CN105497101A - 一种从蓝莓茎叶中提取多种组合提取物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种利用蓝莓植物茎叶制备多种组合提取物的方法，以蓝莓新鲜或干燥枝叶为原料，通过粗碎预处理，采用超声波或微波辅助进行乙醇提取，水提，酶水解，及大孔树脂吸附、膜分离等组合联提工艺，分步制备蓝莓原花青素、绿原酸、多糖等活性成分组合提取物。本发明适应原料范围较宽，生产过程物料循环利用，工艺绿色环保，资源利用率高，生产成本低，产品品质好。

Description

一种从蓝莓茎叶中提取多种组合提取物的方法
技术领域
本发明涉及植物资源综合开发利用及活性成分提取技术领域，具体的说，是提供一种利用蓝莓茎叶制备多种组合提取物的方法。
背景技术
蓝莓是国我近年快速发展的第三代保健型水果。果实中富含果糖、有机酸、维生素等营养成分，花青素、花色苷、原花青素、槲皮素、鞣花酸、绿原酸、没食子酸、多糖等多种生物活性成分，对人体健康具有营养与保健双重功效。
蓝莓为浅根性落叶灌木，生长势较强。在一个生长季节，主茎可以有多处侧枝生长，至少有两次新梢抽生，初夏叶芽萌发抽生新枝，新梢长到一定程度后顶端叶芽重新萌发长出二次新枝，最后一次生长顶端形成花芽，次年开花结果。成年果园在采果期结束后，需要对当年抽生枝条及树形进行秋冬季修剪，一般废弃的枝条茎叶每年每亩达300～600kg，一个百亩蓝莓果园年采集的枝叶生物量可达数十吨。目前国内仅对蓝莓果实进行加工利用，其农事作业产生的茎叶植物资源尚未进行规模化利用。
近年国外的许多研究表明，蓝莓的根、茎、叶中也含有与果实中相同的活性成分，Martineau等研究发现，蓝莓的根、茎、叶提取物有显著的抗氧化和降血糖作用，并已应用于临床。国内李颖畅等进行了“蓝莓叶总黄酮的提取及其定性分析”，程安玮等进行了“蓝莓可萃取多酚和不可萃取多酚提取的研究”,中国专利号CN201210361027.4公布了“从蓝莓红叶中提取纯化花青素的方法”等。但这些研究与发明不足的是，仅着眼于单一活性成分或组分的提取，制备生产成本高，原料未能综合利用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从蓝莓茎叶中提取多种组合提取物的方法，其可分歩制得到蓝莓原花青素、绿原酸及多糖等多种组合提取物，工艺环保，资源利用率高，成本低，产品品质好。
为达到上述目的，本发明的技术方案为：一种从蓝莓茎叶中提取多种组合提取物的方法，包括以下步骤：
（1）在提取罐中，加入浓度为60～75%的乙醇和切碎的蓝莓枝叶原料，料液重量比1:8～12，在温度40～50℃下搅拌浸提1-2h，抽滤，微孔精滤，滤液静置沉淀18-24小时，取上清液；
（2）将上清液上大孔树脂，流速2BV（柱体积，下同）/h，至饱和吸附止，上柱流出醇-水液收集备用；用2～4BV纯化水洗脱，流速1BV/h，收集水洗液回用；再用1.5～2BV的40～50%乙醇洗脱，流速1BV/h，收集醇洗液在60～80℃温度下真空浓缩，回收乙醇，浓缩液冷冻干燥，得蓝莓原花青素组合物产品；
（3）将步骤（1）中抽滤后的蓝莓枝叶原料，加入原料重量的12～15倍纯化水或去离子水，加热至50～60℃，搅拌浸提1～2h，水提液泵入储罐，重复提取2～3次，合并水提液，过超滤膜分离，收集超滤截留液泵入提取罐回用，超滤透析液再过纳滤膜浓缩脱水，收集纳滤截留液真空浓缩，冷冻干燥，得蓝莓绿原酸组合物产品；
（4）在步骤（3）中的超滤截留液中，加入纤维素酶，搅拌提取30～60min，温度40～50℃，酶水解2～4h，抽滤，微孔精滤，再过超滤膜分离，超滤截留液加入步骤（2）中上柱流出的醇-水液，搅拌30min，醇沉过夜，收集下部悬浮液真空浓缩，冷冻干燥，得蓝莓多糖组合物产品。
步骤（1）中，所述蓝莓原料为蓝莓果枝与树叶，包括其制成的鲜料（7天内使用），或经60～70℃烘干的干料，叶片种类包括秋季绿叶与冬季红叶。
步骤（1）中，所述浸提方法包含超声波或微波辅助浸提，物料负载功率:超声波提取500～600w/L,微波提取300～400w/L。所述大孔吸附树脂为AB-8型树脂、D101型树脂或HPD-600型等树脂。
步骤（3）中，所述超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量10000～30000Da；所述纳滤膜为卷式纳滤膜，截留分子量500～1000Da。
步骤（4）中，所述纤维素酶的添加量为原料重量的0.5～2%，所述超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量50000～100000Da。
本发明以蓝莓新鲜或干燥枝叶为原料，通过粗碎预处理，采用超声波或微波辅助萃取，大孔树脂吸附、膜分离、酶水解等组合联提工艺，分步制备蓝莓原花青素、绿原酸、多糖等活性成分组合提取物，适应原料范围较宽，生产过程物料循环利用，工艺绿色环保，资源利用率高，产品成本低，品质好。
具体实施方式
以下结合实施例，详细说明利用蓝莓枝叶提取多种活性物质的方法与步骤。
实施例1：
（1）于9月收集南高丛蓝莓夏普蓝品种修剪后的新鲜绿色枝叶10kg，切成1～3cm碎段及碎片备用。
（2）将预处理的蓝莓新鲜茎叶投入200L容积的超声波提取罐中，加入60%乙醇80kg，控制物料负载功率500w/L,提取温度40℃，搅拌浸提1h，抽滤，微孔精滤，滤液静置沉淀过夜，取上清液，上AB-8型大孔树脂吸附，流速2BV/h，至饱和吸附止，上柱流出醇-水液收集备用；用2.4BV纯化水洗脱，流速1BV/h，至水洗无色止；再用1.5BV的40%乙醇洗脱，流速1BV/h，收集醇洗液，真空浓缩，回收乙醇，浓缩液冷冻干燥，得蓝莓原花青素组合物287g，原料得率2.87%。取样按照《保健食品检验与评价技术规范》2003版中《保健食品中原花青素的测定》分光光度法检测，原花青素含量368mg/g；用pH示差法测定，总花色苷含量154mg/g。
（3）将步骤（2）中醇提液抽滤完毕后，加入12kg去离子水，加热至50℃，搅拌水提1h，水提液泵入储罐，重复提取2次，合并水提液，过30000Da超滤膜分离，超滤透析液再过800Da纳滤膜浓缩脱水，收集纳滤截留液真空浓缩，冷冻干燥，得蓝莓绿原酸组合物175g，原料得率1.75%。取样用高效液相法检测，绿原酸含量152mg/g，槲皮素含量105mg/g。
（4）将步骤（3）中超滤截留液泵入提取罐回用，加入纤维素酶70g，搅拌提取40min，控制温度40～45℃，酶水解2h，抽滤，微孔精滤，再过50000Da超滤膜分离，超滤截留液加入步骤2中上柱流出的醇-水液，搅拌30min，醇沉过夜，收集下部悬浮液真空浓缩，冷冻干燥，得蓝莓多糖组合物344g，原料得率3.44%。取样用硫酸一苯酚法检测，粗多糖含量316mg/g。
实施例2：
（1）于12月收集兔眼蓝莓园蓝品种修剪后的红色枝叶10kg，切成1～3cm碎段及碎片，在60℃恒温下烘干备用。
（2）将预处理的蓝莓干燥茎叶投入200L容积的微波提取罐中，加入75%乙醇100kg，控制物料负载功率350w/L,提取温度45℃，搅拌浸提1h，抽滤，微孔精滤，滤液静置沉淀过夜，取上清液，上D101型大孔树脂吸附，流速2BV/h，至饱和吸附止，上柱流出醇-水液收集备用；再用3.5BV纯化水洗脱，流速1BV/h，至水洗无色止；再用1.5BV的50%乙醇洗脱，流速1BV/h，收集醇洗液，真空浓缩，回收乙醇，浓缩液冷冻干燥，得蓝莓原花青素组合物528g，原料得率5.28%。取样按《保健食品中原花青素的测定》分光光度法检测，原花青素含量312mg/g；用pH示差法测定，总花色苷含量113mg/g。
（3）将步骤2中醇提液抽滤完毕后，加入15kg纯化水，加热至45℃，搅拌水提1h，水提液泵入储罐，重复提取3次，合并水提液，过10000Da超滤膜分离，超滤透析液再过500Da纳滤膜浓缩脱水，收集纳滤截留液真空浓缩，冷冻干燥，得蓝莓绿原酸组合物226g，原料得率2.26%。取样用高效液相法检测，绿原酸含量174mg/g，槲皮素含量136mg/g。
（4）将步骤3中超滤截留液泵入提取罐回用，加入纤维素酶150g，搅拌提取50min，控制温度40～45℃，酶水解4h，抽滤，微孔精滤，再过50000Da超滤膜分离，超滤截留液加入步骤2中上柱流出的醇-水液，搅拌30min，醇沉过夜，收集下部悬浮液真空浓缩，冷冻干燥，得蓝莓多糖组合物416g，原料得率4.16%。取样用硫酸一苯酚法检测，粗多糖含量274mg/g。
采用本方法生产的蓝莓枝叶多种活性提取物，原料鲜料的综合得率达8.06%，干料的综合得率达11.70%；综合评价，以鲜料提取方式为优。生产的原花青素组合物、绿原酸组合物、多糖组合物等蓝莓系列提取物产品，生物活性高，可广泛应用于功能食品、保健食品、食品添加剂及日化行业等领域。

Claims (7)

1.一种从蓝莓茎叶中提取多种组合提取物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）在提取罐中，加入浓度为60～75%的乙醇和切碎的蓝莓枝叶原料，料液重量比1:8～12，在温度40～50℃下搅拌浸提1-2h，抽滤，微孔精滤，滤液静置沉淀18-24小时，取上清液；
（2）将上清液上大孔树脂，流速2BV（柱体积，下同）/h，至饱和吸附止，上柱流出醇-水液收集备用；用2～4BV纯化水洗脱，流速1BV/h，收集水洗液回用；再用1.5～2BV的40～50%乙醇洗脱，流速1BV/h，收集醇洗液在60～80℃温度下真空浓缩，回收乙醇，浓缩液冷冻干燥，得蓝莓原花青素组合物产品；
（3）将步骤（1）中抽滤后的蓝莓枝叶原料，加入原料重量的12～15倍纯化水或去离子水，加热至50～60℃，搅拌浸提1～2h，水提液泵入储罐，重复提取2～3次，合并水提液，过超滤膜分离，收集超滤截留液泵入提取罐回用，超滤透析液再过纳滤膜浓缩脱水，收集纳滤截留液真空浓缩，冷冻干燥，得蓝莓绿原酸组合物产品；
（4）在步骤（3）中的超滤截留液中，加入纤维素酶，搅拌提取30～60min，温度40～50℃，酶水解2～4h，抽滤，微孔精滤，再过超滤膜分离，超滤截留液加入步骤（2）中上柱流出的醇-水液，搅拌30min，醇沉过夜，收集下部悬浮液真空浓缩，冷冻干燥，得蓝莓多糖组合物产品。
2.根据权利要求1所述的从蓝莓茎叶中提取多种蓝莓提取物的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述蓝莓原料为蓝莓果枝与树叶，包括其制成的鲜料，或经60～70℃烘干的干料，叶片种类包括秋季绿叶与冬季红叶。
3.根据权利要求1所述的从蓝莓茎叶中提取多种蓝莓提取物的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述浸提方法包含超声波或微波辅助浸提，物料负载功率:超声波提取500～600w/L,微波提取300～400w/L。
4.根据权利要求1所述的从蓝莓茎叶中提取多种蓝莓提取物的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂为AB-8型树脂、D101型树脂或HPD-600型树脂。
5.根据权利要求1所述的从蓝莓茎叶中提取多种蓝莓提取物的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量10000～30000Da；所述纳滤膜为卷式纳滤膜，截留分子量500～1000Da。
6.根据权利要求1所述的从蓝莓茎叶中提取多种蓝莓提取物的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述纤维素酶的添加量为原料重量的0.5～2%。
7.根据权利要求1所述的从蓝莓茎叶中提取多种蓝莓提取物的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述超滤膜为卷式超滤膜，截留分子量50000～100000Da。
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