH1 | MRP2 | MSH2 | MSH6 | NCF4 | NQO1 | NRAS |
PDGFRA | PMS1 | PMS2 | PTCH | PTEN | RB1 | RET | RRM1 |
SLIT1 | SMAD4 | SMO | top2A | TP53 | VEGFR3 | VHL |
本发明中上述目标基因的序列都可通过GenBank基因序列号从GenBank数据库获得。GenBank数据库是1982年由美国国立生物技术信息中心(NCBI)建立并维护的综合性序列数据库。如下表1为本发明中所涉及的目标基因对应的GenBank基因序列号。
本发明所使用的术语“探针”就是一段与目标基因互补的特异核苷酸序列,它可以包括整个基因,也可以仅仅是/基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
表1目标基因的Genebank序列号
在一些实施方案中,本发明所述的捕获探针中,所述特异性探针组由针对目标基因的特异性探针序列组成,所述特异性探针序列由通用接头A、目标基因特异性序列和通用接头B组成。
在一些优选实施方案中,所述通用接头A长度为15nt,其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示;所述通用接头B的核苷酸序列长度为15nt,其核苷酸如SEQ ID NO.2所示。
本领域技术人员可以根据NCBI数据库中公开的目标基因的参考序列,设计与目标基因的外显子互补的目标基因特异性序列,然后与通用接头A和通用接头B组成特异性探针序列。
在一些实施方案中,所述目标基因特异性序列长度为120nt。与通用接头A和通用接头B组合后,特异性探针序列长度为150nt。
本发明中上述所有的63个目标基因中,每个基因都有多个外显子区域,每个外显子区域都至少有一条探针,在一些实施例中,每个区域都至少有二条探针;在一些实施例中,每个区域都至少有三条探针;在一些实施例中,每个区域都至少有五条探针;在一些实施例中,每个区域都至少有十条探针;在一些实施例中,每个区域都至少有二十条探针。
在一些实施方案中,所述特异性探针组包括至少一条针对每个目标基因的特异性探针序列。即所述特异性探针组针对每个目标基因至少包括一条特异性探针序列。
在另一些实施方案中,所述特异性探针组包括两条以上的针对每个目标基因的特异性探针序列。
其中,申请人根据NCBI数据库中公开的目标基因的参考序列,设计表2所示的与所述63个目标基因的外显子互补的特异性探针序列。
表263个目标基因的特异性探针序列
基因名称 | 特异性探针序列 | 基因名称 | 特异性探针序列 | 基因名称 | 特异性探针序列 |
ABCC1 | SEQ ID NO.3~33 | EZH2 | SEQ ID NO.474~496 | MRP2 | SEQ ID NO.861~892 |
ABL | SEQ ID NO.34~45 | FBXW7 | SEQ ID NO.497~510 | MSH2 | SEQ ID NO.893~910 |
ALK | SEQ ID NO.46~74 | FGFR1 | SEQ ID NO.511~533 | MSH6 | SEQ ID NO.911~923 |
APC | SEQ ID NO.75~92 | FGFR2 | SEQ ID NO.534~557 | NCF4 | SEQ ID NO.924~934 |
ATM | SEQ ID NO.92~155 | FGFR3 | SEQ ID NO.558~576 | NQO1 | SEQ ID NO.935~941 |
BRAF | SEQ ID NO.156~173 | FLT3 | SEQ ID NO.577~600 | NRAS | SEQ ID NO.942~948 |
BRCA1 | SEQ ID NO.174~203 | GNA11 | SEQ ID NO.601~607 | PDGFRA | SEQ ID NO.949~971 |
BRCA2 | SEQ ID NO.204~230 | GNAQ | SEQ ID NO.608~614 | PMS1 | SEQ ID NO.972~987 |
BRIP1 | SEQ ID NO.231~250 | GNAS | SEQ ID NO.615~632 | PMS2 | SEQ ID NO.988~1003 |
CDH1 | SEQ ID NO.251~266 | GSTM1 | SEQ ID NO.633~640 | PTCH | SEQ ID NO.1004~1033 |
CDKN2A | SEQ ID NO.267~272 | HRAS | SEQ ID NO.641~661 | PTEN | SEQ ID NO.1034~1042 |
CHEK2 | SEQ ID NO.273~289 | HGF | SEQ ID NO.662~669 | RB1 | SEQ ID NO.1043~1069 |
CKIT | SEQ ID NO.290~311 | JAK2 | SEQ ID NO.670~694 | RET | SEQ ID NO.1070~1090 |
CSF1R | SEQ ID NO.312~334 | JAK3 | SEQ ID NO.695~717 | RRM1 | SEQ ID NO.1091~1109 |
CTNNB1 | SEQ ID NO.335~352 | KDR | SEQ ID NO.718~747 | SLIT1 | SEQ ID NO.1110~1146 |
CYP19A1 | SEQ ID NO.353~363 | KIT | SEQ ID NO.748~769 | SMAD4 | SEQ ID NO.1147~1158 |
EGFR | SEQ ID NO.364~394 | KRAS | SEQ ID NO.770~775 | SMO | SEQ ID NO.1159~1170 |
EPCAM | SEQ ID NO.395~403 | MDR1 | SEQ ID NO.776~804 | top2A | SEQ ID NO.1171~1204 |
ERBB2 | SEQ ID NO.404~434 | MEK1 | SEQ ID NO.805~815 | TP53 | SEQ ID NO.1205~1220 |
ERBB4 | SEQ ID NO.435~461 | MET | SEQ ID NO.816~837 | VEGFR3 | SEQ ID NO.1221~1250 |
ERCC1 | SEQ ID NO.462~473 | MLH1 | SEQ ID NO.838~860 | VHL | SEQ ID NO.1251~1253 |
本领域技术人员可以理解本发明所述与所述63个目标基因的外显子互补的特异性探针序列包括但不限于表2所示序列。
在一个优选实施方案中,所述特异性探针组包括上述表2所示的每个目标基因的特异性探针序列中的至少一条。如包括针对ABCC1基因的特异性探针序列SEQ ID NO.3、针对ABL基因的特异性探针序列SEQ ID NO.34、……、针对VHL基因的特异性探针序列SEQ IDNO.1251。即所述特异性探针组包括63条特异性探针序列,每个特异性探针序列特异性识别上述63个目标基因中的一个。
在一些实施例中,所述特异性探针组包括上述表2所示的每个目标基因的特异性探针序列中的至少二条;所述特异性探针组包括上述表2所示的每个目标基因的特异性探针序列中的至少三条;所述特异性探针组包括上述表2所示的每个目标基因的特异性探针序列中的至少五条。
在另一个优选实施方案中,所述特异性探针组包括如SEQ ID NO.3-SEQ IDNO.1253所示核苷酸序列。即所述特异性探针组包括上述表2所示的与所述63个目标基因的外显子互补的所有特异性探针序列。
本发明所述生物素标记的目标基因的特异性探针组中生物素标记可采用PCR或缺口平移法来完成。优选的,采用缺口平移法。
所述缺口平移法包括以DNase I在DNA双链上作用产生缺口并以此作为第二反应步骤的作用起点,即大肠杆菌聚合酶I自缺口处进行修补合成。在修补合成互补链时将生物素标记的d-NTP掺入,从而复制出带有生物素标记的探针。
本发明还提供一种目标基因的捕获方法,为构建样本基因组DNA文库,与上述目标基因的捕获探针杂交,亲和素包被的磁珠捕捉与目标基因的捕获探针结合的DNA片段。
其中,所述样本基因组DNA文库的构建可以按照本领域技术人员公知的方法,利用商品化的建库试剂盒进行。
在一个实施方案中,所述样本基因组DNA文库是利用illumina标准建库试剂盒进行构建,得到250ng/μL的200bp-350bp标准文库片段。
在一个实施方案中,本发明所述目标基因的捕获方法中,所述与目标基因的捕获探针杂交具体为杂交缓冲液与标准文库片段混合,预热后在65℃与杂交缓冲液、目标基因的捕获探针、RNA酶抑制剂混合,在65℃保持16-18h。其中所述杂交混合液含有浓度为500ng/μL人Cot-1 DNA和浓度为500ng/μL鲑鱼精子DNA,所述杂交缓冲液含有10×SSPE缓冲液、10×邓哈特溶液(Denhardt’s Solution)、10mM EDTA和0.1%SDS。
在一个实施方案中,本发明所述目标基因的捕获方法中,所述亲和素包被的磁珠捕捉与目标基因的捕获探针结合的DNA片段具体为向杂交液中加入亲和素包被的磁珠,混合静置30分钟后,用磁力架吸住磁珠15min后,弃去上清液;加入洗涤液A室温混匀后,用磁力架吸住磁珠15分钟后,弃去上清液;加入洗涤液B混匀后,用磁力架吸住磁珠15分钟后,弃去上清液;加入洗脱液混匀后,用磁力架吸住磁珠15分钟后,取上清液即得。其中,所述洗涤液A含有1×SSC和0.1%SDS,所述洗涤液B含有0.1×SSC和0.1%SDS,所述洗脱液含有0.1MNaOH。
亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每个分子由4个亚基组成,可以和4个生物素分子亲密结合。亲合素主要包括卵白亲合素、链亲合素、卵黄亲合素及类亲合素等。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链亲和素。在一个优选的实施方案中,所述亲和素为链亲和素。
在一些实施方案中,本发明所述目标基因的捕获方法还包括纯化的步骤。本领域技术人员可以理解所述纯化可以按照本领域技术人员公知的方法进行。
在一个实施方案中,所述纯化具体为洗脱的上清液与Tris缓冲液混合后,用QIAquick的纯化柱纯化。之后的样本按照illumina的测序前处理标准化处理后上机测序。
纯化后的样本可以利用第二代测序技术进行测序。如illumina测序技术。
本发明还提供了一种目标基因的捕获试剂盒,包括上述目标基因的捕获探针。
在一些实施方案中,本发明所述目标基因的捕获试剂盒,还包括杂交混合液、杂交缓冲液、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液中的至少一种。
在一个优选实施方案中,所述目标基因的捕获试剂盒中,所述杂交混合液含有浓度为500ng/μL人Cot-1 DNA和浓度为500ng/μL鲑鱼精子DNA,所述杂交缓冲液含有10×SSPE缓冲液、10×邓哈特溶液(Denhardt’s Solution)、10mM EDTA和0.1%SDS,所述洗涤液A含有1×SSC和0.1%SDS,所述洗涤液B含有0.1×SSC和0.1%SDS,所述洗脱液含有0.1M NaOH。
本发明提供了一种目标基因的捕获探针、包括目标基因的捕获探针的捕获试剂盒及捕获目标基因的方法。本发明所述目标基因的捕获探针与全基因组DNA杂交,运用链霉亲和素包被的磁珠,将与探针结合的DNA片段捕捉下来,在进行二代高通量测序前实现对特定目标基因组区域的富集。本发明所述目标基因的捕获探针覆盖率广,测序深度深,极大的提高了基因组中目标区域的研究效率,显著降低了测序成本。本发明所述目标基因捕获试剂盒组成简单,适用范围广,而且成本低,适用于广大的实验室和科研工作。
为了进一步理解本发明,下面结合实施例对本发明进行详细说明。其中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1:生物素标记的目标基因的特异性探针组
1)设计覆盖目标基因的150nt特异性探针序列如SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.1237所示核苷酸序列,生物公司(美国CustomArray公司)合成备用。特异性探针序列为三个部分:15nt通用接头A-120nt目标基因特异性序列-15nt通用接头B,即ATCGCACCAGCGTGT-120nt-CACTGCGGCTCCTCA
2)用PCR的方法富集探针的含量,并连接上T7启动子:使用Titanium Taq PCR Kit(Clontech)
PCR体系(50μL体系)为:
其中引物C为:CTGGGAATCGCACCAGCGTGT
引物D为:CGTGGATGAGGAGCCGCAGTG
反应循环时间为:94℃ 2min
19 cycles:94℃ 30s;55℃ 30s;72℃ 30s
72℃ 2min
PCR产物使用Qiagen QIAquick PCR extration Kit纯化,纯化后的产物用25μL试剂盒(Titanium Taq PCR Kit)洗脱液洗脱。
取1μL PCR纯化后产物重复PCR体系,使用引物E和引物D,50μL体系为:
其中引物E为:GAATTCTAATACGACTCACTATAGGGATCGCACCAGCGTGT
反应循环时间为:94℃ 2min
14 cycles:94℃ 30s;55℃ 30s;72℃ 30s
72℃ 2min
PCR产物使用Qiagen QIAquick PCR extration Kit纯化,纯化后的产物用25μL试剂盒(Titanium Taq PCR Kit)洗脱液洗脱。
3)体外转录成生物素标记的探针混合物:使用MAXIscript T7 kit(Ambion)
100μL体系为:
37℃反应90min,使用Qiagen RNeasy minikit对产物纯化,洗脱于20μL缓冲液中,测定浓度后配制成500ng/μL溶液,即为生物素标记的目标基因的特异性探针组,保存至-70℃
实施例2:目标基因的捕获试剂盒
一种目标基因的捕获试剂盒由实施例1制得的生物素标记的目标基因的特异性探针组、杂交混合液、杂交缓冲液、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液组成。
其中,所述杂交混合液:500ng/μL人Cot-1 DNA和500ng/μL鲑鱼精子DNA;
2×杂交缓冲液:10×SSPE缓冲液、10×邓哈特溶液(Denhardt’s Solution)、10mMEDTA和0.1%SDS;
洗涤液A:1×SSC/0.1%SDS;
洗涤液B:0.1×SSC/0.1%SDS;
洗脱液:0.1M NaOH。
实施例3:
利用illumina标准建库试剂盒构建人全血样品基因组DNA文库,得到250ng/μL的200bp-350bp标准文库片段。
将5μL杂交混合液与2μL标准文库片段共7μL混合液95℃预热5分钟,保持在65℃5分钟后,与预热在65℃的13μL的2倍杂交缓冲液、6μL 500ng生物素标记的目标基因的特异性探针组及20U的RNA酶抑制剂SUPERRase-IN混合,保持在65℃ 16-18h后,加入50μL链亲和素磁珠溶液(M-280 streptavidin Dynabeads,Invitrogen),混合静置30分钟后,用磁力架吸住磁珠15min后,弃去上清液,加入500μL的洗涤液A,室温混匀后,用磁力架吸住磁珠15分钟后,弃去上清液。加入65℃的500μL的洗涤液B,混匀后,用磁力架吸住磁珠15分钟后,弃去上清液。加入50μL洗脱液,混匀磁珠后,用磁力架吸住磁珠15分钟后,取上清液,与70μL的Tris缓冲液混合后,用QIAquick的纯化柱纯化,洗脱于20μL缓冲液。之后的样本按照illumina的测序前处理标准化处理后上机测序。
测序的结果通过标准流程计算机处理:(1)将Fastq格式原始数据用BWA软件和参考基因对比,确定它们在基因组上的位置;(2)使用SAMtools软件把序列按照一定顺序排列;(3)使用Picard软件将测序产生的冗余信息和噪声去掉;(4)使用GATK软件寻找与参考序列的差异;(5)使用Annovar对差异位点进行注释。利用Integrative Genomics Viewer(IGV)软件查看每个基因和每个突变位点的直观测序结果,使用BAMtools软件统计和计算,结果显示覆盖率达到99%,平均深度为487X。
Claims (5)
1.一种目标基因的捕获探针,为生物素标记的目标基因的特异性探针组,所述目标基因包括如下63个基因:
所述特异性探针组包括如SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.1253示核苷酸序列。
2.一种目标基因的捕获方法,为构建样本基因组DNA文库,与权利要求1所述的目标基因的捕获探针杂交,亲和素包被的磁珠捕捉与目标基因的捕获探针结合的DNA片段。
3.一种目标基因的捕获试剂盒,包括权利要求1所述的目标基因的捕获探针。
4.根据权利要求3所述的捕获试剂盒,还包括杂交混合液、杂交缓冲液、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的捕获试剂盒,其中所述杂交混合液含有浓度为500ng/μL人Cot-1DNA和浓度为500ng/μL鲑鱼精子DNA,所述杂交缓冲液含有10×SSPE缓冲液、10×邓哈特溶液(Denhardt’s Solution)、10mM EDTA和0.1%SDS,所述洗涤液A含有1×SSC和0.1%SDS,所述洗涤液B含有0.1×SSC和0.1%SDS,所述洗脱液含有0.1M NaOH。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410508624.4A CN105524981B (zh) | 2014-09-28 | 2014-09-28 | 目标基因的捕获试剂盒及捕获方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410508624.4A CN105524981B (zh) | 2014-09-28 | 2014-09-28 | 目标基因的捕获试剂盒及捕获方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105524981A CN105524981A (zh) | 2016-04-27 |
CN105524981B true CN105524981B (zh) | 2019-02-05 |
Family
ID=55767505
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410508624.4A Active CN105524981B (zh) | 2014-09-28 | 2014-09-28 | 目标基因的捕获试剂盒及捕获方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105524981B (zh) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107304444B (zh) * | 2016-04-22 | 2021-03-23 | 张彦伟 | 用于基因组目标区域捕获测序的杂交富集溶液及试剂盒 |
CN105950750A (zh) * | 2016-06-08 | 2016-09-21 | 福州市传染病医院 | 用于肝癌诊断及预后评估的基因群及试剂盒 |
CN107794293A (zh) * | 2016-08-31 | 2018-03-13 | 安诺优达基因科技(北京)有限公司 | 一种基因捕获试剂盒 |
CN106282361B (zh) * | 2016-08-31 | 2021-06-18 | 浙江安诺优达生物科技有限公司 | 用于捕获血液病相关基因的基因捕获试剂盒 |
CN106755505A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-05-31 | 安诺优达基因科技(北京)有限公司 | 用于检测血浆ctDNA中基因变异的试剂盒 |
CN107058547A (zh) * | 2017-04-28 | 2017-08-18 | 首度生物科技(苏州)有限公司 | 一种精子的检测方法 |
CN107760771A (zh) * | 2017-11-16 | 2018-03-06 | 杭州迪安医学检验中心有限公司 | 一种乳腺癌易感基因brca1和brca2全基因捕获引物、试剂盒及其方法 |
CN108753954B (zh) * | 2018-06-26 | 2022-11-18 | 中南大学湘雅医院 | 痴呆相关基因的捕获探针组、试剂盒、文库构建方法和用途 |
CN109468312A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-03-15 | 北京安智因生物技术有限公司 | 一种遗传性消化道肿瘤的基因文库构建方法和试剂盒 |
CN111378735B (zh) * | 2018-12-28 | 2023-04-25 | 迈基诺(重庆)基因科技有限责任公司 | Sma致病基因捕获试剂盒及应用 |
CN110079602A (zh) * | 2019-05-29 | 2019-08-02 | 重庆市肿瘤研究所 | 甲状腺结节恶性风险评估相关基因捕获探针及制备方法 |
CN110172530A (zh) * | 2019-05-31 | 2019-08-27 | 杭州链康医学检验实验室有限公司 | 一种用于hpv检测的探针及检测方法 |
CN110373469A (zh) * | 2019-08-02 | 2019-10-25 | 重庆大学附属肿瘤医院 | 一种子宫内膜癌个体化用药的捕获测序探针及其制备方法 |
CN110684765A (zh) * | 2019-09-20 | 2020-01-14 | 浙江大学 | 痴呆相关致病基因捕获探针的筛选方法、捕获基因组和产品及应用 |
CN112226502A (zh) * | 2020-10-10 | 2021-01-15 | 福建医科大学附属协和医院 | 一种认知障碍和运动障碍相关基因的捕获方法和试剂盒 |
CN114790453A (zh) * | 2021-01-25 | 2022-07-26 | 上海思路迪生物医学科技有限公司 | 一种快速杂交捕获试剂盒 |
CN113981041B (zh) * | 2021-11-25 | 2024-04-30 | 首都医科大学附属北京安贞医院 | 靶向富集测序试剂及靶向富集方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103667254A (zh) * | 2012-09-18 | 2014-03-26 | 邵阳 | 目标基因片段的富集和检测方法 |
-
2014
- 2014-09-28 CN CN201410508624.4A patent/CN105524981B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103667254A (zh) * | 2012-09-18 | 2014-03-26 | 邵阳 | 目标基因片段的富集和检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JE'RE'MIE Denonfoux等.Gene Capture Coupled to High-Throughput Sequencing as a Strategy for Targeted Metagenome Exploration.《DNA RESEARCH》.2013,第20卷185-196. |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105524981A (zh) | 2016-04-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105524981B (zh) | 目标基因的捕获试剂盒及捕获方法 | |
US11788153B2 (en) | Methods for early detection of cancer | |
JP2022519159A (ja) | 循環細胞の分析方法 | |
JP6571665B2 (ja) | 遺伝的バリアントを検出するための方法およびシステム | |
JP2024054242A (ja) | 無細胞メチル化dnaを捕捉する方法及びその使用 | |
US11891653B2 (en) | Compositions and methods for analyzing cell-free DNA in methylation partitioning assays | |
CN117597456A (zh) | 用于确定肿瘤生长的速度的方法 | |
EP3191628A1 (en) | Identification and use of circulating nucleic acids | |
Choi et al. | Genome-wide DNA methylation maps in follicular lymphoma cells determined by methylation-enriched bisulfite sequencing | |
CN109988820A (zh) | 一种用于乳腺癌多基因检测的文库构建方法及试剂盒 | |
US20180305738A1 (en) | Methods of attaching adapters to sample nucleic acids | |
WO2023133131A1 (en) | Methods for cancer detection and monitoring | |
JP2023110017A (ja) | 遺伝子型決定アッセイにおける一意でないバーコード | |
US20220154286A1 (en) | Compositions and methods for analyzing dna using partitioning and base conversion | |
Surrey et al. | The genomic era of clinical oncology: integrated genomic analysis for precision cancer care | |
WO2020236625A2 (en) | Rapid aneuploidy detection | |
BR112019013391A2 (pt) | Adaptador de ácido nucleico, e, método para detecção de uma mutação em uma molécula de dna circulante tumoral (ctdna) de fita dupla. | |
Wu et al. | Decoding genetic and epigenetic information embedded in cell free DNA with adapted SALP‐seq | |
CN110129457A (zh) | 一种遗传标记组合及其应用 | |
JP2023524681A (ja) | 分配された核酸を使用した配列決定のための方法 | |
Javanmardi | Genomic instability and genetic heterogeneity in neuroblastoma | |
RU2811503C2 (ru) | Способы выявления и мониторинга рака путем персонализированного выявления циркулирующей опухолевой днк | |
WO2024112643A1 (en) | Fragmentomics based identification of tumor-specific copy number alteration states in liquid biopsy | |
Javanmardi | Genomic instability and genetic heterogeneity in neuroblastoma tumours | |
Liu et al. | Genomic Signatures Define Three Subtypes of EGFR-Mutant Stage II-III NSCLC With Distinct Adjuvant Therapy Outcomes |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |