WO2020159400A1 - Фармацевтическая композиция на основе альфа-метил-п-тирозина и способ ранней диагностики болезни паркинсона - Google Patents

Фармацевтическая композиция на основе альфа-метил-п-тирозина и способ ранней диагностики болезни паркинсона Download PDF

Info

Publication number
WO2020159400A1
WO2020159400A1 PCT/RU2019/000588 RU2019000588W WO2020159400A1 WO 2020159400 A1 WO2020159400 A1 WO 2020159400A1 RU 2019000588 W RU2019000588 W RU 2019000588W WO 2020159400 A1 WO2020159400 A1 WO 2020159400A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
methyl
disease
alpha
tyrosine
parkinson
Prior art date
Application number
PCT/RU2019/000588
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Михаил Вениаминович УГРЮМОВ
Александр Робертович КИМ
Анна Алексеевна КОЛАЧЕВА
Екатерина Николаевна ПАВЛОВА
Лилия Кадыровна ДИЛЬМУХАМЕТОВА
Виталий Васильевич САФАНДЕЕВ
Всеволод Владимирович БОГДАНОВ
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Центр ранней диагностики нейродегенеративных заболеваний (НДЗ)"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Центр ранней диагностики нейродегенеративных заболеваний (НДЗ)" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Центр ранней диагностики нейродегенеративных заболеваний (НДЗ)"
Publication of WO2020159400A1 publication Critical patent/WO2020159400A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid, pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-aminoacids, e.g. alanine, edetic acids [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
    • A61B5/103—Detecting, measuring or recording devices for testing the shape, pattern, colour, size or movement of the body or parts thereof, for diagnostic purposes
    • A61B5/11—Measuring movement of the entire body or parts thereof, e.g. head or hand tremor, mobility of a limb
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid, pantothenic acid
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2835—Movement disorders, e.g. Parkinson, Huntington, Tourette

Definitions

  • the present invention relates to the field of medicine, in particular, the diagnosis of neurodegenerative diseases, and can be used to diagnose Parkinson's disease at the pre-symptomatic (preclinical or prodromal) stage.
  • Neurodegenerative diseases are a group of chronic diseases in which specific neurons of the central nervous system die. Such diseases include Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Huntington's chorea, hyperprolactinemia and a number of other nervous and mental illnesses. Over time, the number of patients suffering from neurodegenerative diseases in general and Parkinson's disease, in particular, is rapidly increasing, which is due to the increase in life expectancy of the population in developed countries, increased environmental pollution and, for still unclear reasons, "rejuvenation of diseases.” So, if at present 16 million people suffer from Parkinson's disease in the world, and 5 million of them are in European countries and Russia, then by 2040, according to the World Health Organization, the number of patients with Parkinson's disease will double. In Russia, the number of patients suffering from Parkinson's disease reaches 200 people per 100 thousand of the population.
  • Parkinson's disease motor function is impaired, primarily voluntary movements of the limbs, due to the appearance of involuntary movements - tremors (tremors) and / or rigidity (stiffness).
  • tremors involuntary movements - tremors
  • stiffness rigidity
  • the treatment and rehabilitation of patients is a heavy moral, psychological and financial burden not only on the patients themselves, but also on their immediate environment and society as a whole. For example, in the United States, only direct costs for the treatment and rehabilitation of one PD patient reach $ 25,000 per year, and the annual costs for all patients exceed $ 60 billion. Similar studies have been carried out in Europe, China and other countries around the world. Despite huge investments in the development of new methods of treatment and rehabilitation of patients, neurodegenerative diseases belong to the category incurable diseases of the brain, and so far in the world not a single patient has been cured.
  • Parkinson's disease is diagnosed only many years after the onset of the pathological process with the death of most of the nigrostriatal dopaminergic neurons and depletion of compensatory brain reserves, i.e. against the background of an almost complete absence of targets for pharmacotherapy. This explains the low efficiency of the existing treatment. Therefore, in recent years, the attention of scientists both in Russia and in other developed countries has been focused on the development of early diagnosis of Parkinson's disease - long before the onset of motor symptoms - at the so-called pre-symptomatic stage, conventionally combining the preclinical and prodromal stages of the disease.
  • Parkinson's disease like other neurodegenerative diseases, would make it possible to start treating patients with neuroprotectors at an early stage of the disease, which would lead, if not to stop, then to slow down the death of specific neurons and to a significant extension of the asymptomatic stage, possibly to the end of the patient's life.
  • Specific markers for Parkinson's disease include a precursor for dopamine synthesis, dopamine transporter ligands, and dopamine receptors.
  • a gradual decrease in the functional activity of neurons, recorded by specific markers, and the accumulation of pathological proteins, recorded by relatively specific markers, can be considered as convincing evidence of the development of a neurodegenerative disease.
  • Methods using a provocative or stress test can reveal the latent pathology of an organ due to a reversible short-term increase in its functional failure. This leads to a short-term manifestation of characteristic symptoms in people with pathology, but does not affect normal people in any way.
  • the present invention is directed to the creation of a drug based on a tyrosine derivative for intranasal administration, which can be safely used for a challenge test in the vast majority of patients, as well as to create a method for the early diagnosis of Parkinson's disease using a challenge test based on this drug.
  • Parkinson's disease develops for a long time in a latent, asymptomatic form, characterized by partial degradation of the nigrostriatal system, a key part of the brain that regulates motor function.
  • Alpha-methyl-p-tyrosine is a reversible non-metabolizable inhibitor of dopamine synthesis, therefore its administration causes a short-term aggravation of the functional insufficiency of the degrading nigrostriatal system, i.e. an even stronger drop in the level of dopamine in the striatum.
  • the essence of the proposed method for early diagnosis of Parkinson's disease consists in a reversible short-term increase in the functional insufficiency of the degrading regulatory system to the threshold at which specific symptoms appear briefly in people in the latent phase of the disease, but not in control subjects, i.e. people with normal dopamine content in the striatum.
  • a drug is used as a provocative agent, which is a tyrosine derivative - alpha-methyl-p-tyrosine in a form suitable for intranasal administration, for example, in the form of methyl ester hydrochloride immobilized in the volume of the hydrogel polymer system as a mucoadhesive a carrier based on synthetic polymer gels.
  • a feature of the proposed provocative agent is strictly dosed and localized intranasal administration of this medicinal product, providing a targeted effect on the nigrostriatal system with minimal systemic effects.
  • a hydrogel is well known as a material suitable for use as a matrix for controlled release of drugs (N.A. Pappas Ed., "Hydrogels in Medicine and Pharmacy, Vol. 11; Polymers", CRC Press, Inc., 1987).
  • any other pharmaceutically acceptable carrier may also be used in accordance with the present invention to prepare a pharmaceutical composition.
  • the carrier will usually comprise saline or sterile water, although other ingredients may be included.
  • saline One of the most common and frequently used carriers is saline.
  • the gel carrier may have some additional advantage over other options, since the application of aMPT in a gel to the nasal mucosa can prevent a part of the administered agent from dripping, thereby providing increased dosing accuracy and selectivity of aMPT delivery to the brain.
  • the described alpha-methyl-p-tyrosine in a form suitable for nasal administration is used in the claimed method for early diagnosis of Parkinson's disease as a provocative agent, the action of which is aimed at a short-term decrease in the level of dopamine in the striatum at the pre-symptomatic stage, i.e. in the absence of impaired motor function, up to the threshold at which these impairments are briefly manifested.
  • the patient is preliminarily examined for the absence of motor disorders and the presence of non-motor harbingers of Parkinson's disease.
  • the following warning signs are taken into account, such as a slow gait, hunched over, quiet speech, poor facial expressions, handwriting deterioration, depression, anxiety, fatigue, constipation, sleep disturbances, smell and thermoregulation, orthostatic hypotension, weakening of potency and, finally, pain symptoms that are usually mistaken for dysfunctional-painful muscle-facial syndrome, radiculopathies or peripheral neuropathies, and the like.
  • the patient is then administered 1 to 4 grams of an alpha-methyl-p-tyrosine preparation.
  • the most effective targeted delivery to the brain is provided by intranasal administration of this drug to the nasal mucosa in the projection of the ethmoid bone, from where it can diffuse along the cranial nerves into the brain.
  • the subject is diagnosed with early stage Parkinson's disease.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition containing alpha-methyl-p-tyrosine or a pharmaceutically acceptable derivative and a pharmaceutically acceptable carrier, intended for intranasal administration as a provocative agent for early diagnosis of Parkinson's disease.
  • pharmaceutically acceptable derivative refers to pharmaceutical salts, esters and other derivatives, which are medically suitable for use in contact with human and animal tissues without undue toxicity, irritation and allergic reaction and with a reasonable balance of benefit and risk.
  • Pharmaceutically acceptable derivatives are well known in the art.
  • the pharmaceutically acceptable alpha-methyl-p-tyrosine derivative is a salt and / or an ester.
  • the pharmaceutically acceptable alpha-methyl-p-tyrosine derivative is alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride.
  • the pharmaceutically acceptable carrier is a gel.
  • the pharmaceutically acceptable gel carrier is a hydrogel.
  • the pharmaceutically acceptable carrier is saline or sterile water.
  • the present invention also relates to a method for the early diagnosis of Parkinson's disease, comprising
  • FIG. 1 shows the locomotor activity and the level of dopamine in the striatum in control mice treated with pure gel intranasally (NaCl-gel), control mice treated with 1 mg of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride immobilized in 16 ⁇ l hydrogel (NaCl-aMPT) , mice with model presymptomatic stage of parkinsonism, who received pure gel (MPTP-gel) and mice with a model of presymptomatic stage of parkinsonism, who received 1 mg of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride, immobilized in 16 ⁇ l of hydrogel (MPTP-aMPT). Data are presented as a percentage of the values of the NaCl-gel group. * p ⁇ 0.05 compared to NaCl-gel or between selected groups. The dashed line indicates the threshold level of dopamine at which motor disorders are manifested.
  • FIG. 2 shows the concentration of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride (aMPT) in the blood plasma of mice after 5, 10, 15 and 30 minutes, as well as 1, 3, 5 and 7 hours after intravenous administration of 1 mg of alpha-methyl ester hydrochloride methyl p-tyrosine and intranasal administration of 1 mg of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride immobilized in 16 ⁇ l of hydrogel.
  • aMPT alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride
  • FIG. 3 shows the level of dopamine in the striatum in mice receiving intranasally 0.8 mg of alpha-methyl-p-tyrosine (aMPT) as a solution of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride or 1 mg in the form of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride p-tyrosine immobilized in 16 ⁇ l of hydrogel. Data are presented as a percentage of control. * p ⁇ 0.05 compared to control.
  • aMPT alpha-methyl-p-tyrosine
  • Example 1 Preparation of a pharmaceutical composition according to a preferred embodiment of the present invention.
  • the hydrogel polymer carrier is a weakly crosslinked polymer of acrylamide swollen in water for injection capable of reversible sorption of various, including biologically active compounds.
  • the immobilization of the substance by the carrier is carried out physically, that is, without the formation of chemical bonds.
  • a polymer gel was synthesized by radical polymerization of a hydrophilic acrylamide monomer, while N, N-methylene-bis-acrylamide was used as a crosslinking agent in accordance with the diagram below.
  • CHrCH-CONHi + CH2 CH-C0NH 2 + (CH ⁇ H-CONHbCib - *
  • the initiator was a redox system ammonium persulfate - N, N, N ', N' -tetramethylethylenediamine.
  • the polymerization reaction was carried out at a temperature of 25-30 ° C and atmospheric pressure.
  • the obtained polymer was placed in dialysis bags and purified until the complete removal of unreacted monomers by dialysis until the optical density of the wash water, measured at 200 nm, becomes less than 0.002.
  • An additional control was performed for the completeness of the washing of the gels by FTIR spectroscopy.
  • the polymer content was determined gravimetrically. The gravimetric method of analysis is based on the accurate measurement of the mass of a substance isolated as a compound of a known composition.
  • a sample of the hydrogel (1 ⁇ 0.001) g was weighed on an analytical balance, dried to constant weight in a drying oven, and the polymer content in the sample was determined using the formula:
  • Alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride in a hydrogel polymer system was obtained by mixing the washed polymer gel with a given mass of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride, after which the mixture was sonicated in an ultrasonic bath for 10 minutes. The resulting product was poured into glass vials, which were sealed with metal lids.
  • Example 2 Alpha-methyl-p-tyrosine provokes motor impairments in a model of pre-symptomatic parkinsonism, but not in control mice.
  • the model of presymptomatic parkinsonism was reproduced by a single subcutaneous injection of 1 - methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) (Sigma, USA) at a single dose of 18 mg / kg. Control animals received 0.9% NaCl.
  • MPTP 1 - methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine
  • mice with a model of presymptomatic parkinsonism were divided into 2 groups, one of which received intranasally 1 mg of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride immobilized in 16 ⁇ L of hydrogel, and the second - a similar volume of pure hydrogel.
  • Animals of the control (NaCl) groups also underwent similar intranasal administration of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride and pure hydrogel, respectively.
  • 5 hours after intranasal administration the motor activity of mice was assessed according to the total traversed path in the "Open Field” test. Then the animals were decapitated, the striatum was isolated, and the dopamine content in it was assessed using high performance chromatography (HPLC) with electrochemical detection.
  • HPLC high performance chromatography
  • Example 3 Comparison of intranasal and intravenous methods of administration of a provocative agent.
  • Intact mice received an injection of 1 mg of alpha-methyl-p-tyrosine in a soluble form of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride into the tail vein, or 1 mg of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride immobilized in 16 ⁇ l of hydrogel, intranasally.
  • the preparation for intranasal administration was prepared according to the method described in example 1. After 5, 10, 15 and 30 minutes, as well as 1, 3, 5 and 7 hours after intravenous or intranasal administration of the drug, the animals were decapitated, blood plasma was collected and the concentration of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride was assessed using HPLC with native fluorescence detection. The analysis results are shown in FIG. 2.
  • Example 4 Comparison of different methods of intranasal administration of alpha-methyl-p-tyrosine.
  • Intact mice received intranasally 0.8 mg of alpha-methyl-p-tyrosine in the form of a solution of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride or 1 mg in the form of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride immobilized in 16 ⁇ l of a hydrogel.
  • a hydrogel for intranasal administration was prepared according to the method described in Example 1.
  • intranasal alpha-methyl-p-tyrosine reduces dopamine levels in the striatum both when administered as a solution of alpha-methyl-p-tyrosine methyl ester hydrochloride and when using a carrier hydrogel.
  • the proposed composition and method provide an effective and safe provocative test for early diagnosis of Parkinson's disease in the widest layers of the population, allow minimizing the intake of a provocative agent into the general circulation system and impact on the peripheral nervous system and internal organs, which minimizes the risks of side effects. effects.
  • the important advantages of the proposed means and method are their high specificity and low cost.

Abstract

Настоящее изобретение относится к области медицины и может использоваться для ранней диагностики нейродегенеративных заболеваний, в частности, болезни Паркинсона, на досимптомной (доклинической или продромальной) стадии. Для диагностики предлагается способ, при котором проводят провокационный тест с интраназальным введением альфа-метил-п-тирозина в форме, пригодной для интраназального введения, и при обнаружении симптомов моторных нарушений ставят диагноз ранней стадии болезни Паркинсона.

Description

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ АЛЬФА-МЕТИЛ-П- ТИРОШНА И СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА
ОПИСАНИЕ
Область техники, к которой относится настоящее изобретение
Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности, диагностики нейродегенеративных заболеваний, и может использоваться для диагностики болезни Паркинсона, на досимптомной (доклинической или продромальной) стадии.
Предшествующий уровень техники настоящего изобретения
Нейродегенеративные заболевания представляют собой группу хронических заболеваний, при которых погибают специфические нейроны центральной нервной системы. К таким заболеваниям относятся болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, хорея Гентингтона, гиперпролактинемия и ряд других нервных и психических болезней. Со временем число больных, страдающих нейродегенеративными заболеваниями вообще и болезнью Паркинсона, в частности, быстро увеличивается, что обусловлено увеличением продолжительности жизни населения в развитых странах, повышением загрязнения окружающей среды и, по пока неясным причинам, «омоложением заболеваний». Так, если в настоящее время болезнью Паркинсона в мире страдают 16 млн. человек, причем 5 млн. из них приходится на европейские страны и Россию, то к 2040 году, по данным Всемирной организации здравоохранения, число больных болезнью Паркинсона удвоится. В России число больных, страдающих болезнью Паркинсона, достигает 200 человек на 100 тысяч населения.
При болезни Паркинсона нарушается двигательная функция, в первую очередь произвольные движения конечностей, за счет появления непроизвольных движений - тремора (дрожания) и/или ригидности (скованности). Лечение и реабилитация больных ложатся тяжелым морально-психологическим и финансовым бременем не только на самих больных, но и на их ближайшее окружение и общество в целом. Так, в США только прямые затраты на лечение и реабилитацию одного больного, страдающего БП, достигают 25 тыс. долларов в год, а ежегодные затраты на всех больных превышают 60 млрд, долларов. Аналогичные исследования были проведены в Европе, Китае и других странах мира. Несмотря на огромные инвестиции в разработку новых способов лечения и реабилитацию больных, нейродегенеративные заболевания относятся к категории неизлечимых болезней мозга, и до сих пор в мире ни одного больного не было вылечено.
Болезнь Паркинсона диагностируется только через много лет после начала патологического процесса при гибели большей части нигростриатных дофаминергических нейронов и истощении компенсаторных резервов мозга, т.е. на фоне почти полного отсутствия мишеней к фармакотерапии. Этим и объясняют низкую эффективность существующего лечения. Поэтому в последние годы внимание ученых как в России, так и в других развитых странах сосредоточено на разработке ранней диагностики болезни Паркинсона - задолго до появления моторных симптомов - на так называемой досимптомной стадии, условно объединяющей доклиническую и продромальную стадии заболевания. Успешная разработка ранней диагностики болезни Паркинсона, как и других нейродегенеративных заболеваний, позволила бы начать лечение больных с помощью нейропротекторов на ранней стадии заболевания, что приведет, если не к остановке, то к замедлению гибели специфических нейронов и к значительному продлению бессимптомной стадии, возможно, до конца жизни больного.
В настоящее время разработаны методы диагностирования нейродегенеративных заболеваний на досимптомной стадии с помощью неинвазивных нейровизуализационных методов - позитронно-эмиссионной томографии и однофотонной эмиссионной компьютерной томографии. Эти методы позволяют оценить функциональное состояние специфических нейронов и уровень нейротоксинов в строго определенных отделах мозга, деградация которых приводит к развитию нейродегенеративных заболеваний (De Kosky, S.T. Looking backward to move forward: early detection of neurodegenerative disorders / S. T. De Kosky, K. Marek // Science. - 2003. - Vol. 302. - P. 830-834). Для этого используют специфичные или относительно специфичные коротко живущие радиоактивно меченные молекулярные маркеры. К специфичным маркерам болезни Паркинсона относятся: предшественник синтеза дофамина, лиганды дофаминового транспортера и рецепторы к дофамину. Постепенное снижение функциональной активности нейронов, регистрируемое по специфичным маркерам, и накопление патологических белков, регистрируемое по относительно специфичным маркерам, могут рассматриваться как убедительное доказательство развития нейродегенеративного заболевания.
Однако, учитывая необходимость больших финансовых затрат на приобретение и эксплуатацию оборудования для позитронно-эмиссионной томографии и однофотонной эмиссионной компьютерной томографии, создания специальных технических условий для их использования (радиохимическая лаборатория, циклотрон и др.), очевидно, что неинвазивные нейровизуализационные методы даже в самых развитых и богатых странах не могут быть использованы при диспансеризации здорового населения, а доступны для обследования лишь ограниченного числа людей.
Из вышеизложенного следует необходимость разработки альтернативной методологии диагностики нейродегенеративных заболеваний на досимптомной стадии
- специфической и легкодоступной по организационным и финансовым показателям.
Последнее время в лаборатории авторов ведутся работы по адаптации методологии так называемых провокационных или нагрузочных тестов для разработки доклинической диагностики хронических заболеваний мозга. Такие провокационные тесты (фармакологические и т.п.) давно и широко применяются во всех ветвях терапии для диагностирования хронических заболеваний внутренних органов (Witek, Р. The role of combined low-dose dexamethasone suppression test and desmopressin stimulation test in the diagnosis of persistent Cushing's disease. Case report / P. Witek [et al.] // Endokrynol Pol.
- 2010. - Vol. 61. - N 3. - P.312-317; Gasco, V. Acylated ghrelin as a provocative test for the diagnosis of GH deficiency in adults / V. Gasco [et al.] // Eur J Endocrinol. - 2012. - Vol. 168. - N 1. - P. 23-30; Hermann, S. Preclinical research. Seal of approval translational medicine / S. Herman, B. Pichler, J. Kotzerke // Nuklearmedizin. - 2013. - Vol. 52. - N 6. - P.53-54).
Методы с использованием провокационного или нагрузочного теста позволяют выявить скрытую патологию органа за счет обратимого кратковременного повышения его функциональной недостаточности. Это приводит к кратковременному проявлению характерных симптомов у людей с патологией, но никак не влияет на людей в норме.
Один из таких методов раскрывается в патенте Российской Федерации 2318437, который является наиболее близким аналогом настоящего изобретения. В указанном патенте заявляется способ доклинической диагностики болезни Паркинсона, суть которого заключается в том, что при проведении провокационного теста пациенту вводят в кровь a-метил-п-тирозин (аМПТ), а затем определяют у него наличие/отсутствие тремора и/или мышечной ригидности. Однако недостатком данного способа является большое количество противопоказаний, поскольку системное введение a-метил-п-тирозина в высокой дозе имитирует десимпатизацию внутренних органов, вызывая нарушение функций сердечно-сосудистой и других систем органов. Следовательно, в неврологии сохраняется потребность в новых более безопасных, эффективных и универсальных способах ранней диагностики болезни Паркинсона.
Раскрытие настоящего изобретения
Таким образом, настоящее изобретение направлено на создание лекарственного средства на основе производного тирозина для интраназального введения, которое можно безопасно использовать для провокационного теста у подавляющего большинства пациентов, а также на создание способа ранней диагностики болезни Паркинсона с применением провокационного теста на основе указанного лекарственного средства.
Болезнь Паркинсона длительное время развивается в скрытой, асимптомной форме, характеризующейся частичной деградацией нигростриатной системы - ключевого отдела мозга, регулирующего моторную функцию. Происходит сильное снижение уровня нейромедиатора дофамина, при котором, однако, уровень дофамина еще не достигает порога, при котором возникает моторная симптоматика - 20-30% от нормы. Альфа-метил-п-тирозин является обратимым неметаболизируемым ингибитором синтеза дофамина, поэтому его введение вызывает кратковременное усугубление функциональной недостаточности деградирующей нигростриатной системы, т.е. еще более сильное падение уровня дофамина в стриатуме. У людей со скрытой формой болезни Паркинсона это провоцирует кратковременное появление характерной моторной симптоматики, позволяющее поставить диагноз. Таким образом, суть предлагаемого способа для ранней диагностики болезни Паркинсона состоит в обратимом кратковременном усилении функциональной недостаточности деградирующей регуляторной системы до порога, при котором кратковременно проявляется специфическая симптоматика у людей в латентной фазе заболевания, но не у испытуемых в контроле, т.е. людей с нормальным содержанием дофамина в стриатуме.
В соответствии с настоящим изобретением в качестве провокационного средства используют лекарственное средство, представляющее собой производное тирозина - альфа-метил-п-тирозина в форме, пригодной для интраназального введения, например, в виде гидрохлорида метилового эфира, иммобилизованного в объеме гидрогелевой полимерной системы в качестве мукоадгезивного носителя на основе синтетических полимерных гелей. Таким образом, особенностью предлагаемого провокационного средства является строго дозированное и локализованное интраназальное введение данного лекарственного средства, обеспечивающее направленное воздействие на нигростриатную систему с минимальными системными эффектами.
Гидрогель хорошо известен как вещество, подходящее для использования в качестве матрицы для регулируемого высвобождения лекарственных средств (N.A. Pappas Ed., "Hydrogels in Medicine and Pharmacy, Vol. 11 ; Polymers", CRC Press, Inc., 1987).
Также в соответствии с настоящим изобретением для приготовления фармацевтической композиции может быть использован любой другой фармацевтически приемлемый носитель. Для интраназального введения носитель обычно включает физиологический раствор или стерильную воду, хотя могут быть включены другие ингредиенты. Одним из наиболее распространенных и часто используемых носителей является физиологический раствор.
Гелевый носитель может обладать некоторым дополнительным преимуществом перед прочими вариантами, поскольку нанесение аМПТ в геле на слизистую оболочку носовой полости способно предотвратить стекание части введенного средства, обеспечивая тем самым повышенную точность дозирования и избирательность доставки аМПТ в головной мозг.
На предварительном этапе работы была получена нейротоксическая модель досимптомного паркинсонизма у мышей, воспроизводящая доклиническую- продромальную стадию болезни Паркинсона. Адекватность использованной животной модели патогенезу этого заболевания у людей была ранее проверена по ряду ключевых параметров: наличию/отсутствию моторных нарушений, степени нейродегенерации в нигростриатной системе, уровню снижения дофамина в стриатуме, изменению экспрессии ключевых генов метаболизма дофамина, соответствию периферических изменений и т.д. (Ugrumov, M.V. Modeling of presymptomatic and symptomatic stages of parkinsonism in mice / M.V. Ugrumov [et al.] // Neuroscience. - 2011. - Vol. 181. - P. 175- 188; Kozina, E.A. Tyrosine hydroxylase expression and activity in nigrostriatal dopaminergic neurons of MPTP-treated mice at the presymptomatic and symptomatic stages of parkinsonism / E.A. Kozina [et al.] // J Neurol Sci. - 2014. - Vol. 340. - P. 198-207; Mingazov, E.R. MPTP mouse model of preclinical and clinical Parkinson's disease as an instrument for translational medicine / E.R. Mingazov [et al.] // Mol Neurobiol. - 2018. - Vol. 55. - P. 2991-3006; Kim, A.R. Upgraded methodology for the development of early diagnosis of Parkinson's disease based on searching blood markers in patients and experimental models / A.R. Kim [et al.] // Mol Neurobiol. - 2018. - doi: 10.1007/sl2035- 018-1315-2).
Описанный альфа-метил-п-тирозин в форме, пригодной для шгграназального введения, используют в заявленном способе ранней диагностики болезни Паркинсона в качестве провокационного средства, действие которого направлено на кратковременное снижение уровня дофамина в стриатуме на досимптомной стадии, т.е. при отсутствии нарушений двигательной функции, до порога, при котором эти нарушения кратковременно проявляются.
Для этого пациента предварительно обследуют на предмет отсутствия моторных нарушений и наличия немоторных предвестников болезни Паркинсона. При этом учитывают следующие такие признаки-предвестники, как замедленная походка, сгорбленность, тихая речь, бедная мимика, ухудшение почерка, депрессия, чувство тревоги, утомляемость, запоры, нарушения сна, обоняния и терморегуляции, ортостатическая гипотония, ослабление потенции и, наконец, болевая симптоматика, которая обычно ошибочно принимается за дисфункционально-болевой мышечно- лицевой синдром, радикулопатии или периферические нейропатии и т.п.
Затем пациенту вводят от 1 до 4 граммов препарата альфа-метил-п-тирозина. Максимально эффективную адресную доставку в головной мозг обеспечивают путем интраназального введения этого препарата на слизистую оболочку носовой полости в проекции решетчатой кости, откуда возможна его диффузия вдоль черепно-мозговых нервов в головной мозг.
После введения альфа-метил-п-тирозина осуществляют мониторинг изменения состояния пациента, которое может иметь место в результате снижения содержания дофамина в стриатуме. Оценка состояния пациента производится квалифицированным врачом-неврологом, а весь мониторинг может осуществляться в течение 3-12 часов.
При обнаружении симптомов моторных нарушений у испытуемого ставят диагноз ранней стадии болезни Паркинсона.
Итак, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей альфа-метил-п-тирозин или его фармацевтически приемлемое производное и фармацевтически приемлемый носитель, предназначенной для интраназального введения в качестве провокационного средства для проведения ранней диагностики болезни Паркинсона.
Используемый в настоящем документе термин «фармацевтически приемлемое производное» относится к фармацевтическим солям, эфирам и другим производным, которые с медицинской точки зрения подходят для применения в контакте с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения и аллергической реакции и с соблюдением разумного соотношения пользы и риска. Фармацевтически приемлемые производные хорошо известны в уровне техники.
Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемое производное альфа-метил-п-тирозина представляет собой соль и/или эфир.
Согласно одному из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемое производное альфа-метил-п-тирозина представляет собой гидрохлорид метилового эфира альфа-метил-п-тирозина.
Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемый носитель представляет собой гель.
Согласно одному из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемый гелевый носитель представляет собой гидрогель.
Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемый носитель представляет собой физиологический раствор или стерильную воду.
Также настоящее изобретение относится к способу ранней диагностики болезни Паркинсона, предусматривающему
а) предварительное обследование пациента на предмет отсутствия моторных нарушений и наличия немоторных предвестников болезни Паркинсона,
б) интраназальное введение пациенту указанной выше фармацевтической композиции и
в) осуществление мониторинга состояния пациента;
причем при обнаружении у пациента симптомов моторных нарушений на стадии в) ставят диагноз ранней стадии болезни Паркинсона.
Далее настоящее изобретение проиллюстрировано следующими примерами осуществления.
Краткое описание Фигур
На фиг. 1 проиллюстрированы двигательная активность и уровень дофамина в стриатуме у контрольных мышей, получавших чистый гель интраназально (NaCl-гель), контрольных мышей, получавших 1 мг гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п- тирозина, иммобилизованного в 16 мкл гидрогеля (NaCl-аМПТ), мышей с моделью досимптомной стадии паркинсонизма, получавших чистый гель (МФТП-гель) и мышей с моделью досимптомной стадии паркинсонизма, получавших 1 мг гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина, иммобилизованного в 16 мкл гидрогеля (МФТП-аМПТ). Данные представлены в процентах от значений группы NaCl-гель. * р< 0,05 по сравнению с NaCl-гель или между выбранными группами. Пунктиром обозначен пороговый уровень дофамина, при котором проявляются моторные нарушения.
На фиг. 2 показана концентрация гидрохлорида метилового эфира альфа-метил- п-тирозина (аМПТ) в плазме крови мышей через 5, 10, 15 и 30 минут, а также 1, 3, 5 и 7 часов после внутривенного введения 1 мг гидрохлорида метилового эфира альфа- метил-п-тирозина и интраназального введения 1 мг гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина, иммобилизованного в 16 мкл гидрогеля.
На фиг. 3 показан уровень дофамина в стриатуме у мышей, получавших интраназально 0,8 мг альфа-метил-п-тирозина (аМПТ) в виде раствора гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина или 1 мг в виде гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина, иммобилизованного в 16 мкл гидрогеля. Данные представлены в процентах от контроля. * р< 0,05 по сравнению с контролем.
Примеры осуществления настоящего изобретения
Пример 1. Приготовление фармацевтической композиции согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения.
Гидрогелевый полимерный носитель представляет собой способный к обратимой сорбции различных, в том числе и биологически активных соединений, набухший в воде для инъекций слабо-сшитый полимер акриламида. Иммобилизация субстанции носителем осуществляется физически, то есть без образования химических связей.
Процесс получения провокационной фармацевтической композиции предусматривал следующие стадии:
1) осуществление полимеризации;
2) промывание геля и
3) получение гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина в гидрогелевой полимерной системе.
На первой стадии осуществляли синтез полимерного геля путем радикальной полимеризации гидрофильного мономера акриламида, при этом в качестве сшивающего агента использовали N,N-метилен-бис-акриламид в соответствии с представленной ниже схемой.
Схема синтеза полимерного геля
CHrCH-CONHi + CH2=CH-C0NH2 + (CH^H-CONHbCib - *
Figure imgf000010_0001
В качестве инициатора использовали окислительно-восстановительную систему персульфат аммония - N,N,N’ ,N’ -тетраметилэтилендиамин . Реакцию полимеризации проводили при температуре 25-30°С и атмосферном давлении.
Для промывания полученный полимер помещали в диализные мешки и очищали до полного удаления непрореагировавших мономеров диализом до тех пор, пока значение оптической плотности промывных вод, измеренное при 200 нм, не станет ниже 0,002. Осуществляли дополнительный контроль полноты отмывки гелей методом ИК-Фурье спектроскопии. Гравиметрически определяли содержание полимера. Гравиметрический метод анализа основан на точном измерении массы вещества, выделенного в виде соединения известного состава. Пробу гидрогеля (1 ± 0,001) г взвешивали на аналитических весах, высушивали до постоянной массы в сушильном шкафу и определяли содержание полимера в навеске по формуле:
(тг / пц) х 100%,
где пц - масса исходной навески; гщ - масса высушенной навески.
Гидрохлорид метилового эфира альфа-метил-п-тирозина в гидрогелевой полимерной системе получали смешиванием отмытого полимерного геля с заданной массой гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина, после чего смесь обрабатывали ультразвуком в ультразвуковой ванне в течение 10 минут. Полученное средство разливали в стеклянные флаконы, которые закупоривали металлическими крышками.
Пример 2. Альфа-метил-п-тирозин провоцирует моторные нарушения на модели досимптомного паркинсонизма, но не у контрольных мышей.
Было получено экспериментальное подтверждение, что альфа-метил-п-тирозин в виде раствора гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина, иммобилизованного в гидрогелевом полимерном носителе, будет провоцировать моторные нарушения на модели досимптомного паркинсонизма, но не у контрольных мышей. В работе использовали самцов мышей линии C57BL/6 в возрасте 2-2,5 месяцев и массой 22-26 г, которых содержали в стандартных условиях вивария (22±1°С, свет с 8.00 часов до 20.00 часов) со свободным доступом к пище и воде. Модель досимптомного паркинсонизма воспроизводили однократным подкожным введением 1 - метил-4-фенил- 1,2, 3,6-тетрагидропиридина (МФТП) (Sigma, США) в разовой дозе 18 мг/кг. Животные контрольных групп получали 0,9% NaCl.
Через 1 неделю после введения МФТП, животных с моделью досимптомного паркинсонизма делили на 2 группы, одна из которых получала интраназально 1 мг гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина, иммобилизованного в 16 мкл гидрогеля, а вторая - аналогичный объем чистого гидрогеля. Животным контрольных (NaCl) групп также осуществляли аналогичное интраназальное введение гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина и чистого гидрогеля, соответственно. Через 5 часов после интраназального введения оценивали двигательную активность мышей по общему пройденному пути в тесте «Открытое поле». Далее животных декапитировали, выделяли стриатум и оценивали в нем содержание дофамина с помощью высокоэффективной хроматографии (ВЭЖХ) с электрохимической детекцией. Результаты поведенческого теста и биохимического анализа представлены на фиг. 1.
Таким образом, было показано, что интраназальное введение 1 мг альфа-метил- п-тирозина в виде гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина, иммобилизованного в гидрогелевом полимерном носителе, вызывает моторные нарушения у мышей с моделью досимптомной стадии паркинсонизма, но не у контрольных мышей. При этом, наблюдаемые моторные нарушения связаны со снижением концентрации дофамина в стриатуме мышей с паркинсонизмом ниже порога в 30% от контрольного уровня.
Пример 3. Сравнение интраназального и внутривенного способов введения провокационного агента.
Интактные мыши получали инъекцию 1 мг альфа-метил-п-тирозина в растворимой форме гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина в хвостовую вену, либо 1 мг гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина, иммобилизованного в 16 мкл гидрогеля, интраназально. Препарат для интраназального введения приготавливали согласно способу, описанному в примере 1. Через 5, 10, 15 и 30 минут, а также 1, 3, 5 и 7 часов после внутривенного или интраназального введения препарата животных декапитировали, собирали плазму крови и оценивали в ней концентрацию гидрохлорида метилового эфира альфа-метил- п-тирозина с помощью ВЭЖХ с детекцией нативной флуоресценции. Результаты анализа представлены на фиг. 2.
Таким образом, в этом эксперименте было показано, что при интраназальном введении провокационного агента, в отличие от внутривенного, концентрация гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина в плазме крови находится на неопределяемом уровне, т.е. практически отсутствует его поступление в общую систему циркуляции. Соответственно, заявленный интраназальный способ введения является более безопасным по сравнению с системным введением, с точки зрения развития нежелательных побочных эффектов, связанных с ингибированием синтеза дофамина на периферии.
Пример 4. Сравнение различных способов интраназального введения альфа-метил-п-тирозина.
Интактные мыши получали интраназально 0,8 мг альфа-метил-п-тирозина в виде раствора гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина или 1 мг в виде гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина, иммобилизованного в 16 мкл гидрогеля. Гидрогель для интраназального введения приготавливался согласно способу, описанному в примере 1.
Через 5 после интраназального введения препарата животных декапитировали, выделяли стриатум и оценивали в нем концентрацию дофамина с помощью ВЭЖХ с электрохимической детекцией. Результаты анализа представлены на фиг. 3.
Итак, было показано, что альфа-метил-п-тирозин при интраназальном введении снижает уровень дофамина в стриатуме как при введении в виде раствора гидрохлорида метилового эфира альфа-метил-п-тирозина, так и при использовании гидрогеля-носителя.
Таким образом, предложенные композиция и способ обеспечивают эффективное и безопасное проведение провокационного теста для ранней диагностики болезни Паркинсона в самых широких слоях населения, позволяют минимизировать поступление провокационного средства в общую систему циркуляции и воздействие на периферическую нервную систему и внутренние органы, что сводит к минимуму риски побочных эффектов. Кроме того, важными преимуществами предложенного средства и способа являются их высокая специфичность и низкая себестоимость.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Фармацевтическая композиция, содержащая альфа-метил-п-тирозин или его фармацевтически приемлемое производное и фармацевтически приемлемый носитель, предназначенная для интраназального введения в качестве провокационного средства для проведения ранней диагностики болезни Паркинсона.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой фармацевтически приемлемое производное альфа-метил-п-тирозина представляет собой соль и/или эфир.
3. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 2, в которой фармацевтически приемлемое производное альфа-метил-п-тирозина представляет собой гидрохлорид метилового эфира альфа-метил-п-тирозина.
4. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой фармацевтически приемлемый носитель представляет собой гель.
5. Фармацевтическая композиция по п. 4, в которой гель представляет собой гидрогель.
6. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой фармацевтически приемлемый носитель представляет собой физиологический раствор.
7. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой фармацевтически приемлемый носитель представляет собой стерильную воду.
8. Способ ранней диагностики болезни Паркинсона, предусматривающий а) предварительное обследование пациента на предмет отсутствия моторных нарушений и наличия немоторных предвестников болезни Паркинсона,
б) интраназальное введение пациенту фармацевтической композиции по любому из пп. 1-7 и
в) осуществление мониторинга состояния пациента;
причем при обнаружении у пациента симптомов моторных нарушений на стадии в) ставят диагноз ранней стадии болезни Паркинсона.
PCT/RU2019/000588 2019-02-01 2019-08-19 Фармацевтическая композиция на основе альфа-метил-п-тирозина и способ ранней диагностики болезни паркинсона WO2020159400A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019102882 2019-02-01
RU2019102882A RU2719575C1 (ru) 2019-02-01 2019-02-01 Фармацевтическая композиция на основе альфа-метил-п-тирозина и способ ранней диагностики болезни Паркинсона

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020159400A1 true WO2020159400A1 (ru) 2020-08-06

Family

ID=69374348

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2019/000588 WO2020159400A1 (ru) 2019-02-01 2019-08-19 Фармацевтическая композиция на основе альфа-метил-п-тирозина и способ ранней диагностики болезни паркинсона

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2719575C1 (ru)
WO (1) WO2020159400A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023128791A1 (ru) * 2021-12-30 2023-07-06 Общество С Ограниченной Ответственностью "Центр Ранней Диагностики Нейродегенеративных Заболеваний" Комбинированное лекарственное средство для ранней диагностики болезни паркинсона

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2318437C1 (ru) * 2006-07-28 2008-03-10 Михаил Вениаминович Угрюмов Способ доклинической диагностики болезни паркинсона у практически здоровых лиц
WO2019018633A1 (en) * 2017-07-19 2019-01-24 Hoffman Technologies, Inc. COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF STRESS-RELATED DISORDERS

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4117161A (en) * 1977-05-16 1978-09-26 Jose Pozuelo Method of pharmacologically treating drug addiction with alpha-methyl-para-tyrosine
US9585841B2 (en) * 2013-10-22 2017-03-07 Tyme, Inc. Tyrosine derivatives and compositions comprising them

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2318437C1 (ru) * 2006-07-28 2008-03-10 Михаил Вениаминович Угрюмов Способ доклинической диагностики болезни паркинсона у практически здоровых лиц
WO2019018633A1 (en) * 2017-07-19 2019-01-24 Hoffman Technologies, Inc. COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF STRESS-RELATED DISORDERS

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ADERIBIGBE BA ED - ADERIBIGBE BA: "In Situ-Based Gels for Nose to Brain Delivery for the Treatment of Neurological Diseases", PHARMACEUTICS,, vol. 10, no. 2, 30 March 2018 (2018-03-30), XP002793857, DOI: 10.3390/PHARMACEUTICS10020040 *
KHAKIMOVA GULNARA R ET AL: "Reversible Pharmacological Induction of Motor Symptoms in MPTP-Treated Mice at the Presymptomatic Stage of Parkinsonism: Potential Use for Early Diagnosis of Parkinson's Disease", MOLECULAR NEUROBIOLOGY, HUMANA PRESS, US, vol. 54, no. 5, 19 May 2016 (2016-05-19), pages 3618 - 3632, XP036244678, ISSN: 0893-7648, [retrieved on 20160519], DOI: 10.1007/S12035-016-9936-9 *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2719575C1 (ru) 2020-04-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Golden et al. Bupropion in depression: I. Biochemical effects and clinical response
US9956206B2 (en) Compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis in responders
Takiyyuddin et al. Sympatho‐adrenal secretion in humans: factors governing catecholamine and storage vesicle peptide co‐release
Vermersch et al. Sequences of memory‐guided saccades in Parkinson's disease
JP2018516906A (ja) レベチラセタムの持続放出性医薬組成物
Reidy et al. Postexercise essential amino acid supplementation amplifies skeletal muscle satellite cell proliferation in older men 24 hours postexercise
RU2719575C1 (ru) Фармацевтическая композиция на основе альфа-метил-п-тирозина и способ ранней диагностики болезни Паркинсона
RU2376044C1 (ru) Способ определения оптимальных режимов флуоресцентной диагностики и фотодинамической терапии
Bradley et al. Failure to confirm a vascular cause of muscular dystrophy
Trachant et al. Is clonidine growth hormone stimulation a good test to differentiate multiple system atrophy from idiopathic Parkinson's disease?
RU2318437C1 (ru) Способ доклинической диагностики болезни паркинсона у практически здоровых лиц
CN109562280B (zh) 复发-缓解型多发性硬化的诊断或预测因子
Di Martino et al. Aerobic rehabilitation program for improving muscle function in Parkinson’s disease
Kuchel et al. Effect of metoclopramide on plasma catecholamine release in essential hypertension
Roloff et al. Long-term study of chronic oral aluminum exposure and spatial working memory in rats.
JP2011520881A (ja) 認知機能を改善するための方法および組成物
Richter et al. The rate of removal of amines from the blood
US20160067246A1 (en) Use of phosphodiesterase 5a inhibitors for the treatment of muscular dystrophy
WO2013125722A1 (ja) 低血糖脳症モデル及びその製造方法、並びに、神経保護剤のスクリーニング方法、及び神経保護剤
JP2021521966A (ja) 高度時間分解心筋血中酸素レベル依存性磁気共鳴画像化の方法
Wang et al. The effects of centrally administered fluorocitrate via inhibiting glial cells on working memory in rats
Alvarez et al. Prolonged high frequency electrical stimulation is lethal to motor axons of mice heterozygously deficient for the myelin protein P0 gene
JPH02177950A (ja) 老化度測定方法
RU2320260C2 (ru) Способ диагностики феохромоцитомы
Kim et al. Development of early diagnosis of Parkinson’s disease on animal models based on the intranasal administration of α-methyl-p-tyrosine methyl ester in a gel system

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19845626

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 19845626

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1