CN105408213B - 杀菌方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及使用过乙酸系杀菌组成液的容器杀菌方法。杀菌方法包括,将在循环槽(1)中调节的含有过乙酸、过氧化氢、乙酸和过氧化氢酶的杀菌组成液通过加热装置(3)加热后,供给至杀菌装置(4),并将用于杀菌后的杀菌组成液回收至循环槽(1)。从用于杀菌后直到供给至加热装置的循环路径内向杀菌组成液中追加过氧化氢酶。由此,杀菌方法可以通过抑制过氧化氢酶失活来保持杀菌组成液的杀菌能力,并且可以在不冷却的情况下循环使用杀菌组成液,由此降低热能并获得更好的经济性。
Description
技术领域
本发明涉及通过使用过乙酸系杀菌组成液将容器杀菌的方法。更具体地,本发明涉及能够以循环方式有效使用过乙酸系杀菌组成液的杀菌方法。
背景技术
迄今为止,过乙酸系杀菌剂已广泛用于将食品容器等杀菌或灭菌(专利文献1)。过乙酸系杀菌剂以平衡状态含有过乙酸、乙酸和过氧化氢。然而,如果过氧化氢的浓度过高,则过氧化氢趋于残留在容器中,因此,必须在杀菌后用无菌水清洗至充分的程度。因此,还提出通过使用通过将能够分解过氧化氢的过氧化氢酶添加至过乙酸系杀菌剂而获得的杀菌组成液的灭菌方法(专利文献2)。
关于使用过乙酸系杀菌组成液的杀菌方法,施行回收用于杀菌的过乙酸系杀菌组成液、调节其浓度、并将杀菌组成液循环至杀菌设备以再次使用。通常,过乙酸系杀菌剂在不低于60℃的温度下显示良好的杀菌效率。因此,为了进行杀菌,以加热状态使用过乙酸系杀菌组成液。另一方面,如果过乙酸系杀菌剂或过乙酸系杀菌组成液以加热状态放置,则促进过乙酸的分解,导致过氧化氢的量增加,因此,杀菌能力降低。因此,在以循环方式使用过乙酸系杀菌组成液时,已尝试将曾在60至70℃的温度下加热以杀菌的过乙酸系杀菌组成液通过除杀菌装置以外的循环路径冷却至35℃以下(专利文献3和4)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:JP-A-8-58744
专利文献2:JP-T-2011-517946
专利文献3:JP-A-2009-291443
专利文献4:JP-A-2012-200456
发明内容
发明要解决的问题
然而,上述使过乙酸系杀菌组成液循环的方法要求加热和冷却过乙酸系杀菌组成液,因此,伴随差的热能效率和不满足经济性。此外,在加热过乙酸系杀菌组成液时,促进过乙酸的分解,导致过氧化氢的量增加。另外,添加至过乙酸系杀菌组成液的用于分解过氧化氢的过氧化氢酶在过乙酸的存在下或者在高温条件下失活。换言之,必须大量添加过氧化氢酶,从而引起诸如起沫或聚集物的产生等问题的发生。
因此,本发明的目的在于提供在抑制过氧化氢酶的活性降低的同时可以保持过乙酸系杀菌组成液的杀菌能力的以循环方式使用该过乙酸系杀菌组成液的杀菌方法。
本发明的另一个目的在于提供无需冷却而能以循环方式使用过乙酸系杀菌组成液,有助于节约热能和提供经济性优势的杀菌方法。
用于解决问题的方案
根据本发明,提供一种杀菌方法,其包括:使在循环槽中配制的含有过乙酸、过氧化氢、乙酸和过氧化氢酶的杀菌组成液通过加热装置加热、供给至杀菌装置、并且在用于杀菌后回收在循环槽中,其中,在用于杀菌后但在供给至加热装置前的循环路径内向杀菌组成液中追加过氧化氢酶。
在本发明的杀菌方法中,期望:
1.过氧化氢酶为在将所述过氧化氢酶添加至调节在50℃的温度下使得过乙酸浓度为3000ppm的过乙酸系杀菌剂后10分钟,能够分解过氧化氢的初始浓度的35%以上的过氧化氢酶;
2.从杀菌装置回收的杀菌组成液在不冷却的情况下回收在循环槽中;
3.将过氧化氢酶追加至循环槽中;和
4.循环槽中的杀菌组成液的过乙酸浓度为500-10,000ppm和过氧化氢浓度为小于500ppm。
发明的效果
在本发明的杀菌方法中,在含有过乙酸、过氧化氢、乙酸和过氧化氢酶的杀菌组成液在其中循环的循环路径除从将杀菌组成液保持在高温下的加热装置直到杀菌装置的路径以外的路径内,追加过氧化氢酶。因此,使得过氧化氢酶有效地显示其分解过氧化氢的性能,由此使得可以有效地防止过乙酸系杀菌组成液的杀菌能力的降低。
此外,在向循环路径内追加过氧化氢酶的情况下,防止过氧化氢酶失去其活性。因此,需要以减少的量添加过氧化氢酶,有助于使由过氧化氢酶的添加引起的起沫或聚集物的产生最小化,因此,需要最小程度的清洗容器从而杀菌。
此外,由于本发明的特征,即,由于作为提高杀菌组成液中的过乙酸浓度以改进杀菌能力的结果的在杀菌期间温度条件的降低,并且由于在添加至调节在50℃温度下使得过乙酸浓度为3000ppm的过乙酸系杀菌剂之后10分钟能够分解过氧化氢的初始浓度的35%以上的过氧化氢酶的使用,使得可以省略至今在循环路径内必需的冷却步骤。因此,使得可以减少伴随循环使用的热能的量,因此,提供经济性优势。
附图说明
[图1]为说明本发明的杀菌方法中的循环路径的图。
[图2]为说明本发明的杀菌方法中的另一种循环路径的图。
具体实施方式
如上所述,如果过氧化氢的浓度提高,则主要包含含有过乙酸、乙酸和过氧化氢的过乙酸系杀菌剂的过乙酸系杀菌组成液(下文中通常简称为“杀菌组成液”)显示降低的杀菌能力并导致过氧化氢趋于残留在被杀菌的材料(容器)中的问题。因此,已尝试添加过氧化氢酶以分解过氧化氢,由此控制过氧化氢浓度并且长期稳定地保持杀菌能力。另一方面,为了通过使用过乙酸系杀菌组成液来有效地进行杀菌,尽管依赖于杀菌组成液的组成,但仍期望通常在50℃以上的温度下加热杀菌组成液。因此,在至少从循环路径内的加热装置直到杀菌装置的路径内使杀菌组成液保持在高温下,并且由于在高温条件下过氧化氢酶遭受失活,因此在上述路径内追加过氧化氢酶是没有效率的。
在本发明的杀菌方法中,在杀菌组成液的循环路径内,仅在将杀菌组成液用于杀菌装置后但在将其供给至加热装置之前将过氧化氢酶追加至该路径内的杀菌组成液。这能够使得过氧化氢酶有效地发挥其活性并保持过乙酸系杀菌组成液的杀菌能力。
为了抑制添加至杀菌组成液的过氧化氢酶失活,可以尝试冷却用于杀菌之后的杀菌组成液以降低杀菌组成液的温度。然而,在此情况下,将杀菌组成液重复地加热和冷却,这在经济性方面为劣势。
因此,本发明使用具有高的过乙酸浓度的过乙酸系杀菌组成液并且采用杀菌时的低温条件,使其可以省略杀菌组成液的冷却步骤。或者如以下所述,本发明使用具有优异的耐热性和耐化学品性(耐过乙酸性)的过氧化氢酶。即,即使被添加(追加)至高温的杀菌组成液,过氧化氢酶也不失活,因此,使得可以省略冷却步骤。
(循环路径)
如图1和2所示,本发明的杀菌方法中杀菌组成液的基本循环路径包括循环槽1→加热装置3→杀菌装置4→回收槽5→循环槽1。即,将杀菌组成液通过供给泵2从循环槽1供给至加热装置3。在加热装置3中在期望的温度下加热杀菌组成液,然后供给至杀菌装置4。在杀菌装置4中,将杀菌组成液喷射在待杀菌的材料上。使用后的杀菌组成液回收在回收槽5中。杀菌组成液通过供给泵6从回收槽5返回至循环槽1。
在位于连接至上述循环路径的另外路径的配制槽10中,以以预定浓度含有过乙酸和过氧化氢的方式来配制杀菌组成液。追加杀菌组成液使得杀菌组成液在循环槽1中保持在预定的浓度。在图1和2所示的实施方式中,将配制槽10中配制的杀菌组成液通过供给泵8一次供给至缓冲槽9。从缓冲槽9,根据循环槽1内的杀菌组成液的浓度以期望的量供给杀菌组成液。此处,阀13和12分别设置在配制槽10和缓冲槽9之间以及供给泵8和循环槽1之间。
如果过氧化氢酶的追加发生在杀菌组合物用于杀菌装置4之后但在供给至加热装置3之前,则可以在任何时机追加过氧化氢酶。然而,如图1和2所示,优选将过氧化氢酶添加至循环槽1中或回收槽5中。在图1所示的实施方式中,调节过氧化氢酶的酶槽7经由阀11与循环槽1连接,且根据循环槽1内的过乙酸系杀菌组成液和过氧化氢酶的浓度将追加的过氧化氢酶适当地供给至循环槽1。在图2所示的实施方式中,酶槽7经由阀11与回收槽5连接,且将过氧化氢酶供给至回收槽5。
(过乙酸系杀菌剂(原液))
作为用于本发明的杀菌组成液的过乙酸系杀菌剂(原液),可以以任何浓度使用任何常规已知的过乙酸系杀菌剂。优选地,可以使用含有10-25重量%过乙酸、20-40重量%乙酸、15-25重量%过氧化氢和余量为水以及根据需要的稳定剂的过乙酸系杀菌剂。
作为过乙酸系杀菌剂,可以示例Oxyper 100(由Nihon Peroxide Co.制造,且含有10.2重量%过乙酸、20.6重量%乙酸和17.2重量%过氧化氢)。使用用水稀释并调节浓度的过乙酸系杀菌剂。
(过氧化氢酶)
过氧化氢酶是分解过氧化氢的酶。在本发明中,重要的是,过氧化氢酶在过乙酸系杀菌剂的酸性区域,即,pH2.6-6.0的区域中具有耐性。可允许使用来源于真菌的过氧化氢酶或者来源于细菌的过氧化氢酶。然而,具体地,期望使用来源于真菌的过氧化氢酶,并且特别地,期望使用来源于黑曲霉的过氧化氢酶。可以仅以一种或者混合在一起的多种来使用过氧化氢酶。
此外,在如上所述的本发明中,在相对高的温度条件下将过氧化氢酶添加(追加)至杀菌组成液。因此,期望过氧化氢酶具有耐热性和耐化学品性(耐过乙酸性)。具体地,期望使用在添加至调节在50℃的温度下使得过乙酸浓度为3000ppm的过乙酸系杀菌剂后10分钟能够分解过氧化氢的初始浓度的35%以上的过氧化氢酶。
作为过氧化氢酶,尽管不仅限于此,但可以使用商购可得的过氧化氢酶酶制剂,如LEONET F PLUS(由Nagase Chemtechs Co.生产)和ASKU-Super 25(由Mitsubishi GasChemicals Co.生产)。
在本发明中,对使用的过氧化氢酶没有特别的限制;即,过氧化氢酶可以为诸如溶液、粉末或者如珠等固定至水不溶性基质的形态等任意形态。
此外,商购可得的过氧化氢酶酶制剂通常包含氯化钠。因此,为了防止管道被氯化物腐蚀,期望在通过已知的脱盐方法降低其中的氯化物离子浓度的情况下使用过氧化氢酶酶制剂。
过氧化氢酶可以一次以需要的量添加(追加)至循环槽1或回收槽5的杀菌组成液。然而,优选地,以其全部的量分成多次来添加过氧化氢酶。这能使过氧化氢酶温和地分解过氧化氢,并更可靠地抑制由过氧化氢酶引起的发泡。
(杀菌组成液)
在本发明的杀菌方法中,通过将pH调节剂、水和过氧化氢酶添加至作为以平衡状态含有上述过乙酸、乙酸和过氧化氢的原液的过乙酸系杀菌剂来配制待循环的杀菌组成液。
该配制方法由以下组成:基于用水稀释后过乙酸的浓度位于下述范围内的前提,将pH调节剂添加至具有期望的过乙酸浓度的过乙酸系杀菌剂以将pH调节为位于2.6-5.0的范围内,然后,添加过氧化氢酶使得其浓度为0.1-10μg/mL,且特别是0.1-3.0μg/mL。添加pH调节剂和过氧化氢酶的顺序不必须如上所述限制。然而,通过以如上所述顺序添加它们,过氧化氢酶的活性可保持在其最大程度。
期望用于本发明的杀菌组成液为使得添加至其的过氧化氢酶促进过氧化氢的分解,从而使得过氧化氢的浓度至少在循环槽1中且期望在整个循环路径保持在小于500ppm,并且过乙酸的浓度保持在500-10,000ppm,特别是1,000-3,500ppm的范围内,因此,使得可以保持优异的杀菌能力。
本发明的过乙酸系杀菌组成液还含有乙酸。当过乙酸浓度位于上述范围内时,期望乙酸的浓度位于1,000-40,000ppm的范围内。
此外,如上所述,用于本发明的过氧化氢酶应当选择在pH为2.6-6.0的范围内发挥其活性。然而,在过乙酸系杀菌组成液中,如果pH超过5.0,则过乙酸发生分解,且其浓度降低从而显示降低的杀菌能力。
此外,期望选择在pH为3.0-6.0范围内发挥其活性从而最有效地用于分解过氧化氢的过氧化氢酶。此处,为了使过乙酸最有效地发挥其杀菌效果,期望过乙酸系杀菌组成液具有不大于4.0的pH。
从上述观点,杀菌组成液的pH保持在2.6-5.0,且特别地为3.0-4.0。这能够使得过乙酸系杀菌组成液用作杀菌剂而不损失稳定性,保持过氧化氢酶的活性,并且尽管以少量添加但显示充分程度的分解过氧化氢的作用。
在本发明中,作为用于使过乙酸系杀菌组成液的pH位于上述范围内的pH调节剂,可以使用已知的碱性组合物如氢氧化钠或氢氧化钾。
此外,为了调节循环槽1中过乙酸系杀菌组成液的浓度,由缓冲槽9供给的杀菌组成液可以为过氧化氢浓度、过乙酸浓度和pH位于上述范围内的杀菌组成液。然而,特别地,期望使用具有尽可能低的过氧化氢浓度且具有高的过乙酸浓度的杀菌组成液。
还可允许将过氧化氢酶追加至缓冲槽9使得将其与杀菌组成液一起引入循环槽1,然而,由于缓冲槽9中的杀菌组成液具有高的过乙酸浓度,所以损害过氧化氢酶的活性。此外,如果加热过乙酸系杀菌组成液,则过氧化氢的量增加。因此,过氧化氢酶必须追加至加热时的过乙酸系杀菌组成液。即,过氧化氢酶必须追加至在使用杀菌组成液后但在供给至加热装置之前的循环路径内。具体地,期望将过氧化氢酶追加至循环槽1中或者回收槽5中。
(杀菌方法)
在本发明的杀菌方法中,将上述杀菌组成液通过加热装置在40至75℃,且特别地为50至65℃的温度下加热,且供给至杀菌装置,使得施加在如容器等待杀菌的材料表面上。待杀菌的材料可以为如罐、瓶和塑料容器等各种已知的容器,以及盖。
如果杀菌组成液的温度高于上述范围,则趋于促进过乙酸的分解,此外,来源于过氧化氢酶的蛋白质凝聚从而堵塞喷嘴。另一方面,如果杀菌组成液的温度低于上述范围,则杀菌能力降低,需要延长的时间用于杀菌,且杀菌效率降低。
通过使调节在上述温度下的杀菌组成液接触5-10秒,可以获得不低于5D的杀菌水平的杀菌性能。
杀菌后,将杀菌后的材料(容器)从杀菌装置取出,并送至用无菌水清洗它们以除去残留在容器表面上的杀菌组成液的下一个清洗步骤。此处,用于本发明的杀菌方法中的杀菌组成液具有低至500ppm以下的过氧化氢浓度。因此,尽管仅进行短时间的清洗,也没有过氧化氢残留在瓶的表面上,并且不损害卫生条件。
此外,以抑制的量使用的过氧化氢酶几乎不引起来源于过氧化氢的分解的发泡,几乎不引起来源于储槽等上聚集物的粘附的装置的污染,因此,能够使得仅需要短时间的清洗的杀菌操作持续。
实施例
(杀菌组成液的组分的测量)
1.过乙酸的浓度。
在完成过氧化氢酶反应后,通过高锰酸钾-碘法进行测量。即,在具有硫酸的酸性条件下用高锰酸钾滴定样品,以测量过氧化氢的浓度。之后,添加碘化钾和淀粉指示剂,并且用硫代硫酸钠滴定样品,以测量过乙酸的浓度。
至于过氧化氢酶的反应结束时间,从将过氧化氢酶添加至杀菌组成液经过5分钟后每5分钟进行测量,且在时间经过时进行测量的同时将没有看到过氧化氢浓度降低的时刻看作反应终止,由此测量各组分的浓度。
2.过氧化氢的浓度。
存在两种过氧化氢的浓度,即,在用水稀释过乙酸系杀菌剂后但在其中添加过氧化氢酶前的浓度(由过乙酸系杀菌剂的原液浓度计算的稀释浓度),和过氧化氢酶反应完成后测量的浓度。测量方法遵照上述1中所述的过乙酸浓度的测量。
(评价方法)
1.过氧化氢的分解能力。
测量杀菌组成液配制后即刻过氧化氢的浓度(I0)和从配制开始经过10分钟后过氧化氢的浓度(I),并且计算减少比[(I0–I)/I0]×100(%/10分钟)。
2.杀菌效果。
通过使用500ml聚对苯二甲酸乙二醇酯瓶(以下称为瓶),制备蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)ATCC 9139的菌液作为样品菌。通过使用喷雾器,将样品菌均匀地喷雾在瓶的内表面,使得其浓度为106cfu/瓶,并将瓶干燥以获得评价用瓶。接着,将过氧化氢酶反应后即刻的杀菌液调节在50℃或65℃的温度下,并喷雾至评价用瓶内使得与其接触8秒。其后,用灭菌水清洗瓶的内表面。通过使用标准琼脂培养基、基于膜过滤法测量用于清洗的灭菌水的存活细菌数。由初始的细菌数和存活的细菌数,根据下式求得杀菌效果(D)。测试次数为n=3,并且将存活细菌的平均数作为存活细菌数来评价杀菌效果。
D=LOG(N0/N)
其中N0为初始细菌数,和N为存活细菌数。
如果D值不小于6D,则杀菌效果高并且评价为○,如果D值不小于5D但小于6D,则观察杀菌效果并且评价为△,如果D值小于5D,则杀菌效果低,并且评价为×。
(实施例1、3和5)
检测过氧化氢酶的追加和过氧化氢的浓度将如何影响杀菌能力。
在配制槽中用水稀释过乙酸系杀菌剂(商品名:Oxyper 100,由Nihon PeroxideCo.制造:过乙酸10.2wt%、乙酸20.6wt%、过氧化氢17.2wt%)使得过乙酸的浓度为10,000ppm,并且以0.4μg/mL的量向其中添加作为过氧化氢酶的LEONET F PLUS(由NagaseChemtechs Co.制造),从而将过氧化氢分解至0ppm,由此配制高浓度的杀菌组成液。
接着,在循环槽中用水稀释高浓度的杀菌组成液以将过乙酸的浓度调节为1500ppm,并且通过图1所示的路径来循环。
通过加热装置在50℃和65℃的两个温度下加热杀菌组成液。将在50℃下加热的杀菌组成液循环12小时和24小时,同时将在65℃下加热的杀菌组成液循环6小时。在杀菌组成液处于循环的同时过乙酸的浓度通过从缓冲槽向其中追加上述高浓度的杀菌组成液而保持在1500ppm。
上述时间经过后,将LEONET F PLUS追加至循环槽中的杀菌组成液,使得过氧化氢酶的浓度为0.4μg/mL。从追加经过10分钟后,确认过氧化氢的浓度和杀菌效果如表1所示。
(实施例2、4和6)
除了使用ASKU-Super 25(由Mitsubishi Gas Chemicals Co.制造)作为过氧化氢酶,并且以5μg/mL的量将其添加至配制槽中以外,以与实施例1、3和5相同的方式配制杀菌组成液。从追加过氧化氢酶经过10分钟后,确认过氧化氢的浓度和杀菌效果如表1所示。
(比较例1-3)
以与实施例1、3和5相同的方式配制杀菌组成液,然而,没有添加过氧化氢酶而循环。确认过氧化氢的浓度和杀菌效果如表1所示。
[表1]
(实验例1)
检测过氧化氢酶的耐热性和耐化学品性。
通过稀释过乙酸系杀菌剂(Oxyper 100)使得过乙酸的浓度为3000ppm而配制的过乙酸系杀菌剂(pH 2.67),在50℃下加热并测量其过氧化氢的浓度。接着,作为过氧化氢酶,以0.4μg/mL的量添加LEONET F PLUS或ASKU-Super 25。经过10分钟后,再次测量过氧化氢的浓度,以计算如表2所示的分解率。
[表2]
产业上的可利用性
根据本发明的杀菌方法,使得可以以循环的方式使用过乙酸系杀菌组成液,保持其杀菌能力而不需要冷却杀菌组成液,结果,抑制过氧化氢酶的活性降低,因此,节约热能。因此,本发明的杀菌方法可以有利地用于无菌地填充如聚对苯二甲酸乙二醇酯瓶和类似容器等大量生产的产品。
附图标记说明
1 循环槽,2 供给泵,3 加热装置,4 杀菌装置,5 回收槽,6 供给泵,7 酶槽,8 供给泵,9 缓冲槽,10 配制槽,11 阀,12 阀,13 阀。
Claims (3)
1.一种杀菌方法,其中,使在循环槽中配制的含有过乙酸、过氧化氢、乙酸和过氧化氢酶的杀菌组成液通过加热装置加热、供给至杀菌装置、并且在用于杀菌后回收在所述循环槽中,其中,在用于所述杀菌后但在供给至所述加热装置前的循环路径内向所述杀菌组成液中追加所述过氧化氢酶,并且从所述杀菌装置回收的所述杀菌组成液在不冷却的情况下回收在所述循环槽中,
在所述循环槽中的所述杀菌组成液中,过氧化氢酶浓度为0.1~10μg/mL、过乙酸浓度为500~10,000ppm、过氧化氢浓度小于500ppm。
2.根据权利要求1所述的杀菌方法,其中所述过氧化氢酶为在将所述过氧化氢酶添加至调节在50℃的温度下使得过乙酸浓度为3000ppm的过乙酸系杀菌剂后10分钟,能够分解所述过氧化氢的初始浓度的35%以上的过氧化氢酶。
3.根据权利要求1或2所述的杀菌方法,其中将所述过氧化氢酶追加至所述循环槽中。
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