CN105461750A - 一种pH敏感磷脂分子及其制备方法与应用 - Google Patents
一种pH敏感磷脂分子及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105461750A CN105461750A CN201510971644.XA CN201510971644A CN105461750A CN 105461750 A CN105461750 A CN 105461750A CN 201510971644 A CN201510971644 A CN 201510971644A CN 105461750 A CN105461750 A CN 105461750A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- formula
- compound
- mol ratio
- reaction
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 title claims abstract description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims abstract description 47
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 25
- WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N pentaerythritol Chemical compound OCC(CO)(CO)CO WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 107
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 39
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 28
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 19
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N phosphoryl trichloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)=O XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 229940059574 pentaerithrityl Drugs 0.000 claims description 12
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 claims description 10
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 9
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 9
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 claims description 8
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 5
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 5
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 claims description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims description 4
- BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N allyl bromide Chemical compound BrCC=C BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KEMQGTRYUADPNZ-UHFFFAOYSA-N heptadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O KEMQGTRYUADPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SZHOJFHSIKHZHA-UHFFFAOYSA-N tridecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC(O)=O SZHOJFHSIKHZHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- -1 lithium aluminum hydride Chemical compound 0.000 claims description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 3
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Substances [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 235000015320 potassium carbonate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 claims description 2
- TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N Myristic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCC(O)=O TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YAQXGBBDJYBXKL-UHFFFAOYSA-N iron(2+);1,10-phenanthroline;dicyanide Chemical compound [Fe+2].N#[C-].N#[C-].C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1.C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 YAQXGBBDJYBXKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012280 lithium aluminium hydride Substances 0.000 claims description 2
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 claims description 2
- ACKFDYCQCBEDNU-UHFFFAOYSA-J lead(2+);tetraacetate Chemical compound [Pb+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O ACKFDYCQCBEDNU-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims 3
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 5
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 abstract 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N calcein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(O)=O)CC(=O)O)C(O)=C1 DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229960002378 oftasceine Drugs 0.000 description 15
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- 229960001701 chloroform Drugs 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FKLJPTJMIBLJAV-UHFFFAOYSA-N Compound IV Chemical compound O1N=C(C)C=C1CCCCCCCOC1=CC=C(C=2OCCN=2)C=C1 FKLJPTJMIBLJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 125000002777 acetyl group Chemical class [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 description 6
- LFTLOKWAGJYHHR-UHFFFAOYSA-N N-methylmorpholine N-oxide Chemical compound CN1(=O)CCOCC1 LFTLOKWAGJYHHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 5
- JEHCHYAKAXDFKV-UHFFFAOYSA-J lead tetraacetate Chemical compound CC(=O)O[Pb](OC(C)=O)(OC(C)=O)OC(C)=O JEHCHYAKAXDFKV-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical class [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 2
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 2
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 2
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NVDBBGBUTKLRSN-UHFFFAOYSA-N 3-[1-(2-phenoxyethyl)piperidin-4-yl]-1h-benzimidazol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2N1C(CC1)CCN1CCOC1=CC=CC=C1 NVDBBGBUTKLRSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical class [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003976 glyceryl group Chemical group [H]C([*])([H])C(O[H])([H])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/655—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms
- C07F9/6552—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a six-membered ring
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明公开了一种以季戊四醇为骨架的新型pH敏感磷脂分子及其制备方法和应用。具体涉及一种如式(I)所示的新型pH敏感磷脂分子。所述磷脂分子可在水相溶剂中形成脂质体，由于缩醛键对酸性环境敏感，使得脂质体在酸性条件下能快速解离，从而达到快速释放负载物的目的。所述磷脂分子具有紫外吸收，易于检测，对肿瘤细胞无细胞毒性的特点，极有潜力成为酸敏感药用材料；式(I)如下所示：
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种以季戊四醇为骨架的pH敏感磷脂分子及其制备方法和应用。
背景技术
磷脂为两性分子，一端为亲水的含氮或磷的头部，另一端为疏水(亲油)的长烃基链。根据磷脂的主链结构分为磷酸甘油脂和鞘磷脂，即由甘油构成的磷脂称为甘油磷脂，由神经鞘氨醇构成的磷脂，称为鞘磷脂。磷脂是生物膜的重要组分，也是脂质体双分子层的主要组成物质，可以作为乳化剂和表面活性剂。
脂质体是磷脂分散在水中形成的一个类球状的、包封一部分水相的封闭囊泡，具有易于在生物体内降解、无免疫原性、无毒性等特点，越来越受到人们的重视并得到了广泛的研究。由于普通脂质体只是单纯的被动靶向，在体内易被一些酶类物质降解和巨噬细胞吞噬，不能到达靶组织而有效发挥药物作用，存在靶向性差的缺点。
在炎症或感染区域，某些肿瘤组织或局部缺血时会出现异常酸化现象，而pH敏感型脂质体结构中的脂质双分子层的稳定性随环境pH变化而变化，在酸性环境中不稳定，这恰好弥补了常规脂质体的缺点，提高了脂质体的靶向性，能促进药效的充分发挥并提高基因的表达水平，在药物传递系统中具有良好的应用价值。
现有技术中公开的酸敏感类磷脂大都是以甘油为骨架，且均无紫外吸收，不宜检测，有些磷脂分子组装成脂质体后酸敏感程度有限，合成步骤复杂，所以仍需继续研究开发新的易于检测，酸敏感性好，靶向性好的磷脂。本发明提供的pH敏感磷脂分子，带有酸敏感的缩醛，所述缩醛在弱酸性或酸性介质中该磷脂中的缩醛极易断裂，而在中性或弱碱性介质中稳定性高，且该磷脂结构具有紫外吸收，易于检测，具有较好的应用前景。
发明内容
为了克服现有技术中的上述缺陷，本发明提出了一种以季戊四醇为骨架的新型pH敏感磷脂分子所述磷脂分子可在水相溶剂中形成脂质体，由于缩醛键对酸性环境敏感，使得脂质体在酸性条件下能快速解离，从而达到快速释放负载物的目的。所述磷脂分子具有紫外吸收，易于检测，对肿瘤细胞无细胞毒性的，极有潜力成为酸敏感药用材料；本发明提出的新型pH敏感磷脂分子的制备方法具有操作简单，所采用的原料廉价易得，无污染，反应条件温和，采用常规设备即可实现，收率高等优点。
本发明的目的之一是提供一种以季戊四醇为骨架的新型pH敏感磷脂分子，所述pH敏感磷脂分子为酸敏感磷脂分子，以解决现有技术中合成复杂，不便于检测，对酸的响应差等问题。
所述新型pH敏感磷脂分子的具体结构如式(I)所示：
其中，R为C9～C17的烃基。优选地，所述R为直链饱和的脂肪族烃基，即，优选地，所述新型pH敏感磷脂分子的结构为：
本发明的另一目的是提供一种所述pH敏感磷脂分子的制备方法，所述方法的反应式为：
反应式(A)；
所述反应步骤包括：
i)亲核取代反应：
在碱的作用下，式(II)所示化合物与烯丙基溴发生亲核取代反应得到式(III)所示化合物；
ii)缩合反应：
在催化剂对甲苯磺酸与吸水剂分子筛的作用下，式(III)所示化合物与季戊四醇发生缩合反应得到式(IV)所示化合物；
iii)酯化反应：
在缩合剂与催化剂的作用下，式(IV)所示化合物与脂肪酸发生酯化反应得式(V)所示化合物；
iv)氧化反应：
式(V)所示化合物在氧化剂NMO与OsO4作用下得式(VI)所示化合物；
v)式(VI)所示化合物与四乙酸铅发生反应得到式(VII)所示化合物；
vi)式(VII)所示化合物在还原剂的作用下得到式(VIII)所示化合物；
vii)在磷酰氯与有机碱的共同作用下，式(VIII)所示化合物转化为中间体；
viii)式(IX)所示化合物与三甲胺气体发生亲核取代反应得到式(I)所示化合物。
其中，
所述步骤i)中，所述碱包括碳酸钾或碳酸钠；
步骤ii)中，所述分子筛包括4A型或5A型；
步骤iii)中，所述缩合剂包括N,N'-二环己基碳二亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺，所述催化剂包括4-二甲氨基吡啶或二异丙基乙胺，所述脂肪酸包括：包括癸酸、十一酸、月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五酸、棕榈酸、十七酸、硬脂酸；
步骤vi)中，所述还原剂包括硼氢化钠、硼氢化钾、氢化铝锂；
步骤vii)中，所述有机碱包括吡啶或三乙胺。
其中，
所述步骤i)中，所述反应温度为40-60℃；优选地，所述反应条件为60℃。
所述步骤ii)中，所述式(III)所示化合物与对甲苯磺酸的摩尔比为1:0.05-0.2，所述分子筛的质量为式(III)所示化合物的质量的4-6倍，式(III)所示化合物与季戊四醇的摩尔比为1:6-10，反应温度为40-70℃，反应时间为6-18h；优选地，所述反应条件为所述式(III)所示化合物与对甲苯磺酸的摩尔比为1:0.1，式(III)所示化合物与季戊四醇的摩尔比为1:10，反应温度为60℃；
所述步骤iii)中，所述式(IV)所示化合物与缩合剂的摩尔比为1:2.5-3.0，式(IV)所示化合物与催化剂的摩尔比为1:0.2，式(IV)所示化合物与脂肪酸的摩尔比为1:2.2-2.5，缩合剂要在冰浴条件下加入，后缓慢升至室温，反应时间为2-6h；
所述步骤iv)中，所述式(VI)所示化合物与氧化剂NMO的摩尔比为1:1.2-1.5，与氧化剂OsO4的摩尔比为1：0.05-0.2，反应温度为25-35℃，反应时间为6-15h；优选地，所述反应条件为所述式(VI)所示化合物与氧化剂NMO的摩尔比为1:1.2，与氧化剂OsO4的摩尔比为1：0.1；
所述步骤v)中，所述式(VI)所示化合物与四乙酸铅的摩尔比为1:1.5-2.0，反应时间为1-2h；
所述步骤vi)中，所述式(VII)所示化合物与还原剂的摩尔比为1:1-1.2，反应时间为0.5-2h；
所述步骤vii)中，所述式(VIII)所示化合物与磷酰氯的摩尔比为1:1.5-2.0，式(VIII)所示化合物与有机碱的摩尔比为1:5.0-8.0，反应时间为1-2h，此中间体在碳酸氢钠的作用下得到式(IX)所示化合物，化合物(VIII)与碳酸氢钠的摩尔比为1:7-15；
所述步骤viii)中，所述反应时间6-10h，反应温度为30-40℃；
具体地，所述制备方法的步骤包括：
i)在碱的作用下，化合物II与烯丙基溴发生亲核取代反应得到化合物III，反应温度为40-60℃。
ii)在对甲苯磺酸与分子筛的作用下，化合物III与季戊四醇发生缩合反应得到化合物IV，化合物III与对甲苯磺酸的摩尔比为1:0.1，分子筛的质量为化合物Ⅲ的质量的4-6倍，化合物III与季戊四醇的摩尔比为1:6-10，反应温度为40-70℃，反应时间为6-18h。
iii)在缩合剂N,N'-二环己基碳二亚胺与催化剂4-二甲氨基吡啶的作用下，化合物IV与脂肪酸发生酯化反应得化合物V，化合物IV与缩合剂的摩尔比为1:2.5-3.0，化合物IV与催化剂的摩尔比为1:0.2，化合物IV与脂肪酸的摩尔比为1:2.2-2.5，缩合剂要在冰浴条件下加入，后缓慢升至室温，反应时间为2-6h。
iv)化合物Ⅴ在氧化剂NMO与OsO4作用下得化合物VI，化合物VI与氧化剂NMO的摩尔比为1:1.2-1.5，与OsO4的摩尔比为1：0.05-0.2，反应温度为25-35℃，反应时间为6-15h。
v)化合物Ⅵ在四乙酸铅的作用下得到化合物VII，化合物Ⅵ与四乙酸铅的摩尔比为1:1.5-2.0，反应时间为1-2h。
vi)化合物VII在还原剂的作用下得到化合物VIII，化合物VII与还原剂的摩尔比为1:1-1.2，反应时间为1h。
vii)在磷酰氯与有机碱的共同作用下，化合物VIII转化为中间体，化合物VIII与磷酰氯的摩尔比为1:1.5-2.0，化合物VIII与有机碱的摩尔比为1:5.0-8.0，反应时间为1-2h，此中间体在碳酸氢钠的作用下得到化合物Ⅸ，化合物VIII与碳酸氢钠的摩尔比为1:7-15。
viii)化合物Ⅸ与三甲胺气体发生亲核取代反应的化合物I，反应时间6-10h，反应温度为30-40℃。
本发明的另一个目的在于提供一种由上述pH敏感磷脂制成的脂质体。
本发明还提出了一种pH敏感脂质体，其包括如上所述的pH敏感磷脂分子。
本发明还提出了如上所述的pH敏感磷脂分子在制备载药脂质体中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果
(a)本发明提供的新的pH敏感磷脂分子，由于带有酸敏感的缩醛，所述缩醛在弱酸性或酸性介质中该磷脂中的缩醛极易断裂，因此，所述pH敏感磷脂分子在中性或弱碱性介质中稳定性高，在弱酸性或酸性介质中具有良好的pH敏感性。
(b)本发明所述pH敏感磷脂分子具有良好的生物相容性，无细胞毒性。
(c)本发明所述pH敏感磷脂分子可以制备成脂质体，具有用于药物传递系统的应用的潜力(图1和图2)。
(d)本发明还提供了一种pH敏感磷脂的制备方法，所述方法操作简单，工艺条件温和，采用常规设备即可实现。
附图说明
图1为实施例9所制得的脂质体的粒径分布(DLS图)。
图2A与2B为实施例9所制得的脂质体的透射电镜观察结果(TEM图)。
图3A与3B为实施例9所制得的脂质体在不同pH缓冲液中的粒径变化图。
图4为包裹钙黄绿素的脂质体在不同pH缓冲溶液中的钙黄绿素的释放行为。
图5为实施例8制得的磷脂细胞毒性测试结果。
具体实施方式
结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
反应式(B)
实施例1化合物III的合成
将1.2g(6.6mmol)式(II)所示化合物溶于18mLDMF，向其中加入1.82g碳酸钾(13.2mmol)，烯丙基溴1.28g(10.6mmol)，氮气保护下，加热到60℃左右反应3h。减压蒸出DMF，然后用乙酸乙酯萃取，饱和氯化铵洗，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏去除溶剂。粗产物经柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝2:1)得式(III)所示化合物浅黄色固体1.1g，收率75.34％。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.36(s,1H),6.10(s,2H),6.09–6.00(m,1H),5.44(dd,J＝17.3,1.4Hz,1H),5.35(dd,J＝10.5,1.2Hz,1H),4.61(d,J＝5.4Hz,2H),3.88(s,6H).
实施例2化合物IV的合成
1.0g(4.5mmol)式(III)所示化合物，季戊四醇6.13g(45.1mmol)，分子筛5g，一水合对甲苯磺酸80mg(0.42mmol)溶于25mLDMF，氮气保护下，升温至60℃左右，反应15h。减压蒸出DMF，加入10mL饱和NaHCO3溶液，5-10mL水，搅拌30min，抽滤，滤饼烘干，用EA:PE＝2:1打浆，得式(IV)所示化合物白色固体1.4g，收率91.50％。
1HNMR(400MHz,DMSO)δ6.19(s,2H),6.04(ddd,J＝22.4,10.5,5.3Hz,1H),5.72(s,1H),5.41(dd,J＝17.3,1.4Hz,1H),5.27(dd,J＝10.5Hz,1.2Hz,1H),4.58(d,J＝5.2Hz,2H),4.46(m,2H),3.84-3.76(m,4H),3.72(s,6H),3.59(d,J＝11.2Hz,2H),3.20(s,2H).
实施例3化合物5的制备
1.4g(4.1mmol)式(IV)所示化合物，癸酸1.77g(10.3mmol)，4-二甲氨基吡啶0.1g(0.8mmol)，溶于35mL二氯甲烷中，冰浴下，分批加入2.12g(10.3mmol)N,N'-二环己基碳二亚胺，加毕，室温反应2.5h。抽滤除去固体，滤液用饱和氯化铵溶液洗，饱和碳酸氢钠溶液洗，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏去除溶剂。粗产物经柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝10:1→6:1→5:1，展开剂中加少量三乙胺)得式(5)所示化合物白色固体2.5g，收率93.83％。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.12(s,2H),6.08–5.98(m,1H),5.96(s,1H),5.39(d,J＝17.3Hz,1H),5.28(d,J＝10.5Hz,1H),4.65(s,2H),4.52(d,J＝4.6Hz,2H),4.08(d,J＝11.2Hz,2H),3.92(s,2H),3.85-3.75(m,8H),2.37-2.29(m,4H),1.67-1.57(m,4H),1.28(m,24H),0.88(t,J＝5.9Hz,6H).
实施例4化合物6的制备
2.5g(3.9mmol)式(5)所示化合物溶于丙酮45mL和4.5mL水的混合溶剂中，N-甲基吗啉-N-氧化物0.54g(4.6mmol)，四氧化锇88mg(0.3mmol)，30℃反应15h。加入亚硫酸钠饱和溶液15mL，有棕色粘稠状物质贴壁，将溶液转移，减压蒸馏去除其中的丙酮，二氯甲烷萃取，水洗，粘稠物质同样加水，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂。粗产物经柱层析(二氯甲烷冲一下，然后二氯甲烷：甲醇＝30:1，展开剂中加少量三乙胺)得式(6)所示化合物白色固体2.3g，收率87.45％。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.10(s,2H),5.96(s,1H),4.64(s,2H),4.13–4.01(m,3H),4.00-3.90(m,4H),3.85-3.75(m,9H),3.70-3.65(m,1H),2.89(s,1H),2.44(s,1H),2.30-2.37(m,4H),1.67-1.57(m,4H),1.35-1.20(m,24H),0.88(t,J＝5.8Hz,6H).
实施例5化合物7的制备
2.3g(3.4mmol)式(6)所示化合物溶解于35mL无水三氯甲烷中，加入四乙酸铅(90％)2.99g(6.1mmol)，室温反应1h，抽滤，滤液用饱和亚硫酸钠溶液洗，饱和碳酸氢钠溶液洗，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏去除溶剂，得式(7)所示化合物粗产物2.8g，直接用于下一步。
实施例6化合物8的制备
式(7)所示化合物粗产物，溶于13mL四氢呋喃和13mL甲醇的混合溶剂中，分批加入硼氢化钾0.22g(4.1mmol)，反应1h。减压蒸馏去除溶剂，二氯甲烷萃取，饱和氯化铵溶液洗，饱和碳酸氢钠溶液洗，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏去除溶剂，粗产物经柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:2→1:1.5，展开剂中加少量三乙胺)得式(8)所示化合物白色固体1.55g，收率70.14％。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.12(s,2H),5.97(s,1H),4.65(s,2H),4.12-4.04(m,4H),3.97-3.90(m,4H),3.85–3.75(m,8H),2.30-2.37(m,4H),2.03(t,J＝5.8Hz,1H),1.66-1.59(m,4H),1.34-1.22(m,24H),0.88(t,J＝6.0Hz,6H).
实施例7化合物9的制备
1.0g(1.5mmol)式(8)所示化合物溶解于15mL无水三氯甲烷中，加入吡啶0.72g(9.1mmol)，加入磷酰氯0.74g(3.1mmol)，室温反应1h，加入饱和碳酸氢钠溶液1mL，碳酸氢钠固体1.28g，体系呈弱碱性，室温反应2h，加入无水硫酸钠干燥。过滤，滤液通过减压蒸馏去除溶剂(加入甲苯将剩余的吡啶带走)，得式(9)所示化合物粗产物2.0g，直接用于下一步。
实施例8化合物1的制备
式(9)所示化合物粗产物，溶于25mL无水三氯甲烷中，通三甲胺气体1h，通毕，升温至40℃左右，反应6h，减压蒸馏去除溶剂，粗产物经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝3:1→1:2，展开剂中加少量三乙胺)得式(1)所示化合物无色蜡状物质0.9g，收率72％。
1HNMR(400MHz,DMSO)δ6.19(s,2H),5.80(s,1H),4.50(s,2H),4.11(t,J＝4.6Hz,2H),4.05(s,2H),3.98–3.83(m,6H),3.77–3.65(m,8H),3.54–3.47(m,2H),3.12(s,9H),2.32(q,J＝7.3Hz,4H),1.57-1.47(m,4H),1.30-1.20(m,24H),0.84(t,J＝6.8Hz,6H).
实施例9
将实施例8制备的磷脂，采用薄膜蒸发法制备脂质体，取磷脂(化合物10)10mg、胆固醇2.3mg溶于氯仿、乙醇混合溶液中(氯仿与乙醇的体积比为1：5)，在旋转蒸发仪上缓慢蒸干(1h)，然后继续真空干燥30min，使有机溶剂完全除去。向其中加100mMNaCl(用NaOH调pH至7.5)，48℃水化10min，将脂质体通过LiposoFast挤出仪，经200nm孔径的聚碳酸酯膜挤出10次，得到脂质体溶液。采用动态光散射(DLS)测脂质体的平均粒径为168nm，粒径分布如图1所示，该脂质体的粒径主要在100-400nm之间，这表明该脂质体可以透过肿瘤组织较大的血管壁间隙而靶向到肿瘤部位。透射电镜照片如图2A和图2B所示为制得的脂质体经2％磷钨酸负染后的透射电镜照片，黑色背景，脂质体为粒径在200nm左右的球状结构。
实施例10
取实施例9所制得的脂质体溶液四份，每份10uL，分别用pH值为7.4(100mMNaCl，50mMNa2HPO4/NaH2PO4)、6.0(100mMNaCl，50mMNa2HPO4/NaH2PO4)、5.0(100mMNaCl,50mMNaAC/HAC)、4.5(100mMNaCl，50mMNaAC/HAC)的缓冲溶液稀释至1ml，监测脂质体在pH值为7.4、6.0、5.0、4.5条件下，粒径随时间的变化(如图3A和3B所示)。如图3A在pH为7.4的条件下，48h后脂质体的粒径，仍无较明显变化，还处于稳定状态，而在pH为4.5的条件下，4h后脂质体被酸解掉，其结构发生变化，团聚而使粒径变大。如图3B，在pH值为5.0条件下，10h粒径也有显著增大，在pH值为6.0条件下，48h粒径保持不变，说明该脂质体具有一定的酸敏感性。
实施例11
将实施例8制备的磷脂，采用冻融-挤出法制备钙黄绿素pH敏感脂质体，取磷脂(化合物10)10mg、胆固醇2.3mg溶于氯仿、乙醇混合溶液中(氯仿与乙醇的体积比为1：5)，在旋转蒸发仪上缓慢蒸干(1h)，然后继续真空干燥30min，使有机溶剂完全除去。加入钙黄绿素-NaCl溶液(100mMNaCl，50mM钙黄绿素，用NaOH调pH至7.5)，48℃水化10min，将脂质体转移至试管中，用液氮冷冻脂质体，然后再室温融化15min，再移至48℃水化2min。重复此过程3次。将脂质体通过LiposoFast挤出仪，经200nm孔径的聚碳酸酯膜挤出10次，用凝胶色谱柱分离未包封的钙黄绿素，得到包裹钙黄绿素的脂质体溶液。
钙黄绿素被包封在脂质体内，浓度很高，此时荧光就会淬灭，而脂质体在酸性条件不稳定释放出钙黄绿素，此时钙黄绿素进入了更大容积的空腔，荧光信号增强。利用这一原理可以检测pH敏感脂质体的稳定性。取所制得的包裹钙黄绿素的脂质体溶液四份，每份50uL，分别用实施例10所用的pH值为7.4、6.0、5.0、4.5的缓冲溶液稀释至1mL。各个时间段，分别取四种混合溶液25uL，用pH值为8.0(100mMNaCl，50mMNa2HPO4/NaH2PO4)的缓冲溶液稀释至1mL，在发射波长为494nm，激发波长为527nm处测定所释放钙黄绿素的荧光强度。不同pH，特定时间钙黄绿素释放率如图4，在pH为4.5的条件下，3h后就有超过40％钙黄绿素释放，5h后释放量超过80％，在pH为的7.4条件下，25h后仍没有明显释放。该结果进一步表明该脂质体具有较好酸敏性，且在中性或弱碱性条件下稳定。
钙黄绿素释放率计算如下：
内容物释放率(％)＝(IpH-I0/I100-I0)×100％
IpH：特定时间或每一特定酸度溶液的荧光强度；I0待测钙黄绿素脂质体溶液起始背景荧光强度(取所包裹的钙黄绿素的脂质体溶液50uL，用100mMNaCl溶液(用NaOH调pH至7.5)稀释至1mL，取上述混合溶液25uL，用pH值为8.0(100mMNaCl，50mMNa2HPO4/NaH2PO4)的缓冲溶液稀释至1mL，测荧光强度)；I100总的荧光强度(用表面活性剂Triton-100将脂质体膜完全破环后测得总荧光强度)。
实施例12
分别将处于对数生长期的A549细胞、HepG2细胞、MGC803细胞，接种密度分别为4×103、5×103、2×103个细胞/孔/180uL接种于96孔板内，经过细胞接种的96孔板放置在培养箱(37℃、5％CO2浓度的潮湿环境)中培养24h。24h后加入不同浓度实施例8制备的磷脂20uL/孔，每个细胞株，每个浓度均为三个复孔(另设无细胞空白孔、含细胞无药物对照孔)。然后再次放入培养箱培养72h后，从每孔中去除100uL旧培养液后加入浓度为5mg/mL的MTT溶液10uL，继续培养4小时后，加入三联液(10％SDS-5％异丁醇-0.01mol/lHCl)50uL/孔，于培养箱中过夜。然后用酶标仪(检测波长为570nm)测定每孔中溶液的吸光度(OD值)。按下列公式计算癌细胞的相对存活率。
细胞存活率(％)＝(OD实验组-OD空白组/OD对照组-OD空白组)×100％
细胞毒性试验结果见图5，从图5可以看出，实施例8制备的pH敏感磷脂材料对A549细胞、HepG2细胞、MGC803细胞均无明显细胞毒性。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。
Claims (8)
1.一种pH敏感磷脂分子，其特征在于，所述磷脂分子的结构如式(I)所示：
其中，R为C9～C17的烃基。
2.如权利要求1所述的pH敏感磷脂分子，其特征在于，所述R为直链饱和的脂肪族烃基。
3.如权利要求1或2所述的pH敏感磷脂分子的制备方法，其特征在于，所述方法的反应式为：
反应式(A)；
所述反应步骤包括：
i)亲核取代反应：
在碱的作用下，式(II)所示化合物与烯丙基溴发生亲核取代反应得到式(III)所示化合物；
ii)缩合反应：
在催化剂对甲苯磺酸与吸水剂分子筛的作用下，式(III)所示化合物与季戊四醇发生缩合反应得到式(IV)所示化合物；
iii)酯化反应：
在缩合剂与催化剂的作用下，式(IV)所示化合物与脂肪酸发生酯化反应得式(V)所示化合物；
iv)氧化反应：
式(V)所示化合物在氧化剂NMO和OsO4的作用下得式(VI)所示化合物；
v)式(VI)所示化合物与氧化剂四乙酸铅发生反应得到式(VII)所示化合物；
vi)式(VII)所示化合物在还原剂的作用下得到式(VIII)所示化合物；
vii)在磷酰氯与有机碱的共同作用下，式(VIII)所示化合物转化为中间体；
viii)式(IX)所示化合物与三甲胺气体发生亲核取代反应得到式(I)所示化合物。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述
步骤i)中，所述碱包括碳酸钾或碳酸钠；
步骤ii)中，所述分子筛包括4A型或5A型；
步骤iii)中，所述缩合剂包括N,N'-二环己基碳二亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺，所述催化剂包括4-二甲氨基吡啶或二异丙基乙胺，所述脂肪酸包括癸酸、十一酸、月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五酸、棕榈酸、十七酸、硬脂酸；
步骤vi)中，所述还原剂包括硼氢化钠、硼氢化钾、氢化铝锂；
步骤vii)中，所述有机碱包括吡啶或三乙胺。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，
所述步骤i)中，所述反应温度为40-60℃；
所述步骤ii)中，所述式(III)所示化合物与对甲苯磺酸的摩尔比为1:0.05-0.2，所述分子筛的质量为式(III)所示化合物的质量的4-6倍，式(III)所示化合物与季戊四醇的摩尔比为1:6-10，反应温度为40-70℃，反应时间为6-18h；
所述步骤iii)中，所述式(IV)所示化合物与缩合剂的摩尔比为1:2.5-3.0，式(IV)所示化合物与催化剂的摩尔比为1:0.2，式(IV)所示化合物与脂肪酸的摩尔比为1:2.2-2.5，缩合剂要在冰浴条件下加入，后缓慢升至室温，反应时间为2-6h；
所述步骤iv)中，所述式(Ⅴ)所示化合物与氧化剂NMO的摩尔比为1:1.2-1.5，与氧化剂OsO4的摩尔比为1：0.05-0.2，反应温度为25-35℃，反应时间为6-15h；
所述步骤v)中，所述式(VI)所示化合物与四乙酸铅的摩尔比为1:1.5-2.0，反应时间为1-2h；
所述步骤vi)中，所述式(VII)所示化合物与还原剂的摩尔比为1:1-1.2，反应时间为0.5h-2h；
所述步骤vii)中，所述式(VIII)所示化合物与磷酰氯的摩尔比为1:1.5-2.0，式(VIII)所示化合物与有机碱的摩尔比为1:5.0-8.0，反应时间为1-2h，此中间体在碳酸氢钠的作用下得到式(IX)所示化合物，化合物(VIII)与碳酸氢钠的摩尔比为1:7-15；
所述步骤viii)中，所述反应时间6-10h，反应温度为30-40℃。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，
所述步骤i)中，所述反应温度为60℃；
所述步骤ii)中，所述式(III)所示化合物与对甲苯磺酸的摩尔比为1：0.1，所述分子筛的质量为式(III)所示化合物的质量的5倍，式(III)所示化合物与季戊四醇的摩尔比为1：10，反应温度为60℃，反应时间为15h；
所述步骤iii)中，所述式(IV)所示化合物与缩合剂的摩尔比为1：2.5，式(IV)所示化合物与催化剂的摩尔比为1：0.2，式(IV)所示化合物与脂肪酸的摩尔比为1：2.5，缩合剂要在冰浴条件下加入，后缓慢升至室温，反应时间为2.5h；
所述步骤iv)中，所述式(VI)所示化合物与氧化剂NMO的摩尔比为1：1.2，与OsO4的摩尔比为1：0.1，反应温度为30℃，反应时间为15h；
所述步骤v)中，所述式(VI)所示化合物与四乙酸铅的摩尔比为1:1.8，反应时间为1h；
所述步骤vi)中，所述式(VII)所示化合物与还原剂的摩尔比为1:1.2，反应时间为1h；
所述步骤vii)中，所述式(VIII)所示化合物与磷酰氯的摩尔比为1:2，式(VIII)所示化合物与有机碱的摩尔比为1:6，反应时间为2h，此中间体在碳酸氢钠的作用下得到式(IX)所示化合物，化合物(VIII)与碳酸氢钠的摩尔比为1：10；
所述步骤viii)中，所述反应时间6h，反应温度为40℃。
7.一种pH敏感脂质体，其特征在于，其包括如权利要求1所述的pH敏感磷脂分子。
8.如权利要求1所述的pH敏感磷脂分子在制备载药脂质体中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510971644.XA CN105461750B (zh) | 2015-12-22 | 2015-12-22 | 一种pH敏感磷脂分子及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510971644.XA CN105461750B (zh) | 2015-12-22 | 2015-12-22 | 一种pH敏感磷脂分子及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105461750A true CN105461750A (zh) | 2016-04-06 |
| CN105461750B CN105461750B (zh) | 2017-05-24 |
Family
ID=55599960
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510971644.XA Active CN105461750B (zh) | 2015-12-22 | 2015-12-22 | 一种pH敏感磷脂分子及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105461750B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108299499A (zh) * | 2018-01-19 | 2018-07-20 | 华东师范大学 | 一种pH敏感的磷脂酰乙醇胺分子及其制备方法 |
| CN109568271A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-04-05 | 徐州医科大学 | 一种pH敏感的肿瘤靶向的重组高密度脂蛋白、制备方法及应用 |
| CN109731607A (zh) * | 2019-02-18 | 2019-05-10 | 大连工业大学 | 一种丙基磺酸基改性sba-15的制备方法及其在合成结构磷脂中的应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5008386A (en) * | 1987-10-13 | 1991-04-16 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszeti Termekek Gyara R.T. | Methylated cyclodextrin type compounds and process for preparing same |
| CN102911326A (zh) * | 2012-07-05 | 2013-02-06 | 苏州大学 | 一种酸敏感可降解聚合物囊泡及其制备和应用 |
| CN103333301A (zh) * | 2013-06-29 | 2013-10-02 | 华南理工大学 | 一种两亲性pH响应4/6杂臂星型共聚物及其制备方法 |
-
2015
- 2015-12-22 CN CN201510971644.XA patent/CN105461750B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5008386A (en) * | 1987-10-13 | 1991-04-16 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszeti Termekek Gyara R.T. | Methylated cyclodextrin type compounds and process for preparing same |
| CN102911326A (zh) * | 2012-07-05 | 2013-02-06 | 苏州大学 | 一种酸敏感可降解聚合物囊泡及其制备和应用 |
| CN103333301A (zh) * | 2013-06-29 | 2013-10-02 | 华南理工大学 | 一种两亲性pH响应4/6杂臂星型共聚物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李玲 等: ""载多柔比星pH敏感型聚合物胶束的制备及细胞毒性"", 《中国医药工业杂志》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108299499A (zh) * | 2018-01-19 | 2018-07-20 | 华东师范大学 | 一种pH敏感的磷脂酰乙醇胺分子及其制备方法 |
| CN109568271A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-04-05 | 徐州医科大学 | 一种pH敏感的肿瘤靶向的重组高密度脂蛋白、制备方法及应用 |
| CN109731607A (zh) * | 2019-02-18 | 2019-05-10 | 大连工业大学 | 一种丙基磺酸基改性sba-15的制备方法及其在合成结构磷脂中的应用 |
| CN109731607B (zh) * | 2019-02-18 | 2021-09-24 | 大连工业大学 | 一种丙基磺酸基改性sba-15的制备方法及其在合成结构磷脂中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105461750B (zh) | 2017-05-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105833284B (zh) | 紫杉醇-油酸小分子前药自组装纳米粒的构建 | |
| CN105461750A (zh) | 一种pH敏感磷脂分子及其制备方法与应用 | |
| Yang et al. | A near-infrared fluorescent probe based on phosphorus-substituted rhodamine for deep imaging of endogenous hypochlorous acid in vivo | |
| CN100348179C (zh) | 一种包埋抗癌药物的微胶囊的制备方法 | |
| CN101897976A (zh) | 一种药物增溶载体及其制备方法和应用 | |
| CN103554508B (zh) | 酸敏感两亲性星状嵌段共聚物、其制备方法及应用 | |
| CN102391498B (zh) | 一种聚乙二醇二脂肪酸甘油酯衍生物及其在药物传递中的应用 | |
| CN101254309A (zh) | 叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖纳米粒及制备方法 | |
| CN105154071A (zh) | 一种荧光探针及其制备方法与应用 | |
| CN102440961B (zh) | 一种具有酸敏亚表层的靶向聚合物胶束及其制备方法 | |
| CN103142479A (zh) | 一种磷脂-维生素e琥珀酸聚乙二醇酯胶束的应用 | |
| CN106905235A (zh) | 过氧亚硝酸根离子检测探针、制备方法及其应用 | |
| CN109350598A (zh) | 糖-聚乙二醇-dspe偶联化合物及其制备方法和应用 | |
| CN109876150B (zh) | 聚合物药物载体、其载药组合物及制备方法和应用 | |
| CN105504293B (zh) | 一种荧光星形嵌段共聚物的制备及应用 | |
| Li et al. | Kinetic stability-driven cytotoxicity of small-molecule prodrug nanoassemblies | |
| CN104173282B (zh) | 基于聚磷酸酯的叶酸靶向酸敏感核交联载药胶束及其制备方法 | |
| CN103319710A (zh) | 聚（2-乙基-2-恶唑啉）-脂质衍生物及制备方法 | |
| CN105131066B (zh) | 一种嘧啶衍生物及其制备方法与用途 | |
| CN106939075A (zh) | 一种亲水性聚酯及其嵌段共聚物 | |
| CN101475503B (zh) | 一种新型阳离子类脂及其制备方法和应用 | |
| CN107243000B (zh) | 载药杂化纳米粒子及其制备方法 | |
| CN103304802B (zh) | 酸敏感两亲性嵌段共聚物及其制备、用途 | |
| CN105963708B (zh) | 一种酶促响应释放的磷脂酰纳米前药及其制备方法和应用 | |
| CN103709410A (zh) | 酸敏感两亲性嵌段共聚物及其自组织胶束、用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Luo Yu Inventor after: Chang Shuyuan Inventor after: Zhan Li Inventor after: Luo Tian Inventor after: Xu Chengtao Inventor after: Wang Siyang Inventor after: Zhu Yong Inventor before: Luo Yu Inventor before: Chang Shuyuan Inventor before: Luo Tian Inventor before: Xu Chengtao Inventor before: Wang Siyang |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20160530 Address after: 200062 Putuo District, Zhongshan North Road, No. 3663, Applicant after: East China Normal University Applicant after: Suzhou Hao Fan biological Limited by Share Ltd Address before: 200062 Putuo District, Zhongshan North Road, No. 3663, Applicant before: East China Normal University |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |