CN1055063A - 氨基胍的分析及其应用 - Google Patents

氨基胍的分析及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN1055063A
CN1055063A CN91101782A CN91101782A CN1055063A CN 1055063 A CN1055063 A CN 1055063A CN 91101782 A CN91101782 A CN 91101782A CN 91101782 A CN91101782 A CN 91101782A CN 1055063 A CN1055063 A CN 1055063A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aminoguanidine
analog
biological sample
test equipment
equipment case
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN91101782A
Other languages
English (en)
Inventor
彼得·C·乌尔里希
齐·M·卢克
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GERITECH Inc
Original Assignee
GERITECH Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GERITECH Inc filed Critical GERITECH Inc
Publication of CN1055063A publication Critical patent/CN1055063A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/66—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood sugars, e.g. galactose
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/808—Automated or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/17—Nitrogen containing
    • Y10T436/173845—Amine and quaternary ammonium

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

公开了用于检测和测量在生物样品中氨基胍和 其类似物的存在和数量的方法和包括试验器材箱的 有关材料。生物样品包括血浆、尿或组织。本方法 可以用于确定氨基胍和其类似物的活性和效果，物别 是对这些材料用作防止过强的蛋白质糖化作用的试 剂程度。本发明扩展到新药分析、适用的试验器材 箱，并扩展到评价肾功能和帮助在肾机能障碍是症状 的潜在病状的诊断中的可能性。

Description

本发明涉及对氨基胍及其类似物的分析，特别是涉及在人体液中的氨基胍及其类似物的测量。
对化合物氨基胍的研究已进行多年，具体地说，最初确定它具有某些生理性质，其中的一个性质是对酶的组胺酶的抑制作用，氨基胍已被确定为双胺氧化酶的一种选择性抑制剂，为了研究组胺的新陈代谢而提供给动物和人体。更具体地说，如同Lindbergh等人在“The  Inhibitory  Effect  of  Aminoguanidine  On  Histamine  catabolism  in  Human  Pregnancy”《ACTA  OBSTET.GYNECOL.SCAND.》（45：131-139，1966）中指出的那样，氨基胍被认为可以提高组胺的水平。特别是最近确认氨基胍作为蛋白质的葡萄糖传递交联的抑制剂，例如有用在非酶蛋白质交联状态治疗中，例如用在糖尿病引起的长期并发症的治疗中。氨基胍的这一新发现的作用由Cerami.Ulrich和Brownlee，在1988年7月19日出版，专利号为4758583美国专利说明书中公开。其中的相关部分作为本申请的参考技术引用。
由于前面所述的氨基胍在研究组胺新陈代谢中的应用结果，使在检验活组织中的氨基胍分布相应的测定方法取得了适当的进度。特别是由Beaven等人在《J.PHARMACOL.EXP.THER.》（165：14-22，1969），提出了一种根据在酸溶液中氨基胍与P-硝基苯甲醛的反应比色分析氨基胍。在这个反应中生成一种正黄色的物质，这种物质可以从内生的物质萃取到乙酸乙酯中，然后再返回到稀盐酸中，再将该盐酸萃取物变成碱性后，可以用分光光度法测定该黄色产物。
另一方面，由Beaven等人确认的方法提供了一种适于具有个别特性研究的测定，作为一种即将出现的治疗试剂的氨基胍已经促进了更加完善的测定方法的发展，这种方法能够自动地操作，迅速地分批分析生物样品中的该化合物。这样的测定将促进有效地、迅速地和精确地控制氨基胍的治疗。这正如在美国专利4758583中所提及那样，另外还有助于对这种化合物的新的潜在活性和各种应用识别。
此外，人们希望发展这种分析方法，这种方法不仅对氨基胍是有用的，对它的类似物也是有用的，这些同样是根据上述的美国专利所教导的概要发展，而AG（氨基胍）及其类似物的代谢物的存在对于测量是重要的。
根据本发明，发展了一种分析方法和有关的材料，这种方法提供了确定氨基胍及其类似物质在生物样品例如血浆和身体组织存在和分布的迅速和精确的手段。因此，在其本质方面本发明包括一种分析氨基胍及其类似化合物的方法，它包括：
A、收集一个确信包括有一些氨基胍及其类似化合物的生物样品;
B、脱去该生物样品中的蛋白质;
C、使经步骤B中除去过蛋白质的生物样品同足够量的吡啶醛反应，以使在该生物样品中存在的氨基胍及其类似物全部转化为相应的吡啶醛-取代腙;
D、用一个利用梯度洗脱高压液相色谱法从反应混合物的剩余物分离出在步骤C中生成的全部取代腙;以及
E、检验步骤D中所分离出的物质，以便估计该氨基胍和/或其类似物的分布和数量。
这个生物样品可以通过用足够数量的脱去蛋白质试剂或从用于沉淀蛋白质的中等强度酸到强酸选择的试剂以及一种适合的有机溶剂脱去蛋白质;也可以使样品经超过滤而脱去蛋白质。适用的酸包括高氯酸和三氯乙酸，而适用的有机溶剂包括：甲醇、乙腈和二氯甲烷。在氨基胍是被分析的化合物的情况下，吡啶醛最好包括6-甲基-2-甲基吡啶醛，它对应于形成6-甲基-2-甲基吡啶醛脒腙。最好是使生物样品和吡啶醛之间的反应在中等酸度的条件下进行，而色谱条件采用具有径向压缩的色谱柱和具有一均匀流量率和在离子对条件下进行。在缺少径向压缩的工艺的情况下，可以用钢柱中类似填充材料来代替，虽然色谱仪调整可能需要。最后腙析出物可以用紫外光谱仪进行检验。对氨基胍来说在波长302nm能检查出来。
上述程序具有各种应用，特别是适用于促进与糖尿病和衰老的有害影响斗争而正在服用的氨基胍的测量，以便确定是否曾供给过氨基胍，倘若如此，为了获得所希望的效果，氨基胍在体液中的合适数量是否已经达到，作为最后监测的辅助手段，上述程序将进一步促进调整给药量，以便使体液中的氨基胍的含量达到有效水平。这样本发明分析方法例如可以利用生物流体样品如尿、唾液、组织匀浆和血浆。
如上所述，借助于这个分析的检测和测量氨基胍的方法适合于氨基胍的类似物。在这当中，下面将以N-乙基氨基胍测定作为氨基胍的典型的类似物的例子来说明，这个物质已作本分析系统的内部标样，并表明这个分析系统适合于氨基胍的其它类似物。氨基胍可以用作其它类似物的内部标样，只要氨基胍不是一种可疑的或该类似物的已知代谢物，并且它有测量需要的浓度。
本分析方法相应的应用范围可以推广到生物样品是组织的情况下，此外，本发明可以扩展到一种测量在组织中氨基胍和/或及其类似物的存在的方法，这个方法是通过收集一个或多个组织样品，然后对这些样品完成本发明的测定。这样这些组织例如可以是肾、骨胶原子、血管等以及类似物可以作为实验动物研究和人体活组织研究同样地被检验，以便测量在这些组织中氨基胍或类似物的水平，从而确定这样的水平是否合适，以及在一新发现了氨基胍的衍生物的情况下，为了发挥所希望治疗的抑制效果就要确定这些衍生物是否能够定位在所期望的组织中。
本发明还扩展到一种测量肾功能的方法，该方法是通过对氨基胍及其类似物的消除半衰期测量来完成的，而在一个具体的实施例中，可以借助本分析方法来完成测定。当然，肾功能的测量可以通过从所检测者收集血浆样品;用足够量的氯化有机酸除去血浆样品中的蛋白质，使脱去蛋白质的血浆样品同吡啶醛最好在中等强度的酸性条件下反应，以便生成一种吡啶醛取代脘;借助高压液相色谱法分离形成的任何腙，并且最好用紫外光谱仪检测这个分离物，以便确定氨基胍或其类似物。
整个的分析和程序包括服用一个固定剂量的氨基胍或及类似物，接着按不同的时间收集血浆样品，完成本方法，从而确定在每个样品中的氨基胍的含量，将计算出的氨基胍的排除数据，同根据曲线或列表的连续集得到的数据相比较，其中曲线或列表的数据是事先收集各种不同肾功能被试验者中采集的氨基胍的排除数据中整理出来的，根据比较结果来确定目前被检测者的肾功能。
本发明还涉及一个为完成本分析的试验器材箱，这个器材箱中装有：
A、供脱去生物样品蛋白质用的一定量的试剂;
B、用于同获得的氨基胍或其类似化合物反应的一定量的吡啶醛;
C、其它用在高压液体色谱仪试剂和固定液;
D、使用这些器材的指南。
适合的脱去蛋白质的试剂可以从适合于沉淀蛋白质的中等强度的酸到强酸以及合适的有机溶剂中选择。这些酸和溶剂早已列这当中。本测定器材箱还可以包括从氨基胍和它的类似物选出的内部标准，例如氨基胍的类似物N-乙基氨基胍。
在为测量肾功能而准备的试验器材箱的情况，它可以包括在事先量过的适于被试验者服用的剂型中一定量氨基胍或一种类似物，还应包括商的曲线或列表的连续集，或者从这样一个连续集导出的公式，这个连续集由用肾小球滤过率（GFR）表示的氨基胍或它的类似物一致的消除半衰期（T1/2）确定，诊断者和门诊医师可以参考它解释在肾合用性期间试验结果。
这种予先确定的剂型，可以制成口服的，具可以事先制成固态或液态剂型，如所予期的片剂、胶囊、甘香酒剂、糖浆等。这个商包括由氨基胍或其类似物消除半衰期（T1/2）与肾小球滤过率（GFR）的比率得出的系数。
本发明呈现出广泛的优点，作为能够迅速估计肾功能的现代诊断程序，以及与显露诊断和治疗作用相结合的有希望的效率，这对于氨基胍和它的类似物被预见。因为本发明的分析方法速度高，操作简单，精度高，可靠，所以使它可作为一个极好的诊断和研究工具，将达到广泛的接受和使用。
这样，本发明的主要目的是提供一种测量氨基胍及其类似物质在组织和生物流体样品中的分布。
本发明的另一目的是提供一种上述的方法，这种方法可在容易和廉价的方式中完成。
本发明还有一个目的是提供一种上述的方法，这种方法可以用作对和氨基胍及其代谢物和类似物质具有同样作用的药品和其它化合物的分析。
本发明的另一个目的是提供一种精确的可靠的估价肾功能的方法。
本发明的另一个目的提供一种为完成所述方法的试验器材箱，它应用简单。
本发明的再一个目的是在具有氨基胍或其类似物质的存在，活性或排除的有关病理学状况或条件的哺乳动物中监测药物养生法或类似草案的有效性。
根据下面的说明书和结合附图的描述对于本专业的技术人员来说，本发明的其它目的和优点将是显而易见的。
图1是从完成测定鼠、狗和人的血浆结果中得到的标准数据的概括的曲线。
图2包括分别为人的空白血浆样品，一个低浓度（0.1μg/ml）量的对照样品和一个高浓度（8μg/ml）量对照样品单独的色谱图。
图3是一个从完成测定人的尿的结果中得到的标准曲线数据的概括的曲线。
图4包括分别为人的空白尿样品，一个低浓度（1、0μg/ml）量的对照样品，和一个高浓度（90μg/ml）量的对照样品的单独色谱图。
图5是一个氨基胍排放半衰期（T1/2）对肾小球滤过率（GFR）商的连续集的关系曲线。
本发明涉及一种用于测量在人体流体和组织中的氨基胍及其类似物质的方法和有关材料。本发明的方法包括：
A、收集确信含有氨基胍或其类似物质的生物样品;
B、对生物样品进行脱去蛋白质处理;
C、使在步骤B中脱去过蛋白质的生物样品同中足够量的吡啶醛反应，以便使在该生物样品中的氨基胍或其类似物质全部转换成相应的吡啶醛-取代腙;
D、借助于利用均匀洗脱的高压液体色谱法从反应混合物的剩余物中全部分离出在步骤C中生成的取代腙。
E、检验步骤D中的分离物，以便估价该氨基胍和/或及类似物的数量和分布。
如上所述，本发明的方法力图提供一个能够用在自动的分批的基础上使用测定程序，这个程序除了适合诊断和试验目的外，还适合于治疗目的。尽管Beaven等人公开的氨基胍已知测定方法中包括比色分析，但是本发明方法在生成吡啶醛取代腙这点上是具有特点的，这个吡啶醛取代腙可以用紫外光检测，而更重要的是在其检验结果的稳定性、相应的精度和重复性。生成腙本身不是新的发现，它已被Ceba等人在《Analytical  Properties  of  Pyridine-2-Aledhyde  Guanylhydrazone，》（TALANTA  28：134-136  1981）所公开，这些作者公开了这种腙的制备方法并建议同各种无机阳离子一起作为分析试剂，因为用这种腙能生成视觉可以区分的络合物。在Ceba等人的论文中，关于可以通过反应生成相应脒基腙来测定氨基胍，以及这最终的反应物可以在波长为302nm的紫外范围内很容易检测出来，这个构思一点也没有提及。
如上所述，为了脱去样品的蛋白质可以用能够沉淀蛋白质的试剂来处理样品，也可以用其它分离技术处理样品，例如超过滤技术。适合的试剂可以从中等强酸到强酸，例如高氯酸和三氯乙酸一类酸中选取，后者优先选用。如果用三氯乙酸，其典型的浓度为7.5%。试剂也可以从由在溶剂一以蛋白质为基础沉积程序中使用的有机溶剂，例如甲醇、乙腈和二氯甲烷中选取。蛋白沉积技术是公知的，在这里要提及的是补充的程序。当然在这里试剂和规定的程序是为了说明的目的，以及依照申请人要尽公开完成本发明最好的方式的义务而提出的。
用在本发明的吡啶醛可以是6-甲基甲基吡啶醛，它可以制成例如10mg/ml浓度的溶液。此外，在吡啶醛和脱去过蛋白质的生物样品之间的反应最好在中等强度酸中进行。然而具体的吡啶醛及其具体的浓度在这个工艺中是可以改变的，上述的选择数据同样是为了使申请人尽公开完成发明的最好方式的义务而提出的。
本方法的下一个步骤中是要借助于采用均匀或梯度的洗脱的高压液体色谱法从生物样品和吡啶醛之间的反应形成取代腙，然后从反应混合物的剩余物中把所有取代腙全部分离出。具体地说，色谱方案可以利用具有均匀流量率的在离子对条件下的径向压缩色谱柱的。然后，用紫外光谱法对最终的腙的分离物进行检验，而在氨基胍的具体情况下，可以在302nm波长检测。这个检测特异性是本发明的优点之一，并且它区别公知的比色分析测定方法。
实践本方法包括一个内部标样的参考标准，这个标准最好是同根据本方法的步骤B对它处理之前的生物样品结合，要选择具有类似结构和功能性的样品作为这个内部标样，以便能保持对本方法的程序对照作用。适合作为内部标样的化合物包括氨基胍及其类似物质。内部标样可以是氨基胍或一个类似物质，例如N-乙基氨基胍（＝N-ethylhydrazine  carboximidamide）。当然，利用具体化合物作为内部标样不是对本发明的限定，而采用其它与氨基胍的结构和功能相似的化合物作为标样也在本发明的保护范围内。
如前所述，本方法具有很多应用，其中包括对在各种生物环境下的氨基胍及其类似物质的检测，具体地说，根据本方法可以测量的生物样品包括流体，例如血浆、唾液、尿和组织等，本方法还具有多种诊断和治疗应用。
在进一步实施例中，本发明涉及一种监测治疗方案或药物疗法的效率的方法，这些治疗中包括服用例如氨基胍或及类似物质的化合物，以便与过强的身体蛋白质糖化作用的有害影响斗争，如在老化过程和糖尿病中所证明的。本发明的方法可以借助分离和检验由血浆，尿或组织所取的生物样品来完成。为了确定在血中存在的氨基胍的治疗剂量是否达到要求，可以测试血浆样品，而为了测定氨基胍的清除率可以测定尿样品，以便确定为保持有效的治疗剂量所需要的相应的氨基胍的给药。最后，组织样品可以从与治疗目的有关的器官或人体的局部取出，以确定输送到这个局部治疗试剂是否已经够用。
本发明扩展一种为治疗病人以抑制在该病人体内过强的糖基化作用的最后产物，该方法包括服用这样的过强糖基化作用的一种有效数量的抑制剂，它包括一种从氨基胍及其类似物质中选出的化合物。该方法还包括连续监测在取自试验对象的样品中氨基胍或它的类似物质的含量是否达到治疗有效的水平，这些样品包括体液和组织。在这种情况下，本发明的分析方法可以在规定的时间间隔中进行，精确的时间间隔应根据单个服药方案和病人简况改变。例如，这些时间间隔可以在一小时到24小时内调整。
本发明可以应用于检测上面提及的氨基胍的类似物质，就此而论，扩展到一种确认化合物筛选测定，这种化合物可以抑制过强的糖基化作用最后产物的生成，并且这类化合物具有和氨基胍相似的结构。在这样的情况下，一种生物样品例如组织样品或细胞培养物，可以用一定量的化合物在试验中培养，此后本分析方法在观察时可以测定被检查化合物的存在和活性，从而测定它的吸收、分布、新陈代谢和/或排泄简况。在这种情况，予见的具有和氨基胍相似的结构抑制剂化合物临床试验正在进行中，则可以将这个新药物供给实验对象，然后接规定的间隔取出尿样品，从而确定被检测药品的范围和它的肾清除率发生。这个试验可以作为检验组织和血浆样品的辅助手段来进行。从而不仅确定了新药品的疗效，还试图有系统地阐述一个适宜的给药方案。
本发明同样扩展到一个测试器材箱，以便完成氨基胍及其类似物质的分析，它包括：
A、一定数量用于脱去生物样品中蛋白质的试剂;
B、一定数量用于同获得的氨基胍或类似化合物反应吡啶醛;
C、在高压液体色谱法中应用的其它试剂和固定液;
D、关于该器材箱的使用指南。
在本器材箱中的脱去蛋白质的试剂和吡啶醛的选择如前所述。同样，这个器材箱可以包括一定量的内标以及一般用在高压色谱法中试剂和材料。
本发明进一步实施例扩展到一种测定肾功能的方法，它包括，向待检测对象供给一事先确定的数量或从由氨基胍及其类似物质组成的组中选定的主要试剂量;按规定的时间间隔从该待检对象身上，收集血浆样品，并检测该标品中上述的氨基胍或其类似物质的含量和分布。这种方法主要注视作为这个目的主要试剂氨基胍及其类似物质应用，并扩展到各种试验方案，在这些方案中，可以服用这样的试剂，然后进行监测和/或测量。这些方案的具体例子将在这里着重说明，对试验器材箱同样也予以考虑，它包括一定数量的从氨基胍及其类似物中选出的主要试剂，其它的试剂和底物以及器材的使用指南。
下面说明一种测量肾功能的具体方法，它包括测量氨基胍或及类似物质的排放半衰期（T1/2），并把这些数据同从各种参考个人样品得到的同类数据集相比较。更具体地说，这种方法包括服用一确定剂量氨基胍或其类似物质，然后按规定的各个时间间隔，依次从该被检对象身体中收集血浆样品，用本法检测这些样品，根据其检测结果确定每个样品的排放半衰期数据，再将这些数据与从有各种肾功能个别人试验和分析中得到的数据的预先确定的数据集相比较。这个测定的数据包括排放半衰期和肾小球滤过率（GFR），将这些单个数据综合起来考虑，以便确定一个比值，根据这个比值，可以用表格或曲线图的数据集表示出来。
作为背景技术，肾功能的测量数据长期以来被认为是在一般的健康评价以及具体的病症例如肾病（nephropathy）的重要指标。因为肾在人体呼吸和新陈代谢活动中起着同等重要的作用，所以与病理无关的肾衰老或肾衰竭是危险的。例如，肾衰竭需要血液透析或进行肾移植，在血透析的情况下，必须连续地监测肾功能，以便确定透析处理的必要性和频次。因此可以正确估价肾衰竭是否由糖尿病引起的。上述的方法一般应用在任何病理条件下的肾功能的评价上。
公知的测量肾功能的方法有多种，其中有血静脉内灌输放射性示踪物，首先服用示踪物，然后取出血液和定量的尿样品，再测定在稳定条件下这些示踪物的肾清除率。虽然这种方法是精确的，但是它有许多缺点，其中包括需要小心管理病人和定时收集尿和血样品等，此外病人服用的放射性物质可能表现对人体安全有危害，以及附带的同位素的存储和运输、销售的价格高和由于这些同位素的半衰期短，需要经常补充的等问题，还有安全帮资金上的考虑。因为放射性同位素的半衰期短而需经常补充，在很多情况下，在用这种物质之前，设备、病人和在测定中使用这种物质的工作人员，都要受到附加的污染。
第二种方法是测量内生的肌酸酐排放量，在这种方法中必需从病人收集血和全尿样品，误差主要是由于很难收集全尿样品，很多要求测定肾功能的病人呈现有神经方面的损伤，使他们完全排空膀胱，如果不是不可能至少也是困难的。而且为了收集全部尿，24小时尿收集需要病人在家里或在医院里配合，这种配合病人很难保证。于是虽然肌酸酐排放量的测定是科学可靠的，和理论上精确，但是常常在获得精确检测样品的实践中失败。
通过上述的比较，作为适合于测定肾功能的本方法提供了一个简单方便和可能的方案。所需要做的只是一次服用小剂量的氨基胍和分三次取出血液样品。服用小剂量的氨基胍表现低的危险，减少了流体收集的次数，同样还减少了对病人的危险和不方便。正如下面指出的那样，从完成用于肾功能的本方法中所获得的数据指出在氨基胍的消除半衰期和借助肾小球滤过率测定的肾功能之间的线性关系有极好线性相关。
如前所述，完成评价肾功能的本方法的具体实施例的步骤包括：
A、给病人服用一次300mg剂量的盐酸氨基胍，盐酸氨基胍可以是口服的胶束、片剂或液体糖浆、甘香酒剂等。
B、在氨基胍或类似物质服用后，定期收集血浆样品，例如至少收集3ml血浆样品，如果服用的是干的氨基胍（例如小丸状）则应在服用后10小时取第一个样品，在服用后14小时取第二个样品，在服用后18小时取第三个样品;如果服用的是液体氨基胍，可以按类似的规则进行取样。
C、根据本发明的方法，对按指定时间间隔收集的样品进行处理，以便测定氨基胍的浓度。
D、测定消除半衰期（T1/2），具体地说，是参考关系式解释和确定数据，其中血浆浓度的对数下倾的斜率随时间关系被确定为消除率（Kelim），消除半衰期（T1/2）和Kelim由下列方程来确定。
T1/2＝0.6931/Kelim
E、在测定出氨基胍消除半衰期以后，把它与一个连续集比较，这个集是氨基胍消除半衰期与从大量个人的肾功能值联系起来，这些个人有各种各样的肾功能，其中包括从肾功能正常的到不正常的试验对象。在这些人身上，两种测量结果都已事先得到。这个现存数据的基础或连续集显示出氨基胍的消除半衰期和肾小球滤过率（GFR）之间呈反比的关系。
以目前得到的数据和试验为基础，口服300mg剂量的盐酸氨基胍以后测定氨基胍得到T1/2和肾小球滤过率（GFR）之间的关系如下：
氨基胍T1/2＝-0.14（GFR）+22.04
（r＝0.875，n＝18）
上述关系式可以根据肾小球滤过率解出，将解出的最终的数据点同根据的已知肾功能个人试验建立的数据的连续集相比较。图5中示出这样连续集的代表。它包括一个氨基胍的清除半衰期随着肾小球滤过率（GFR）变化的曲线和并包括求出的数据点，这个图将在后面的例3中说明。
正如前所述，本方法的优点之一是摆脱了因繁琐的尿的收集和检验而带来的不精确和不方便。本方法可以通过简单服用事先确定数量的氨基胍，然后按照如上面所建议的时间间隔依次收集血浆样品来完成，然后根据本方法处理这些样品，将这测量数据变换氨基胍的相应的消除数据，再将这些数据与借助于曲线或表格表示的已有的连续集比较。根据这个方法，可以得到一安全有效的简单的监测肾功能的方法。可把这种方法推广到检测与肾功能有关的病症的发作和存在，这是可取的。
本发明还进一步提供一个根据本发明的一个最佳实施例评价肾功能的测试器材箱，它包括：
A）一定数量的氨基胍及类似物质，它被制成予先确定剂量的适于检测对象服用的形式;
B）包括从氨基胍或其类似物质的消除半衰期T1/2同它的肾小球滤过率（GFR）的比值导出商的图或连续集;
C）一定数量的用于脱去生物样品中蛋白质的试剂;
D）一定数量的用于同可以获得的氨基胍或其类似化合反应的吡啶醛;
E）用在高压色谱仪中的其他试剂和固定液;
以及
F）测试器材使用指南。
如前所述试验器材箱，本测试器材箱可以包括一个内部标样，例如氨基胍或其类似物质。同样地在测试器材箱中的试剂可以包括前面指出脱去蛋白质试剂在内的那些试剂。这个测试器材箱可以根据重复使用基础来准备，其中器材箱中的某些消耗品可以多倍剂量地提供;或者这个器材箱准备供一次使用;在其中提供特定数量的每种试剂和消耗物品。
同样，某些试剂可以制成干式的，例如借助于冻干，以便于包装，并附有特定的说明，为使用时加适当液体以便活化这些试剂。
在本测试器材箱中事先确定的或事先测量过的数量的氨基胍或其类似物质可以按各种服用方式制备，最好是制成固态或液态可口服的药剂;如片、胶束、糖衣丸、密饯、糖浆、甘香酒剂等形式。此外具有各种浓度氨基胍都是有用的，本发明不限制氨基胍的特定浓度，300mg的盐酸氨基胍及其类似物质的药剂已经被利用并且是优选的。
用下面的实施例加以说明，可以更好地理解本发明：
例1、
下列试验曾经是为确定本方法检验一些哺乳动物血浆样品的精度而进行的。这些样品是从鼠、狗和人体中收集的，然后以一予先确定剂量的氨基胍处理。为了评价本分析程序的重复性和可靠性，两个分析者进行独立和平行分析，对于每位分析者的最后得到的样品按下述方法处理：
分析方法
1、样品制备
将0、5ml内部标准工作溶液（在7.5%三氯乙酸中10μg/mlN-乙基氨基胍甲苯磺酸盐）加到0.5ml的血浆样品中，在旋涡10秒钟和在微型离心机（microfuge）（Eppendorf，14000rpm，10分钟）离心分离后，将上层清液倾析到一干净螺旋塞培养管中，其中装有0.1ml反应试剂的水溶液（10mg/ml）（6甲基-乙吡啶甲醛），将该样品用盖盖紧，在加热装置中（95°-100℃）反应10分钟，待冷却后，将样品输送到高压液相色谱仪中管瓶中，从该瓶中取200μl的样品，以供高压液相色谱分析用。
2、色谱
采用Waters  Associates  Model  510泵的带有一径向压缩柱（Waters  Novapak  CN.8mm×10cm，4μm的大小颗粒）和一个氰基（Waters  Resolve  Guard-pak  CN）前置柱。利用可变波长的紫外光检测器（Waters  484）在302nm波长检测。移动相（体积比）15%的乙腈：10%的甲醇：75%的各为0.01M的1-庚磺酸和磷酸一钠。在室温下流速保持在恒定的2.0ml/分，借助一个可编程序的取样器顺序地自动地注入样品。（Waters  WISP  712）
3、数据分析
所有数据的获得是用Waters  Maxima  820系统来完成的，药物峰高对内部标样药剂的浓度的峰高比对在标准构成日常方法标准化中加入的血浆中的浓度的峰高进行线性一致分析。从该线性回归线的内插法，确定在质量对照和未知分析样品中氨基胍的浓度。
4、结果和讨论
以每天为基础，在游离的氨基胍浓度为0-10μg/ml范围内观察到线性（r＞0.998，p＜0.01）浓度最小的标样（0.05μg/ml）可被稳定地测出。图1概括了从这些研究中得到的标准曲线数据，并表明平均峰高的比特性曲线和血浆浓度关系曲线。在这个研究中，从两个分析者得到的标准曲线本质上是重叠的，因而图是用总平均数据给出的。
从色谱的角度来看，6-甲基甲基吡啶醛脒腙（AGH）和6-甲基甲基吡啶醛-N-乙基脒腙（NEH），这两种在反应期间同甲基吡啶醛（6-甲基-2-吡啶-羰基醛）生成的两个加合物易于彼此和从内生的干扰物中分离出来。图2示出了一个人的空白血浆样品色谱图，一个低浓度（0、1μg/ml）质量的对照样品色谱图和一个高浓度（8μg/ml）的质量对照样品色谱图。
对每个试验中的随时间有明显较小不同，如用标准曲线的予先质量对照试验与标准曲线过后的质量对照试验（数据未给出），所示这种变化的原因可能归因于有机溶剂对各种移动相水平的分配（色谱时移动相没有搅拌）或因过夜运行时温度波引动起的，但是在进行真实的生物样品实际分析时，这些问题可以通过在整个试验中缓慢连续搅拌移动相使标样和质量对照样品分散开来解决。因此对于这个研究使对所有的标样的数据号（予先的和后来的质量对照）的回归分析能充分模拟随机分散标样曲线上的结果。
三组被测试组的全部血浆质量对照样品（质量对照样品A-D的游离氨基胍的浓度分别为0.1，0.8，2.0和8.0μg/ml），试验数据汇总在下面的表Ⅰ中
Figure 911017828_IMG1
Figure 911017828_IMG3
误差%＝100%×（观测浓度-理论浓度）/（理论浓度）
QC＝质量对照
参看表Ⅰ，根据系数误差确定人血浆的测定精度（用体积百分比表示）的范围在所研究的浓度（0.1-8μg/ml）范围内从3.6%-12.9%（总平均值＝6.5%）。根据与理论浓度的百分误差测出的准确度的范围从-0.90%到-5.8%（总平均值3.6%）对于从生物分析的观点上看，这已是相当令人满意的结果了。
动物血浆的质量对照样品（狗和鼠的）每天要用含水的氨基胍溶液注入到动物的空白血浆中的办法来组成。这样作的目的是为了评价测定来自小动物研究样品的可行性。对于这些小动物来说要配制大量的血浆标准是有困难的。
就狗血浆质量对照样品的测定精度来说，总平均的系数变差为9.7%（范围：8.2%到10.6%）。而就准确度来说与理论浓度总平均百分偏差为-2.6%（范围-7.0%到1.8%）。
鼠血浆质量对照样品的测定精度平均为8.7%体积浓度（范围5.6%到13.3%），而与理论浓度的平均百分偏差为1.5%（范围-3.8%到9.1%）。
在现行的分析条件下，如果血浆样品中被测得的游离氨基胍的浓度超过10μg/ml，则需要用人（或相应的动物）空白血浆稀释，然后重新测定以使样品的响应在标样曲线的线性范围内（0.05-10μg/ml）。应该把内推法氨基胍浓度少于0.05μg/ml的样品称为“NR”（不能报告的），在进一步计算中（如药物动力学，统计学等）作为零对待。
这个研究的结果表明，这个发展的高压液相色谱分析方法的具有重复性，准确和稳定，对于三组所有血浆样品的总平均变差系数（精度）少于10%，总平均准确度在理论值的4%之内。分析稳定性经两个分析者在三天的确认期间非常好的结果，是很好的证明，在其中可检测加合物，对一整天看来是稳定的，从而可使或批样品的处理简化和高生产率地分析，利用人血浆标准曲线可成功地分析动物血浆的氨基胍浓度对于采用这个程序的未来的分析者可以予期得到10%的精度和5%的准确度标准。
总之，本分析方法在人、狗和鼠血浆中令人满意地被确认。
例2
这个试验计划按照类似于例1的方案进行，以便进一步证实本分析方法对于尿样品测定的准确度、可操作性。两个分析者利用一个HPLC系系统，独立绘制一人尿标样曲线和对四个已知的质量对照样品反复四次作高压液相色谱分析，每个工作日连续二天以便完成特定的分析操作规范。
分析方法
1、样品制备
将0.5ml工作内标溶液（在7.5%三氯乙酸中10μg/mlN-乙基氨基胍甲苯磺酸盐）和在干净螺旋塞培养管中0.5ml的含水（10mg/ml）溶液的反应试剂（6-乙基-2-吡啶-羰基醛）加到0.5ml的尿样品中。将样品盖紧，旋涡（10秒）然后在加热器（95°-100℃）上反应10分钟，在冷却后将样品输送到一个高压液相色谱仪的管瓶中，从中50μl一份被注射用于高压液相色谱仪分析用。
2、色谱法
利用一个Waters  Associates  Model  510泵并带有一个径向加压的柱（Waters  Novapak  CN，8mm×10cm，4μm颗粒大小）和一个氰基（Waters  Resolve  Guard-Pak  CN）前置柱。用可变紫外光检测器（Waters  484）在302μm波长检测样品的成份。移动相包括（体积比）10%乙腈：10%的甲醇：各0.01M的1-庚磺酸和磷酸-钠80%。在整个试验中，借助磁搅拌器缓慢地搅拌移动相防止有机溶剂分配。保持均匀的流速2.0ml/分，在室温下。经一个可编程的取样器顺序自动注入样品（Waters  WISP  712）。
3、数据分析
利用Waters  Maxima  820色谱操作台收集所有数据，由分析者利用线性试验校正药剂峰高和内部标样峰高的比值同在标准构成日常的方法标准化中加入尿中的浓度关系，从线性回归线内插法来确定在质量对照和未知的被测定样品中的氨基胍浓度。
结果和讨论
以天为基准，被观察到的线性（r＞0.998，p＜0.01）是在游离氨基胍的浓度0-100μg/ml的范围内，最低标准样品（0.5μg/ml）可以被稳定检测出。图3汇总了从这个研究中标样曲线数据，并示出了平均峰高比响应同血浆浓度关系曲线。和例1相同，由两个分析者在这次研究中得到的标样曲线基本上是可重叠的，因此总平均数据绘制成曲线。
从色谱的观点来看，6-甲基甲基吡啶醛脒基腙（AGH）和6-甲基甲基吡啶醛-N-乙基脒基腙（NEH），在同甲基吡啶醛（6-甲基-2-吡啶-羰基醛）反应期间生成的这两种加合物易于彼此或从内生干扰物中分离出来。图4示出人的空白尿的色谱，一个低浓度（1.0μg/ml）质量对照样品的色谱和一个高浓度（90μg/ml）质量对照样品的色谱。
和例1的分析结果相同，如用标样样品予先质量对照试验同标准样品曲线以后质对照试验结果（数据未示出）的关系所示，二者随时间的在每个试验结果中记下了较小不同。引起这些变化可能是由于在夜间试验中试验室温度波动引起的，这些可能的温度波动对保留时间有很大的影响，然而感兴趣的峰仍能有效地彼此以及与其他无关峰分开，这些峰容易检测和积分。和例1相同，这些问题将通过在整个试验中分散标样和质量对照样品最终得到平衡，因而对这个研究，对所有标样点进行回归分析可以充分模拟结果。
人尿的质量对照样品（对于质量对照样品A-D游离氨基胍的浓度分别为1.0，8.0，40和90μg/ml）结果汇总在下面的表Ⅱ中。
误差%＝100%×（观测浓度-理论浓度）/理论浓度
QC＝质量对照
利用m′（强制通过原点的回归斜率n＝14）计算质量对照的浓度以便获得最大的准确度。为确定未知的浓度，所给出的全部结果是用m′表示的。根据变差系数（用体积百分浓度）在所研究的浓度范围（1.0-40μg/ml）测量的精度的范围为1.8%到6.8%（总平均＝4.9%。用与理论浓度的百分误差测量的准确度的范围为-6.7%到15.5%（总平均＝4.8%）这对于生物分析观点来说已是相当令人满意的结果了。
在现行的分析条件下，如被分析样品的游离氨基胍的浓度超过100μg/ml，则应用人（或相应的动物）空白尿来稀释，然后重新分析，以便使样品的响应在标样曲线的线性范围（0.5-100μg/ml）内。对内推的氨基胍浓度小于0.5μg/ml样品应该被认为“NR”（不报告）在进一步计算中（如药物动力学、统计学）以零对待。
这个研究的结果进一步证明了本分析方法是可重复的，准确的和稳定的，以及对尿样品是适用的。对人尿的总平均变差（精度）系数小于5%，总平均准确度在理论浓度5%以内。分析的稳定性两个试验者在两天确认期间所得到的结果证明是优良的。在其中可检测的加合物在一整天中看来是稳定的，这样就便于样品的成批处理和高生产率的分析。予计利用这个确认程序的未来分析者可以期望得到5%的精度和5%准确度的标准。
例3
为了说明本方法在测量肾功能中的应用，使一组19个试验对象服用总剂量为300mg的盐酸氨基胍。在病人服用这个总剂量后，按照规定的服用后10小时，14小时和18小时，依次从每个病人处取出血浆样品，这些血浆被取出后，按例1的操作方案进行处理再用本发明的方法分析。
首先将这此样品同一定量的在7.5%三氯乙酸中N-乙基氨基胍甲苯磺酸盐内部标准工作溶液相混合，将得到的试样经10秒钟旋涡处理，然后在14000rpm速度下离心分离10分钟。将得到的上层清液倒入装有0.1ml含水溶液（10μg/ml）的6-甲基吡啶醛的培养管中。再将这些样品用盖子盖紧，在加热器上反应10分钟，待冷却后，转移到高压液相色谱的管瓶中，从管瓶把等分的样品供给高压液相色谱分析。
利用一个等流量在离子对条件下的径向加压的色谱柱，测量是借助一个可变紫外检测器在波长302nm完成的，利用所获得数据并通过下式，把计算的消除率转换为消除半衰期数据。
T1/2＝0、6931/Kelim
然后，把这些数据相对于用放射性示踪法测量的病人肾小球滤过率绘制成曲线，利用二者之间最后的线性关系式根据公式T1/2＝-0.14GFR+22.04（r＝0.875，n＝18）计算肾小球滤过率。然后对每个病人推导出T1/2和GFR的对应数值，这些数值列在下面表Ⅲ中
表Ⅲ
病人  GFR  氨基胍T1/2
1  12.8  24.59
2  52.4  14.19
3  116.3  3.83
4  44.1  21.75
5  31.1  19.04
6  80.5  6.78
7  26.7  14.83
8  12.1  24.91
9  117.2  4.73
10  148.9  3.94
11  111.9  6.82
12  103.8  6.08
13  41.6  14.92
14  39.2  9.54
15  113.2  4.81
16  82.2  6.03
18  131.3  7.05
19  131.1  6.46
此外，这些数据被整理成表格形式，并示在图5中，从这些列出的数据中可以发现十分一致和一个线性关系存在，可以测定氨基胍的消除以及确定相应的正常肾功能。因而氨基胍T1/2值在肾功能中用作鉴定反常，根据这个肾功能结果可以确定肾损伤和/或潜在的病理状态。
本发明可以包括另外的形式或在不背离本发明的精神或主要特征的条件下通过其它方法完成。因此，本说明书只是为对所有的方面进行说明，而不是对这些方案的限定。本发明的范围由权利要求书限定，所有的在相等意义和范围内变化都应在本发明范围内。

Claims (37)

1、一种分析氨基胍及其类似物的方法，它包括：
A、收集确信包含有氨基胍或其类似物的生物样品；
B、脱去该生物样品中的蛋白质；
C、使在步骤B中脱去蛋白质的生物样品同足够量的吡啶醛反应，以使在该生物样品中的氨基胍或其类似物全部生成相应的吡啶醛一取代腙；
D、借助于利用均匀或梯度洗脱的高压液相色谱法从步骤C中生成的反应混合物的剩余物中分离全部取代腙；
E、检测步骤D中的分离物，以便估价该氨基胍和/或类似物的数量和分布。
2、如权利要求1所述的方法，其特征在于，该生物样品可以从血浆、尿和组织中选取。
3、如权利要求1所述的方法，其特征在于，该生物样品根据一个已知相等含量的内标来制备。
4、如权利要求3所述的方法，其特征在于，该内标可以从氨基胍和其类似物中选取。
5、如权利要求4所述的方法，其特征在于，该内标由氨基胍组成。
6、如权利要求4所述的方法，其特征在于，该内标由N-乙基氨基胍组成。
7、如权利要求1所述的方法，其特征在于，该生物样品用从中等强度酸到强酸、以及可以沉淀蛋白质的有机溶剂中选取的脱去蛋白质试剂处理，来脱去蛋白质。
8、如权利要求7所述的方法，其特征在于，该酸从高氯酸和三氯乙酸中选取。
9、如权利要求7所述的方法，其特征在于，该有机溶剂从甲醇、乙腈和二氯甲烷中选取。
10、如权利要求1所述的方法，其特征在于，该生物样品通过使该样品经超过滤处理来脱去蛋白质。
11、如权利要求1所述的方法，其特征在于，该吡啶醛是甲基吡啶醛。
12、如权利要求11所述的方法，其特征在于，该吡啶醛是6-甲基甲基吡啶醛。
13、如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C是在中等强度酸的条件下完成的。
14、如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤D的高压液相色谱法的方案是利用径向压缩色谱柱和等流量以及离子对条件下进行。
15、如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤E的检验包括用紫外分光光谱在302nm波长分析分离出物质，检测所有的氨基胍和/或其类似物。
16、用于完成分析氨基胍及其类似物的测试器材箱，包括：
A、一定数量的用于和可得到的氨基胍或类似化合物反应的吡啶醛;
B、用在高压液相色谱中的其它试剂和固定液;
C、使用这些器材的指南。
17、如权利要求16所述的测试器材箱，进一步包括一定数量用于脱去该生物样品中蛋白质的试剂。
18、如权利要求16所述的测试器材箱，包括一个从氨基胍及其类似物中选定的内标。
19、如权利要求18所述的测试器材箱，其特征在于该内标是氨基胍。
20、如权利要求18所述的测试器材箱，其特征在于该内标是N-乙基氨基胍。
21、如权利要求16所述的测试器材箱，其特征在于借助于从由中等强度酸到强酸，以及可以沉淀蛋白质的有机溶剂中选取脱去蛋白质试剂来脱去该生物样品中的蛋白质。
22、如权利要求21所述的测试器材箱，其特征在于该酸从高氯酸和三氯乙酸中选取。
23、如权利要求21所述的测试器材箱，其特征在于该有机溶剂从甲醇、乙腈和二氯甲烷中选取。
24、如权利要求16所述的测试器材箱，其特征在于该生物样品是超过滤处理该样品来脱去蛋白质的。
25、如权利要求16所述的测试器材箱，其特征在于该吡啶醛是甲基吡啶醛。
26、如权利要求16所述的测试器材箱，其特征在于该吡啶醛是6-甲基甲基吡啶醛。
27、用于测量肾功能的权利要求16所述的测试器材箱，还包括一定数量的予先确定的适合于试验对象服用剂型的氨基胍或其类似物;一个商值曲线或表格形式的连续集，该商值是根据氨基胍或其类似物的消除半衰期（T1/2）与肾小球滤过率（GFR）的比率得出的，据此可以向诊断者和临床医生提供解释肾功能测试结果。
28、如权利要求27所述的测试器材箱，该预先确定的剂型是口服剂型。
29、如权利要求28所述的测试器材箱，其特征在于该口服剂型是从药丸、糖果剂、胶囊、糖衣丸、甘香酒剂、糖浆中选取的。
30、如权利要求29所述的测试器材箱，其特征在于该口服剂型含有300mg盐酸氨基胍或其类似物。
31、一种监测哺乳动物肾功能的方法，包括服用由氨基胍和其类似物中选取的主试剂一确定剂量，在规定的时间间隔从所述哺乳动物收集血浆样品，检验这些样品，以便确定该主试剂的存在和分布。
32、如权利要求31所述的方法，还包括：
（1）用下述方法检验这些样品：
A、收集确信含有氨基胍或其类似物的生物样品;
B、脱去该生物样品中的蛋白质;
C、使在步骤B中脱去了蛋白质的生物样品同足量的吡啶醛反应，以便使在该生物样品中的氨基胍或其类似物全部转换成相应的吡啶醛-取代腙;
D、借助于使用均匀或梯度洗脱的高压液相色谱法从步骤C中反应混合物的剩余物中分离出形成的所有取代腙;
E、检验在步骤D中的分离出的物质，以便估价所述氨基胍和/或其类物的数量和分布;
（2）根据所得结果确定氨基胍和/或其类物的消除半衰期;以及
（3）把这些确定的消除数据与从各种已知肾功能的哺乳动物得到氨基胍的消除数据图或表格连续集比较。
33、完成权利要求31所述方法的测试器材箱包括：
A、从氨基胍和其类似物中选取的一种主试剂的固定剂量;
B、其他试剂和固定液;
C、这些器材的使用说明。
34、一种检测与肾功能改变有关疾病的出现或存在的方法，包括完成权利要求31或32的方法。
35、如权利要求34所述的方法，其特征在于该疾病是肾病和糖尿病。
36、一种监测抑制过强的糖基化最终产物在人体中生成的药物疗效的方法，包括完成权利要求1的方法。
37、一种筛选可以抑制在人体内过强糖基化最终产物形成的新化合物培育的生物样品，确定吸收、分布、代谢和/或排泄的简况，并用权利要求1的方法检验该样品。
CN91101782A 1990-02-20 1991-02-20 氨基胍的分析及其应用 Pending CN1055063A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/469,964 US5108930A (en) 1990-02-20 1990-02-20 Aminoguanidine assay and applications thereof
US469,964 1990-02-20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1055063A true CN1055063A (zh) 1991-10-02

Family

ID=23865726

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN91101782A Pending CN1055063A (zh) 1990-02-20 1991-02-20 氨基胍的分析及其应用

Country Status (9)

Country Link
US (1) US5108930A (zh)
EP (1) EP0448228A3 (zh)
JP (1) JPH06281648A (zh)
KR (1) KR910021584A (zh)
CN (1) CN1055063A (zh)
AU (1) AU7114991A (zh)
CA (1) CA2036631A1 (zh)
IE (1) IE910554A1 (zh)
PT (1) PT96829A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109580873A (zh) * 2018-12-27 2019-04-05 湖北航天化学技术研究所 一种三氨基硝酸胍纯度的测定方法

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6191169B1 (en) * 1992-08-28 2001-02-20 City Of Hope Human leukocyte 12-lipoxygenase and its role in the pathogenesis of disease states
NO315930B1 (no) * 1995-01-18 2003-11-17 Picower Inst For Medical Res T Anvendelse av tiazoliumforbindelser ved fremstilling av farmasöytiske preparater, preparater som inneholder forbindelsene, samt nyetiazoliumforbindelser
CA2210684C (en) * 1995-01-18 2008-01-15 Alteon Inc. Use of thiazolium compounds for preventing and reversing the formation of advanced glycosylation endproducts
US5656261A (en) 1995-01-18 1997-08-12 The Picower Institute For Medical Research Preventing and reversing advanced glycosylation endproducts
US6004958A (en) * 1997-02-05 1999-12-21 Fox Chase Cancer Center Compounds and methods for therapeutic intervention in preventing diabetic complications and procedures for assessing a diabetic's risk of developing complications and determining the efficacy of therapeutic intervention
US7071298B2 (en) * 1997-02-05 2006-07-04 Fox Chase Cancer Center Compounds and methods for treating glycogen storage disease and other pathological conditions resulting from formation of age-proteins
US6171856B1 (en) 1997-07-30 2001-01-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions relating to no-mediated cytotoxicity
JP4529104B2 (ja) * 2000-03-16 2010-08-25 株式会社エイコム 生体試料中のｄｎａ酸化損傷指標の簡易高感度測定システム
AU2001275515A1 (en) * 2000-06-07 2001-12-17 Alteon Inc. Method for treating hyperglycemia
US6781039B2 (en) * 2002-05-07 2004-08-24 Stine Seed Farm, Inc. Soybean cultivar S010360
US20050014747A1 (en) * 2003-04-18 2005-01-20 Emily Reinhard Dihydrothiazine prodrugs of thiazolium agents
RU2676487C1 (ru) * 2018-06-27 2018-12-29 Общество С Ограниченной Ответственностью "Инновационные Фармакологические Разработки" (Ооо "Ифар") Способ количественного определения 8-(трифторметил)бензо[f][1,2,3,4,5]пентатиепин-6-амина гидрохлорида в биологических средах
RU2699550C1 (ru) * 2018-07-04 2019-09-06 Общество С Ограниченной Ответственностью "Инновационные Фармакологические Разработки" (Ооо "Ифар") Способ количественного определения n-[3-(4-нитрофениламино)-индол-2-илметилен]аминогуанидина метансульфоната в плазме крови
CN113156029B (zh) * 2021-05-08 2023-05-16 西安航洁化工科技有限责任公司 一种液相色谱法测定氨基胍碳酸盐纯度的方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4758583A (en) * 1984-03-19 1988-07-19 The Rockefeller University Method and agents for inhibiting protein aging
US4983604A (en) * 1987-11-13 1991-01-08 The Rockefeller University Inhibitors of nonenzymatic cross-linking

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109580873A (zh) * 2018-12-27 2019-04-05 湖北航天化学技术研究所 一种三氨基硝酸胍纯度的测定方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP0448228A2 (en) 1991-09-25
EP0448228A3 (en) 1993-01-13
KR910021584A (ko) 1991-12-20
AU7114991A (en) 1991-08-22
JPH06281648A (ja) 1994-10-07
US5108930A (en) 1992-04-28
PT96829A (pt) 1991-10-31
CA2036631A1 (en) 1991-08-21
IE910554A1 (en) 1991-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1055063A (zh) 氨基胍的分析及其应用
Dona et al. Precision high-throughput proton NMR spectroscopy of human urine, serum, and plasma for large-scale metabolic phenotyping
Zametkin et al. Stimulants, urinary catecholamines, and indoleamines in hyperactivity: a comparison of methylphenidate and dextroamphetamine
JP6927212B2 (ja) 軽度認知障害又はアルツハイマー型認知症の評価方法
KR102355667B1 (ko) 알츠하이머형 인지증의 장래의 발증 리스크의 평가 방법
KR20050012281A (ko) 대사 표현형 확인 방법
CN101013137A (zh) 一类检测缺血性修饰白蛋白的试剂盒及其检测方法
CN105506115A (zh) 一种检测诊断遗传性心肌病致病基因的dna文库及其应用
CN1919201A (zh) 用于预防糖尿病并发症中的治疗干涉的化合物和方法
Yamada et al. Factors associated with the serum myostatin level in patients undergoing peritoneal dialysis: potential effects of skeletal muscle mass and vitamin D receptor activator use
Manyam et al. Huntington's disease: Cerebrospinal fluid GABA levels in at-risk individuals
US20230357820A1 (en) Test method for mild cognitive impairment, test reagent for mild cognitive impairment, and method for screening therapeutic candidate substances for mild cognitive impairment
JP5850374B2 (ja) アルツハイマー病の診断補助方法、及び診断システム
Gerdts et al. Salt sensitive essential hypertension evaluated by 24 hour ambulatory blood pressure
CN108593811B (zh) 一种测定生物体液中百草枯和敌草快含量的方法
CN1844912A (zh) 一种地龙指纹图谱的建立方法和地龙药材的鉴别方法
CN112345655A (zh) 一种胡蜂毒液指纹图谱的建立方法、胡蜂毒液指纹图谱及其应用
Nalbandian et al. Liquid-chromatographic quantification of piracetam.
EP3207926B1 (en) Oxidized lipids in the treatment of chronic or neuropathic pain
CN109470533A (zh) 一种用于便携式血糖仪的人源全血基质质控品的制备方法
WO2020159400A1 (ru) Фармацевтическая композиция на основе альфа-метил-п-тирозина и способ ранней диагностики болезни паркинсона
Kron et al. Alterations of glycaemia, insulin resistance and body mass index within the C-peptide optimal range in non-diabetic patients.
CN113030305B (zh) 一种健康人群n-糖肽生理丰度范围的构建方法及其应用
CN114295757B (zh) 一种鼠妇虫hplc特征图谱构建方法
Widiyanto et al. Stress Estimation of Pre-Slaughter and Slaughtered by Means of Fourier Transform Infrared Spectroscopy Analysis Through Measurement of Cortisol and Catecholamine Level in Female Cattle Urine

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C01 Deemed withdrawal of patent application (patent law 1993)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication