CN105517573A - 合成用于绿脓杆菌疫苗的低聚糖 - Google Patents

合成用于绿脓杆菌疫苗的低聚糖 Download PDF

Info

Publication number
CN105517573A
CN105517573A CN201480048550.9A CN201480048550A CN105517573A CN 105517573 A CN105517573 A CN 105517573A CN 201480048550 A CN201480048550 A CN 201480048550A CN 105517573 A CN105517573 A CN 105517573A
Authority
CN
China
Prior art keywords
oligosaccharide
antibody
rha
carrier
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201480048550.9A
Other languages
English (en)
Inventor
A·S·坎贝尔
O·J·普兰特
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Visterra Inc
Original Assignee
Synglyco Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Synglyco Pharmaceuticals Inc filed Critical Synglyco Pharmaceuticals Inc
Publication of CN105517573A publication Critical patent/CN105517573A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/104—Pseudomonadales, e.g. Pseudomonas
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
    • C07H13/02—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids
    • C07H13/04—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals attached to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
    • C07K16/1214—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Pseudomonadaceae (F)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/21—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Pseudomonadaceae (F)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明提供了合成的绿脓杆菌脂多糖(LOS)-基低聚糖以及含有多种绿脓杆菌血清型特异性的低聚糖抗原或多种核心绿脓杆菌低聚糖结构或者基序的共轭物。本发明进一步提供了绿脓杆菌LOS-基免疫原和免疫保护组合物和由此得到的抗体，用于诊断、治疗和预防由绿脓杆菌引起的感染。

Description

合成用于绿脓杆菌疫苗的低聚糖
相关申请的交叉引用
本申请要求享有2013年7月3日提交的美国临时专利申请号为61/842,474的权益,该专利的全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明涉及免疫原性和免疫保护的组合物以及用于制备和使用同源合成的绿脓杆菌脂多糖(P.aeruginosalipooligosaccharide)(LOS)-基的低聚糖，共轭物及其衍生的抗体的方法。
发明内容
本发明提供了合成的低聚糖1a或者1b：
其中每个R1和R2各自独立地为H、一种单醣或者一种寡糖，X是H、一种连接基团、或者一种保护基团；L是一种连接基团并且Y是一种载体。在某些实施方案中，R1和R2每个独立地为H、α-Rha-、α-Glc(1-2)-α-Rha-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha-、β-FucNAc(1-3)-α-Rha-、α-Rha[2,3,4-OAc]-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2,4-OAc]-、或者β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2,4,-OAc]-。在某些实施方案中，R1和R2选自在下表中所述的组合：
R1 R2
α-Rha- H
α-Glc(1-2)-α-Rha- H
H α-Rha-
H β-QuiNAc(1-3)-α-Rha-
H β-FucNAc(1-3)-α-Rha-
H α-Rha[2,3,4-OAc]-
H β-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2,4-OAc]-
H β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2,4,-OAc]-
本发明还包括组合物，其含有一种抗原1a和/或1b以及一种药物学可接受的载体。优选地组合物含有一种单一抗原或者一种公知的、定义的抗原混合物。
本发明进一步提供了疫苗组合物，包括免疫原性和免疫保护的组合物，包括抗原1a和/或1b以及一种药学上可接受的载体。这些疫苗组合物可任选地包括一种药学上可接受的佐剂。优选地，所述疫苗组合物是无内毒素的。所述的疫苗组合物可以是一、二、三、或者四价。
本发明进一步提供了一种用于人工合成低聚糖1a和抗原1b。
本发明进一步提供了用于诊断、治疗和预防由P.aeruginosa引起的感染。
具体实施方案
定义
为了提供一种对说明书和权利要求书的清楚和一致的理解，提供了一下术语的定义。
单位、前缀和符号可以它们的SI形式表示。在这里所限定的数字范围包括限定范围的边界数，并且包括所限定范围内的所有数。除非另有说明，术语“一个(a)”或者“一个(an)”可以解释为“至少其中一个”的意义加以理解。在此所使用的段落标题仅用于组织的目的，而不理解为多所述的主题的限定。在本申请中所引用的所有的文献，或者文献的部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍以及论文，其所有或部分作为参考均完整的通过引用结合到本文中。
正如在这里所使用的，“低聚糖”涉及一种化合物，其含有两个或多个单糖单元。低聚糖被认为是具有还原端以及非还原端，无论是否在还原端上的所述单糖单元实际上是一种还原糖。根据本领域所接受的术语，低聚糖在这里所指出的是具有在左侧的非还原端以及在右侧的还原端。在这里所描述的低聚糖是用针对非还原单糖(例如，Gal)的命名或者缩写进行描述的，加上糖苷键(α或者β)、换件、在减重所涉及的还原单糖的换位置的结构的前缀，并且之后是所述还原单糖(例如，GlcNAc)的名称或者缩写。在两种糖之间的连接键可以表示为，例如，2,3、2→3、或者2-3。每种单糖是吡喃糖或者呋喃糖。
正如在这里所使用的，“单糖”或者“单糖单元”涉及在低聚糖中的单个的糖残基，包括其衍生物。在上下文的低聚糖中，各单体单元是单糖，其是(或者可以是)通过羟基基团连接到另一个单糖上。
正如在这里所使用的，“无内毒素”指的是一种不含有通常存在于分离的细菌糖类或者多糖类中的内毒素或者内毒素成分的低聚糖。
正如在这里所使用的，“合成物”指的是一种材料，其基本上或者大体上不含有一些成分，例如内毒素、糖脂类、不相关的低聚糖等等，当其被分离时其通常伴随有一种化合物。典型的，合成的化合物有至少大约90％的纯度，通常为至少大约95％，并且优选为至少大约99％的纯度。纯度可以用本领域所熟知的多种方式进行测定。优选地，纯度是通过HPLC进行测定。合成的材料的标识是通过质朴分析和/或NMR波谱法进行确定。
正如在这里所使用的，术语“连接物”指的是键或者基团，根据本发明所述，其表现出在末端进入到与载体的反应功能基团共价连接的种类，例如，氨基、硫醇或者羧基基团，并且在另一个末端同样地一种能够进入到与低聚糖的羟基或者氨基基团共价连接的种类。在这里的连接分子的两个功能基团之间是合适长度的生物相容性桥接分子，例如取代或者未被取代的杂烷基、芳烷基、烯烃基、亚烯基或者(寡)亚烷基二醇基团。连接物优选包括一种取代的或者未被取代的(C1-C10)亚烷基基团或者一种取代的或者未被取代的(C2-C10)亚烯基基团。
正如在这里所使用的，术语“载体”指的是蛋白质、肽、脂质、聚合物、树枝状聚合物、病毒颗粒、病毒类似物颗粒(VLP)，或者它们的组合，其被连接到低聚糖上从而将所得到的低聚糖-载体共轭物的免疫原性增强至比单独的低聚糖更高的水平。
正如在这里所使用的，“蛋白质载体”指的是一种蛋白质、肽或其片段，其被连接或者共轭到低聚糖上从而将所得到的低聚糖-蛋白质载体共轭物的免疫原性增强至比单独的低聚糖更高的水平。例如，当使用一种载体时，蛋白质载体可起到T-依赖抗原的作用，所述T-依赖抗原能够激活并且召集T细胞从而由此增强T细胞依赖性的抗体产生。
正如在这里所使用的，“共轭”指的是一种化学交联，不论是共价的还是非共价的，其最接近地将低聚糖与一种载体相关联从而所述低聚糖共轭物具有相对于非共轭的低聚糖而言增强的免疫原性。
正如在这里所使用的，“共轭物”值得是通过键和/或交联剂与一种载体化学结合的低聚糖。
正如在这里所使用的，“被动免疫”指的是将抗体给药于受试者，其中所述抗体是在不同的受试者中产生的(包括相同或者不同种类的受试者)，从而所述抗体附着在细菌表面上，并造成细胞被吞噬。
正如在这里所使用的，“保护性免疫”指的是给药于动物的疫苗或者免疫接种程序表，诱导一种免疫应答，从而预防、阻碍疾病的严重程度的发展，或者降低疾病的严重程度，所述疾病是由病原体引起的，或者减少或完全消除疾病的症状。保护性免疫也可以在合适的动物攻击模型中基于血清抗体被预测用于激活补体介导的杀菌活性或者给予被动保护抵抗细菌感染。
正如在这里所使用的，“免疫保护性组合物”指的是一种制备用于在宿主中提供保护性免疫的组合物。
正如在这里所使用的,“以一种足以诱发免疫应答的量”或者“以一种刺激免疫应答的有效剂量”(例如，为了存在于制剂中的表位)指的是在给药一种具体的抗原制剂之前以及在给药一种具体的抗原制剂之后测量的免疫应答指示之间具有一种可检测的差异。免疫应答指示包括，但不限于：抗体滴度或特异性，如通过一种分析所检测到的，例如酶联免疫分析法(ELISA)、细菌测定(例如，用于测定血清杀菌抗体)、流式细胞仪、免疫沉淀、Ouchter-Lowry免疫扩散；例如光点、蛋白质印记或者抗原阵列的结合检测测试；细胞毒性测试等等。
正如在这里所使用的，“抗体”包含多可龙和单克隆抗体制剂，以及与抗体的母体分子显示免疫结合性质的包括杂交抗体、改造抗体、F(ab')2片段、F(ab)分子、Fv片段、在噬菌体上显示的单链可变片段(scFv)、单结构域抗体、嵌合抗体、人源化抗体、及其功能性片段。
正如在这里所使用的，“单克隆抗体”指的是一种具有基本同质的抗体群体的抗体组合物。所述术语并不受气制备的方式限制。该术语涵盖完整的免疫球蛋白分子，以及与抗体的母体分子显示免疫结合性质的F(ab')2片段、F(ab)分子、Fv片段、在噬菌体上显示的单链可变片段(scFv)、以及其他分子。
正如在这里所使用的，“特异性结合抗体”或者“特异性免疫反应”，当涉及一种低聚糖、蛋白质或肽时，指的是一种连接反应，其是基于和/或是在样品中存在抗原的证明，其还可能包括其他分子的特异性群体。因此，在设定的免疫测定条件下，特定的抗体(或者抗体)结合在样品中的特定的抗原(或抗原)上，并且不会以一种显著的量与存在于样品中的其他分子结合。在这种条件下雨抗体的特异性结合可能要根据其对特定抗原(或抗原)的特异性来选择的抗体或者抗血清。
正如在这里所使用的，“抗原”指的是可以被抗体分子特异性结合的任何物质。
正如在这里所使用的，“免疫原”和“免疫原性组合物”指的是抗原组合物，其能够启动淋巴细胞活化从而导致抗原-特异性免疫应答。
正如在这里所使用的，“表位”涉及针对其特异性B细胞和/或T小应答的抗原上的位点。所述术语页可以与“抗原决定簇”或者“抗原决定位点”互换使用。在蛋白质、低聚糖或者其他生物聚合物上的B细胞表位位点可以由来自大分子的不同部分的基团组成，所述大分子通过折叠聚集在一起。这种类型的表位被称为构想的或者非连续的表位，因为该位点是由聚合物的片段构成的，其在线性序列中是不连续的，但是在折叠构象中时连续的。有生物聚合物或其他分子的单个片段构成的位点被称为连续或线性位点。T细胞位点通常被限制为线性肽。在一个简单的免疫测定中可以鉴定出识别相同表位的抗体，表明一种抗体阻断另一种抗体与靶体抗原结合的能力。
术语Ac指的是乙酰(-C(O)CH3)。
术语TBS指的是叔丁基二甲基硅。
术语Troc指的是2,2,2-三氯乙氧基羰基。
术语TCI指的是三氯乙酰亚氨酸酯。
术语Phth指的是领苯二甲酰基。
术语TFA指的是三氟醋酸盐。
术语TCA指的是三氯醋酸盐。
术语Cbz指的是苄氧羰基。
术语Bz指的是苯甲酰。
术语Bn指的是苄基。
术语TES指的是三乙基甲硅烷基。
术语TBDPS指的是叔-丁基二苯基甲硅烷基。
术语MCA指的是单氟醋酸钠。
术语Lev指的是乙酰丙酰基。
术语ADMB指的是4-O-乙酰基2,2二甲基丁酸酯。
术语Tr指的是三苯甲基。
术语DMT指的是二甲氧三苯甲基。
术语FMOC指的是9-芴基甲基碳酸盐。
术语Alloc指的是烯丙基氧羰基。
术语Nap指的是萘基。
术语SEt指的是甲硫基乙基。
术语SPh指的是苯硫基。
术语STol指的是甲苯基硫代。
术语SAdm指的是硫代金刚烷基。
合成低聚糖
本发明提供了一种组合物以及用于化学合成对应于绿脓杆菌(P.aeruginosa)脂多糖(LOS)部分、外膜的主要表面成分的抗原结构的方法。
在低聚糖(1a和1b)中，低聚糖可包括一种或多种通过一个或多个α-和/或β-单糖苷键连接到另一个单糖单元上的单糖单元。优选的，所述低聚糖将包括天然地在绿脓杆菌(P.aeruginosa)LOS结构中发现的单糖单元和糖苷键，通常是以1-2或者1-4连接。本发明进一步涉及了其他的连接，例如1-3,和1-6，特别是当低聚糖设计是延伸到天然的绿脓杆菌(P.aeruginosa)LOS结构之外时。
当R1或R2的任一个是低聚糖时，其可以包含1到大约6之间的，优选地多大大约4个单糖单元。本发明考虑了包含天然的和改性的单糖单元，例如葡萄糖、果糖胺和鼠李糖，特别是当低聚糖设计是延伸到天然的绿脓杆菌(P.aeruginosa)LOS结构之外时。
在化合物(1a和1b)中，优选的糖取代基包括α-Rha-鼠李糖)、α-Glc(1-2)-α-Rha-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha-、β-FucNAc(1-3)-α-Rha-、α-Rha[2,3,4-OAc]-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2,4-OAc]-、和β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2,4,-OAc]-。
在一个方面，本发明提供了低聚糖1a：
其中R1和R2的每个各自独立地为H、单糖或者低聚糖，并且X是H、一种连接基团或者一种保护基团。优选地，R1和R2选自H、α-Rha-(鼠李糖)、α-Glc(1-2)-α-Rha-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha-、β-FucNAc(1-3)-α-Rha-、α-Rha[2,3,4-OAc]-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2,4-OAc]-、以及β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2,4,-OAc]-。更为优选地，R1和R2选自选自下表中的组合：
R 1 R 2
α-Rha- H
α-Glc(1-2)-α-Rha- H
H α-Rha-
H β-QuiNAc(1-3)-α-Rha-
H β-FucNAc(1-3)-α-Rha-
H α-Rha[2,3,4-OAc]-
H β-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2,4-OAc]-
H β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2,4,-OAc]-
在另一个方面，本发明提供了低聚糖1b：
其中R1和R2的每个各自独立地为H、单糖或者低聚糖，L是一种连接基团，并且Y是一种载体。优选地，R1和R2选自H、α-Rha-(鼠李糖)、α-Glc(1-2)-α-Rha-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha-、β-FucNAc(1-3)-α-Rha-、α-Rha[2,3,4-OAc]-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2,4-OAc]-、以及β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2,4,-OAc]-。更为优选地，R1和R2选自选自下表中的组合：
在一个实施方案中，低聚糖(1a)具有式(2a)：
在另一个实施方案中，低聚糖(1b)具有式(2b)：
在进一步的实施方案中，低聚糖(1a)具有式(3a)：
在进一步的实施方案中，低聚糖(1b)具有式(3b)：
在进一步的实施方案中，低聚糖(1a)具有式(4a)：
在进一步的实施方案中，低聚糖(1b)具有式(4b)：
在进一步的实施方案中，低聚糖(1a)具有式(5a):
在进一步的实施方案中，低聚糖(1b)具有式(5b):
在进一步的实施方案中，低聚糖(1a)具有式(6a):
在进一步的实施方案中，低聚糖(1b)具有式(6b):
在进一步的实施方案中，低聚糖(1a)具有式(7a):
在进一步的实施方案中，低聚糖(1b)具有式(7b):
在进一步的实施方案中，低聚糖(1a)具有式(8a)：
在进一步的实施方案中，低聚糖(1b)具有式(8b):
在进一步的实施方案中，低聚糖(1a)具有式(9a):
在进一步的实施方案中，低聚糖(1b)具有式(9b):
表1列出了建议的通过置换被包含之内的优选的R1和R2的组合和假单胞菌(Psuedomonas)血清型。
表1.
在另一个方面，本发明提供了一种LOS抗原，其由核心低聚糖结构的或者对应于在表1中所指出的一个或多个所述20主要血清型、给定血清型中的成员以及个体的血清型亚型的基序构成。在下述技术方案中，连接体被例举为具有1到20个碳原子的硫醇基团，优选的是在1到8个之间。在任意的这些实施方案中，所显示的连接体(即，硫醇基团)可以被任意其它在这里所描述的适合的连接体所替代。
当认识到，本发明还考虑并提供了足够的下述指导用于修饰任意上述所描述的具有不同连接体和/或间隔的硫醇产品，并且用于生产涉及任意上述所描述的低聚糖的LOS结构，包括任意由此衍生的后续组合，或者实际上任意与此有关的绿脓杆菌(P.aeruginosa)LOS结构。
在一个进一步的方面，本发明提供了多价的LOS抗原组合(及其共轭物)，表示在表1中所描述的多个不同的低聚糖中任一个，例如，或者具有一个或多个其它蛋白质抗原、碳水化合物O－抗原和/或藻酸盐的合成的低聚糖的一个或多个的多价组合。
相对于本发明而言适合的连接体包括在一端能够进入到一种共价键中与载体的反应功能基团连接的组，例如，氨基、硫醇基、或者羧基基团，并且包括在另一端同样能够进入到与一种低聚糖的羟基基团共价连接的类似的组。在连接分子的两个功能基团之间，具有一种合适长度的生物相容性桥接分子，例如，取代或未被取代的杂烷基、芳基烷基、亚烷基、亚烯基或者(低聚)亚烷基二醇基团。优选地连接体包括取代或未被取代的包含1-10个碳原子的亚烷基或者亚烯基基团。
能够与在载体上的硫醇基团反应的连接体是，例如，马来酰亚胺和羧基基团；优选的能够与醛或者羰基基团反应的基团是，例如，氨基或者硫醇基团。在连接体和载体之间的优选的共价连接包括由硫醇与α-卤代羰基或者α-卤代腈的反应产生的硫醚，包括硫醇与马来亚胺的反应；由酰肼或者联氨与一种激活的羰基基团(例如,激活的NHS-酯或者酰基卤)反应产生的酰肼类；由叠氮化物与炔烃(例如，通过“点击化学”)反应得到的三唑；以及有羟胺与例如在Leesetal.,Vaccine,24:716,2006所公开的乙醛或者酮反应得到的肟。进一步核实的连接分子是本领域技术人员已知的，并且是市场上可以买到的或者能够按在需求以及依据已知的功能基团被设计的并且能够通过已知的方法进行制备。
适合的载体是在本领域所已知的(参见，例如雷明顿制药科学(Remington’sPharmaceuticalSciences)(18thed.,MackEaston,PA(1990))并且可以包括，例如，蛋白质、肽、脂质、聚合为、树枝状聚合为、病毒体、病毒已知样颗粒(VLPs)，或者他们的组合，其通过其本身不能显示具体的抗原性质，但是能够支持宿主与载体表面上所显示的本发明(抗原)的低聚糖的免疫原性反应。
优选地，载体时一种蛋白质载体，包括但不限于，细菌类毒素、毒素、外毒素、及其无毒衍生物，例如破伤风类毒素、破伤风毒素片段C、白喉类病毒、CRM(无毒的白喉类病毒突变体)例如CRM197、霍乱类毒素、金黄色葡萄球菌外毒素或类毒素、大肠杆菌热肠毒素、绿脓杆菌外毒素A,包括重组产生的、其基因方面解毒变体；细菌外膜蛋白，例如脑膜炎奈瑟氏菌、血清型乙外膜蛋白复合物(OMPC)、外膜3类孔蛋白(rPorB)和其它的孔蛋白；匙孔血蓝蛋白(KLH)、乙型肝炎病毒核心蛋白、甲状腺球蛋白、白蛋白比方说牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、和卵清蛋白；肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌粘附蛋白(PsaA)；结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)；运铁蛋白结合蛋白、聚氨基酸比方说聚(赖氨酸:谷氨酸)；TLR-5的肽激动剂(例如能动菌例如李斯特菌的鞭毛蛋白)；及上述所述的载体的衍生物和/或组合。优选的用于人类的载体包括破伤风类毒素、CRM197、和OMPC。
根据在连接体和载体之间的连接的类型，以及载体和低聚糖的结构性质，载体可以表现出在其表面上例如平均1到500，1到100，1到20，或者3到9个低聚糖单元。
用于将低聚糖连接到载体上的方法是常规的，所述载体例如是载体蛋白质，并且本领域技术人员能够根据本发明所公开的内容使用常规的方法产生共轭物。也可以使用在各种公开内容中的指导，包括，例如，U.S.Pat.Nos.4,356,170；4,619,828；5,153,312；5,422,427；以及5,445,817；以及在多种印刷物和在线的穿孔乳蛋白交联指南和目录(ThermoFisher,Rockford,IL)。
在一个实施方案中，本发明的糖类抗原被共轭到CRM197，一种在多种FDA批准的疫苗中使用的市场上可买到的蛋白质载体。相对于其他的FDA批准的载体例如OMPC而言CRM-共轭物具有更容易被合成、纯化和表征的优势。糖类抗原可通过硫醇-溴乙酰基共轭化学与CRM进行共轭。CRM激活可通过使用在在前的US专利申请2007-013476(该专利申请的公开内容已通过引用全部并入本文)中所描述的标准条件将赖氨酸侧链与溴乙酸的NHS酯进行反应得到。CRM可以在共轭之前用每个蛋白质(n＝10-20)的10-20溴乙酰基基团进行官能化。共轭反应在pH＝9的条件下进行，用以避免CRM的聚集。必须对pH的进行仔细检测，用以确保CRM与NHS-溴乙酸酯的反应完全，并且是CRM的背景水解最小化。激活的CRM可以在共轭反应之前通过尺寸排除色谱法进行纯化。抗原-CRM共轭物可以通过将硫醇-封端的糖抗原与溴乙酰胺-活化的CRM进行反应来合成。
CRM共轭物可以通过尺寸排除色谱法进行纯化，从而去除并恢复任何未反应的糖类。MBTH(针对GlcNAc残基特异性)以及Bradford分析法可被用于分别确定糖类：蛋白质比率以及蛋白质含量，如在前所述(Manzietal.,Curr.Prot.Mol.Biol.,section17.9.1(Suppl.32),1995)。在优选的实施方案中，可以产生对于每个共轭物以重量级大约10％的最小化的糖类含量。典型的，一种共轭物可包括陪个蛋白质载体大约3-20个抗原。
在另一个实施方案中，糖抗原可以共轭到一种或多种施用于诊断分析发展的载体上，包括ELISAs和微阵列法。用于在这些分析法中使用的示例性的载体包括羊血清蛋白(BSA)、匙孔血蓝蛋白(KLH)、生物素、一种标记、一种玻璃载片或者一种金表面。通过示例的方式，合成的糖抗原可通过一种硫醇-马来酰亚胺结合方法被共轭到BSA上(附图5B)。马来酰亚胺-BSA含有15-20个马来酰亚胺基团每个蛋白质(n＝15-20)。因此，低聚糖抗原可被结合到马来酰亚胺官能化的BSA上，通过20-倍摩尔过量的抗原与在马来酰亚胺共轭缓冲液(Pierce)中的市场上可买到的Imject马来酰亚胺BSA(Pierce)。共轭反应可以在pH＝7.2下进行从而避免在共轭反应过程中马来酰亚胺的水解。
BSA共轭物可以通过尺寸排除色谱法进行纯化从而去除并恢复任何未反应的糖类。通过苯酚-硫酸和Bradford分析法进行的表征可以与MALDI-MS一起进行，从而提供在共轭物的糖类含量和化合价方面的信息。在优选的实施方案中，共轭物将含有每BSA共轭物以重量计大约10％的最小糖类含量以及每共轭物>8的抗原拷贝数。
用于合成LOS-低聚糖结构的方法
在进一步的方面中，本发明提供了一种用于收集来自绿脓杆菌(P.aeruginosa)的合成的同源LOS-低聚糖结构的方法，包括那些从单糖和二糖切块中得到上述所描述的那些。
方案I表示的是绿脓杆菌(P.aeruginosa)疫苗外核逆合成.
方案I:
所述外核可以根据在WO2012/082635所描述的方法依据在方案I中的逆合成程序进行制备。
α-葡萄糖基供体可使用下述方案进行制备：
适用于制备绿脓杆菌(P.aeruginosa)疫苗外核合成的半乳糖胺连接体单元可通过下述方式进行制备：
可以使用在WhitfieldD.M.etal(Collet.Czech.Chem.Commun.58:159-17291993)中所描述的方法制备己基(苄基)氨基甲酸酯化合物。6-O位置和4-O位置可已根据BediniE.etal.CarbohydrateRes.349:24-32(2012)所述通过使用苯亚甲基进行保护。
适用于制备绿脓杆菌(P.aeruginosa)疫苗外核的分枝葡萄糖二糖单元：
适用于制备绿脓杆菌(P.aeruginosa)疫苗外核的核心tetracaccharideassemplies可以通过下述方式进行制备：
GaIN3-3,4-二醇与二糖的选择性耦合可通过Osswaldetal.(Z.Naturforsch.58b:764-774(2003))和KomarovaB.S.etal.(Tetrahed.Lett.47:3583-78(2006))所公开的方法完成。上述两个参考文献表明在3-位置会超过在4-位置从而有利于反应的选择性。Komarova还描述了用于将所得到的三聚物的4-位置与OTFI-激活的单糖进行耦合从而提供一种四聚物。
用于上述所描述的LOS-低聚糖及其共和物的合成的组合物和方法，包括在表1中所列出的那些，在下文的实施例1到9中进行叙述。在LOS-低聚糖合成中采用的保护基团可包括在制糖化学中常用的那些，例如在“ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis”,3rdedition,T.W.Greene以及P.G.M.Wuts(Ed.),JohnWileyandSons,NewYork,1999所提到的那些。
免疫原和免疫保护组合物和其使用方法
本发明提供了一种用于诱导针对LOS抗原免疫反应的含有LOS-低聚糖或者LOS低聚糖-蛋白质载体共轭物的免疫原和免疫保护组合物。所述免疫原组合物可包括适用于给药动物或者个体的一种或多种佐剂，以及药学上可接受的载体。一种免疫原或免疫保护组合物可包括根据本发明所述的“足够量”或者“免疫有效量”的低聚糖-蛋白质载体共轭物，以及任意上述所提到的成分，用于形成一种免疫应答或者提供保护性免疫的目的，如在这里所进一步定义的。
在一个实施方案中，本发明提供了一种免疫原组合物，包括一种或多种LOS低聚糖1a或者LOS低聚糖-蛋白质载体共轭物1b，适用于诱导针对绿脓杆菌(P.aeruginosa)的免疫应答。
在一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，包括一种LOS低聚糖1a或者LOS低聚糖-蛋白质载体共轭物1b，制备作为用于针对绿脓杆菌(P.aeruginosa)感染的保护的疫苗。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，包括LOS低聚糖-蛋白质载体共轭物1b，制备作为如在这里所描述的一种用于针对一种或多种绿脓杆菌(P.aeruginosa)血清型进行保护的疫苗。
在进一步的实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，包括一种抗体以及一种生理学可接受的载体，以便应用于用于提供针对一种或多种绿脓杆菌(P.aeruginosa)血清型的被动免疫或者治疗的方法中。更为具体的，本发明根据本发明所述的内容提供了一种针对一种或多种LOS-低聚糖共轭物1b组合物的抗体制剂。所述抗体制剂可包括来自由多克隆抗体、单克隆抗体、小鼠单克隆IgG抗体、人源化抗体、嵌合抗体、其它们的片段，或它们的组合所组成的组中的任何成员。本发明进一步考虑到一种杂种瘤细胞，产生直接针对这里所描述的LOS-低聚糖的单克隆抗体。
低聚糖或者低聚糖-蛋白质载体共轭物或者针对其的抗体的给药可以通过任何合适的方式完成，包括通过肠胃外给药(例如静脉注射、皮下注射、皮内注射、或者肌肉注射)；通过例如将抗体局部给药至气道表面；通过口服给药；通过例如在鸟类的卵内注射；等等。
在具体的实施方案中，每个免疫原或免疫保护组合物包括在形成一种基本上含水混合物的药物可接受载体或者稀释液中的一种或多种依据式1a或者1b或者其共轭物的低聚糖。在优选的实施方案中，所述免疫原或免疫保护组合物包括一种或多种低聚糖-蛋白质载体共轭物连同适用于给药动物或者个体一种或多种药学上可接受的佐剂、载体和/或蛋白质载体。
佐剂
一种低聚糖-蛋白质载体共轭物组合物可进一步包括一种或多种免疫佐剂。一种免疫佐剂是一种化合物，当结合到抗原上时，相对于通过抗原单独诱导的应答而言所述化合物能够增强针对抗原的免疫应答，从而较少的抗原能够被用于得到相似的应答。例如，一种佐剂可以增强体液免疫应答、细胞介导的免疫应答、或者同时增强上述二者。
本领域技术人员将能够预测到，术语“佐剂”和“载体”可以在显著程度上重叠。例如，一种作为一种“佐剂”的物质也可以是一种“载体”，并且某些通常作为载体其他的物质，例如，页可以起到“佐剂”的作用。因此，一种能够能加合成的低聚糖或与此相关的载体的免疫原性的物质是一种潜在的佐剂。正如在这里所使用的，一种载体通常在适用于将更有方向性的位点特异性偶联方面用于本发明的低聚物，从而佐剂通常适用于不太具体或更一般化的结构关联。
示例性的佐剂和/或佐剂组合可选自下述物质所组成的组中：矿物盐，包括铝盐，如磷酸铝和氢氧化铝(明矾)(例如，铝胶TM，Superfos，丹麦)和磷酸钙；RIBI，其含有在2％鲨烯/Tween80乳液中的提取至细菌的三种成分，即单磷酰脂质A、海藻糖二霉菌酸酯以及细胞壁骨架(MPL+TDM+CWS)，从而三种成分MPL,TDM或者CWS中的任意一种可以单独使用或者两两结合使用；toll样受体(TLR)激动剂，包括，例如TLR-1(例如，三酰基脂肽)的激动剂；TLR-2(例如，革兰氏阳性菌象链球菌和葡萄球菌的肽聚糖；脂磷壁酸)的激动剂；TLR-3(例如，双链RNA和它们的类似物，如聚1：C)的激动剂；TLR-4(例如，革兰氏阴性细菌像沙门氏菌和大肠杆菌的脂多糖(内毒素))的激动剂；TLR-5(例如，活动细菌李斯特菌样鞭毛)的激动剂；TLR-6(例如，与TLR2肽聚糖和脂质的某些(二酰基脂肽))的激动剂；TLR-7(例如，单链RNA(dsRNA)的此类病毒如流行性感冒，麻疹，腮腺炎和基因组；小型合成鸟苷基的抗病毒分子像洛索立宾和单链RNA及其类似物)的激动剂；TLR-8(例如，结合ssRNA)的激动剂；TLR-9(例如，病院体的DNA的非甲基化CpG以及他们的类似物)的激动剂；TLR-10(例如，定义函数)的激动剂；TLR-11(例如，通过某些传染性原生动物(顶复亚门)表达的结合蛋白质)的激动剂；特异性toll糖受体激动剂包括单磷酸脂质A(3D-MPL),OM-174(大肠杆菌脂质A的衍生物)；OM三酰脂质A的衍生物，以及其他MPL-或脂质A-基配方以及它们的组合；包括-SE,RC-529(DynavaxTechnologies),AS01(脂质体+MPL+QS21),AS02(油包水PL+QS-21),和AS04(Alum+MPL)(GlaxoSmithKline,Pa.),CpG-寡脱氧核苷酸(ODNs)，含有免疫刺激CpG基序、双链RNA、聚肌苷:胞苷酸(聚I：C)，以及包封在脂质体中的其它的寡核苷酸或多核苷酸；油包水乳液，包括AS03(GlaxoSmithKline,Pa.),MF-59(微流化洗涤剂稳定角鲨烯油包水乳液；Novartis)，以及MontanideISA-51VG(稳定的水包油乳剂)以及MontanideISA-720(稳定水/角鲨烷；Seppic制药,Fairfield,NJ)；霍乱毒素B亚基；皂甙，如QuilA或QS21，来自QuillajaSaponariaMolina(STIMULONTM(Antigenics,Inc.,Lexington,Mass)和皂素基佐剂的HPLC纯化的非毒性馏分，包括免疫刺激复合物(ISCOMs；皂苷和脂质的结构复合物)以及其他的ISCOM-基佐剂，如ISCOMATRIXTM和-100和-300系列佐剂(IsconovaAB，Uppsala,Sweden)；如在U.S.Pat.Appl.No.2006/007317中所公开的QS21和3D-MPL以及油包水乳液；硬脂酪氨酸(ST)和酰胺类似物；病毒样颗粒(VLPs)和重组流感病毒颗粒(IRIS)；弗氏完全佐剂(CFA)；不完全弗氏佐剂(IFA)；大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)；免疫佐剂，包括细胞因子，如IL-2，IL-12，GM-CSF，Flt3，辅助分子，例如B7.1，和肥大细胞(MC)的活化剂，如肥大细胞活化剂化合物48/80(C48/80)；不溶于水的无机盐；脂质体，包括那些从DNPC/Chol和DCChol制备得到的；胶束；角鲨烯；角鲨烷；胞壁酰二肽，例如如在U.S.Pat.No.4,606,918中发现的N-乙酰胞璧酰-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)，N-乙酰胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷氨酰(nor-MDP)以及N-乙酰基胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷氨酰-L-丙氨酰-2-(1'2'-二棕榈酰-n-甘油-3-羟基磷酰基氧基；SAF-1(Syntex)；AS05(GlaxoSmithKline,Pa.)；以及它们的组合。
在优选的实施方案中，佐剂效力可通过结合上述所描述的多种佐剂进行增强，包括将多种递送系统与免疫增强物质进行结合从而产生具有潜力的多-成分佐剂用以协同作用从而增强在体内的抗原-特异性应答。示例性的免疫增强物质包括上述所描述的佐剂，包括，例如，MPL以及合成的衍生物，MDP以及衍生物，寡核苷酸(CpGetc)，dsRNAs，可替换的病原体相关分子模式((PAMPs)(大肠杆菌(E.coli)热不稳定肠毒素；鞭毛蛋白，皂甙(QS-21等)，小分子免疫增强剂(SMIPs,例如，瑞喹莫德[R848]))，细胞因子和趋化因子。
药学上可接受的递送载体
药学上可接受的递送载体，包括那些上文所描述的那些，可以被使用用于增强递送和/或控制反映持续时间。控释制剂可以通过将聚合物用于混合体的应用得到或者吸收低聚糖、低聚糖共轭物和/或佐剂。控制递送可以受到选择合适的大分子(例如聚酯，聚氨基酸，聚乙烯吡咯烷酮，乙烯-乙酸乙烯酯，甲基纤维素，羧甲基纤维素，或硫酸鱼精蛋白)和大分子的浓度以及为了控制释放的合并的方法的影响。其他可能的用于通过控释制剂来控制反应持续时间的方法是为了将本发明所述的化合物合并到聚合物材料的颗粒中，例如聚酯、聚氨基酸、水凝胶、聚(乳酸)或乙烯醋酸乙烯酯共聚物。作为选择，不将这些制剂合并到聚合物颗粒中，可能将这些材料分别截留在制备的微胶囊中，例如界面聚合制备的，例如羟甲基纤维素或者明胶-微胶囊以及聚(甲基丙烯酸甲酯)-微胶囊，或者可能将这些材料截留在胶体药物递送系统中，例如脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊或者在粗乳液中。这些技术在雷明顿制药科学(Remington’sPharmaceuticalSciences)中公开，同上。
本发明所述的低聚糖组合物，包括低聚糖-蛋白质载体共轭组合物，能够根据已知的方法进行制造从而制备药学上有用的组合物，由此这些材料或者它们的功能衍生物可以在混合物中与一种药学上可接受的载体(或者稀释剂)结合。合适的载体或者它们的制剂，包括其他人蛋白，例如人血清白蛋白，已经在例如雷明顿制药科学(Remington’sPharmaceuticalSciences)中被描述。为了形成适用于有效给药的药学上可接受的组合物，这种组合物将含有有效量的上述化合物以及适量的蛋白质载体和/或载体。
典型地，免疫原或免疫保护组合物可以制备成注射剂，即流体溶液或者悬浮液；适用于注射之前液体载体的溶液或悬浮液的固体形式。用于肠胃外给药的水性组合物，比方说，可以包括一种溶解或悬浮于药学上可接受的载体或者稀释液中的免疫原性成分，优选一种主要的水性载体。药学上可接受的载体或稀释液可包括水、盐水，包括经磷酸盐、Tris、甘油、乙醇等等缓冲的中性生理盐水。一种水性组合物可制备成一种无菌、无热原的缓冲生理盐水或者含有磷酸盐的溶液，其可包括一种防腐剂或者可以是无防腐的。合适的防腐剂包括苄醇，对羟基苯甲酸酯，硫柳汞，氯丁醇，和苯扎氯铵，举例来说。此外，所需的接近生理状态的辅助物质，包括pH调节和缓冲制剂，强度调节剂、润湿剂或者乳化剂、pH缓冲物质等等，包括乙酸钠，乳酸钠，氯化钠，氯化钾，氯化钙，脱水山梨醇单月桂酸酯，油酸三乙醇胺等等，可以与这里所描述的载体一起被包括。
这些组合物可以通过传统的杀菌技术进行杀菌，或者可以无菌过滤。所产生的水溶液可以被包装起来使用，或者冻干，冻干制剂在给药前与灭菌溶液混合。这类药物组合物的制备术语本领域技术人员的水平范围之内，并且能够通过标准参考文献来引导，例如雷明顿制药科学(Remington’sPharmaceuticalSciences)，如上所述，其已经通过引用全部并入本文。
组合物可以被制成固体或者液体形式用于口服递送。对于固体组合物，非毒性和/或药学上可接受的固体蛋白质载体可以包括，例如，药用级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等等。对于口服给药，药学上可接受的非毒性组合物可通过掺入任意通常使用的赋形剂进行制备，包括那些在前面所列出的蛋白质载体，以及一种单位剂量的活性成分，也就是说，一种或多种本发明所述的化合物，不论是否与一种蛋白质载体共轭。
抗体局部施用于气道表面，例如，能够通过鼻腔给药完成(例如，通过使用滴管、棉签、或者吸入器，其中鼻腔内沉积一种药物制剂)。抗体局部施用于气道表面也能够通过吸入给药完成，例如通过产生含有抗体作为一种喷雾悬浮液的药物制剂(包括固体颗粒和液体颗粒)可吸入颗粒，然后使受试者吸入所述可吸入颗粒。用于给药所述药物制剂可吸入颗粒的方法和装置是本领域所公知的，并且可以通过任何常规技术进行。口服给药可以是以一种可社区的液体或固体制剂的形式。
进一步，组合物可被配制成一种喷雾剂用于鼻内给药。对于喷雾给药，所述免疫原组合物优选以精细分散的形是和表面活性剂和/或推进剂一起提供。所述表面活性剂将是非毒性的，并且优选在推进剂中可溶。这类制剂的代表形是是含有6到22个碳原子的脂肪酸，例如己酸、辛酸、月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、油硬脂酸和油酸，与脂族多元醇或其环状酐形是的酯类或者部分酯。可以使用混合酯类、例如混合的或天然的甘油酯类。所述表面活性剂可占组合物的0.1％-20％(按重量计)，优选为0.25-5％。组合物的其余部分通常为推进剂。如果需要还可以包括一种蛋白质载体，例如，用于鼻腔递送的卵磷脂。
在药物制剂中的本发明所述的免疫原低聚糖的浓度可以在大范围内变动，从至少0.1％(通常为或者至少为大约0.1％)到高达20％到50％或更高(按重量计)，并且根据选用的特定给药方式，可以主要通过液体的体积、年度等进行选择。人类单位剂量形式的化合物和组合物通常包括在药物组合物之中，该药物组合物包括一种人类剂量形式的可接受蛋白质载体，优选一种水性蛋白质载体，并且以本领域技术人员已知的体积给药以便用于将这类组合物给药于人类，并且根据用于带治疗的特定的受试者的通常理解原则进行调整。因此，在一个实施方案中，本发明提供了在一种合适剂量的水性溶液中的单位剂量的本发明所述的组合物，例如0.1-3ml，优选0.2-2mL。
治疗方法
本发明所述的免疫原和免疫组合物可给药于具有发生绿脓杆菌(P.aeruginosa)感染的危险的任意的动物种类。
所述治疗可以以单剂疗程施用，或者优选以一种多剂疗程施用，其中治疗的初期疗程可以1-10次剂量给药，和间隔一段时间例如1-4个月的第二次给药以保持和/或加强免疫反应，并且如果需要，几个也后可以才再次给予一剂或多剂。合适的治疗方案的实施例包括：(i)0、1个月和6个月，(ii)0、7天和1个月，(iii)0和1个月，(IV)0和6个月，或者其他的疗程安排以满足引起预期能够降低疾病的疾病症状或者降低疾病的严重程度的所期望的应答。
有效诱导免疫应答或者提供保护性免疫的剂量将取决于多种因素，包括低聚糖组合物，共轭到蛋白质载体，佐剂的夹杂物和性质，给药的方式，患者的体重和总体健康状况，以及处方主治医师的判断。举例说明，所述剂量通常在用于初始免疫的范围(也就是说，用于预防疾病给药)内，针对70kg重的患者大约1.0μg到大约5,000μg的糖类抗原(例如，1.0μg、2.0μg、2.5μg、3.0μg、3.5μg、4.0μg,、4.5μg、5.0μg、7.5μg、10μg、12.5μg、15μg、17.5μg、20μg、25μg、30μg、35μg、40μg、45μg、50μg、75μg、100μg、250μg、500μg、750μg、1,000μg、1,500μg、2,000μg、2,500μg、3,000μg、3,500μg、4,000μg、4,500μg或者5,000μg)。给药于受试者的实际剂量通常根据适合于每千克的受试者体重的剂量进行确定。例如，有效量可以是大约0.1μg到5μg/kg的体重。
初次剂量可以选择紧接着依据数周之数月的加强方案的大约1.0到大约1,000的糖抗原(例如，1.0μg、2.0μg、2.5μg、3.0μg、3.5μg、4.0μg、4.5μg,、5.0μg、7.5μg、10μg、12.5μg、15μg、17.5μg、20μg、25μg、30μg、35μg、40μg、45μg、50μg、75μg、100μg、250μg、500μg、750μg、1,000μg、1,500μg、2,000μg、2,500μg、3,000μg、3,500μg、4,000μg、4,500μg或者5,000μg)的加强剂量，其取决于测定在患者血液内的特异性T细胞活性的患者的应答和病症。
本发明包括单价-糖共轭物疫苗以及多价糖共轭物疫苗的应用，包括在这里所描述的任何合成的低聚糖。诱发一种交叉反应免疫应答的单个低聚糖抗原可以促进针对所有普通绿脓杆菌(P.aeruginosa)细菌血清型和/或菌株的单抗原疫苗候选活性的发展。
本发明进一步提供了多抗原糖共轭物疫苗，包括在这里所描述的多种任意的合成低聚糖，以便提供针对绿脓杆菌(P.aeruginosa)单一血清型或血清型亚型或者针对绿脓杆菌(P.aeruginosa)的多种血清型或者血清型亚型的保护。因此，在一个实施方案中，例如，本发明提供了一种包含有根据式1b的二、三、四或更多不同的低聚糖抗原的组合物。
含有本发明所述化合物的免疫原组合物可以适用于在成人或者在儿童中应用，包括年幼的儿童或者其他在接触有LOS-表达细菌种类引起的感染风险的儿童。任选的这种组合物可以与其他的药物活性物质结合给药，并且经常会作为儿童疫苗接种方案的一部分与其他的疫苗结合给药。
用于给药的组合物可以有利地包括多种低聚糖-或者低聚糖共轭物，其引起对于多种不同的表位的免疫应答，以便提供对于绿脓杆菌(P.aeruginosa)的单一菌株或者血清型或者对于多种绿脓杆菌(P.aeruginosa)菌株或者血清型的增强的保护。此外，组合物还可被给药从而使用一种或多种抗原共轭物的主要免疫作用后接着用根据本发明所述的一种或多种交叉反应的核心共轭物进行加强。
抗体组合物
在另一个实施方案中，本发明提供了一种诊断抗体，以及药物组合物，其包括一种或多种抗-LOS抗体或其功能片段，以及一种生理学可接受的载体。用于产生这些抗体的方法在下文进行进一步描述。
药物抗体组合物可被应用在用于提供对绿脓杆菌(P.aeruginosa)感染被动免疫的方法中。一种药物抗体组合物可被给药于一种动物受试者，优选人类，以一种足以用于预防或减轻由绿脓杆菌(P.aeruginosa)的一种或多种菌株或血清型感染的严重程度、持续范围。
一种或多种抗体的给药可以是预防性的(在预期的暴露于细菌感染之前)或者治疗性的(在感染开始之后，咋已整装起始之时或之后不久)。一种或多种抗体的剂量可以依据多种因数变化，由于受试者的年龄、体重或者类型。一般来说，抗体的剂量可已在大约1-10mg/kg的体重的范围之内。在一个优选的实施方案中，所述抗体是IgG或者IgA类型的人源化抗体。一种或多种抗体的给药途径可以是口服或者系统路径，例如，皮下，肌肉内或静脉内。
抗体作为诊断制剂的引用进一步在下文并且在U.S.Pat.No.7,595,307和U.S.Pat.Appl.Publ.No.2009/0155299中进行表述，上述公开文献已经通过引用全部并入本文。
本发明还提供了一种或多种试剂盒，用于诊断、治疗和/或预防P.Aeruginosa感染。例如，所述试剂盒可包括一种或多种具有本发明所述的诊断或药物组合物的容器。所述试剂盒还可以包括掐的容器，包括，例如，必要或者方便用于具体诊断或者药物应用的一种或多种溶液。所述容器值得是由玻璃、塑料或者金属箔进行制备的，并且可以是小瓶，瓶，袋，管，袋等等。所述试剂盒还可以包含写入信息，例如用于执行本发明或者分析信息的规则，例如半酣在容器中的试剂的量。
抗体的产生及其在检测分析研究中的应用
在一种进一步的方面，本发明提供了组合物以及用于引起用于在检测分析研究中应用的抗体的产生方法，包括其作为检测实际和血清筛查工具的应用。
用于LOS-共轭物的抗血清能够通过在超过13周的3-4皮下注射在NewZealand白兔中产生。预免疫放血可以从每个白兔产生大约5mL的基线血清。初始的注射(10g抗原当量)可以以一种完全弗氏佐剂(CFA)中的乳剂进行给药。随后的注射(5g抗原当量)可以以一种不完全弗氏佐剂(IFA)在3周间隔下进行给药。兔子可以在第三次免疫之后的一周开始每两周放血。从没次放血情况中可以产生每只兔子大约25-30mL的血清，并且在-80℃冷冻。血清可以通过ELISA针对下述所描述的对应的LOS-共轭物进行分析。此外，从随后的出血中得到的抗血清可以如下面的进一步描述被进行亲和纯化。
本发明所述的低聚糖和抗体可以被作为一种诊断制剂用于检测绿脓杆菌(P.aeruginosa)LOS抗原或者与之相对的抗体应用，其存在于一种生物样品中所述检测制剂可以用于各种免疫诊断技术，对于本应于技术人员已知的，包括ELISA-和微阵列相关技术。此外，这些制剂可以被用于评估对于免疫原性低聚糖共轭物的抗体应答，包括血清抗体水平。本发明的测定方法通常包括使用标记，例如荧光，化学发光，，诶标记或者染料分子，和/或二次免疫制剂，用于直接或间接的在生物样品中的抗原和抗体以及连接到固体载体上的对应的抗体或者抗原之间的复合物的检测。
这类测定通常包括将液相中未结合的抗体从结合了抗体-抗原复合物的固相支持物上分离。可以在本发明的实施中使用的固体支持物包括一些物质，例如硝酸纤维素(例如，以膜或微量滴定孔形式)；聚氯乙烯(例如，片或微量滴定孔)；聚苯乙烯胶乳(例如，珠或微量滴定板)；聚偏二氟乙烯；重氮化纸；尼龙膜；活化珠，磁感应珠，以及类似物。
典型地，一种固体支持物是在合适的连接条件下首先与第一连接成分(例如，根据本发明所述的抗原或者抗体)进行反应，从而所述第一连接成分被充分地固定在支持物上。在某些情况下，到支持物上的移动可以通过首先将抗体或者低聚糖连接到具有管教好连接特性的蛋白质上进行增强，或者提供在支持物上的抗体或抗原的固定化而不会使抗原连接活性或特异性显著损失。合适的连接蛋白包括，但不限于，大分子例如血清白蛋白包括牛血清白蛋白(BSA)、匙孔血蓝蛋白(KLH)、免疫球蛋白分子、甲状腺球蛋白、卵清蛋白、和泵领域技术人员所公知的其他蛋白质。能够用于连接抗体到支持物上的其他分子包括多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物、以及类似物。这类分子以及用于连接这类分子的方法对于本领域普通技术人员是公知的，并且已经在例如U.S.Pat.No.7,595,307和U.S.Pat.Appl.No.US2009/0155299中进行描述。
实施例
可以理解的是，本发明中所描述的实施例和实施方案仅用于说明目的，并且在此所描述的多种修饰和改变在本领域技术人员看来很溶液联想到，并且都被包括在本申请的精神和范围之内以及本申请所附的权利要求书的范围内。在此所引用的所有的出版物、专利和专利申请出于各种目的已经以引用的方式完全并入到本文中。
试验详述部分:
下述方案详细的实施方法对于适用于绿脓杆菌(P.aeruginosa)LOS抗原组装的主要组成结构进行协议。在方案1-5的每一个中，实线箭头表示已经进行的化学作用，并且虚线箭头表示预示性的化学反应。
方案1.葡萄糖胺组成结构F的合成
中间体E的合成：
将苯甲醛二甲基缩醛(7.22mL,48mmol)和樟脑磺酸(2g)添加到在无水DMF(100mL)中的已知的三醇D(40mmol)中，根据Emmadi,M.,Kulkarni,S.S.J.Org.Chem.2011,76,4703进行制备的。在旋转蒸发仪上在真空下将所述反应混合物添加到50℃。在1个小时之后，用三乙胺(6mL)淬灭了反应混合物，并且在真空下进行浓缩。粗产品E被用于在下一个步骤中，不需要纯化。
中间体F的合成：
粗中间体E(～40mmol)溶解到吡啶(80mL)中。将反应混合物冷却到0℃，并且添加乙酸酐(40mL)。在室温下搅拌所述反映混合物12个小时，然后浓缩至浓浆。添加EtOAc(200mL)，并且所述悬浮液用水(200mL)进行分配。收集有机物，用NaHCO3和盐水进行洗涤。用Na2SO4干燥所述粗产物，过滤并浓缩。通过硅胶层析色谱(EtOAc，庚烷洗脱液)进行纯化得到中间体F(11g)。
方案2.葡萄糖二糖组成结构J的合成
中间体N的合成：
已知化合物M(Peri,F.etalJ.Carbohydr.Chem.2003,22,57)(275mmol)与DMF(3x100mL)共蒸发，并且溶解到CH2Cl2(100mL)中。添加2-甲氧基丙烯(52mL,550mmol)，并且在30分钟内将所述反应混合物冷却至0℃。添加对甲苯磺酸(120mg)，并且将反应混合物加热至室温超过12个小时。所得到的混合物用Na2CO3(20g)进行中和，并且再搅拌1个小时。通过celite过滤所述悬浮液，用EtOAc进行漂洗，并且用水和盐水进行清洗。将粗产品溶解到吡啶(200mL)中，冷却至0℃并且逐滴添加苯甲酰氯(80mL)。将反映混合物加热到室温，并且搅拌12个小时。在冷却至0℃之后，添加甲醇(40mL)并且搅拌30分钟。将反应混合物浓缩至一种粘稠的白色固体。将悬浮液溶解到EtOAc(500mL)中，并且用水和盐水进行洗涤。用Na2SO4干燥粗产品，过滤并浓缩。产品N被用于下一个步骤中，不需要纯化。
中间体O的合成：
将中间体N(～275mmol)悬浮到HOAc:H2O(500mL,4:1v:v)中，并且在室温下搅拌18个小时。所述反应混合物在真空中浓缩至浓浆。所述悬浮液与甲苯(3x100mL)进行共蒸发，并且在硅胶上进行纯化。分离中间体O(49.8g)。
中间体P的合成：
中间体O(116mmol)与吡啶(3x100mL)共蒸发，并且溶解到吡啶(300mL)中。所述反应混合物在30分钟内冷却到-0℃。逐滴添加TBSCl(139mmol,溶解到100mL的CH2Cl2中)，并且将反应混合物加热至室温超过12个小时。所得到的混合物在30分钟内冷却至0℃。添加苯甲酰氯(162mmol)，并且将所述反应混合物加热至室温超过18个小时。添加甲醇(40mL)，并且搅拌30分钟。将反应混合物浓缩至粘稠的白色固体。将悬浮液溶解到EtOAc(500mL)中，并且用1MHCl、水和盐水进行清洗。用Na2SO4干燥所述混合物，过滤并且浓缩。产品P被用于下一个步骤中，不需要纯化。
中间体Q的合成：
将中间体P(～116mmol)悬浮于CH2Cl2(200mL)中，并且用TFA:H2O(22mL,10:1v:v)进行处理，并且在室温下搅拌1个小时。所述反应混合物在真空中浓缩至浓浆。所述悬浮液与甲苯(3x100mL)进行共蒸发，并且在硅胶上进行纯化。中间体Q作为α-和β-异构体的混合物的(82mmol)被分离。
中间体S的合成：
已知的糖基三氯乙酰亚胺R(21.7mmol)与糖基受体Q(26.3mmol)进行结合，并且与甲苯(3x20mL)进行共蒸发，并且在真空下干燥1个小时。所得到的混合物溶解到无水CH2Cl2(150mL)、无水乙醚(100mL)中，在氮气下吹扫并且来令却至-20℃。在10分钟内逐滴添加三甲基甲硅烷酯(TMSOTf,1.0M在CH2Cl2中,2.19mL,2.19mmol)，并且在-10℃下搅拌所述反应额外的30分钟。所述反应混合物用三乙胺(2mL)进行淬灭，用CH2Cl2(50mL)稀释并且用饱和的NaHCO3水溶液和盐水洗涤。用Na2SO4干燥所述有机溶液，过滤并提纯。通过硅胶层析色谱(EtOAc/庚烷)纯化得到所期望的结合产品S(16.4g)。
中间体T的合成：
将二糖S(11g)悬浮与THF:MeOH(200mLtotal,10:1v:v)中，并且冷却至0℃。使氨气鼓泡通过所述反应混合物15分钟。将反应混合物进行封盖，并且允许搅拌加热至室温12个小时。用氮气吹扫所述反应混合物，并且在真空下浓缩至一种浓浆。分离作为α-和β-异构体混合物的中间体T，并且应用于下一个步骤中，不需要纯化。
中间体J的合成：
将在CH2Cl2(20mL)中的起始糖T(7mmol)溶液用三氯乙腈(5mL)进行处理。将1,8-二氮杂二环.4.0]十一碳-7-烯(DBU,0.1mL,0.6mmol)逐滴添加至反应混合物中。所述反应混合物在室温下搅拌1个小时，然后浓缩至粘稠油。通过硅胶塞的纯化用含有0.1％TEA的EtOAc进行预处理，用于得到所期望的三氯乙酰亚氨酸酯产品J(6.2mmol)。
方案3.关键的三糖核心单元K的合成
中间体H的合成：
将硫代糖苷F(14.0mmol)和羰基受体G(20.4mmol)进行结合，并且与甲苯(3x20mL)进行共蒸发，并且在真空下干燥1个小时，将所得到的混合物在氮气下溶解到无水CH2Cl2(130mL)中，并且将反应混合物冷却到-20℃。添加N-碘琥珀酰亚胺(28mmol)，随后添加三氟甲磺酸(1.4mmol)。将反应混合物加热至0℃超过10分钟，并且在搅拌另外的30分钟所述反应混合物。所述反应混合物用三乙胺(2mL)进行淬灭，用CH2Cl2(50mL)进行稀释，并且用饱和的NaHCO3水溶液和盐水进行洗涤。有机溶液用Na2SO4进行干燥，过滤并浓缩。通过硅胶层析色谱(EtOAc/庚烷；50-100％EtOAc的梯度)的纯化得到所期望的偶联产品H(9.2g)。
中间体I的合成：
将中间体H(8.0mmol)溶解到CH2Cl2(50mL)中。添加NaOMe(4MinMeOH,0.1mL,0.4mmol)，并且在室温下搅拌所述反应混合物1个小时。所得到的混合物用水和盐水进行清洗。有机溶液通过Na2SO4进行干燥，过滤并浓缩。通过硅胶层析色谱(EtOAc/庚烷；50-100％EtOAc的梯度)的纯化得到所期望的偶联产品I(4.5g,7.25mmol)。
三糖K的合成
将糖基三氯乙酰亚氨酯J(6.0mmol)和糖基接受体I(7.3mmol)进行结合，与甲苯(3x20mL)进行共蒸发，并且在真空下干燥1个小时。所得到的混合物在氮气下溶解到无水CH2Cl2(40mL)中，并且将所述反应混合物冷却到0℃。添加活化的分子筛(AW-300,5g)，并且搅拌所述反应混合物30分钟。将三甲基甲硅烷酯(TMSOTf,0.10M在CH2Cl2中,3.0mL,0.3mmol)在10分钟之内逐滴添加，并且另外搅拌反应30分钟。所述反应混合物用三乙胺(2mL)进行淬灭，用CH2Cl2(50mL)稀释，并且用饱和的NaHCO3水溶液和盐水进行洗涤。有机溶液用Na2SO4进行干燥，过滤并浓缩。通过硅胶层析色谱(EtOAc/庚烷；50-100％EtOAc的梯度)纯化得到所期望的偶联产品K(8.2g)。
方案4.QuiNAc组成结构CC的合成
以下协议描述了中间体Y的合成，一种化合物其可用于目标组成结构CC的生产。
中间体Y的合成：
已知化合物V(Christ,W.etalPCT/US96/09578)(73mmol)与THF(3x100mL)共蒸发，并且溶解到THF(200mL)中。添加2,6-二甲基吡啶(25mL,109mmol)，并且在30分钟内将所述u反应混合物冷却至-78℃。逐滴加入三氟甲磺酸(18.4mL,109mmol)，并且在-78℃搅拌所述反应混合物30分钟。用THF(200mL)稀释反应混合物并且用盐水(500mL)进行洗涤。将有机相用Na2SO4进行干燥、过滤并浓缩。中间体W直接用于下一个步骤中，不需要纯化。将乙腈(100mL)添加到粗中间体W中，并且将反应混合物冷却到0℃。NaBH4(9g总量,240mmol)以1g的比例进行添加，允许在每次添加之前有缓慢的气泡。将反应混合物加热至室温1小时，然后用水(20mL,逐滴地)进行猝灭。将悬浮液在真空下浓缩，悬浮于EtOAc(200mL)并且通过celite进行过滤。产物X被用于下一个步骤中，不需要纯化。
中间体Y的合成：
中间体X(8mmol)与甲苯(3x100mL)共蒸发，并且溶解到NMP:THF(20mL总量,4:1v:v)中。所述反应混合物在30分钟内冷却到-0℃，并且用氮气净化。添加NaH(1.05g,60％存在于矿物油中,25mmol)，并且将反应混合物在-0℃下搅拌30分钟。添加苄基溴(2.2mL,18.4mmol)，并且将所述反应混合物在1个小时内加热至室温。用甲醇(5mL)猝灭反应混合物，用EtOAc(200mL)进行稀释，并且用水(2x200mL)进行清洗。将有机相用Na2SO4进行干燥、过滤并浓缩。经硅胶层析纯化(EtOAc/庚烷)得到产物Y(2.3g)。
方案5.FucNAc组成结构LL的合成
化合物HH可以通过Paulsen,H.etalLiebigsAnn.Chem.1992,735所述的方法进行合成，并且是用于组成结构LL的合成的关键中间体。
上述详细说明被认为是说明性的，而不是限定性的，并且，可以理解的是，包括所有等同方案的以下权利要求书，被视为用于限定本发明的精神和范围。

Claims (31)

1.一种合成的低聚糖1a或1b
其中R1和R2各自独立地是H、单糖或者低聚糖，X是H、连接基团或者保护基团；L是连接体并且Y是载体。
2.根据权利要求1所述的低聚糖，其中R1和R2各自独立地选自由H、α-Rha-、α-Glc(1-2)-α-Rha-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha-、β-FucNAc(1-3)-α-Rha-、α-Rha[2,3,4-OAc]-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2,4-OAc]-、以及β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2,4,-OAc]-独立地所组成的组中。
3.根据权利要求1所述的低聚糖，其中R1和R2选自有下表所列的组合中的其中之一：
R1 R2 α-Rha- H α-Glc(1-2)-α-Rha- H H α-Rha- H β-QuiNAc(1-3)-α-Rha- H β-FucNAc(1-3)-α-Rha- H α-Rha[2，3，4-OAc]- H β-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2，4-OAc]- H β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2，4，-OAc]-
4.根据权利要求1到3任意其中一项所述的低聚糖，其中L是亚烷基硫醇连接体。
5.根据权利要求1到3任意其中一项所述的合成低聚糖，其中Y是一种载体，其选自由蛋白质、肽、脂质、聚合物、树枝状聚合物、病毒颗粒、以及病毒类似物颗粒或者它们的组合所组成的组中。
6.根据权利要求5所述的合成低聚糖，其中所述载体时一种载体蛋白质。
7.根据权利要求6所述的合成低聚糖，其中所述的载体蛋白质选自由细菌类毒素、毒素、外毒素、及其非毒性的衍生物所组成的组中。
8.根据权利要求7所述的合成低聚糖，其中所述载体蛋白质选自由破伤风类毒素、破伤风毒素片段C、白喉类病毒、CRM、霍乱类毒素、金黄色葡萄球菌外毒素或类毒素、大肠杆菌热肠毒素、绿脓杆菌外毒素A，其基因方面解毒变体；细菌外膜蛋白、血清型乙外膜蛋白复合物(OMPC)、外膜3类孔蛋白(rPorB)、孔蛋白；匙孔血蓝蛋白(KLH)、乙型肝炎病毒核心蛋白、甲状腺球蛋白、和卵清蛋白；肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌粘附蛋白(PsaA)；结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)；运铁蛋白结合蛋白、TLR-5的肽激动剂；及上述所述的载体的衍生物和/或组合。
9.根据权利要求8所述的合成低聚糖，其中所述载体蛋白质选自由CRM197、脑膜炎奈瑟氏菌、牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、聚(赖氨酸:谷氨酸)、f能动菌的鞭毛蛋白以及上述所述的载体的衍生物和/或组合所组成的组中。
10.根据权利要求8所述的合成低聚糖，其中所述载体蛋白质选自由破伤风类毒素、CRM197以及OMPC所组成的组中。
11.一种药物组合物，包括权利要求1到10任意其中一项所述的至少以一种低聚糖，其以有效剂量用于刺激免疫应答，可选择地进一步包括一种药学上可接受的载体。
12.根据权利要求11所述的药物组合物，进一步包括一种佐剂。
13.根据权利要求11或12任意其中一项所述的药物组合物，其中所述免疫应答是抗原特异性免疫应答。
14.一种组合物，包括权利要求1到3任意其中一项所述的合成低聚糖，以及一种药学上可接受的载体。
15.根据权利要求14所述的组合物，包括多种不同的低聚糖，其中每种低聚糖是式1a或者1b的低聚糖。
16.根据权利要求14所述的组合物，进一步包括一种佐剂。
17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述佐剂选自由下述物质所组成的组中：铝盐、RIBI、toll样受体激动剂、AS01AS02AS03、AS04、AS05、CpG-寡脱氧核苷酸、MF-59、MontanideISA-51VG、MontanideISA-720、QuilA、QS21、合成皂苷、免疫刺激复合物、硬脂酪氨酸、病毒样颗粒、重组流感病毒颗粒、细胞因子、大细胞活化剂化合物48/80、脂质体、胞壁酰二肽、SAF-1以及它们的组合。
18.根据权利要求16所述的组合物，包括一种量的足以给予对假单胞菌免疫的至少一种低聚糖。
19.一种组合物，包括作为疫苗的权利要求1到10任意其中一项所述的低聚糖。
20.一种抗体制剂，针对根据权利要求1到10任意其中一项所述的低聚糖。
21.根据权利要求46所述的抗体制剂，其中所述抗体制剂包括至少一种选自由多克隆抗体、单克隆抗体、小鼠单克隆IgG抗体、人源化抗体、嵌合抗体、其它们的片段，或它们的组合所组成的组中的至少一个成员。
22.一种用于治疗与绿脓杆菌感染有关的疾病的方法，包括给药有效量用于诱导针对权利要求1到10任意一项所述的低聚糖的假单胞菌或基于此的抗体的免疫应答。
23.一种用于治疗与绿脓杆菌感染有关的疾病的方法，包括对由此需要的患者给药权利要求1到19任意一项所述的低聚糖或者组合物。
24.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述的患者是人类。
25.一种用于产生抗体的方法，包括：
(a)给药受试者一种有效量的权利要求1到10任意其中一项所述的低聚糖，用于产生对假单胞菌特异性的抗体；可选择地进一步包括一种佐剂；
(b)从受试者中分离抗体。
26.一种用于产生单克隆抗体的方法，包括：
(a)a给药受试者一种有效量的权利要求1到10任意其中一项所述的低聚糖，用于产生对Moraxella特异性的抗体；
(b)从受试者中分离抗体；
(c)将来自受试者的抗体产生细胞溶解到骨髓瘤细胞，并且
(d)收集从融合克隆中产生的抗体。
27.根据权利要求25和26所述的方法，其中所述受试者是白兔。
28.根据权利要求25和26所述的方法，其中所述受试者是人类。
29.一种通过进行权利要求26所述的步骤(a)到(c)得到的抗体产生细胞。
30.一种通过进行权利要求26所述的步骤(a)到(d)得到的抗体。
31.一种用于诊断样品中假单胞菌存在的方法，包括使样品与权利要求20、21、29或30所述的抗体进行接触。
CN201480048550.9A 2013-07-03 2014-07-01 合成用于绿脓杆菌疫苗的低聚糖 Pending CN105517573A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361842474P 2013-07-03 2013-07-03
US61/842,474 2013-07-03
PCT/US2014/045057 WO2015002954A1 (en) 2013-07-03 2014-07-01 Synthetic oligosaccharides for p. aeruginosa vaccine

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105517573A true CN105517573A (zh) 2016-04-20

Family

ID=52144159

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201480048550.9A Pending CN105517573A (zh) 2013-07-03 2014-07-01 合成用于绿脓杆菌疫苗的低聚糖

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20160144016A1 (zh)
EP (1) EP3016685B1 (zh)
JP (1) JP2016525507A (zh)
KR (1) KR20160098161A (zh)
CN (1) CN105517573A (zh)
AU (1) AU2014284457A1 (zh)
CA (1) CA2917192A1 (zh)
CL (1) CL2015003792A1 (zh)
HK (1) HK1217642A1 (zh)
IL (1) IL243432A0 (zh)
MX (1) MX2016000195A (zh)
SG (1) SG11201510792XA (zh)
WO (1) WO2015002954A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110423274A (zh) * 2017-11-01 2019-11-08 深圳市国创纳米抗体技术有限公司 高亲和力抗绿脓杆菌外毒素a纳米抗体及其应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016138164A1 (en) * 2015-02-26 2016-09-01 Thevax Genetics Vaccine Co., Ltd. A vaccine composition comprising an immunogenic protein and combination adjuvants for use in eliciting antigen-specific t-cell responses
EP4069751A4 (en) * 2019-12-04 2023-11-22 University of Montana ANTIBACTERIAL CARBOHYDRATE VACCINE

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1788018A (zh) * 2003-05-14 2006-06-14 伯纳生物技术有限公司 铜绿假单胞菌血清型iats o6的脂多糖(lps)特异性的人单克隆抗体
CN101947323A (zh) * 2010-07-26 2011-01-19 北京绿竹生物制药有限公司 一种革兰氏阴性细菌疫苗及其制备方法
WO2011133227A2 (en) * 2010-04-23 2011-10-27 Ancora Pharmaceuticals Inc. Synthetic oligosaccharides for staphyloccocus vaccine

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4693891A (en) * 1985-09-09 1987-09-15 Miles Laboratories, Inc. Vaccine for Pseudomonas aeruginosa
CN101912609B (zh) * 2009-08-20 2012-02-01 成都蓉生药业有限责任公司 防治绿脓杆菌感染的组合物及其制备方法
WO2012082635A1 (en) * 2010-12-13 2012-06-21 Ancora Pharmaceuticals, Inc. Synthetic oligosaccharide group a streptococcus
EP2554549A1 (en) * 2011-08-02 2013-02-06 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Oligosaccharides and oligosaccharides-protein conjugates derived from clostridium difficile polysaccharide PS-I, methods of synthesis and uses thereof, in particular as vaccines and diagnostic tools
EP2884842A4 (en) * 2012-07-16 2016-04-20 Visterra Inc SYNTHETIC OLIGOSACCHARIDES FOR ANTI-P. aeruginosa

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1788018A (zh) * 2003-05-14 2006-06-14 伯纳生物技术有限公司 铜绿假单胞菌血清型iats o6的脂多糖(lps)特异性的人单克隆抗体
WO2011133227A2 (en) * 2010-04-23 2011-10-27 Ancora Pharmaceuticals Inc. Synthetic oligosaccharides for staphyloccocus vaccine
CN101947323A (zh) * 2010-07-26 2011-01-19 北京绿竹生物制药有限公司 一种革兰氏阴性细菌疫苗及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BOZHENA S. KOMAROVA等: "First Synthesis of Pentasaccharide Glycoform I of the Outer Core Region of the Pseudomonas aeruginosa Lipopolysaccharide", 《THE JOURNAL OF ORGANIC CHEMISTRY》 *
BOZHENA S. KOMAROVA等: "Synthesis of pentasaccharides corresponding to the glycoform II of the outer core region of the Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide", 《CARBOHYDRATE RESEARCH》 *
O. V. BYSTROVA等: "Full Structure of the Lipopolysaccharide of Pseudomonas aeruginosa Immunotype 5", 《BIOCHEMISTRY》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110423274A (zh) * 2017-11-01 2019-11-08 深圳市国创纳米抗体技术有限公司 高亲和力抗绿脓杆菌外毒素a纳米抗体及其应用
CN110423274B (zh) * 2017-11-01 2022-03-11 深圳市国创纳米抗体技术有限公司 抗绿脓杆菌外毒素a纳米抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015002954A1 (en) 2015-01-08
CA2917192A1 (en) 2015-01-08
KR20160098161A (ko) 2016-08-18
MX2016000195A (es) 2016-08-18
JP2016525507A (ja) 2016-08-25
SG11201510792XA (en) 2016-01-28
AU2014284457A1 (en) 2016-01-28
CL2015003792A1 (es) 2017-01-20
EP3016685B1 (en) 2018-01-31
IL243432A0 (en) 2016-03-31
HK1217642A1 (zh) 2017-01-20
EP3016685A1 (en) 2016-05-11
EP3016685A4 (en) 2016-11-23
US20160144016A1 (en) 2016-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. Synthesis of Neisseria meningitidis serogroup W135 capsular oligosaccharides for immunogenicity comparison and vaccine development
US20140170151A1 (en) Synthetic Oligosaccharides for Staphylococcus Vaccine
WO2012082635A1 (en) Synthetic oligosaccharide group a streptococcus
US11420993B2 (en) Semi-synthetic meningococcal conjugate vaccine
WO2003094961A1 (en) Improved polysaccharide and glycoconjugate vaccines_____________
CN105517573A (zh) 合成用于绿脓杆菌疫苗的低聚糖
WO2011149778A1 (en) Synthetic oligosaccharides for neisseria meningitis vaccine
WO2012145626A1 (en) Synthetic oligosaccharides for staphylococcus vaccine
CN108367059A (zh) 针对肺炎链球菌血清型2的合成疫苗
Berni et al. Synthetic carbohydrate-based cell wall components from Staphylococcus aureus
US20160375120A1 (en) Synthetic oligosaccharides for moraxella vaccine
US11612664B2 (en) Immunogenic compositions
JP2015525771A (ja) 緑膿菌ワクチンのための合成オリゴ糖
WO2012138698A1 (en) Synthesis of beta-mannuronic acid oligosaccharides
CN114073761B (zh) 一种寡糖缀合物及其作为预防v型b族链球菌感染糖疫苗的应用
CN106084037A (zh) 一种炭疽杆菌荚膜表面三糖缀合物及其制备方法和应用
Shchelik et al. Glycodendrimers and their derivatives as potential therapeutic agents
WO2012103058A1 (en) Method for synthesizing glucans with beta-1,3 and beta-1,6 linkages
JP5536765B2 (ja) 部分糖鎖エピトープを用いた、病原性ナイセリア属細菌感染の検出方法およびそれら細菌に対するワクチン
Nguyen Carbohydrates in Drug Discovery: 1. Methods for solid phase glycoconjugate synthesis 2. Syntheses and evaluation of carbohydrate toll-likereceptor agonist conjugates for S. pneumoniae vaccines

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
CB02 Change of applicant information

Address after: American New York

Applicant after: Singly C Co. Ltd.

Address before: American New York

Applicant before: SYNGLYCO PHARMACEUTICALS INC.

COR Change of bibliographic data
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20160624

Address after: Massachusetts, USA

Applicant after: VISTERRA INC

Address before: American New York

Applicant before: Singly C Co. Ltd.

C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160420