CN105524133B - 一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，步骤为：(1)含有必特螺旋霉素的酯提取液，经三级逆流洗涤，得到洗后酯溶液；(2)用磷酸盐溶液第一次反萃洗后酯溶液，得含有必特螺旋霉素的一次水提液；(3)用酯萃取一次水提液，得到浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液；(4)用磷酸盐溶液第二次反萃酯萃取液，得含有必特螺旋霉素的二次水提液；(5)加入乙醇，滴加碱液结晶，得到必特螺旋霉素成品。与现有技术相比，本发明采用三级逆流萃取洗涤和变相比的多次溶媒萃取法，达到去除较强极性杂质而富集有效组分的目的；并通过加入乙醇调节结晶体系极性和采用低浓度碱液调节结晶液pH的方法，有效去除组分间杂质并富集有效组分。

Description

一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法
技术领域
本发明涉及一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，属于抗生素分离提纯技术领域。
背景技术
大环内酯类抗生素(Macrolides antibiotics)是应用最为广泛的抗菌药物之一，分子结构母体是14～16元环大环内酯，内酯环上的羟基通过糖苷键与1～3分子的糖或氨基糖相连。迄今为止发现的该类抗生素达100余种，临床上常用的有：14元环红霉素(Erythromycin)及其衍生物罗红霉素(Roxithromycin)、克拉霉素(Clarithromycin)，15元环红霉素衍生物阿奇霉素(Azithromycin)，16元环主要有交沙霉素(Josamycin)、柱晶白霉素(Kitasamycin)、麦迪霉素(Midecamycin)、普拉特霉素(Platenomycin)、泰乐菌素(Tylosin)和螺旋霉素(Spiramycin)及其衍生物等。
必特螺旋霉素(Bitespiramycin)，是一种酰化螺旋霉素所组成的多组分混合物，如图1所示，图1中，1.螺旋霉素Ⅲ，2.单乙酰螺旋霉素II，3.单乙酰螺旋霉素III，4.丙酰螺旋霉素II，5.丙酰螺旋霉素III，6.(异)丁酰螺旋霉素II，7.异戊酰螺旋霉素I，8.(异)丁酰螺旋霉素III，9.异戊酰螺旋霉素II，10.异戊酰螺旋霉素III。必特螺旋霉素由工程菌Stmptomyces spiramyceticus WSJ-1产生，是国内首例具有自主知识产权的大环内酯类抗生素。必特螺旋霉素的药效试验表明，其对支原体及革兰氏阳性菌抑制活性较高，对临床耐红霉素的金葡球菌仅有极少交叉耐药性，抗菌活性及治疗效果优于乙酰螺旋霉素、红霉素、麦迪霉素。
必特螺旋霉素成品是由极性不同的酰化螺旋霉素和未知杂质所组成的混合物，各组分的极性差异致使杂质分布非常复杂，如图1。目前必特螺旋霉素的合格标准已明确规定，其规格为异戊酰螺旋霉素III≥30％，异戊酰螺旋霉素I+II+III≥60％，总酰化螺旋霉素≥80％，螺旋霉素≤1.0％，总未知杂质≤5.0％。由于极性接近的有效组分和杂质的性质极为相似，因此在分离提纯的过程中，极性相近的有效组分和未知杂质保持相同程度的去留趋势，将总未知杂质含量控制在不高于5％这一苛刻范围内已成为生产必特螺旋霉素合格品的难点。
对于多组分药物的分离提纯并无太多可以借鉴的成功案例。必特螺旋霉素作为国家一类新药，其组分复杂，目前已报道的关于分离提纯必特螺旋霉素的研究主要集中在溶媒萃取法、大孔树脂吸附法等工艺的研究。例如，中国发明专利CN101921302B公开了一种从发酵液中提取必特螺旋霉素的纯化工艺，该纯化方法通过萃取，尤其是通过缓冲盐溶液洗涤萃取相，去除了其中残留的螺旋霉素，优化了必特螺旋霉素的组分分配。中国发明专利CN103694295A公开了一种优化必特螺旋霉素组分的方法，通过膜分离、大孔树脂吸附洗脱、洗涤和萃取操作，采用分步结晶的方法从水相中提取必特螺旋霉素，可去除弱极性杂质并富集异戊酰螺旋霉素III。然而，针对如何去除组分间杂质并提高有效组分的含量，未见有相关报道。
在工业生产中，分离提纯必特螺旋霉素的工艺主要来源于生产螺旋霉素的工艺方法，即溶媒萃取法，该方法的基本原理为：必特螺旋霉素在不同的pH溶液中以不同的化学状态存在，基于这种特性，使必特螺旋霉素在不同溶媒中发生相转移，进而达到浓缩和提纯的目的。然而，溶媒萃取法对必特螺旋霉素单个组分没有选择特异性，加之其组分及杂质种类多、发酵液不稳定等因素，生产合格的必特螺旋霉素成品有很大的难度。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，以制得必特螺旋霉素合格品。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，该工艺方法包括以下步骤：
(1)三级逆流洗涤：用磷酸盐溶液三级逆流洗涤含有必特螺旋霉素的酯提取液，得到含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液；
(2)第一次反萃：用磷酸盐溶液反萃含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液，静置分液，得含有必特螺旋霉素的一次水提液；
(3)酯萃取：用酯萃取含有必特螺旋霉素的一次水提液，静置分液，得到浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液；
(4)第二次反萃：用磷酸盐溶液反萃浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液，静置分液，得含有必特螺旋霉素的二次水提液；
(5)结晶：向含有必特螺旋霉素的二次水提液中，加入乙醇，滴加碱液结晶，得到必特螺旋霉素成品。
本发明中，用酯提取必特螺旋霉素发酵液得到含有必特螺旋霉素的酯提取液，含有必特螺旋霉素的酯提取液效价为7000-11000u/ml。
步骤(1)所述的三级逆流洗涤步骤中，三级逆流洗涤的温度为15～25℃，优选为20℃，洗涤相比为水相:酯相＝1:1～1:2，优选为1:1.5；
逆流洗涤所用磷酸盐溶液为质量分数0.7％-1％的NaH2PO4溶液；
含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液效价为5000-9000u/ml。
步骤(2)所述的第一次反萃步骤中，反萃相比为水相：酯相＝1:3.5-1:4.5，并调整水相pH至3.5-4.0，静置分液，使含有必特螺旋霉素的一次水提液效价为20000-26000u/mlu/ml；
第一次反萃步骤中，所用磷酸盐溶液为pH＝2.0-2.3、质量分数为0.5-1.0％的NaH2PO4溶液。调节水相pH值采用磷酸溶液。
步骤(3)所述的酯萃取步骤中，用酯萃取前，调节含有必特螺旋霉素的一次水提液pH至6.8-7.0，酯萃取时萃取相比为水相：酯相＝3:1-5:1，使浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液效价为75000-98000u/ml。
步骤(3)所述的酯萃取步骤中，所用的酯为乙酸丁酯。
步骤(4)所述的第二次反萃步骤中，反萃相比为酯相：水相＝1:3-1:5，并调节水相的pH至2.8-3.0，静置分液，使含有必特螺旋霉素的二次水提液效价为13000u/ml-18000u/ml。
第二次反萃步骤中，所用磷酸盐溶液为pH＝2.0-2.3，质量分数为0.5-1.0％的NaH2PO4溶液。调节水相pH值采用磷酸溶液。
步骤(5)所述的结晶步骤中，首先调节含有必特螺旋霉素的二次水提液的pH至4.5-5.5，得到必特螺旋霉素的结晶液，此处由于结晶液的严格pH控制，使得杂质更多的留在母液中，提高结晶产品的纯度，然后向必特螺旋霉素的结晶液中加入乙醇，滴加碱液结晶，得到必特螺旋霉素成品。
调节pH值可以选用0.8～1.2mol/l的NaOH溶液，在调节pH值以后，优选设置去除溶于其中微量酯的步骤，去除微量酯的方法可以采用向含有必特螺旋霉素的二次水提液中持续鼓入空气的方法。
向结晶液中加入乙醇的量为结晶液质量的6％-10％。
结晶过程中首先使用0.8～1.2(优选为1.0)mol/l的碱液滴定结晶液至刚出现沉淀，然后改用浓度为0.05～0.15(优选为0.1)mol/l的碱液继续滴加结晶，控制结晶终点pH值为7.5-8.0。
结晶完成后，进行抽滤，干燥，得到必特螺旋霉素成品。
本发明工艺方法中，所述的酯优选为乙酸丁酯。
本发明工艺方法，对含有必特螺旋霉素的料液进行三级逆流洗涤，利用两次水相萃取与一次酯相萃取，提取酯相中必特螺旋霉素至水相中，向水相中加入少量乙醇，利用低浓度氢氧化钠进行结晶。
本发明利用必特螺旋霉素在高pH值时溶于酯相，低pH值时溶于水相的特性，严格控制洗涤、萃取、结晶过程中的pH值等一系列关键技术参数，制备出异戊酰螺旋霉素III≥30％、异戊酰螺旋霉素I+II+III≥60％、总酰化螺旋霉素≥80％、螺旋霉素≤1.0％、未知杂质≤5.0％的必特螺旋霉素合格品。
本发明综合三级逆流洗涤、溶媒萃取、结晶液中加入少量乙醇、低浓度NaOH结晶的工艺操作，并严格控制各步骤包括pH在内的操作条件，可以得到总未知杂质含量低而有效组分含量高的必特螺旋霉素合格品，目前还未见有相关文献及公开专利报道。
与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：
1)本发明的工艺方法控制指标明确，可控性强，是对工业上溶媒萃取法的改进，可应用于大批量生产必特螺旋霉素的过程中。
2)本发明多级逆流萃取，对从发酵液提取出的含有必特螺旋霉素的酯萃取液进行三级逆流洗涤，实现对萃取液的梯度洗涤，使必特螺旋霉素各组分在水酯两相中的分配系数和选择性系数达到理想值，可大大减少洗涤次数。
3)本发明所使用的溶媒萃取法，使必特螺旋霉素在水酯两相中转移，通过控制水酯两相的相比和关键操作参数pH值，将强极性杂质富集在第二次溶媒乙酸丁酯中，可有效降低未知杂质并提高有效组分的含量，解决了发酵液中异戊酰螺旋霉素III等有效组分含量低的问题，并进一步攻克了传统溶媒萃取法去除未知杂质的难关。
4)本发明在结晶过程中，向结晶液中加入乙醇，乙醇是弱极性溶剂，通过改变结晶液的极性，可以达到优化必特螺旋霉素各组分的目的。
5)本发明所使用的低浓度氢氧化钠结晶工艺，消除了结晶过程中局部过碱的隐患，使析出的结晶晶型更加有序，提高了最终产品的品质。此外，低浓度的碱液对结晶液有很大的稀释作用，使溶解平衡方程中的必特螺旋霉素分子及与必特螺旋霉素性质相似的未知杂质更多解离为离子，这使得母液中保留了更多的杂质，这一操作可有效去除有效组分之间的杂质，从而在一定程度上提高了结晶产品中有效组分的含量。
6)本发明必特螺旋霉素提取工艺，以未知杂质的去除和有效组分含量的提高作为整个工艺的重点，对提取工艺中各个环节的操作参数进行优化，大大提高了必特螺旋霉素成品的合格率。
附图说明
图1为必特螺旋霉素成品高效液相色谱图(HPLC)；
图2为本发明分离提纯必特螺旋霉素的工艺流程图；
图3为实施例1所得必特螺旋霉素合格成品的高效液相色谱(HPLC)图谱；
图4为实施例2所得必特螺旋霉素合格成品的高效液相色谱(HPLC)图谱；
图5为实施例3所得必特螺旋霉素合格成品的高效液相色谱(HPLC)图谱。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
本发明的工艺流程如图2所示，含有必特螺旋霉素的酯提取液，用磷酸盐溶液三级逆流洗涤，得到含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液；含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液，用磷酸盐溶液进行第一次反萃，静置分液，得含有必特螺旋霉素的一次水提液；含有必特螺旋霉素的一次水提液，用酯溶媒萃取，静置分液，得到浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液；浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液，用磷酸盐溶液进行第二次反萃，静置分液，得含有必特螺旋霉素的二次水提液；调节二次水提液的pH值，得到必特螺旋霉素的结晶液，然后向必特螺旋霉素的结晶液中加入乙醇，滴加低浓度碱液结晶，结晶完成后，进行抽滤，干燥，得到必特螺旋霉素成品。
实施例1：
(1)三级逆流洗涤：含有必特螺旋霉素效价为7234u/ml的乙酸丁酯提取液，用质量分数为0.8％的NaH2PO4溶液经三级离心机进行逆流洗涤。洗涤温度为20℃，洗涤相比为水相：酯相＝1:1.5，得到酯相效价为5593u/ml的必特螺旋霉素洗后液。
(2)缓冲液反萃：分离出的乙酸丁酯洗后液用pH＝2.2、质量分数为0.7％的NaH2PO4溶液反萃，反萃相比为水相：酯相＝1:4.5，水酯混合搅拌，用H3PO4调水相pH至3.60，静置分液，得到水相效价为21708u/ml的必特螺旋霉素反萃液。
(3)乙酸丁酯萃取：调节必特螺旋霉素水相反萃液PH至6.80，用乙酸丁酯萃取，萃取相比为水相：酯相＝5:1，静置分液，得到浓缩必特螺旋霉素的乙酸丁酯萃取液，酯相效价为87040u/ml。
(4)缓冲液反萃：缓冲液特性同(2)，反萃相比为酯相：水相＝1:5，水酯混合搅拌，用H3PO4调水相pH值至2.85，静置分液，得到水相效价为15364u/ml的必特螺旋霉素水相反萃液。用1.0mol/l的NaOH回调水相pH至4.95，得必特螺旋霉素的结晶液。
(5)结晶：向结晶液中加入质量分数为结晶液6％的乙醇，结晶过程中首先使用1.0mol/l的NaOH滴定结晶液至刚出现沉淀，然后改用浓度为0.1mol/l的NaOH继续滴加结晶，控制终点pH值为7.70。抽滤，干燥，得必特螺旋霉素成品。
用高效液相色谱对结晶产品进行梯度洗脱，如图3所示，测得必特螺旋霉素含量为：异戊酰螺旋霉素III为32.52％，异戊酰螺旋霉素I+II+III为68.99％，总酰化螺旋霉素为93.05％，螺旋霉素为0％，总未知杂质为4.11％。所得结晶产品含量达到合格标准。
实施例2：
(1)三级逆流洗涤：含有必特螺旋霉素效价为9078u/ml的乙酸丁酯提取液，用1％NaH2PO4溶液经三级离心机进行逆流洗涤。洗涤温度为20℃，洗涤相比为水相：酯相＝1:1.5，得到酯相效价为5249u/ml的必特螺旋霉素洗后液。
(2)缓冲液反萃：分离出的乙酸丁酯洗后液用pH＝2.2的0.7％NaH2PO4溶液反萃，反萃相比为水相：酯相＝1:4，水酯混合搅拌，用H3PO4调水相pH至3.85，静置分液，得到水相效价为20468u/ml的必特螺旋霉素反萃液。
(3)乙酸丁酯萃取：调节必特螺旋霉素水相反萃液PH至7.00，用乙酸丁酯萃取，萃取相比为水相：酯相＝3:1，静置分液，得到浓缩必特螺旋霉素的乙酸丁酯萃取液，酯相效价为77040u/ml。
(4)缓冲液反萃：缓冲液特性同(2)，反萃相比为酯相：水相＝1:3，水酯混合搅拌，用H3PO4调水相pH值至2.90，静置分液，得到水相效价为14078u/ml的必特螺旋霉素水相反萃液。用1.0mol/l的NaOH回调水相pH至5.05，得必特螺旋霉素的结晶液。
(5)结晶：向结晶液中加入质量分数为结晶液8％的乙醇。结晶过程中首先使用1.0mol/l的NaOH滴定结晶液至刚出现沉淀，然后改用浓度为0.1mol/l的NaOH继续滴加结晶，控制终点pH值为7.85。抽滤，干燥，得必特螺旋霉素成品。
用高效液相色谱对结晶产品进行梯度洗脱，如图4所示，测得必特螺旋霉素含量为：异戊酰螺旋霉素III为35.26％，异戊酰螺旋霉素I+II+III为67.26％，总酰化螺旋霉素为98.03％，螺旋霉素为0.05％，总未知杂质为3.28％。所得结晶产品含量达到合格标准。
实施例3：
(1)三级逆流洗涤：含有必特螺旋霉素效价为8578u/ml的乙酸丁酯提取液，用0.9％NaH2PO4溶液经三级离心机进行逆流洗涤。洗涤温度为20℃，洗涤相比为水相：酯相＝1:1.5，得到酯相效价为6091u/ml的必特螺旋霉素洗后液。
(2)缓冲液反萃：分离出的乙酸丁酯洗后液用pH＝2.2的0.7％NaH2PO4溶液反萃，反萃相比为水相：酯相＝1:3.5，水酯混合搅拌，用H3PO4调水相pH至3.75，静置分液，得到水相效价为20972u/ml的必特螺旋霉素反萃液。
(3)乙酸丁酯萃取：调节必特螺旋霉素水相反萃液PH至6.90，用乙酸丁酯萃取，萃取相比为水相：酯相＝4:1，静置分液，得到浓缩必特螺旋霉素的乙酸丁酯萃取液，酯相效价为79140u/ml。
(4)缓冲液反萃：缓冲液特性同(2)，反萃相比为酯相：水相＝1:4，水酯混合搅拌，用H3PO4调水相pH值至2.80，静置分液，得到水相效价为12920u/ml的必特螺旋霉素水相反萃液。用1.0mol/l的NaOH回调水相pH至5.30，得必特螺旋霉素的结晶液。
(5)结晶：向结晶液中加入质量分数为结晶液10％的乙醇。结晶过程中首先使用1.0mol/l的NaOH滴定结晶液至刚出现沉淀，然后改用浓度为0.1mol/l的NaOH继续滴加结晶，控制终点pH值为7.75。抽滤，干燥，得必特螺旋霉素成品。
用高效液相色谱对结晶产品进行梯度洗脱，如图5所示，测得必特螺旋霉素含量为：异戊酰螺旋霉素III为46.69％，异戊酰螺旋霉素I+II+III为65.23％，总酰化螺旋霉素为87.73％，螺旋霉素为0.03％，总未知杂质为3.65％。所得结晶产品含量达到合格标准。
实施例4：
一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，该工艺方法包括以下步骤：
(1)三级逆流洗涤：用酯提取必特螺旋霉素发酵液得到含有必特螺旋霉素的酯提取液，含有必特螺旋霉素的酯提取液效价为7000u/ml。用质量分数0.8％的NaH2PO4溶液三级逆流洗涤含有必特螺旋霉素的酯提取液，三级逆流洗涤的温度为15℃，洗涤相比为水相:酯相＝1:1，得到含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液，其中含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液效价为5000u/ml。
(2)第一次反萃：用pH＝2.0，质量分数为0.5％的NaH2PO4溶液反萃含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液，反萃相比为水相：酯相＝1:4.5，并调整水相pH至3.5，静置分液得含有必特螺旋霉素的一次水提液，且含有必特螺旋霉素的一次水提液效价为20000u/ml；
(3)酯萃取：用酯萃取前，调节含有必特螺旋霉素的一次水提液pH至6.8，用乙酸丁酯萃取含有必特螺旋霉素的一次水提液，萃取相比为水相：酯相＝5:1，静置分液，得到浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液，且浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液效价为90000u/ml；
(4)第二次反萃：用pH＝2.0，质量分数为0.5％的NaH2PO4溶液反萃浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液，反萃相比为酯相：水相＝1:5，并采用磷酸溶液调节水相的pH至2.8，静置分液，得含有必特螺旋霉素的二次水提液，且含有必特螺旋霉素的二次水提液效价为13000u/ml；
(5)结晶：首先用0.8mol/l的NaOH溶液调节含有必特螺旋霉素的二次水提液的pH至4.5，得到必特螺旋霉素的结晶液，然后向必特螺旋霉素的结晶液中加入乙醇，乙醇的量为结晶液质量的6％，结晶过程中首先使用0.8mol/l的碱液滴定结晶液至刚出现沉淀，然后改用浓度为0.05mol/l的碱液继续滴加结晶，控制结晶终点pH值为7.5，结晶完成后，进行抽滤，干燥，得到必特螺旋霉素成品。
本实施例所得必特螺旋霉素成品中，测得必特螺旋霉素含量为：异戊酰螺旋霉素III为39.62％，异戊酰螺旋霉素I+II+III为63.42％，总酰化螺旋霉素为82.91％，螺旋霉素为0.57％，总未知杂质为4.35％。所得结晶产品含量达到合格标准。
实施例5：
一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，该工艺方法包括以下步骤：
(1)三级逆流洗涤：用酯提取必特螺旋霉素发酵液得到含有必特螺旋霉素的酯提取液，含有必特螺旋霉素的酯提取液效价为11000u/ml。用质量分数1％的NaH2PO4溶液三级逆流洗涤含有必特螺旋霉素的酯提取液，三级逆流洗涤的温度为25℃，洗涤相比为水相:酯相＝1:2，得到含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液，其中含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液效价为9000u/ml。
(2)第一次反萃：用pH＝2.3，质量分数为1.0％的NaH2PO4溶液反萃含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液，反萃相比为水相：酯相＝1:3.5，并调整水相pH至4.0，静置分液得含有必特螺旋霉素的一次水提液，且含有必特螺旋霉素的一次水提液效价为26000u/ml；
(3)酯萃取：用酯萃取前，调节含有必特螺旋霉素的一次水提液pH至7.0，用乙酸丁酯萃取含有必特螺旋霉素的一次水提液，萃取相比为水相：酯相＝4:1，静置分液，得到浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液，且浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液效价为95000u/ml；
(4)第二次反萃：用pH＝2.3，质量分数为1.0％的NaH2PO4溶液反萃浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液，反萃相比为酯相：水相＝1:3，并采用磷酸溶液调节水相的pH至3.0，静置分液，得含有必特螺旋霉素的二次水提液，且含有必特螺旋霉素的二次水提液效价为18000u/ml；
(5)结晶：首先用1.2mol/l的NaOH溶液调节含有必特螺旋霉素的二次水提液的pH至5.5，得到必特螺旋霉素的结晶液，然后向必特螺旋霉素的结晶液中加入乙醇，乙醇的量为结晶液质量的10％，结晶过程中首先使用1.2mol/l的碱液滴定结晶液至刚出现沉淀，然后改用浓度为0.15mol/l的碱液继续滴加结晶，控制结晶终点pH值为8.0，结晶完成后，进行抽滤，干燥，得到必特螺旋霉素成品。
本实施例所得必特螺旋霉素成品中，测得必特螺旋霉素含量为：异戊酰螺旋霉素III为36.52％，异戊酰螺旋霉素I+II+III为62.34％，总酰化螺旋霉素为82.3％，螺旋霉素为0.63％，总未知杂质为4.15％。所得结晶产品含量达到合格标准。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，其特征在于，该工艺方法包括以下步骤：
(1)三级逆流洗涤：用磷酸盐溶液三级逆流洗涤含有必特螺旋霉素的酯提取液，得到含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液；
(2)第一次反萃：用磷酸盐溶液反萃含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液，静置分液，得含有必特螺旋霉素的一次水提液；
(3)酯萃取：用酯萃取含有必特螺旋霉素的一次水提液，静置分液，得到浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液；
(4)第二次反萃：用磷酸盐溶液反萃浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液，静置分液，得含有必特螺旋霉素的二次水提液；
(5)结晶：向含有必特螺旋霉素的二次水提液中，加入乙醇，滴加碱液结晶，得到必特螺旋霉素成品；
用酯提取必特螺旋霉素发酵液得到含有必特螺旋霉素的酯提取液，含有必特螺旋霉素的酯提取液效价为7000-11000u/ml；
步骤(5)所述的结晶步骤中，首先调节含有必特螺旋霉素的二次水提液的pH至4.5-5.5，向含有必特螺旋霉素的二次水提液中持续鼓入空气，以去除微量酯，得到必特螺旋霉素的结晶液，然后向必特螺旋霉素的结晶液中加入乙醇，向结晶液中加入乙醇的量为结晶液质量的6％-10％，滴加碱液结晶，得到必特螺旋霉素成品；
结晶过程中首先使用0.8～1.2mol/l的碱液滴定结晶液至刚出现沉淀，然后改用浓度为0.05～0.15mol/l的碱液继续滴加结晶，控制结晶终点pH值为7.5-8.0。
2.根据权利要求1所述的一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，其特征在于，步骤(1)所述的三级逆流洗涤步骤中，三级逆流洗涤的温度为15～25℃，洗涤相比为水相:酯相＝1:1～1:2；
逆流洗涤所用磷酸盐溶液为质量分数0.7％-1％的NaH2PO4溶液；
含有必特螺旋霉素的洗后酯溶液效价为5000-9000u/ml。
3.根据权利要求1所述的一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，其特征在于，步骤(2)所述的第一次反萃步骤中，反萃相比为水相：酯相＝1:3.5-1:4.5，并调整水相pH至3.5-4.0，静置分液，使含有必特螺旋霉素的一次水提液效价为20000-26000u/ml；
第一次反萃步骤中，所用磷酸盐溶液为pH＝2.0-2.3、质量分数为0.5-1.0％的NaH2PO4溶液。
4.根据权利要求1所述的一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，其特征在于，步骤(3)所述的酯萃取步骤中，用酯萃取前，调节含有必特螺旋霉素的一次水提液pH至6.8-7.0，酯萃取时萃取相比为水相：酯相＝3:1-5:1，使浓缩必特螺旋霉素的酯萃取液效价为75000-98000u/ml。
5.根据权利要求1所述的一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，其特征在于，步骤(4)所述的第二次反萃步骤中，反萃相比为酯相：水相＝1:3-1:5，并调节水相的pH至2.8-3.0，静置分液，使含有必特螺旋霉素的二次水提液效价为13000u/ml-18000u/ml。
6.根据权利要求1所述的一种分离提纯必特螺旋霉素的工艺方法，其特征在于，结晶完成后，进行抽滤，干燥，得到必特螺旋霉素成品。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101921302A (zh) * 2010-07-16 2010-12-22 华东理工大学 可利霉素的纯化工艺
CN103694295A (zh) * 2014-01-08 2014-04-02 华东理工大学 一种优化可利霉素组分的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101921302A (zh) * 2010-07-16 2010-12-22 华东理工大学 可利霉素的纯化工艺
CN103694295A (zh) * 2014-01-08 2014-04-02 华东理工大学 一种优化可利霉素组分的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
多级逆流分配—分步结晶法分离螺旋霉素与必特螺旋霉素;万倩玉;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）》;20151215(第12期);B016-474页；正文第34-45页第4章

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