CN105505984A - 水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体及其应用 - Google Patents

水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105505984A
CN105505984A CN201610028697.2A CN201610028697A CN105505984A CN 105505984 A CN105505984 A CN 105505984A CN 201610028697 A CN201610028697 A CN 201610028697A CN 105505984 A CN105505984 A CN 105505984A
Authority
CN
China
Prior art keywords
osrboh
os01g25820
loc
rice
plant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610028697.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105505984B (zh
Inventor
胡丽芳
贺浩华
刘世强
朱昌兰
欧阳林娟
彭小松
陈小荣
贺晓鹏
傅军如
边建民
徐杰
孙晓棠
周大虎
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangxi Agricultural University
Original Assignee
Jiangxi Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangxi Agricultural University filed Critical Jiangxi Agricultural University
Priority to CN201610028697.2A priority Critical patent/CN105505984B/zh
Publication of CN105505984A publication Critical patent/CN105505984A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105505984B publication Critical patent/CN105505984B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8287—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for fertility modification, e.g. apomixis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Landscapes

  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一个水稻呼吸爆发氧化酶OsRboh(LOC_Os01g25820)及其在叶色改变及育性降低中的应用，属于生物技术领域。该载体为含有双35S启动子和水稻OsRboh(LOC_Os01g25820)基因植物表达载体。在水稻中过量表达OsRboh(LOC_Os01g25820)，获得的转基因植株的叶色变黄、过氧化氢含量升高、育性明显降低。以上结果表明OsRboh(LOC_Os01g25820)在水稻的发育过程中发挥重要作用，为研究植物的发育提供了新的基因资源，还可以作为一种潜在的工具来改良植物的形态，应用在分子育种和遗传改良上。

Description

水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体及其应用
技术领域
本发明涉及一种水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体及应用，属于基因工程技术领域。
背景技术
活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)是生物体一类有氧代谢的副产物，除作为有毒分子伤害细胞外，还作为一类重要的信号分子参与生物体的生长和发育。
研究发现，ROS的来源包括质膜NADPH氧化酶、过氧化物酶及胺氧化酶，其中由NADPH氧化酶介导产生的ROS最受关注。NADPH氧化酶以定位于细胞质边缘的NADPH为电子供体，催化O2生成超氧阴离子(O2 －·)，随后超氧阴离子歧化生成H2O2，H2O2再经芬顿反应生成·OH。植物NADPH氧化酶又称呼吸爆发氧化酶（Respiratoryburstoxidasehomologue，Rboh），所有植物Rboh蛋白都包含约300个氨基酸大小的N端区，该区存在一对保守的Ca2+结合EF手性结构域。植物中的呼吸爆发氧化酶（Respiratoryburstoxidasehomologue，Rboh）主要由呼吸爆发氧化酶基因(RespiratoryBurstOxidaseHomologue,Rboh)所控制。
植物Rboh基因的功能主要集中于两个方面：参与胁迫反应和调控生长发育。当病原菌侵染拟南芥细胞时，AtRbohD和AtRbohF基因表达产生大量的ROS来增强组织的抗病性。拟南芥atRbohD/atRbohF双突变体中，Ca2+通道的ABA活化与气孔关闭不能正常进行，通过外源施加H2O2可以部分修复这些缺失的功能。拟南芥AtRbohC基因的突变导致根和根毛生长受抑制，其突变体rdh2内ROS的水平较野生型有大幅度的降低，用NADPH氧化酶的抑制剂二亚苯基碘（DPI）处理可抑制其活性，产生与突变体相同的情况，而ROS处理突变体根部则可部分恢复表型。番茄反义Rboh植侧枝增加，花序和花数量为野生型的2-3倍，大多数花表现不育。菜豆PvRbohB干扰植株中侧根的密度降低，根瘤的形成受影响，从而影响植株的固氮能力。
水稻(OryzasativaL.)是最主要的粮食作物之一，也是一种重要的模式生物，对相关基因进行功能研究具有重要作用。随着水稻功能基因组研究的不断深入，许多重要农艺性状相关基因相继被分离。RespiratoryBurstOxidaseHomolog(Rboh)基因直接参与ROS的形成，但在水稻中的功能并不清楚，值得进一步的研究。我们的研究发现OsRboh(LOC_Os01g25820)的过量表达的水稻植株中叶片变黄，育性降低，利用这一特性可以应用在水稻分子育种和遗传改良上。
发明内容
本发明的目的在于提供一种水稻OsRboh(LOC_Os01g25820)基因载体及在叶色和育性改变中的应用，该载体含有水稻OsRboh(LOC_Os01g25820)基因的上游连有双35S启动子。
本发明的上述植物表达载体为PHB-OsRboh(LOC_Os01g25820)，由下述方法构建而成：
（1）根据NCBI上公布的OsRboh(LOC_Os01g25820)全长cDNA(AK065117)序列，设计两端引物：
OsRboh-OE-F:AGATCTATGGCTGACCTGGAAGCAGGCATGG(BamHI)
OsRboh-OE-R:CACGTGTTAGAAGTTCTCCTTGTGGAAATCA(XbaI)
以日本水稻基因组研究中心(RGRC)购得的质粒AK065117为模板进行PCR扩增，获得OsRboh(LOC_Os01g25820)全长。
（2）回收OsRboh(LOC_Os01g25820)的cDNA全长，将其连接到pMD18载体上，采用碱裂解法提取质粒DNA，通过PCR检测和酶切检测获得重组质粒pMD18-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE。
（3）使用BamHI和XbaI酶切pMD18-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE，回收OsRboh(LOC_Os01g25820)片段，同时用BamHI和XbaI酶切PHB，回收后连接，转化感受态细胞，获得植物表达载体PHB-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE。
本发明的另一目的是公开水稻OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE在叶色和育性改造中的基因工程应用。在水稻中过量表达OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE的转基因植株的叶色变黄、过氧化氢含量升高、育性明显降低。该载体可作为一种潜在的工具应用在水稻分子育种和遗传改良上。
附图说明
（1）图1为pMD18T-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE的BamHI和XbaI酶切图。
（2）图2为PHB-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE的BamHI和XbaI酶切图。
（3）图3为转基因水稻植株的PCR鉴定图。
（4）图4为转基因水稻植株呈现黄化苗表型；其中A为野生型，B为转基因水稻。
（5）图5为转基因水稻植株呈现育性降低表型；其中A为野生型，B为转基因水稻。
（6）图6为转基因水稻植株叶片中过氧化氢的染色，其中A为野生型，B为转基因水稻。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，这些实施例仅用于举例说明本发明，而不对本发明的范围构成任何限制。
实施例中所涉及的试剂主要分为分子生物学实验试剂、各种限制性内切酶、TaqDNA聚合酶、反转录酶、RNA酶抑制剂、dNTP等为日本宝生物工程有限公司(大连)产品，质粒提取试剂盒购自生工生物工程（上海）股份有限公司，其余试剂均为国产分析纯；仪器均为分子生物学以及基因工程实验室常用仪器。所有引物序列均在生工生物工程（上海）股份有限公司合成。本发明实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
实施例1：水稻PHB-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE载体的构建
（1）OsRboh(LOC_Os01g25820)基因的扩增
根据NCBI上公布的OsRboh(LOC_Os01g25820)全长cDNA(AK065117)序列，设计两端引物：
OsRboh-OE-F:AGATCTATGGCTGACCTGGAAGCAGGCATGG(BamHI)
OsRboh-OE-R:CACGTGTTAGAAGTTCTCCTTGTGGAAATCA(XbaI)
以日本水稻基因组研究中心(RGRC)购得的质粒AK065117为模板，高保真酶KOD-Plus进行PCR扩增获得OsRboh(LOC_Os01g25820)全长。PCR反应条件为：94℃5min；94℃30s；56℃30s；68℃3.0min，35个循环；68℃5min。PCR产物用1.2%琼脂糖进行电泳检测，扩增片段大小约2718bp，与预期大小一致（图1）。
（2）OsRboh(LOC_Os01g25820)片段的胶回收
对PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳后，切下目的片段，使用胶回收试剂盒，按照试剂盒说明书对目的片段进行回收。
（3）OsRboh(LOC_Os01g25820)片段加尾
取1.5ml灭菌的eppendorf管，依次加入回收的PCR产物14μl、10×TaqDNA聚合酶缓冲液2μl、10mMdNTP2μl、TaqDNA聚合酶2μl；72℃处理45min；先加0.18mL无菌水，再加20μl3M醋酸钠，混匀，最后加入2倍体积的无水乙醇，-20℃沉淀60min，12,000rpm，4℃离心10min。弃上清，75%乙醇洗涤沉淀2次。DNA晾干后加入20μL无菌水溶解沉淀，溶解的DNA置于-20℃保存备用。
（4）OsRboh(LOC_Os01g25820)片段的T/A克隆和测序
将回收片段连接到pMD18载体上，其具体步骤为：向1.5ml离心管中分别加入：OsRboh(LOC_Os01g25820)片段的cDNA5μl、pMD18载体0.5μl、10×T4DNA连接酶缓冲液1μl,T4DNA连接酶1μl，加无菌水至10μl，用封口膜封好；置于16℃连接4-6h。将100μl感受态肠杆菌E.coliDH5α加入连接体系中混匀；混合液冰浴30min，42℃热刺激90s后，冰浴5min；加入800μlLB液体培养基，37℃、200rpm摇床培养45min使菌体复苏；培养结束后，常温3,000rpm离心2min收集菌体；在超净台上吸去上清，剩余约0.1ml时，使用移液枪混匀，接入带有Amp抗性的LB固体平板上，用无菌三角棒涂布均匀；37℃过夜培养；挑取菌落接种到带有Amp抗性的LB液体培养基中培养12h，收集菌体，采用质粒抽提试剂盒提取质粒。通过酶切检测获得的重组质粒pMD18-OsRboh(LOC_Os01g25820)，具体方法为：向0.5ml的离心管中分别加入：质粒DNA（50ng/μl）2μl、BamHI0.5μl、XbaI0.5μl、10×buffer（K）2μl，使用无菌水补足20μl；37℃反应4h；然后将酶切正确的重组质粒pMD18-CsMADS1进行测序验证插入基因的正确性。
（5）表达载体PHB-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE的构建
使用BamHI和XbaI对质粒pMD18-OsRboh(LOC_Os01g25820)和PHB载体进行双酶切，分别获得5’端带有BamHI和3’端带有XbaI的OsRboh(LOC_Os01g25820)片段和PHB载体，电泳后分别进行胶回收，16℃连接4-6h；将100μl感受态肠杆菌E.coliDH5α加入6μl连接体系中混匀；混合液冰浴30min，42℃热刺激90s后，冰浴5min；加入800μlLB液体培养基，37℃、200rpm摇床培养45min使菌体复苏；培养结束后，常温3,000rpm离心1min收集菌体；在超净台上吸去上清，剩余约0.1ml时，使用移液枪混匀，接入带有Kan抗性的LB固体平板上，用无菌三角棒涂布均匀；37℃过夜培养；挑取菌落接种于LB液体+Kan的培养基，37℃、180rpm培养12h后，提取质粒。通过酶切检测获得的重组质粒PHB-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE，具体方法为：向0.5ml的离心管中分别加入：质粒DNA（50ng/μl）2μl、BamHI0.5μl、XbaI0.5μl、10×buffer（K）2μl，使用无菌水补足20μl；37℃反应4h；经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测发现，重组质粒PHB-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE可酶切出预期大小的片段（图2）。将酶切正确的重组质粒送至生工生物工程（上海）股份有限公司测序进行序列验证（其核苷酸序列如SEQIDNO1所示），最后获得表达载体PHB-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE。
实施例2：PHB-OsRboh(LOC_Os01g25820)-OE转农杆菌EHA105
(1)农杆菌感受态细胞制备
挑取农杆菌EHA105单菌落接种于5mlYEB培养基中，28℃摇培过夜，按1:100的比例接种于50mlYEB培养基中扩培，28℃继续培养约6-7h至OD600=0.4-0.6。将菌液置于冰上30min；5000rpm，4℃离心5min，弃上清，将菌体悬于10ml0.15MNaCl中；5000rpm，4℃离心5min，弃上清，菌体用1ml20mMCaCl2，4℃）轻轻悬浮，每管200μl分装，或加入终浓度为20％的无菌甘油，-70℃保存。
(2)农杆菌的转化及鉴定
将10μl质粒DNA加入200μl农杆菌感受态中，混匀，冰浴30min，液氮冷冻3-5min，37℃水浴5min，加入1mlYEB培养基，28℃摇培3-4h。10000rpm，室温离心30s，弃上清，加入200μlYEB培养基重悬菌体，涂于YEB培养基上，28℃培养2天；碱裂解法提取农杆菌质粒DNA，质粒再重新转化大肠杆菌（DH5α），过夜培养后，挑取单菌落液体培养，提取质粒DN并进行PCR鉴定。
实施例3：含PHB-OsRboh(LOC_Os01g25820)的农杆菌EHA105转化水稻
(1)材料的预处理
首先将干种子去壳,去壳种子在70%乙醇中浸泡1分钟,然后在50%漂白剂
(含2%HClO)中灭菌20分钟,再用无菌水洗4次,将整个种子转移至MD2培养基
平板上，26℃暗培养4天。当黄色愈伤组织在胚轴出现时（通常需要四天，在这
期间，根通常有2-5cm长），切除根部和胚乳，将胚轴转移至一个新鲜的NBD2
培养基平板，钝形面向上,26℃暗培养7-10天。
(2)挑取EHA105农杆菌单菌落，在100ml含相应抗性的YEB培养基中震荡培
养约16小时（200rpm，28℃），至OD600为0.6-0.8左右。
(3)3000rmp离心10分钟，在AAM-AS液体培养基液体培养基中重悬沉淀至浓
度OD600为0.6-0.8。
(4)将300个带有黄色愈伤的胚浸泡在细菌悬液中20分钟，间或震荡。
(5)从悬液中收集胚，在两张无菌滤纸间吸干。
(6)在NBD2-AS培养基平板表面放上无菌滤纸，把胚放在滤纸表面，26℃暗培
养2天。
(7)把胚的根部去掉，把胚放入新NBD2培养基平板上（含潮霉素和头孢霉素），
切割面向下，26℃暗培养12天。
(8)再转入新鲜的NBD2培养基平板上（含潮霉素和头孢霉素），26℃暗培养12-15
天，在这个时间可以看见新的愈伤长出。
(9)把抗性愈伤（将抗性愈伤从胚上切下）放在Pre-MS预分化培养基平板上，
26℃暗培养8天。
(10)把愈伤放在生芽培养基MS-H分化培养基平板上，26℃（12小时光照，12
小时黑暗）培养，当绿芽出现（大约15天），立即将它们转入新鲜的MS-H培
养平板上不要加潮霉素（如果只看见绿点，立即将它们转入新鲜的MS-H培养基
平板上加入终浓度为25mg/L的潮霉素，防止愈伤形成），新的无根苗在10天内
形成。
(11)将无根苗移入MSNH再生培养基上，诱导根的形成。
(12)当根形成后，将培养瓶打开7天后，把苗移入温室。
实施例4：转基因植株的鉴定和分析
(1)水稻DNA的提取
将适量的经筛选的水稻叶片放入1.5ml的离心管中，加入400μl的CTAB抽提缓冲液，用蓝色小棒研磨成浆状，加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），猛烈摇匀，12000rpm，离心10min。取上清至新的离心管中，加入2倍体积的无水乙醇和0.1倍体积的3M醋酸钠(PH5.2)，剧烈混匀使DNA成团，放入-20℃沉淀2hr以上。随后12000rpm，离心10min。弃上清，沉淀用70%乙醇洗涤一次后室温晾干，加适量的TE或超纯水溶解。
（2）转基因水稻植株的鉴定
以抽提的DNA为模板、使用引物OsRboh-F：AACTTCAGCATGCGAAGAAGG和载体上的引物rbcs-R：ATTAACTTCGGTCATTAGAGGC进行PCR扩增OsRboh片段，PCR的25μl体系为：PCR缓冲液（10*）2.5μl、Taq0.5μl、cDNA模板2μl、10mMdNTP0.5μl、10μMOsRboh-F引物1μl、10μMOsRboh-R引物1μl、使用无菌水补足25μl。反应条件为：94℃5min，35个循环，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸60s，72℃反应10min。可以发现大部分转化苗都为阳性植株，能扩增出目的条带，见图3。
(3)转基因水稻植株表型分析
通过尼康D7100数码相机进行拍照，进行表型观察，可以发现在苗期会出现白化苗，见图4，成熟期育性降低，见图5。
转基因水稻植株的DAB染色
过氧化氢的染色采用DAB染色试剂盒（北京赛驰生物科技有限公司）。按照DAB试剂盒说明书的方法，用去离子水将B显色液（B显色液与去离子水按照1:25体积比配制）稀释为B工作液，然后将B工作液与A显色液以25:1的体积比配制成DAB染色液，配好后立即使用。将野生型和转基因植株的叶片置于配好的15mlDAB染色溶液中，放置在光照培养箱中反应8h（27℃,35%湿度，3000LX光照强度），将叶片取出并在盛有20ml75%乙醇的试管中煮沸脱色，通过尼康D7100数码相机进行拍照。可以发现，转基因植株中的过氧化氢含量明显要高于野生型中。
SEQIDNO：1
〈210〉：1
〈211〉:2718
〈212〉：DNA
〈213〉：水稻（OryzasativaL.）
〈400〉:1
ATGGCTGACCTGGAAGCAGGCATGGTTGCTGCTGCCACAGACCAGGGCAATTCAACAAGG60
TCACAAGATGACGCAGCCACACTGATCCCGAACAGTGGCAATCTGGGCTCGAGCAACAGG120
AGCACCAAGACGGCCAGGTTCAAGGACGACGACGAGCTGGTCGAGATCACCCTCGACGTG180
CAGCGCGATTCGGTGGCAATCCAAGAAGTGAGAGGGGTGGATGAGGGTGGCTCCGGGCAC240
GGTACCGGGTTCGACGGCCTGCCACTGGTGTCACCCTCGTCGAAGAGCGGAAAGCTGACG300
TCAAAGCTCAGGCAGGTGACCAATGGGCTCAAGATGAAGAGCTCCAGCAGGAAGGCGCCA360
TCCCCGCAGGCGCAGCAGTCTGCGAAGAGGGTGAGGAAGAGGCTGGACAGGACCAAGAGC420
AGCGCCGCCGTGGCGCTCAAAGGATTGCAGTTTGTGACTGCAAAGGTTGGCAATGACGGC480
TGGGCCGCGGTGGAGAAGCGGTTCAATCAGCTGCAGGTGGATGGTGTGCTGCTCCGTTCA540
AGATTTGGGAAATGCATTGGAATGGATGGGTCCGACGAGTTTGCGGTGCAAATGTTCGAT600
TCTCTGGCGAGGAAGAGAGGGATAGTGAAGCAGGTGCTCACTAAGGACGAGCTCAAAGAT660
TTCTATGAGCAATTGACTGATCAGGGGTTTGACAATCGTCTTCGGACATTCTTTGACATG720
GTTGACAAGAACGCTGATGGAAGGCTCACAGCAGAAGAGGTTAAGGAGATTATTGCCCTT780
AGTGCATCAGCAAACAAACTTTCCAAGATCAAGGAGCGAGCTGATGAGTACACAGCACTC840
ATTATGGAAGAGCTTGACCCTACAAACTTGGGATACATCGAGATGGAGGACTTGGAAGCA900
CTATTGCTTCAGTCACCATCTGAAGCTGCTGCAAGATCAACAACGACGCACAGCTCCAAA960
CTTAGCAAAGCTCTTAGCATGAAGCTTGCGTCTAACAAAGAAATGAGCCCAGTTCGTCAT1020
TACTGGCAGCAGTTCATGTACTTCCTTGAAGAGAATTGGAAGCGCAGTTGGGTTATGACT1080
CTGTGGATCTCAATCTGCATTGCCCTTTTCATTTGGAAGTTCATTCAGTACCGTAATCGA1140
GCCGTATTCGGCATCATGGGTTATTGTGTGACCACTGCAAAGGGTGCTGCAGAGACCCTC1200
AAATTCAACATGGCTTTGGTCCTACTTCCTGTCTGCAGAAATACAATCACATGGATTCGG1260
TCAAAGACACAGGTTGGAGCTGTTGTACCCTTCAACGACAATATAAACTTTCATAAGGTC1320
ATAGCCGCAGGTGTTGCAGTTGGTGTTGCTTTGCATGCAGGTGCTCATCTGACATGTGAT1380
TTTCCCCGGCTGCTCCATGCGAGTGATGCACAATATGAACTAATGAAGCCCTTCTTTGGG1440
GAGAAGAGGCCACCAAATTACTGGTGGTTTGTAAAGGGAACTGAAGGCTGGACAGGTGTG1500
GTCATGGTGGTGCTCATGGCAATAGCATTTACATTAGCCCAACCATGGTTCCGACGTAAC1560
AAGCTCAAGGACTCCAATCCCCTCAAAAAAATGACTGGCTTCAATGCCTTCTGGTTTACC1620
CACCACCTGTTTGTCATTGTGTACACTTTGCTCTTTGTCCATGGAACGTGCTTGTATCTA1680
AGCAGGAAATGGTACAAGAAGACGACATGGATGTACCTCGCTGTTCCTGTTGTCCTGTAT1740
GTAAGTGAGCGTATTCTTCGGTTGTTTAGGAGCCATGATGCAGTTGGGATTCAGAAGGTT1800
GCAGTGTATCCCGGGAATGTATTGGCTCTTTATATGTCGAAGCCACCTGGTTTCAGATAC1860
CGTAGTGGGCAGTACATCTTCATAAAATGCACTGCTGTGTCTCCATATGAATGGCATCCA1920
TTTTCCATAACATCAGCACCTGGAGATGATTATCTTAGTGTTCATATTCGCACAAGGGGT1980
GATTGGACTTCACGGCTTAGAACTGTTTTCTCTGAGGCATGCCGACCCCCCACTGAGGGA2040
GAAAGTGGACTACTTAGAGCTGACCTTTCCAAGGGAATAACGGACGAAAAAGCAAGATTC2100
CCAAAACTTTTGGTCGATGGACCGTATGGTGCACCGGCACAAGATTACCGTGAATACGAT2160
GTGCTACTTCTCATCGGGCTGGGCATCGGAGCCACCCCTTTGATTAGCATTGTGAAGGAC2220
GTGCTTAACCACATTCAAGGTGAGGGATCAGTTGGAACCACGGAGCCGGAGAGCAGCAGC2280
AAGGCGAAGAAGAAACCTTTCATGACGAAGAGAGCCTACTTCTACTGGGTGACGAGAGAG2340
GAGGGCTCGTTTGAGTGGTTCAGAGGCGTCATGAACGAGGTGTCTGAGAAGGACAAGGAT2400
GGAGTCATTGAGCTCCATAACCACTGCTCAAGCGTGTACCAGGAAGGCGATGCTCGTTCT2460
GCTCTCATTGTCATGCTCCAAGAACTTCAGCATGCGAAGAAGGGCGTCGATATCTTGTCG2520
GGAACTAGTGTGAAGACCCATTTCGCACGACCTAATTGGCGAAGCGTCTTCAAGAAGGTT2580
GCGGTCAGCCATGAGAACCAGCGCGTCGGTGTGTTCTACTGTGGTGAGCCTGTGCTGGTT2640
CCCCAACTAAGGCAGTTGTCAGCAGATTTCACCCACAAGACAAACACAAGATTTGATTTC2700
CACAAGGAGAACTTCTAA2718

Claims (2)

1.水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体，其特征在于：该载体含有水稻OsRboh(LOC_Os01g25820)基因的编码区全长、双35启动子，所述OsRboh(LOC_Os01g25820)基因的GenBank登录号为AK065117。
2.权利要求1所述水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体的应用，其特征在于：所述水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体用于改变水稻叶色及育性。
CN201610028697.2A 2016-01-18 2016-01-18 水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体及其应用 Active CN105505984B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610028697.2A CN105505984B (zh) 2016-01-18 2016-01-18 水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610028697.2A CN105505984B (zh) 2016-01-18 2016-01-18 水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105505984A true CN105505984A (zh) 2016-04-20
CN105505984B CN105505984B (zh) 2023-08-15

Family

ID=55714277

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610028697.2A Active CN105505984B (zh) 2016-01-18 2016-01-18 水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105505984B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113416747A (zh) * 2020-03-03 2021-09-21 山东舜丰生物科技有限公司 一种创建温度敏感型雄性不育植物的方法
CN116121278A (zh) * 2023-02-10 2023-05-16 西南大学 CsRBOH5的磷酸化突变及其在提高柑橘溃疡病抗性中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103710382A (zh) * 2014-01-20 2014-04-09 江西农业大学 一种改变植物花型的双35s过表达载体及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103710382A (zh) * 2014-01-20 2014-04-09 江西农业大学 一种改变植物花型的双35s过表达载体及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RODRÍGUEZ AA等: "Reactive oxygen species in the elongation zone of maize leaves are necessary for leaf extension", 《PLANT PHYSIOL.》 *
胡丽芳 等: "水稻 OsRbohB 基因原位杂交载体的构建及其在花药中的表达分析", 《广东农业科学》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113416747A (zh) * 2020-03-03 2021-09-21 山东舜丰生物科技有限公司 一种创建温度敏感型雄性不育植物的方法
CN113416747B (zh) * 2020-03-03 2023-09-12 山东舜丰生物科技有限公司 一种创建温度敏感型雄性不育植物的方法
CN116121278A (zh) * 2023-02-10 2023-05-16 西南大学 CsRBOH5的磷酸化突变及其在提高柑橘溃疡病抗性中的应用
CN116121278B (zh) * 2023-02-10 2023-10-31 西南大学 CsRBOH5的磷酸化突变及其在提高柑橘溃疡病抗性中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN105505984B (zh) 2023-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101942449B (zh) 提高植物非生物胁迫耐受性和/或生物量的方法及用该方法所产生的植物
CN103710382B (zh) 一种改变植物花型的双35s过表达载体及其应用
CN104059937B (zh) 一个来源于苜蓿的蛋白质及其编码基因的新用途
Zhai et al. Introduction of a rice blight resistance gene, Xa21, into five Chinese rice varieties through an Agrobacterium-mediated system
CN107383179A (zh) 一种与植物耐逆性相关蛋白GsSLAH3及其编码基因与应用
CN102757487B (zh) 植物矮化相关蛋白GA2ox及其编码基因和应用
WO2017076306A1 (zh) 利用黄萎病菌VdP4-ATPase基因提高植物对黄萎病抗性的方法
CN104593380A (zh) 用于提高植物耐盐性的编码玉米HKT转运蛋白的基因ZmHKT1;1a及其应用
CN103951740A (zh) 狗牙根CCAAT转录因子CdtNF-YC1及其编码基因和应用
CN105505984A (zh) 水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRboh(LOC_Os01g25820)的载体及其应用
CN106892973A (zh) 植物抗逆性相关蛋白GhMYB4及编码基因与应用
CN104046639A (zh) 小麦甲硫氨酸亚砜还原酶基因TaMsrB3.1及其应用
CN103667290B (zh) 玉米营养器官特异性启动子及其应用
CN102286494B (zh) 条斑紫菜tps基因及其在提高水稻耐盐性中的应用
CN104628840B (zh) 植物耐逆性相关蛋白VrDREB2A及其编码基因与应用
CN106520723A (zh) 蛋白VvMas、编码基因及其在提高植物耐盐性中的应用
CN103305527A (zh) 水稻基因pmrp在改良水稻农艺性状方面的应用
CN105695479A (zh) 菊花对称性基因CmCYC2c及其应用
CN102115751A (zh) 油菜BnPABP5基因及其启动子的应用
CN101824080B (zh) 青杄转录因子PwHAP5及其编码基因与应用
CN105255898A (zh) 一种沉默水稻过氧化氢酶基因OsCAT3的sgRNA
CN109628468A (zh) 一种春兰CgWRKY53基因及其应用
CN113736798B (zh) 一种来源于黑孢块菌的耐锌镉基因TmZRC1S及应用
CN102775485A (zh) 调节种子脂肪酸组成的蛋白及其编码基因与应用
CN116694675B (zh) 大豆GmGST基因在提高植物抗铝毒胁迫中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: He Haohua

Inventor after: Bian Jianmin

Inventor after: Xu Jie

Inventor after: Sun Xiaotang

Inventor after: Zhou Dahu

Inventor after: Hu Lifang

Inventor after: Liu Shiqiang

Inventor after: Zhu Changlan

Inventor after: OuYang Linjuan

Inventor after: Peng Xiaosong

Inventor after: Chen Xiaorong

Inventor after: He Xiaopeng

Inventor after: Fu Junru

Inventor before: Hu Lifang

Inventor before: Bian Jianmin

Inventor before: Xu Jie

Inventor before: Sun Xiaotang

Inventor before: Zhou Dahu

Inventor before: He Haohua

Inventor before: Liu Shiqiang

Inventor before: Zhu Changlan

Inventor before: Ouyang Linjuan

Inventor before: Peng Xiaosong

Inventor before: Chen Xiaorong

Inventor before: He Xiaopeng

Inventor before: Fu Junru

CB03 Change of inventor or designer information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant