CN105456550A - 胃粘膜损伤预防治疗复合物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药和食品技术领域，具体提供一种胃粘膜损伤预防治疗复合物。本发明提供的复合物主要由葡萄籽、三七和猴头菇以任意重量比混合而成。且优选的，葡萄籽、三七和猴头菇三种原料的重量比例为1:1:1。同时，本发明中还提供了前述本发明复合物的制备方法以及其应用。本发明的有益效果是：本发明提供的复合物在治疗和预防胃粘膜损伤方面疗效显著，并且各原料均取自天然植物，副作用小，尤适用于长期服药和饮酒所引起的胃粘膜反复损伤治疗和预防。同时，本发明提供的制备方法各原料中的有效成分提取率高，各提取物中有效成分含量高，最终进一步提升制备获得的复合物的疗效。

Description

胃粘膜损伤预防治疗复合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于医药和食品技术领域，具体涉及一种胃粘膜损伤预防治疗复合物及其制备方法与应用。

背景技术

随着我国人民生活水平的提高，过度饮酒和生活不规律现象越来越严重。胃黏膜损伤、胃溃疡等胃部疾病发生率急剧升高。加之我国老龄化的加深，心脑血管疾病发生率逐渐升高。阿司匹林作为非甾体类抗炎代表药物，近年来成功应用于心脑血管疾病的一级和二级预防，但其长期和大量服用会对胃黏膜造成损害。

对于胃黏膜损伤的治疗和预防有多种药物，有单纯抑制胃酸分泌的药物如奥美拉唑、泮托拉唑、法莫替丁、西咪替丁等，有中和胃酸的药物，氢氧化铝、铝碳酸镁等，有保护胃黏膜的药物，如硫糖铝、枸橼酸铋钾等，此外还有一些中成药物，如快胃片、胃康灵等。这些药物确实能够起到一定的效果，但是长时间服用副作用明显，成本也较高。

综上，基于心脑血管疾病需长期服用带来胃粘膜损伤副作用的药物的原因，在医疗卫生领域，亟需开发一种能够疗效好、并且副作用小可以长期服用的用于预防和治疗胃粘膜损伤的组合物。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种疗效显著、副作用小易于长期服用的胃粘膜损伤预防治疗复合物，本发明还同时提供了该复合物的制备方法以及其应用。

本发明的胃粘膜损伤预防治疗复合物主要由葡萄籽、三七和猴头菇以任意重量比作为原料制备而成。

进一步的，为了提升治疗胃粘膜损伤的治疗效果，本发明的胃粘膜损伤预防治疗复合物主要由以下重量份的原料制备而成：葡萄籽1-3份、三七1-3份、猴头菇1-3份。进一步的研究发现，当葡萄籽、三七和猴头菇三种主要原料的重量比为1:1:1时能够获得最为优异的治疗胃粘膜损伤的效果。

本发明还同时提供了制备前述本发明胃粘膜损伤预防治疗复合物的方法，按量称取葡萄籽、三七和猴头菇，并将称取的葡萄籽、三七和猴头菇分别制成葡萄籽提取物、三七提取物和猴头菇提取物，再将葡萄籽提取物、三七提取物和猴头菇提取物混合均匀即得本发明的胃粘膜损伤预防治疗复合物。

为了进一步提升和发挥本发明复合物的疗效，前述本发明的复合物制备方法中的葡萄籽提取物通过以下步骤制备获得：称取葡萄籽加入提取罐，向提取罐中加水回流提取，过滤取滤液，浓缩滤液，干燥即得。为了进一步提升葡萄籽中葡萄籽花青素的提取效果，优选的，回流提取及过滤步骤中：加水回流提取三次，每次回流提取加入水量均为葡萄籽重量的8倍，合并三次回流提取过滤所得滤液，再进行浓缩操作；浓缩滤液具体操作为：60℃条件下减压浓缩滤液的相对密度至1.06-1.12。为了进一步提升葡萄籽中葡萄籽花青素的提取效果，优选的，干燥步骤具体为：使用喷雾干燥塔进行喷雾干燥，喷雾干燥塔的进风温度为180-200℃，喷雾干燥塔的出风温度为90-100℃。通过本段制备步骤可以最大限度的提取葡萄籽中用于胃粘膜损伤治疗的活性成分——葡萄籽花青素。本发明提供的制备方法获得的葡萄籽提取物中葡萄籽花青素的含量高达95％以上，高含量的活性成分有助于显著提升本发明复合物产品对于胃粘膜损伤的疗效。

为了进一步提升和发挥本发明复合物的疗效，前述本发明的复合物制备方法中的三七提取物通过以下步骤制备获得：称取三七，清洗晾干后粉碎得三七原料；使用80wt％乙醇水溶液沸腾提取所述三七原料，得到提取液；过滤提取液取滤液，滤液脱色后在60℃下真空浓缩得浓缩液，喷雾干燥浓缩液后粉碎即得。通过本段制备步骤可以最大限度的提取三七中用于胃粘膜损伤治疗的活性成分——三七总皂苷。本发明提供的制备方法获得的三七提取物中三七总皂苷的含量可高达80％以上，高含量的活性成分有助于显著提升本发明复合物产品对于胃粘膜损伤的疗效。

为了进一步提升和发挥本发明复合物的疗效，前述本发明的复合物制备方法中的猴头菇提取物通过以下步骤制备获得：称取猴头菇，粉碎后加水水提3次，每次水提1h，合并三次提取液，减压蒸馏得浓缩液，喷雾干燥得干粉，粉碎均匀即得。通过本段制备步骤可以最大限度的提取猴头菇中用于胃粘膜损伤治疗的活性成分——猴头菇多糖。本发明提供的制备方法获得的猴头菇提取物中猴头菇多糖的含量可达87％以上，高含量的活性成分有助于显著提升本发明复合物产品对于胃粘膜损伤的疗效。

与此同时，本发明还提供了前述本发明所述的复合物在制备预防治疗胃粘膜损伤的药物中的应用。该预防治疗胃粘膜损伤的药物可以通过添加相应辅料制成任何药学上可接受的剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液等等剂型。

下面结合本发明中各味原料的药性及在本发明中的作用机理以及他们相互间的协同作用，对本发明可达的技术效果做更进一步的阐述。

本发明的发明人深入研究发现，酒精及药物等引起的胃黏膜损伤伴随胃黏膜上皮柱状细胞肿大、凋亡，血管破损出血。常伴有脂质过氧化、炎症反应。

葡萄籽提取物主要成分为原花青素(即本发明所述葡萄籽花青素)。本发明中葡萄籽提取物原花青素主要作用是清除胃组织内自由基，阻止炎症因子的表达和释放，保护胃黏膜不受自由基和炎症因子的损伤。同时具有抗氧化、保护心血管、抗肿瘤、抗过敏及抗炎的效果。具体的：(1)抗氧化，葡萄籽提取物能够抑制脂质过氧化，减少共轭二烯的形成，清除体内氧自由基，并且具有增强机体组织抗氧化酶系统的能力。(2)保护心血管，预防高血压，葡萄籽提取物能够有效地降低降低胆固醇和低密度脂蛋白的水平，预防血栓的形成，有助于预防心脑血管疾病的发生。(3)抗过敏及抗炎作用，葡萄籽提取物的抗氧化活性可以抑制组织胺、5-羟色胺、前列腺素、白三烯等炎症因子的合成和释放，抑制嗜碱细胞和肥大细胞释放过敏颗粒，从而有效地改善皮肤过敏症状和过敏性哮喘症状。此外，它还可抑制组织胺脱羧酶的活性，限制透明质酸的作用，对各种关节炎、胃、十二指肠溃疡效果显著。

三七性温味甘、味苦，入肝、胃经，有散淤止痛，消肿定痛的功效。三七提取物总皂苷能够提高胃黏膜SOD活性，清除胃组织自由基，保护胃黏膜，减少胃黏膜的损伤，对缺血性损伤、血管疾病等有很好疗效。

猴头菇是一种药食两用的植物，本发明深入研究发现，猴头菇提取物具有养胃和中的功效，可用于胃、十二指肠溃疡及慢性胃炎的治疗。同时，猴头菇多糖还具有提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂等多种生理功效。

同时，本发明中葡萄籽、三七、猴头菇联合使用，发挥各自的优势并相互促进，在副作用小的基础上全面预防和治疗胃黏膜损伤。

综上，本发明的有益效果为：本发明提供的复合物在治疗和预防胃粘膜损伤方面疗效显著，并且各原料均取自天然植物，副作用小，尤适用于长期服药和饮酒所引起的胃粘膜反复损伤治疗和预防。同时，本发明提供的制备方法各原料中的有效成分提取率高，各提取物中有效成分含量高，最终进一步提升制备获得的复合物的疗效。

附图说明

图1为试验例中各试验组大鼠胃粘膜损伤发生率和损伤抑制率的柱状对比图；

图2为试验例中各试验组大鼠胃粘膜损伤指数柱状对比图；

图3为试验例中各试验组大鼠胃粘膜损伤情况代表图；

图4为试验例中模型组的胃粘膜损伤病理切片图；

图5为试验例中低剂量组的胃粘膜损伤病理切片图；

图6为试验例中中剂量组的胃粘膜损伤病理切片图；

图7为试验例中高剂量组的胃粘膜损伤病理切片图；

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐释。

实施例1：

本实施例提供一种胃粘膜损伤预防治疗复合物，制备步骤如下：

称取10kg葡萄籽，打碎并投入提取罐中，加入80kg水回流提取，提取完毕分离得到一次提取液，再向提取罐中加入80kg水进行第二次回流提取，提取完毕分离得到二次提取液，再向提取罐中加入80kg水进行第三次回流提取，提取完毕分离得到三次提取液。合并一次提取液、二次提取液和三次提取液得到提取液。过滤提取液取滤液，减压浓缩滤液至滤液的相对密度为1.06(60℃条件下)。将浓缩后的滤液送至喷雾干燥塔进行喷雾干燥，喷雾干燥塔的进风温度设定为180-200℃，出风温度为90-100℃。干燥完毕，粉碎均匀即得葡萄籽提取物。

称取30kg三七，清洗晾干后粉碎得到三七原料，使用80wt％乙醇水溶液沸腾提取所述三七原料，得到提取液；过滤提取液取滤液，滤液脱色后在60℃下真空浓缩得浓缩液，喷雾干燥浓缩液后粉碎即得三七提取物。

称取30kg猴头菇，粉碎后加水水提3次，每次水提时间为1h，合并三次提取液，减压蒸馏得浓缩液，喷雾干燥得干粉，粉碎均匀即得猴头菇提取物。

合并并混合均匀前述所得葡萄籽提取物、三七提取物和猴头菇提取物，即得本实施例的胃粘膜损伤预防治疗复合物。

实施例2

称取30kg葡萄籽，打碎并投入提取罐中，加入240kg水回流提取，提取完毕分离得到一次提取液，再向提取罐中加入240kg水进行第二次回流提取，提取完毕分离得到二次提取液，再向提取罐中加入240kg水进行第三次回流提取，提取完毕分离得到三次提取液。合并一次提取液、二次提取液和三次提取液得到提取液。过滤提取液取滤液，减压浓缩滤液至滤液的相对密度为1.12(60℃条件下)。将浓缩后的滤液送至喷雾干燥塔进行喷雾干燥，喷雾干燥塔的进风温度设定为180-200℃，出风温度为90-100℃。干燥完毕，粉碎均匀即得葡萄籽提取物。

称取10kg三七，清洗晾干后粉碎得到三七原料，使用80wt％乙醇水溶液沸腾提取所述三七原料，得到提取液；过滤提取液取滤液，滤液脱色后在60℃下真空浓缩得浓缩液，喷雾干燥浓缩液后粉碎即得三七提取物。

称取10kg猴头菇，粉碎后加水水提3次，每次水提时间为1h，合并三次提取液，减压蒸馏得浓缩液，喷雾干燥得干粉，粉碎均匀即得猴头菇提取物。

合并并混合均匀前述所得葡萄籽提取物、三七提取物和猴头菇提取物，即得本实施例的胃粘膜损伤预防治疗复合物。

实施例3：

称取20kg葡萄籽，打碎并投入提取罐中，加入160kg水回流提取，提取完毕分离得到一次提取液，再向提取罐中加入160kg水进行第二次回流提取，提取完毕分离得到二次提取液，再向提取罐中加入160kg水进行第三次回流提取，提取完毕分离得到三次提取液。合并一次提取液、二次提取液和三次提取液得到提取液。过滤提取液取滤液，减压浓缩滤液至滤液的相对密度为1.12(60℃条件下)。将浓缩后的滤液送至喷雾干燥塔进行喷雾干燥，喷雾干燥塔的进风温度设定为180-200℃，出风温度为90-100℃。干燥完毕，粉碎均匀即得葡萄籽提取物。本实施例制备葡萄籽提取物的产品收率为11％，经检测所得葡萄籽提取物中葡萄籽花青素的含量为96％。

称取20kg三七，清洗晾干后粉碎得到三七原料，使用80wt％乙醇水溶液沸腾提取所述三七原料，得到提取液；过滤提取液取滤液，滤液脱色后在60℃下真空浓缩得浓缩液，喷雾干燥浓缩液后粉碎即得三七提取物。经检测，所得三七提取物中三七总皂苷的含量为80％。

称取20kg猴头菇，粉碎后加水水提3次，每次水提时间为1h，合并三次提取液，减压蒸馏得浓缩液，喷雾干燥得干粉，粉碎均匀即得猴头菇提取物。经检测，所得猴头菇提取物中猴头菇多糖的含量为87.69％。

合并并混合均匀前述所得葡萄籽提取物、三七提取物和猴头菇提取物，即得本实施例的胃粘膜损伤预防治疗复合物。

试验例1

本试验例提供前述实施例3制备获得的复合物，关于胃粘膜损伤治疗效果的动物实验。本试验例中所述的受试物即为实施例3所制得复合物。

1.试验原理

在一定时间内给予一定量的受试样品，用对胃粘膜有损伤作用的物质造成急性胃粘膜损伤模型，观察各剂量组胃粘膜的损伤程度；或用对胃粘膜有损伤作用的物质造成慢性胃溃疡模型，在一定时间内给予一定量的受试样品，观察各剂量组胃溃疡的面积和体积，反映受试样品对胃粘膜的保护作用。

2.试验方法

2.1试验对象

Wistar大鼠，雄性，180-200g/只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK-(京)2012-0001。

2.2试验动物分组

180-200g雄性Wistar大鼠适应性喂养3天后随机分为对照组、模型组、低剂量组(150mg/kg)、中剂量组(300mg/kg)、高剂量组(600mg/Kg)五组。每组8只。对照组、模型组给予生理盐水，低、中、高剂量组给予相应剂量的受试物，给药容量10ml/kg。

2.3急性胃粘膜损伤模型的建立

连续给药17天后完全禁食24h。模型组和剂量组给予消炎痛40mg/kg，一次性腹腔注射。5h后处死动物，剖腹将胃取出，结扎幽门和贲门，从十二指肠与幽门部结合处注入10％甲醛溶液5ml，固定20min后，沿胃大弯剪开，洗净胃内容物，展开胃粘膜，用纸吸干，观察胃粘膜损伤程度。用游标卡尺测量胃出血或溃疡的最大长度及宽度，以出血或溃疡的最大长宽径作为损伤指标评分。消炎痛所致胃粘膜损伤的溃疡一般较小，肉眼观查以点状多见，其评分标准见表1。

表1急性胃粘膜损伤消炎痛模型评分标准

注：表1中，长度和宽度均以最大径计。

2.4检测指标

2.4.1损伤发生率(％)＝某组出现出血或溃疡的大鼠数量/该组大鼠数量×100％。

2.4.2损伤指数＝组损伤评分总和/组动物数量。

2.4.3损伤抑制率(％)＝(A-B)/A×100％(A、B分别为模型组与试验组的损伤积分。

2.5病理切片的制备及观察

整体胃粘膜检查完毕后，将每只动物胃粘膜损伤最严重的部位切下，固定于10％甲醛溶液。

2.5.1组织脱水将每个组织按照以下步骤进行脱水：50％乙醇(90min)→70％乙醇(90min)→85％乙醇(90min)→95％乙醇(90min)→100％乙醇(60min)→100％乙醇(60min)。

2.5.2组织透明将脱水后的组织按照以下步骤进行透明：1/2乙醇+1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步60min。

2.5.3组织浸蜡将透明后的组织按照以下步骤进行浸蜡：1/2二甲苯+1/2石蜡(90min)→石蜡I(120min)→石蜡II(120min)，62℃下进行所述浸蜡操作。

2.5.4组织包埋将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，倒入融化的石蜡，冷却。

2.5.5组织切片和贴片将包埋好的组织块于切片机中约4μm，放于水浴锅中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号后65℃干烤4h。

2.5.6HE染色采用HE染色试剂盒对切片进行HE染色。

3.试验结果

3.1损伤发生率和损伤抑制率

损伤发生率(％)＝某组出现出血或溃疡的大鼠数量/该组大鼠数量×100％，损伤抑制率(％)＝(A-B)/A×100％(A、B分别为模型组与试验组的损伤积分)。损伤发生率、损伤抑制率如表2及图1所示。

表2本发明复合物对大鼠胃粘膜损伤发生率(％)、损伤抑制率(％)的影响

从上表2以及附图1中可以看出，消炎痛能够明显引起大鼠胃粘膜出血，导致胃粘膜损伤，本发明的复合物能够抑制大鼠胃粘膜损伤发生率，并且能够有效抑制消炎痛造成的大鼠胃粘膜损伤。

3.2损伤指数损伤指数＝组损伤评分总和/组动物数量。损伤指数如表3及图2所示。

表3本发明复合物对大鼠胃粘膜损伤指数的影响

注：表3及附图2中：“#”标记表示模型组与空白组相比有显著性差异(P<0.05)；“*”标记表示与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。

从表3以及图2可以看出，给予大鼠不同剂量的本发明复合物均可以显著降低消炎痛对大鼠胃粘膜的损伤指数。本发明的复合物能够有效抑制消炎痛对大鼠胃粘膜损伤程度，并且随着剂量的增加，胃粘膜损伤的抑制率也随之增加。

3.3损伤对比

附图3为空白组、模型组、低中高剂量组大鼠胃组织损伤情况代表图。

如附图3所展示，本发明的复合物能够显著的减轻消炎痛对大鼠胃粘膜损伤程度。

3.4病理检测

图4～图7分别为模型组、低剂量组、中剂量组及高剂量组的胃粘膜损伤切片图。

图4中可见模型组胃黏膜上皮细胞变性坏死，约占上皮的2/5-3/5。图5中可见低剂量组胃黏膜有部分上皮细胞变性坏死，约占上皮2/5-3/5。图6中可见中剂量组胃黏膜同样出现上皮细胞变性坏死，但是损伤程度要比模型组的小，其损伤部分约占上皮1/5-2/5。图7中可见高剂量组胃黏膜结构正常，未见出血、坏死及炎性细胞浸润。

通过以上病理观察，病理检测结果与大体(即整体)观察评分结果基本一致，可以判定本发明复合物对胃黏膜有保护治疗作用。

4.试验结论

试验结果显示：根据食品药品监督管理局提供的《对胃粘膜损伤有辅助保护功能评价方法(征求意见稿)》中的规定：“受试物一个或一个以上剂量组与模型对照组进行比较，大体观察评分与病理组织学检查评分，结果均表明胃粘膜损伤明显改善，可判定该受试物杨平动物实验结果为阳性”，本试验大体观察评分效果明显，本发明复合物能够降低大鼠胃粘膜损伤发生率，能够显著降低大鼠胃粘膜损伤指数、提高大鼠胃粘膜损伤抑制率，在病理上也得到支持，因此，可以判定本发明复合物对胃黏膜有辅助保护治疗作用。

同时，基于以上试验例及实施例亦可得知，在猴头菇、三七、葡萄籽用量1:1:1的情况下，本发明的复合物疗效最好。在给药剂量方面，150～600mg/kg的给药剂量均可以起到一定疗效，同时，在给药剂量300～600mg/kg时疗效更为显著，且给药剂量为600mg/kg时，疗效最佳。

本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其细节上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.胃粘膜损伤预防治疗复合物，其特征在于，主要由以下任意重量比例的原料制备而成：葡萄籽、三七、猴头菇。

2.根据权利要求1所述的胃粘膜损伤预防治疗复合物，其特征在于：主要由以下重量份的原料制备而成：葡萄籽1-3份、三七1-3份、猴头菇1-3份。

3.根据权利要求1所述的胃粘膜损伤预防治疗复合物，其特征在于：主要由以下重量份的原料制备而成：葡萄籽2份、三七2份、猴头菇2份。

4.制备权利要求1或2或3所述复合物的方法，其特征在于，称取各原料，并将各原料分别制备为葡萄籽提取物、三七提取物和猴头菇提取物，将葡萄籽提取物、三七提取物和猴头菇提取物混合均匀即得。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述葡萄籽提取物通过以下步骤制备获得：称取葡萄籽加入提取罐，向提取罐中加水回流提取，过滤取滤液，浓缩滤液，干燥即得。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，回流提取及过滤步骤中：加水回流提取三次，每次回流提取加入水量均为葡萄籽重量的8倍，合并三次回流提取过滤所得滤液，再进行浓缩操作；浓缩滤液具体操作为：60℃条件下减压浓缩滤液的相对密度至1.06-1.12。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，干燥步骤具体为：使用喷雾干燥塔进行喷雾干燥，喷雾干燥塔的进风温度为180-200℃，喷雾干燥塔的出风温度为90-100℃。

8.根据权利要求4～7任一所述的方法，其特征在于，所述三七提取物通过以下步骤制备获得：称取三七，清洗晾干后粉碎得三七原料；使用80wt％乙醇水溶液沸腾提取所述三七原料，得到提取液；过滤提取液取滤液，滤液脱色后在60℃下真空浓缩得浓缩液，喷雾干燥浓缩液后粉碎即得。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述猴头菇提取物通过以下步骤制备获得：称取猴头菇，粉碎后加水水提3次，每次水提1h，合并三次提取液，减压蒸馏得浓缩液，喷雾干燥得干粉，粉碎均匀即得。

10.权利要求1或2或3所述复合物在制备预防治疗胃粘膜损伤的药物中的应用。