CN105456362B - 一种治疗鸡传染性支气管炎的合剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗鸡传染性支气管炎的合剂及其制备方法，包括以下质量份数的原料药材：板蓝根200‑350重量份、黄芩100‑200重量份、石膏100‑200重量份、桔梗100‑200重量份、紫菀100‑200重量份、北豆根50‑100重量份、硼砂20‑50重量份和冰片1‑10重量份；并公开了制备方法。本发明的有益效果是：本发明能够治疗鸡传染性支气管炎，治疗效果好，并且无毒，不影响鸡的生长性能，并且能够促进鸡的生长，本发明稳定性高，适合大量生产。
Description
技术领域
本发明涉及中兽医技术领域，特别涉及一种治疗鸡传染性支气管炎的合剂及其制备方法。
背景技术
鸡传染性支气管炎是由冠状病毒科、冠状病毒属的传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病。主要侵害鸡的呼吸系统、消化系统以及泌尿生殖系统，引起鸡咳嗽、喷嚏、气管啰音、呼吸困难、肠炎、产蛋数量和质量下降等症状。各种日龄、性别的鸡均易感染，但主要侵害1-4周龄雏鸡，幼雏鸡感染本病后常引起输卵管永久性退化，因呼吸道或肾脏病变而引起的死亡率高达40％-90％。鸡感染传染性支气管炎病毒后，通常会引起饲料报酬率降低，死亡率增加，该病造成的生产效益下降比死亡损失要大，严重危害养鸡业生产。
鸡传染性支气管炎的流行病学：该病经常发生于鸡，各种月龄的鸡均可感染，尤以1月龄以内雏鸡最易感染，发病率较高，肉鸡死亡率高，蛋鸡产蛋量下降。该病主要通过空气在鸡群迅速传染，咳出的飞沫经呼吸道传播，污染的饲料、饮水等间接地经消化道传播。虽然IBV对外界因素的抵抗力不强，但其传染性极高。有母源抗体的雏鸡有一定的抵抗力(约4周)。过热、严寒、拥挤、通风不良、疫苗接种以及维生素、矿物质和其他营养缺乏等均可促使该病的发生。四季均有发生，以冬季较为严重。病鸡康复后可带毒49d，在35d内具有传染性。
该病潜伏期为2-5d临床症状因病毒的毒力、并发感染(如大肠杆菌、支原体等)、不良的饲养管理因素等的不同而有很大差异。该病临床特征为病鸡常看不到前驱临床症状，却突然出现呼吸的临床症状，并迅速传播到全群。4周龄以下鸡常表现为伸颈、张口呼吸，喷嚏、咳嗽、哆音，全身衰弱，精神不振，食欲减少，羽毛松乱，昏睡，翅下垂。病鸡常挤在一起保暖。康复鸡则发育不良。5-6周龄以上鸡，主要的临床症状是啰音、气喘和微咳，同时伴有食欲减退、沉郁或下痢等临床症状。成年鸡出现轻微的呼吸道临床症状，产蛋鸡则引起产蛋量下降，并产软壳蛋、畸形蛋、“鸽子蛋”或粗壳蛋。蛋的质量变坏，蛋白稀薄呈水样，蛋黄和蛋白分离以及蛋白勤着于壳膜表而等。病程一般为1-2周，有的拖延至3周。雏鸡的死亡率可达25％,6周龄以上的鸡死亡率则很低。康复后的鸡具有免疫力，血清中的相应抗体至少在1年可被检测出。
鸡传染性支气管炎的病理变化：肉眼可见结膜炎，鼻腔、鼻窦、咽喉、气管内半透明勤稠液增量，病程稍长则变成干酪样。在支气管和肺支气管可见肺炎灶和水肿，气囊混浊，可见条状、点状干酪样物附着。肝稍肿大，呈土黄色。产蛋母鸡的腹腔内可以发现液状的卵黄物质，卵泡充血、出血、变形。18日龄以内的幼雏感染可导致输卵管发育异常，致使成熟期不能正常产蛋。有些病鸡的法氏囊有炎症出血，输卵管呈稚型或萎缩至一半。
肾病变型鸡传染性支气管炎病，其肾肿大、苍白，外观似油灰样，小叶清晰，多数肾的表而红白相间呈斑驳状的“花斑肾”，切开后有大量石灰渣样物流出。肾小管扩张，充满尿酸盐。严重病例，白色尿酸盐沉积可见于其他组织器官表面。
疫苗预防：疫苗选择弱毒苗和灭活苗是目前应用的主要疫苗。前者有以M株致弱的血清型如H52、H120和Ma5等，己得到广泛使用。H120株毒力较弱，对雏鸡安全；H52毒力较强，适用于20日龄以上鸡；Ma5用于肾型IB，其次是Conn株致弱的疫苗株。活苗能有效地激发体液和细胞免疫，使用方便，成本低，但有出现毒力返强或变异强毒株的隐患。灭活苗可有效控制相应型的IB，而且安全性好，不存在散播病原和毒力返强的问题，且能激发良好的体液免疫反应。其中油乳剂灭活苗和组织灭活苗油剂苗较为常用，可用于各种日龄鸡，多价油乳剂灭活苗及和其他病毒的联苗可在一定程度上扩大其应用，如ND-腺肾IB,ND-腺肾IB-肾型IB,ND-IB等。灭活苗的缺点是使用剂量大，需与佐剂配合使用，成本较高。
抗生素治疗：治疗方案对IBV没有特异疗法，因在实际生产过程中经常并发细菌性疾病，因此使用抗生素类药物有一定的疗效。①链霉素：5万-10万IU，注射用水适量，一次肌肉注射，2次/d，连用3-5d。呼吸困难时，也可一次肌肉注射20％樟脑水注射液0.5-1mL。②复方新诺明：一次喂服，按20-25mg/(kg·bw)用药，2次/d，连用2-4d。
中医认为，中兽医认为畜禽的致病因素主要有“六淫”、“疫病”等。“疫病”是天地间一种可以传染的不正之气，又有“瘟疫”、“病气”、“庆气”、“异气”、“毒气”、“乖戾之气”之称，比“六淫”之气对畜禽健康的危害更大。鸡传染性支气管炎主要是在机体正气虚弱或“疫病”之气IBV毒力过强时，通过呼吸道感染。“疫病”客于肺卫，致使卫气郁闭，肺气不宣，出现恶寒发热、身痛、缩颈杂毛、不愿走动、鼻流清涕、咳嗽等症状。如邪疫由表入里，肺主肃降、通调水道之功能受阻，肺气上逆，水湿不得及时下泻，郁而化痰，就会出现气喘、痰鸣；如湿热下注脾胃，出现食欲减退、消化不良、消瘦、腺胃肿大；湿热下注于肾，肾的气化功能受阻，湿热储留于肾脏，湿化浊、浊化石，形成乳糜尿或砂石淋，鸡排石灰渣样粪便，肾脏肿大呈花斑状，即现代禽病学中的痛风症。由于临床症状的不同，施治原则己有差异。
中医治疗，具有得天独厚的优势，因此中兽医治疗方法逐步推广。
发明内容
为了达到上述目的，本发明提供了一种治疗鸡传染性支气管炎的合剂及其制备方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供了一种治疗鸡传染性支气管炎的合剂，包括以下质量份数的原料药材：板蓝根200-350重量份、黄芩100-200重量份、石膏100-200重量份、桔梗100-200重量份、紫菀100-200重量份、北豆根50-100重量份、硼砂20-50重量份和冰片1-10重量份。
其中优选的，包括以下质量份数的原料药材：板蓝根300重量份、黄芩120重量份、石膏150重量份、桔梗120重量份、紫菀120重量份、北豆根80重量份、硼砂30重量份和冰片5重量份。
进一步优选的，还包括漆大姑、一扫光、黑面叶、细叶桉叶、水珠草和山枝根；包括以下质量份数的原料药材：板蓝根200-350重量份、黄芩100-200重量份、石膏100-200重量份、桔梗100-200重量份、紫菀100-200重量份、北豆根50-100重量份、硼砂20-50重量份、冰片1-10重量份、漆大姑100-150重量份、一扫光80-120重量份、黑面叶20-50重量份、细叶桉叶50-100重量份、水珠草20-40重量份和山枝根30-50重量份。
其中，包括以下质量份数的原料药材：板蓝根300重量份、黄芩120重量份、石膏150重量份、桔梗120重量份、紫菀120重量份、北豆根80重量份、硼砂30重量份、冰片5重量份、漆大姑120重量份、一扫光100重量份、黑面叶30重量份、细叶桉叶80重量份、水珠草30重量份和山枝根40重量份。
为了达到上述目的，本发明还提供了所述的治疗鸡传染性支气管炎的合剂的制备方法，包括以下步骤：
第一步、将除冰片和硼砂以外的所述原料药材混合加水煎煮两次，第一次加混合后质量的5-12倍量的水煎煮1-2小时，第二次加6-9倍量的水煎煮45分钟-1小时，滤过，合并滤液，将合并后的滤液高速离心，取上清液，并减压减压浓缩至65～75℃，-0.07～-0.08MPa时相对密度为1.10～1.20，趁热加入硼砂，搅拌使溶解，得到的浓缩液备用；
第二步、取冰片，加2-5倍量的乙醇，搅拌使溶解，加聚山梨酯-801-5重量份，搅拌均匀得到冰片溶液；
第三步、将所述冰片溶液加入所述浓缩液中，加苯甲酸钠3-6重量份，搅拌溶解，加水调整，总量至1000ml，混匀，使用高密度聚乙烯瓶进行分装，每瓶装100ml、250ml或1000ml。
本发明带来的有益效果是：本发明能够治疗鸡传染性支气管炎，治疗效果好，并且无毒，具有良好的抗炎、止咳、祛痰及抗病毒作用，本发明合剂对鸡的精神、运动及饮水无不良影响；对雏鸡的采食、无明显影响；对血象、血清生化指标及心、肝、胃、肠、法氏囊等脏器指数无不良影响，本发明的药物合剂对雏鸡具有较高的临床用药安全性，不影响鸡的生长性能，能明显提高日均增重，并且能够促进鸡的生长，本发明稳定性高，适合大量生产。
具体实施方式
针对上述问题，本发明提供了一种治疗鸡传染性支气管炎的合剂，其中，包括以下质量份数的原料药材：板蓝根200-350重量份、黄芩100-200重量份、石膏100-200重量份、桔梗100-200重量份、紫菀100-200重量份、北豆根50-100重量份、硼砂20-50重量份和冰片1-10重量份；进一步的还包括漆大姑100-150重量份、一扫光80-120重量份、黑面叶20-50重量份、细叶桉叶50-100重量份、水珠草20-40重量份和山枝根30-50重量份。
本发明主要用于家禽的传染性支气管炎，证属气血两燔型风温证。风热之邪入里，邪热壅阻肺经，则咳嗽不止，重者咳喘；热邪炽盛则身热，里热蒸迫津液外散则烦渴引饮；邪热雍肺，肺气失于宣降则胸闷热毒侵袭肺系门户，则见咽喉肿肿疼痛。肺热不解则下移大肠，既可致肠腑气机不行，燥热内结而便秘，也可致传导失司而泄泻；邪热在肺，久则耗伤肺胃之阴液。治则清热解毒，止咳平喘。本方重用板蓝根为君，具有清热解毒，凉血利咽之功。黄芩性味苦寒，清热燥湿，泻火解毒；石膏大凉，为去气分之热要药，功能清热泻火，除烦止渴。北豆根、漆大姑、一扫光、黑面叶清热解毒，消肿利咽，历来为治咽要药，与大青根合用，强其清热利咽的功效，咽通则气顺；上述各药为臣药，助君药清解气分之热，兼之解毒，除烦止渴，清热利咽，消解表症。细叶桉叶、水珠草宣肺，山枝根补肺；桔梗辛散，开通肺气，与黄芩连用，清热燥湿，宽胸利膈，祛胸膈之热；紫菀性温热，润肺下气，消痰之力甚强，痰去则咽爽，表症则轻。方中加入紫菀，辛凉之中配伍少量辛温之品，既有利于透邪，又不悖辛凉之旨。佐以少量冰片，开窍醒神，提振精神。后面几味药材为佐使药。全方配伍合理，标本兼治，清热为本，兼以利咽，宣肺，补肺，祛痰，和脾胃，开窍醒神。各药材科学配伍，达到治疗鸡传染性支气管炎，治疗效果好且促进鸡的生长。
各味药材的药理如下：
板蓝根：本品为十字花科植物菘蓝的干燥根。秋季采挖，除去泥沙，晒干。本品苦，寒，有清热解毒，凉血利咽之功效。常用于温疫时毒，发热咽痛，温毒发斑，痄腮，烂喉丹痧，大头瘟疫，丹毒，痈肿等。板蓝根化学成分主要有靛蓝、靛玉红、(R，S)-告依春、腺苷等20多种，其中主要包括有羟基靛玉红、依靛蓝酮、大黄素-8-O-β-D-葡萄苷、邻氨基苯甲酸等。
石膏：本品为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏，主含含水硫酸钙(CaSO4·2H2O)。采挖后，除去杂石及泥沙。本品归肺、胃经。清热泻火，除烦止渴。用于外感热病，高热烦渴，肺热喘咳，胃火亢盛，头痛，牙痛。本品主要含有含水硫酸钙，及多种微量元素。
黄芩：本品为唇形科植物黄芩的干燥根，除去须根及泥沙，晒后撞去粗皮，晒干。本品按干燥品计算，含黄芩苷(C21H18O11)不得少于9.0％。本品味苦、性寒，有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。黄芩的临床抗菌性比黄连好，而且不产生抗药性。黄芩中含有多种苷类化合物及黄酮类化合物，主要包括：黄芩素，黄芩新素，即黄芩黄酮Ⅱ，黄芩苷，汉黄芩素，汉黄芩苷，木蝴蝶素A，7-甲氧基黄芩素，黄芩黄酮Ⅰ，二氢木蝴蝶素A等。
北豆根：本品为防己科植物蝙蝠葛的干燥根茎。春秋二季采挖，除去泥沙和须根，干燥。北豆根药材中蝙蝠葛碱的含量不得低于0.5％。本品苦，寒；有小毒。有清热解毒，祛风止痛之功效，常用于咽喉肿痛，热毒泄痢、风湿痹痛。北豆根中的化学成分以生物碱类物质为主，主要包括蝙蝠葛碱、蝙蝠葛任碱、蝙蝠葛诺林碱等。
桔梗：本品为桔梗科植物桔梗的干燥根。夏、秋二季采收，洗净，除去须根，趁鲜剥去外皮或不去外皮，干燥。本品味苦、性辛，平。归肺经。功能宣肺，利咽，祛痰，排脓。用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛，音哑，肺痈吐脓，疮疡脓成不溃。桔梗主要活性成分为皂苷类，桔梗的皂苷类成分均属于齐墩果烷型五环三萜衍生物。可分为3类：桔梗酸类、桔梗二酸类、远志酸类。主要包括：桔梗皂苷D；远志皂苷D2；桔梗皂苷D3；去芹菜糖桔梗皂苷D3；桔梗皂苷D2；去芹菜糖桔梗皂苷D2等。其还含有黄酮类物质，如黄衫素、木犀草素、芹菜素等。
硼砂：本品系从硼砂矿提炼而成的结晶。硼砂是含有10个水分子的四硼酸钠。它的晶体为板状或柱状，晶体集合在一起形成晶簇状、粒状、多孔的土块状等，颜色为白中带灰或带浅色调的黄、蓝、绿等，具有玻璃光泽。水溶液呈弱碱性。硼砂在空气可缓慢风化，熔融时成无色玻璃状物质。
紫菀：本品为菊科植物紫菀的干燥根和根茎。春秋二季采挖，除去有节的根茎和泥沙，编成辫状晒干，或直接晒干。本品性苦，味温。功能温肺，下气，消痰，止咳。治风寒咳嗽气喘，虚劳咳吐脓血，喉痹，小便不利。紫菀含无羁萜，表无羁萜醇，紫菀酮，紫菀苷A、B及C，紫菀皂苷A、B、C、D、E、F及G，紫菀五肽A、B，紫菀氯环五肽C；还含植物甾醇葡萄糖甙及挥发油，押发油的成分有毛叶醇，乙酸毛叶酯，茴香脑，烃，脂肪酸，芒香族酸等。
冰片：本品为无色透明或白色半透明的片状松脆结晶；气清香，味辛、凉，具挥发性点燃发生浓烟，并有带光的火焰。冰片，为无色透明或白色半透明的片状松脆结晶；气清香，味辛、凉；具挥发性，味辛、苦，性微寒。归心、脾、肺经。开窍醒神，清热止痛。用于热病神昏、惊厥，中风痰厥，气郁暴厥，中恶昏迷，胸痹心痛，目赤，口疮，咽喉肿痛，耳道流脓。
漆大姑：本品为大戟科植物毛果算盘子的枝叶。味苦；涩；性平。【归经】胃；脾；大肠经。【功能主治】清热解毒；祛湿止痒。主生漆过敏；稻田皮炎；皮肤瘙痒；荨麻疹；湿疹；烧伤；乳腺炎；急性胃肠炎；痢疾。
一扫光：【来源】菊科千里光属植物双花千里光，以全草入药。秋季采集全草，切段晒干。【性味】苦，寒。【功能主治】清热解毒，祛风湿，止痒。用于急性结膜炎，疮疖，皮炎，跌打损伤。
黑面叶：【别名】黑面神、鬼划符、暗鬼木、青凡木、铁甲将军、夜兰茶、锅盖仔、四眼草、乌漆臼、青漆、山树兰【来源】大戟科山漆茎属植物黑面树，以根、叶入药。全年可采，洗净切片晒干。【性味】微苦，凉。【功能主治】清热解毒，散瘀，止痛，止痒。根：急性胃肠炎，扁桃体炎，支气管炎，尿路结石，产后子宫收缩疼痛，风湿性关节炎。叶：外用治烧烫伤，湿疹，过敏性皮炎，皮肤搔痒，阴道炎。
细叶桉叶：【来源】为桃金娘科植物细叶桉的叶。全年可采。【性味】《陆川本草》:"辛苦，平。"【功能主治】《陆川本草》:"治感冒，咳嗽，气胀腹痛，泄泻下痢，跌打损伤；外治毒疮，溃疡，并可作冲洗消毒剂。"
水珠草：【来源】药材基源：为柳叶菜科植物水珠草的全草。【性味】味辛；苦；性平。【功能主治】宣肺止咳；理气活血；利尿解毒。主外感咳嗽；脘腹胀痛；痛经；月经不调；经闭；泄泻；水肿；淋痛；疮肿；瘭疽；癣痒；湿疣
山枝根：【来源】为海桐花科植物光叶海桐的根或根皮。秋末采集。【性味】甘苦辛，凉。广州部队《常用中草药手册》："甘苦辛，微温。"【功能主治】补肺肾，祛风湿，活血通络。治虚劳喘咳，遗精早泄，失眠，头晕，高血压病，风湿性关节疼痛，小儿瘫痪。
以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。
实施例1
配方:板蓝根200g、黄芩100g、石膏100g、桔梗100g、紫菀100g、北豆根50g、硼砂20g和冰片1g。
制备过程：第一步、将除冰片和硼砂以外的所述原料药材混合加水煎煮两次，第一次加混合后质量的5倍量的水煎煮1小时，第二次加6倍量的水煎煮45分钟，滤过，合并滤液，将合并后的滤液高速离心，取上清液，并减压减压浓缩至65℃，-0.07MPa时相对密度为1.10，趁热加入硼砂，搅拌使溶解，得到的浓缩液备用；
第二步、取冰片，加2倍量的乙醇，搅拌使溶解，加聚山梨酯-803g，搅拌均匀得到冰片溶液；
第三步、将所述冰片溶液加入所述浓缩液中，加苯甲酸钠5g，搅拌溶解，加水调整，总量至1000ml，混匀，使用高密度聚乙烯瓶进行分装，每瓶装100ml、250ml或1000ml。
实施例2
配方：板蓝根350g、黄芩200g、石膏200g、桔梗200g、紫菀200g、北豆根100g、硼砂50g和冰片10g。
制备过程：第一步、将除冰片和硼砂以外的所述原料药材混合加水煎煮两次，第一次加混合后质量的12倍量的水煎煮2小时，第二次加9倍量的水煎煮1小时，滤过，合并滤液，将合并后的滤液高速离心，取上清液，并减压减压浓缩至75℃，-0.08MPa时相对密度为1.20，趁热加入硼砂，搅拌使溶解，得到的浓缩液备用；
第二步、取冰片，加5倍量的乙醇，搅拌使溶解，加聚山梨酯-805g，搅拌均匀得到冰片溶液；
第三步、将所述冰片溶液加入所述浓缩液中，加苯甲酸钠6g，搅拌溶解，加水调整，总量至1000ml，混匀，使用高密度聚乙烯瓶进行分装，每瓶装100ml、250ml或1000ml。
实施例3
配方：板蓝根300g、黄芩120g、石膏150g、桔梗120g、紫菀120g、北豆根80g、硼砂30g和冰片5g。
制备过程：第一步、将除冰片和硼砂以外的所述原料药材混合加水煎煮两次，第一次加混合后质量的10倍量的水煎煮2小时，第二次加8倍量的水煎煮1小时，滤过，合并滤液，将合并后的滤液高速离心，取上清液，并减压减压浓缩至60℃，-0.08MPa时相对密度为1.15，趁热加入硼砂，搅拌使溶解，得到的浓缩液备用；
第二步、取冰片，加4倍量的乙醇，搅拌使溶解，加聚山梨酯-803g搅拌均匀得到冰片溶液；
第三步、将所述冰片溶液加入所述浓缩液中，加苯甲酸钠5g，搅拌溶解，加水调整，总量至1000ml，混匀，使用高密度聚乙烯瓶进行分装，每瓶装100ml、250ml或1000ml。
实施例4
配方：板蓝根300g、黄芩120g、石膏150g、桔梗120g、紫菀120g、北豆根80g、硼砂30g、冰片5g、漆大姑120g、一扫光100g、黑面叶30g、细叶桉叶80g、水珠草30g和山枝根40g。
制备过程：第一步、将除冰片和硼砂以外的所述原料药材混合加水煎煮两次，第一次加混合后质量的10倍量的水煎煮2小时，第二次加8倍量的水煎煮1小时，滤过，合并滤液，将合并后的滤液高速离心，取上清液，并减压减压浓缩至60℃，-0.08MPa时相对密度为1.15，趁热加入硼砂，搅拌使溶解，得到的浓缩液备用；
第二步、取冰片，加4倍量的乙醇，搅拌使溶解，加聚山梨酯-803g搅拌均匀得到冰片溶液；
第三步、将所述冰片溶液加入所述浓缩液中，加苯甲酸钠5g，搅拌溶解，加水调整，总量至1000ml，混匀，使用高密度聚乙烯瓶进行分装，每瓶装100ml、250ml或1000ml。
一、本发明药物的稳定性试验
试验样品:本发明的实施例1得到的合剂。
试验方法
①光照试验：取实施例1得到的合剂置于光橱中，调节照度为4500±500lux，放置10天。分别于0天、5天和10天取样，按稳定性重点考察项目检测。
②加速试验：取实施例1得到的合剂置于恒温恒湿箱中，设定温度为40℃、相对湿度为75％的条件下放置6个月，试验期间第0天、1个月、2个月、3个月和6个月末各取样一次，按稳定性重点考察项目进行检测。
③长期试验：取实施例1得到的合剂，室温自然放置条件下放置24个月，分别于第0天、3个月、6个月、9个月、第12个月、第18个月和24个月末各取样一次，按稳定性重点考察项目进行检测。
试验结论
光照试验结果显示，本品按口服液体药用聚酯瓶包装，置于光橱中，调节照度为4500±500lux，放置10天，其外观性状、pH值、相对密度、装量差异、鉴别、含量等主要质量指标均无明显变化，质量稳定，说明采用此种包装形式对光稳定。加速试验结果表明，本品按口服液体药用聚酯瓶包装，在温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％条件下放置6个月，其外观性状、pH值、相对密度、装量差异、鉴别、含量等主要质量指标均无明显变化，质量稳定。长期试验结果表明，本品按上述包装，在室温自然放置条件下(温度25℃±2℃，相对湿度60％±10％)，放置24个月，其外观性状、pH值、相对密度、装量差异、鉴别、含量等主要质量指标均无明显变化，质量稳定。以上初步稳定性试验结果表明，本发明在加温加速放置6个月、室温自然条件放置24个月质量稳定。本发明有效期为24个月。本品贮藏条件确定为密封，阴凉处保存。
二、本发明药物的安全性试验
(1)本发明药物对鼠的经口急性毒性试验
试验：将8只ICR小鼠(雌、雄各半)每组4只，重复2次，禁食12h后灌胃给药。取实施例4得到的合剂，灌胃给药1次，灌胃给药体积0.2mL/只(相当于原生药10mg/Kg)。连续观察7d，结果小鼠全部存活，未能测出该受试物LD50值，提示该受试物毒性很低，依据《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》改用最大耐受量给药。
最大耐受量的测定：ICR小鼠40只，随机分成2组，即阴性对照组和染毒组(试验组)，每组20只，雌雄各半，试验前禁食不禁水12h。试验组每只小鼠按10g/kgb.w.灌胃给予实施例4得到的合剂1次，灌胃体积为0.2mL/只,对照组给于等体积生理盐水水灌胃。给药后4h内连续观察，之后每天上下午各观察1次，连续观察7d。观察动物精神状态、毛色、自主活动、呼吸、饮食、二便、口鼻分泌物等一般状态，并详细记录动物的中毒表现和特点，毒性反应出现和消失的时间、死亡时间，观察期结束后将所有存活小鼠脱臼处死，进行眼观病理学检查。
结果证明：ICR小鼠在给予10g/kgb.w.剂量的合剂经口染毒后的7d内，所有小鼠均存活，且精神、自主活动、采食、饮水、排便等正常，未出现中毒反应。观察期结束后处死存活小鼠，眼观病理学检查均未发现明显可见的病理变化。结果表明，本发明的合剂小鼠经口染毒，LD50大于10g/kg。根据WTO有关外源性化学物(药物)急性毒性分级标准进行评价，试验结果表明本发明合剂属实际无毒。
(2)本发明药物对靶动物鸡安全试验
受试药物：实施例3得到的合剂，每瓶100ml，每1ml相当于原生药0.93g。
试剂：生化试剂检测试剂盒均购自中生北控生物科技股份有限公司；其他相关化学试剂均为国产分析纯。
试验动物：1日龄新苏绿壳蛋鸡公雏，购自中国农业科学院家禽研究所。试验前按常规饲养，喂不含任何药物的全价雏鸡饲料，自由采食及饮水；5日龄断喙，7日龄用新城疫LaSota苗滴鼻点眼，1羽份/只，饲养至10日龄用于试验。
试验周期：试验从2015年1月7日至1月27日，试验周期为21天。
试验方法：取10日龄健康雏公鸡120只，称重后随机分成4组，分别为试验1组1倍(即2.5ml/L混饮)、试验2组3倍(即7.5ml/L混饮)、试验3组5倍(即12.5ml/L混饮)合剂推荐剂量的3个给药组和试验4组空白对照组(不给药组)。各给药组分别按相应剂量混饮给予实施例3得到的合剂，连续5d，自由采食及饮水。给药后每天观察雏鸡的精神、食欲、饮水、排便、运动和毒副反应，连续观察12天，试验结束称重，统计各组的日均增重、日均采食量、料重比；并采血进行血液学(红细胞数、白细胞总数和白细胞分类、总蛋白、白蛋白等)和血清生化(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、血清总蛋白、血清白蛋白、血清球蛋白、白球比、肌酐、尿素氮、血糖)指标的检测；剖检观察心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、法氏囊等器官的组织病理变化和分别称量(心、肝、脾、胃、肠、法氏囊)统计脏器指数(脏器湿重/活体重×100)。
数据处理：数据以
表示，用SPSS 17.0应用软件进行组间数据的显著性检验。采用t检验比较各给药组与对照组间日均增重、料肉比、血液学和血液生化学等各项指标的显著性差异。
结果与分析
①一般临床观察：整个试验期间，空白照组、合剂1倍推荐剂量组、3倍推荐剂量组、5倍推荐剂量组所有试验鸡健康生长，各试验组鸡均没有发生疾病和死亡，且精神、运动、食欲、饮水等均未见异常。
②生长性能：经给药后12天至试验观察结束称重、各组日均增重、日均采食量、料重比数据统计结果显示：合剂5倍剂量组、3倍剂量组和1倍剂量组的日均增重和日均采食量均略低于空白对照组，且料重比均低于空白对照组的2.67。但数据统计分析显示：合剂5倍剂量组、3倍剂量组和1倍剂量组与空白对照组相比，日均采食量、日均增重、料重比均无显著性差异(P>0.05)，详细结果见表1。
表1合剂对鸡体重变化和饲料报酬的影响(n＝30)
③合剂对鸡血液常规指标的影响
血液学常规指标检测结果经统计分析，结果显示：与空白对照组相比，3个给药剂量组鸡的血液学参数均无显著性差异(p>0.05)，表明合剂对靶动物鸡的血常规指标无不良影响，详细结果见表2。
表2各组试验鸡的血液常规指标(n＝10)
④合剂对鸡血液生化指标的影响
4组鸡给药后12d血液生化学检测结果见表3。由表3可知，与对照组相比，合剂各剂量组试验鸡的血液生化指标均无显著性差异(P>0.05)，且均在正常范围，表明合剂对靶动物鸡的肝功能、脂代谢、蛋白代谢、糖代谢均无不良影响。
表3各组试验鸡的血液生化指标(n＝10)
⑤合剂对鸡的脏器系数的影响
经给药后12天至试验结束，每组随机抽取10只鸡，称重、扑杀，剖检观察内脏器官心、肝、脾、胃、肠、法氏囊等组织病理变化和脏器指数统计分析。结果显示：合剂1倍剂量组、3倍剂量组、5倍剂量组和空白对照组鸡的内脏器官均未发现肉眼病理变化；与空白对照组相比，各剂量组试验鸡的心、肝、脾、胃、肠和法氏囊指数均无显著差异(P＞0.05)。
表4各组试验鸡的脏器系数(n＝10)
| 空白对照组1倍剂量组3倍剂量组 | 5倍剂量组 |
| 心脏指数0.86±0.120.83±0.090.86±0.12 | 0.88±0.11 |
| 肝脏指数3.12±0.263.26±0.313.25±0.47 | 3.20±0.38 |
| 脾脏指数0.16±0.040.19±0.040.18±0.05 | 0.18±0.02 |
| 胃指数0.75±0.050.74±0.090.78±0.06 | 0.83±0.08 |
| 肠指数6.80±0.977.06±0.907.53±1.24 | 6.80±1.02 |
| 法氏囊指数0.49±0.150.54±0.140.58±0.15 | 0.54±0.13 |
总结：
本次试验结果显示，本发明合剂即使给予5倍推荐剂量即12.5ml/L和3倍推荐剂量即7.5ml/L的药液混饮，各给药组鸡的一切临床症状均正常，日均增重、日均采食量、料重比、各脏器系数及血液学、血液生化学各项指标等参数与空白对照组鸡的相应指标参数均显著性差异(P＞0.05)。表明合剂即使按12.5ml/L混饮给药，连用5天，亦不会给雏鸡造成毒副作用。通过料/重可以看出，合剂连用5天对雏鸡还有一定的促生长，降低料重比作用。本发明合剂按2.5ml/L、7.5ml/L、12.5ml/L给雏鸡混饮，未引起试验雏鸡发病或死亡；对精神、运动及饮水无不良影响；对雏鸡的采食、无明显影响；对血象、血清生化指标及心、肝、胃、肠、法氏囊等脏器指数无不良影响。试验结果提示，本发明的药物合剂对雏鸡具有较高的临床用药安全性。
三、本发明的药物主要药效学试验
受试药物：实施例3得到的合剂，规格：250mL/瓶(含生药量0.925g/ml)。
对照药物：柏麻口服液，500ml/瓶(含生药量1g/ml)，批号：20140802，江苏牧香源动物保健品有限公司生产。
种毒：IBV JS/2010/12株，由扬州大学兽医学院预防兽医学国家重点学科开放实验室，吴艳涛教授提供。
实验动物：昆明小鼠，体重18-22g，150只，雌雄各半。实验室环境：室温：22～24℃，相对湿度：60％-70％。由青岛市实验动物和动物实验中心提供，生产许可证号：SCXK(鲁)2014 0001。10日龄SPF鸡胚，由国药集团威克公司提供。
实验方法
对二甲苯致小鼠耳廓水肿的影响：昆明小鼠50只，雌雄各半，分为5组，即合剂高(9.25g/kg b.w.)、中(4.625g/kg b.w.)、低剂量(2.3125g/kg b.w.)组，柏麻口服液对照组(20g/kg b.w.)，模型对照组(造模，给予同体积生理盐水)，每组10只。按试验剂量灌胃给药，灌胃体积0.4ml/只，连续3d，末次给药后30min，各组动物以微量加样器在右耳均匀涂布二甲苯0.02mL/只致炎，左耳不作任何处理。4h后，将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下双耳，用电动打耳器在同一部位打下圆耳片，用分析天平称重。以左右耳片重量之差为肿胀度，并按下列公式计算肿胀率。将对照组与给药组的肿胀程度进行统计学处理。肿胀率(％)＝(右耳片重－左耳片重)/左耳片重×100％模型判定标准：右耳肿胀明显，且与左耳片重比较差异显著，则表明造模成功。
止咳作用(氨水引咳法)：将50只小鼠随机分为5组，即合剂高(18.5g/kg b.w.)、中(9.25g/kg b.w.)、低剂量(4.625g/kg b.w.)组，柏麻口服液对照组(20g/kg b.w.)，模型对照组(造模，给予同体积生理盐水)。灌胃体积0.4ml/只，连续给药3d，末次给药后1h进行止咳实验。选用500ml的玻璃烧杯作为雾化罩。实验时先在雾化器中加入2mL(经预试确定较优造模用量)氨水(需要每次更换)雾化30s，使雾化的氨水充满雾化罩，然后将试验小鼠放入雾化罩内，分别观察记录自放入雾化罩起2min内小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数。模型判定标准：小鼠腹肌收缩或缩胸，同时张大嘴。
祛痰试验：酚红祛痰法。取50只小鼠雌雄各半，体重20g左右，随机分为5组，即合剂高(18.5g/kg b.w.)、中(9.25g/kg b.w.)、低剂量(4.625g/kg b.w.)组，柏麻口服液对照组(20g/kg b.w.)，模型对照组(造模，给予同体积生理盐水)。各组按照0.4ml/20g体重灌胃给药，每日1次，连续给药3d，末次给药10min后各组动物按0.5mg/10g体重(使用剂量经预试确定)灌胃氯化铵溶液，30min后各组动物腹腔注射5％酚红生理盐水溶液0.15ml/10g体重，注射酚红0.5h后处死动物，稍许等待使小鼠体内血液凝固，以剪开颈部皮肤无明显出血(以免血液中酚红混入灌洗液)分离气管，放置在0.7ml 5％NaHCO3溶液中，放置一定时间离心处理，得到上清液，用分光光度计，波长546nm测清洗液中的OD值。并根据酚红的标准曲线计算酚红含量(ug·mL-1)，记录结果并进行统计学处理。酚红标准曲线制作：参照药理学试验方法。判定标准：与造模组相比，受试药使小鼠气管酚红排泄量增加，即通过促进小鼠气管液体分泌而稀释痰液，起到祛痰作用。
抗病毒试验
取11日龄胚224枚，随机分成6组，具体分组与处理方法见表5。
攻毒后每天照蛋2次，弃24h内死亡的鸡胚，连续观察8d。记录、观察各组鸡胚死亡数、死亡时间；收集各死亡鸡胚尿囊液1mL，-70℃冰箱保存；并观察死亡鸡胚是否存在发育受阻、胚体萎缩(成小丸形)、羊膜增厚、卵黄囊缩小，尿囊液增多等特征性变化。观察期结束，统计各组存活鸡胚数；所有存活鸡胚4℃冰箱过夜冻死后，各胚收集尿囊液1mL进行IBV荧光定量RT-PCR测定(测定方法参见实验临床试验报告)；并观察测量各胚发育受阻等病变、胚重、胚长及胚发育正常保护率。
结果
①合剂对二甲苯致小鼠耳廓水肿的影响结果见表6(x±SD，n＝10)
注：同列上标字母不同者表示差异显著(P＜0.05)。
由表6可知，与模型对照组相比较，合剂高、中剂量组及柏麻口服液组都能使小鼠的致炎肿胀度减小，且差异显著(P＜0.05)。
②止咳效果见表7(x±SD，n＝10)
注：同列上标字母不同者表示差异显著(P＜0.05)。
由表7可知，与模型对照组相比较，合剂高、中剂量组及柏麻口服液组对小鼠都能起到止咳效果，且差异显著(P＜0.05)。
③祛痰效果见表8(x±SD，n＝10)
注：同列上标字母不同者表示差异显著(P＜0.05)。
由表8可知，与模型对照组相比较，合剂高、中剂量组及柏麻口服液组对小鼠都能起到祛痰效果，且差异显著(P＜0.05)。
④抗病毒效果：所有SPF鸡胚经尿囊腔注射给药和接种病毒尿囊液后，除部分组在24h内死亡1-2个胚外，其余胚均存活至8d观察期结束。将存活鸡胚数4℃冰箱过夜冻死后，经收集尿囊液载毒量测定，各组胚体发育受阻情况、受阻胚数、胚重、胚长及发育正常保护率观测统计。结果显示：1组：阴性对照组所有胚都存活，发育正常，胚重20.0±2.26g，胚长12.1±0.50；2组：阳性对照组所有存活胚均出现不同程度的发育受阻卷曲、胚体萎缩、羊膜增厚、卵黄囊缩小和表皮水肿等病变，胚重11.1±2.53g，胚长9.24±1.03极显著低于阴性对照组(P＜0.01)；而各给药组虽然均有4-8枚存活胚出现不同程度的发育受阻等病变，但病变程度较轻，且都约有50％以上的胚发育正常保护率，且各组的胚生和胚长均极显著或显著高于阳性对照组(P＜0.01或P＜0.05)。另外，除合剂低剂量先给药组(6-1组)和阳性药物先给药组(3-1组)的尿囊液载毒量与阳性对照组无显著差异外，其余无论先后或同时给药组的尿囊液载毒量均极显著或显著低于阳性对照组(P＜0.01或P＜0.05)。表明合剂和阳性药物在鸡胚内均能抑制IBV的复制增殖，且合剂高、中剂量组显著优于其低剂量组和阳性药物(P＜0.05)，尤其是攻毒同时或攻毒后给药的作用效果更好。
综上所述，本发明合剂可明显抑制二甲苯引起的小鼠耳肿、氨水引起的小鼠咳嗽，以及促进小鼠气管中酚红的排泌；对SPF鸡胚IBV的复制增殖具有显著的抑制作用，从而显著降低IBV感染所造成的鸡胚发育受阻。说明本发明合剂主具有良好的抗炎、止咳、祛痰及抗病毒作用。
四、本发明的临床试验
受试药物：实施例2、3、4得到的合剂，每瓶100ml，每1ml相当于原生药0.93g。
阳性对照药柏麻口服液，每瓶500ml，批号：20140802(见附照片1)，江苏牧香源动物保健品有限公司出品。
试验动物：1日龄SPF来航鸡，购自亁元浩生物有限公司南京生物药厂，实验动物生产许可证号：SCXK(苏)2013-0009，合格证编号：201500953。SPF鸡胚，购自北京梅里亚生物科技有限公司。
种毒：IBV－M41标准株，购于中国兽医药品监察，采用Reed-Muench两氏法测得其鸡胚半数感染量为10-6.5(EID50＝10-6.5/0.1mL)，具体测试情况如下：
将-70℃保存的病毒液接种SPF鸡胚尿囊腔，37℃孵化48h后收集尿囊液备用。取上述尿囊液适量作10倍系列稀释，取10-5、10-6、10-7、10-8、10-9五个稀释度接种鸡胚，0.1ml/胚接种病毒稀释液，各稀释度接种5枚，接种鸡胚后7d收取尿囊液，通过RT-PCR检测病毒滴度，Reed-Muench两氏法测得鸡胚半数感染量。测得的具体感染情况见表9。计算公式如下:
LogEID50＝高于50％的病毒稀释度的对数+距离比例×稀释系数的对数
距离比例＝(高于50％-50％)/(高于50％-低于50％)
表9各稀释度鸡胚感染情况
计算结果：距离比例＝(87.5％-50％)/(87.5％-42.8％)＝0.507
LogEID50＝-6+0.507×(-1)＝-6.507
试验周期试验从2015年1月25日至2月25日，试验周期为1个月。
试验方法
购回1日龄SPF来航鸡210只，于生物屏障系统隔离器内饲养，5日龄断喙，饲养致10日龄，称重选取体重为50-65g雏鸡180只，随机分为6组，分别于P3实验室动物攻毒试验标准实验动物房内饲养，具体分组与处理方法见表10。
注：攻毒剂量确定为105EID50/0.1mL，是依据前期剂量筛选试验中采用104EID50/0.1mL攻毒后，所有试验鸡只表现典型临床症状的发病，没有出现死亡等情况。
攻毒24h后，每天2次观察，连续观察10d。记录各组鸡的发病情况、临床症状，如有否精神沉郁，食欲减损或废绝，畏寒怕冷，羽毛松乱，垂翅呆立，羞明流泪，鼻黏膜肿胀，流清涕，呼吸困难，伸头直项，气促喘粗，咳嗽喷嚏，气管啰音，白色或水样下痢等症状的出现，记录出现症状的鸡只数、时间以及症状消失时间，按表11临床症状评分标准统计各组鸡每天的症状得分。表11
统计各组鸡的死亡情况，病死鸡及时剖检，观察是否有鸡传染性支气管炎病的典型病变，并用棉拭子采集咽喉或气管粘液，RT-PCR检测是否有鸡传染性支气管炎病毒。
于攻毒后第6d，每组随机抽10只鸡采集泄殖腔棉拭子，分别置于装有1ml灭菌PBS的指形管中，进行荧光定量PCR测定各组鸡的平均排毒量。具体检测方法如下：
1)Trizol法提取RNA
(1)样品1000rpm离心10min，取300μl上清于DEPC水处理的指形管中，加500μlTrizol(TAKARA RNAiso Plus NO.9109)，反复颠倒6-10次混匀，室温静置5min。
(2)加入与样品等体积的三氯甲烷300μl，剧烈混匀15s，静置5min，12000rpm离心10min。
(3)取上清500μl于新的指形管中加入等体积的异丙醇，反复颠倒6-10次充分混匀，-20℃沉淀10-15min，12000rpm离心10min。
(4)弃上清，加800μl75％的DEPC乙醇，12000rpm离心10min，弃上清。
(5)晾干，加入反转录体系，反转录体系见表12：
(6)42℃反转录1h，70℃灭火10min。
表12：反转录体系
| DEPC水 | 4.75μl |
| M-MLV(TAKARA NO.2641A.) | 0.5μl |
| M-MLV Buffer | 2μl |
| RNA inhibitor(全式金AI101) | 0.25μl |
| oligodT(TAKARA) | 1μl |
| dNTP(全式金AP301) | 2μl |
2)real-time RT-PCR检测病毒滴度
(1)引物和探针设计检测IBV的引物及探针序列见表13。引物由金斯瑞生物科技有限公司合成。
表13：RCR引物及TaqMan探针
3)绝对定量PCR检测IBV病毒滴度
将IBV阳性重组质粒进行10倍梯度稀释，取103、104、105、106、107copies/2μl用于标准曲线的绘制。反应体系按FastStart Essent ial DNA Probes Master试剂盒说明书进行，反应体系见表14。反应条件为：95℃预变性10min；95℃变性15s，60℃退火30s，共40个循环，荧光信号采集在每个退火步骤之后，并设阴性对照。反应结束后确认real-t ime PCR扩增曲线，并绘制标准曲线，采用LightCycler_Nano自动分析软件进行实验数据分析。
表14：real-t ime PCR反应体系如下
| H2O | 6μl |
| 2×Mix | 10μl |
| 上游引物F | 0.8μl |
| 下游引物R | 0.8μl |
| 探针Probe | 0.4μl |
| cDNA | 2μl |
观察期结束后存活鸡分别称重，统计各组的日均增重、日均采食量和料重比，最后扑杀所有存活鸡，剖检观察病理变化，并按表15病理变化评分标准统计各组鸡的病变得分。表15
最后依据各组鸡的死亡率、发病症状得分、病理变化得分、第6d平均排毒量，并结合日均增重、日均采食量和料重比等指标，综合评价试药疗效。
数据统计
数据以
表示，用SPSS 17.0应用软件进行组间数据的显著性检验，用卡方检验比较各组发病率、死亡率、治愈率、有效率等差异性。
结果
攻毒后发病情况、临床症状、症状分值和死亡数
所有试验攻毒鸡只24h后主要表现为精神沉郁，喜卧，羽毛粗乱，闭眼昏睡，废食，伸颈、张口呼吸、啰音、口腔有粘液、咳嗽；部分雏鸡36h后出现拉白色或水样稀便，呼吸困难，饮食废绝，突然死亡。剖检攻毒病死鸡，可见鼻腔、鼻窦及喉头粘膜充血，鼻腔中有粘稠分泌物；气管环出血，管腔中有黄色或黄褐色粘稠分泌物；肺水肿、充血、出血；少数鸡只肾脏肿胀、充血呈花斑肾等，且经RT-PCR检测IBV均为阳性。10日龄SPF雏鸡采用IBV-M41株105EID50/0.1mL，滴鼻点眼0.1mL/只攻毒，能引起攻毒雏鸡100％发病，且传支阳性对照组死亡率达到43.3％，而阴性对照组(1组)的发病率和死亡率均为0，表明本次人工攻毒发病造模成功。攻毒及用药治疗后每天各组的鸡只发病数、死亡数及临床症状分值的详细情况见表16。表16
注：症状平均分是为了观察药物的治疗作用，因此是从用药后至第10天的症状分平均值，即D5-D10症状分之和/6。
RT-PCR排毒量测定结果
于攻毒后6d(即用药治疗结束后2d)，每组随机抽取10只鸡采集泄殖腔棉拭子进行荧光定量RT-PCR测定的各组鸡平均排毒量详细结果见表17。从表17可以看出，实施例2组、实施例3组、实施例4组和阳性药物柏麻口服液对照组鸡泄殖腔排毒量极显著低于传支阳性对照组鸡的排毒量(t检验，P<0.01)，表明实施例2组、实施例3组、实施例4组的合剂对攻毒鸡体内IBV的复制增殖有显著抑制作用。表17
注：同列数据上标字母不同且相邻者差异显著(P<0.05)，相间者差异极显著(P<0.01)。
治疗效果
综合临床发病症状、存活鸡只扑杀剖检病理观察结果，从上述表中可以看出，2组攻毒10d后总计有效率为40.0％、显效率为23.3％、治愈率仅为13.3％(即自行耐过康复)，极显著或显著低于4组、5组、6组；而2组的死亡率又高达43.3％，亦极显著高于4组、5组、6组。说明实施例2组、实施例3组和实施例4组的合剂对鸡传染性支气管炎病的治疗效果显著优于阳性药物。详细结果见表18。
表18试验药物的治疗情况 n＝30
生长性能变化
至试验观察期结束，试验2组、3组、4组、5组和6组的体重与日均增重均极显著地低于阴性对照组(P<0.05)，而料重比则显著高于阴性对照组(P<0.05)，表明人工攻毒引发鸡传染性支气管炎病对雏鸡的采食量、增重及料重比等生长性能有极大的负面影响，这与临床观察的结果相一致。其中3组、4组、5组和6组的日均增重在3.06-3.30g之间，显著低于1组的日均增重7.96g(P<0.05)，但又显著高于2组的日均增重1.82g(P<0.05)。表明实施例2组、实施例3组、实施例4组的合剂能有效地降低鸡传染性支气管炎病对雏鸡生长性能的负面影响。表19
注：同行数据上标字母不同且相邻者差异显著(P<0.05)，相间者差异极显著(P<0.01)。
分析
采用IBV-M41株105EID50/0.1mL，滴鼻点眼0.1mL/只给10日龄SPF雏鸡攻毒，能引起攻毒雏鸡100％发病，且传支阳性对照组死亡率达到43.3％，而阴性对照组的发病率和死亡率均为0，表明本次人工攻毒造模成功。
综合整个治疗试验观察期的临床症状分值统计结果和观察结束时存活鸡扑杀病理分值统计结果显示，实施例2组、实施例3组、实施例4组的治愈率显著高于阳性药物对照组，且极显著高于传支阳性对照组，总有效率亦显著高于传支阳性对照组。另外从用药治疗结束后2d存活鸡泄殖腔排毒量测定结果显示，实施例2组、实施例3组、实施例4组的排毒量极显著低于传支阳性对照组(P<0.01)。表明实施例2组、实施例3组、实施例4组的合剂能有效治疗鸡传染性支气管炎病，且效果明显优于阳性药物组。
从试验鸡的生产性能来分析比较，可以看出鸡传染性支气管炎病对雏鸡的生产性能具有十分严重的危害性，不仅使发病鸡的采食量显著下降，而且几乎停止生长；实施例2组、实施例3组、实施例4组的合剂虽不能明显增加发病鸡的采食量，但却能明显提高日均增重。
结论
合剂按2.5mL/L混饮，连续3天，均能有效治疗鸡传染性支气管炎病，明显提高日均增重。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种治疗鸡传染性支气管炎的合剂，其特征在于，所述合剂由以下重量份数的原料药材制成：板蓝根200-350重量份、黄芩100-200重量份、石膏100-200重量份、桔梗100-200重量份、紫菀100-200重量份、北豆根50-100重量份、硼砂20-50重量份和冰片1-10重量份。
2.根据权利要求1所述的治疗鸡传染性支气管炎的合剂，其特征在于，所述合剂由以下重量份数的原料药材制成：板蓝根300重量份、黄芩120重量份、石膏150重量份、桔梗120重量份、紫菀120重量份、北豆根80重量份、硼砂30重量份和冰片5重量份。
3.一种治疗鸡传染性支气管炎的合剂，其特征在于，所述合剂由以下重量份数的原料药材制成：板蓝根200-350重量份、黄芩100-200重量份、石膏100-200重量份、桔梗100-200重量份、紫菀100-200重量份、北豆根50-100重量份、硼砂20-50重量份、冰片1-10重量份、漆大姑100-150重量份、一扫光80-120重量份、黑面叶20-50重量份、细叶桉叶50-100重量份、水珠草20-40重量份和山枝根30-50重量份。
4.根据权利要求3所述的治疗鸡传染性支气管炎的合剂，其特征在于，所述合剂由以下重量份数的原料药材制成：板蓝根300重量份、黄芩120重量份、石膏150重量份、桔梗120重量份、紫菀120重量份、北豆根80重量份、硼砂30重量份、冰片5重量份、漆大姑120重量份、一扫光100重量份、黑面叶30重量份、细叶桉叶80重量份、水珠草30重量份和山枝根40重量份。
5.根据权利要求1至4任一项所述的治疗鸡传染性支气管炎的合剂，其特征在于，所述合剂的制备方法包括以下步骤：
第一步、将除冰片和硼砂以外的所述原料药材混合加水煎煮两次，第一次加混合后质量的5-12倍量的水煎煮1-2小时，第二次加6-9倍量的水煎煮45分钟-1小时，滤过，合并滤液，将合并后的滤液高速离心，取上清液，并减压浓缩至65～75℃，-0.07～-0.08MPa时相对密度为1.10～1.20，趁热加入硼砂，搅拌使溶解，得到的浓缩液备用；
第二步、取冰片，加2-5倍量的乙醇，搅拌使溶解，加聚山梨酯-801-5重量份，搅拌均匀得到冰片溶液；
第三步、将所述冰片溶液加入所述浓缩液中，加苯甲酸钠3-6重量份，搅拌溶解，加水调整，总量至1000ml，混匀，使用高密度聚乙烯瓶进行分装，每瓶装100ml、250ml或1000ml。
6.一种权利要求1至5任一项所述的治疗鸡传染性支气管炎的合剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
第一步、将除冰片和硼砂以外的所述原料药材混合加水煎煮两次，第一次加混合后质量的5-12倍量的水煎煮1-2小时，第二次加6-9倍量的水煎煮45分钟-1小时，滤过，合并滤液，将合并后的滤液高速离心，取上清液，并减压浓缩至65～75℃，-0.07～-0.08MPa时相对密度为1.10～1.20，趁热加入硼砂，搅拌使溶解，得到的浓缩液备用；
第二步、取冰片，加2-5倍量的乙醇，搅拌使溶解，加聚山梨酯-801-5重量份，搅拌均匀得到冰片溶液；
第三步、将所述冰片溶液加入所述浓缩液中，加苯甲酸钠3-6重量份，搅拌溶解，加水调整，总量至1000ml，混匀，使用高密度聚乙烯瓶进行分装，每瓶装100ml、250ml或1000ml。
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