CN105362273A

CN105362273A - 7-烷氧基防己诺林碱类化合物在制备治疗和改善抑郁症状的药物中的用途

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Publication number: CN105362273A
Application number: CN201410437058.2A
Authority: CN
Inventors: 张永鹤; 张雪琼; 盛兆福
Original assignee: Peking University
Current assignee: Peking University
Priority date: 2014-09-01
Filing date: 2014-09-01
Publication date: 2016-03-02
Anticipated expiration: 2034-09-01
Also published as: CN105362273B

Abstract

本发明提供了7-烷氧基防己诺林碱衍生物或其在药学上可接受的盐在制备GSK-3β抑制剂以及在治疗和改善抑郁症状中的新用途。具有式(I)结构化合物1-8在细胞和整体动物水平均显示了促进糖原合成激酶-3β(GSK-3β)磷酸化，进而抑制其活性的作用；动物实验结果发现，化合物1-8可通过增强5-HT_1A受体和褪黑素受体功能，抑制5-HT_2A受体功能，抑制GSK-3β活性，改善绝望、快感丧失、焦虑及睡眠障碍等抑郁症状。

Description

7-烷氧基防己诺林碱类化合物在制备治疗和改善抑郁症状的药物中的用途

技术领域

本发明涉及7-烷氧基防己诺林碱类化合物的新用途，尤其是其在制备治疗和改善抑郁症的药物中的用途，属于医药领域。

背景技术

7-烷氧基防己诺林碱类化合物(式(I)结构所述)中，粉防己碱(又称汉防己甲素，tetrandrine)、防己诺啉碱(7-去甲基粉防己碱，又称汉防己乙素，fangchinoline)、小檗胺(12-去甲基粉防己碱，商品名：升白胺，berbamine)以及5-溴粉防己碱(商品名：溴泰君，5-bromotetrandrine)的研究较多；其中，粉防己碱、防己诺林碱和小檗胺属于天然产物，而5-溴粉防己碱为半合成品。

现有技术已知，小檗胺用途包括：止痒(KR2006000127-A，KR1126592-B1)；抗骨质酥松(CN1357346-A)；抗耐氯喹疟原虫(JP2000143523-A)；抗肠出血性大肠杆菌感染(JP2000080039-A)；抑制NF-κB，治疗炎症，自身免疫性疾病及病毒性疾病(EP931544-A3，EP931544-A1，EP931544-A2)；治疗支气管哮喘、类风湿性关节炎或湿疹(JP6211661-A)；抗四型疱疹病毒(JP4099723-A)；促进头发生长、止痒去头屑(JP1061413-A，JP93029325-B)；治疗癌症放疗和化疗所引起的白细胞减少症(CN1911277-A，CN100425252-C)；抗肿瘤(WO2014048377-A1，CN2011104535721，CN2008101634386，WO2012031563-A1，CN102712654-A，EP2615092-A1，WO2012025054-A1，CN102712655-A，US2013158068-A1)；治疗白血病(WO2013026373-A1)、白内障(CN961206071，CN1181932-A)；也可用于治疗肺结核、矽肺、肿瘤、高血压、心肌缺氧缺血、心律失常(CN103012421-A)以及冠状动脉疾病(KR2007113532-A，KR817932-B1)。

小檗胺的12-O-取代衍生物具有良好的抗肿瘤活性(US2010298369-A1，US8722698-B2)。例如12-O-乙基-小檗胺具有抗白血病活性【XieJWetal.，Berbaminederivatives：Anovelclassofcompoundsforanti-leukemiaactivity.EurJMedChem，2009，44：3293-3298】；12-O-(4-乙氧基丁基)-小檗胺(EBB)为钙调素拮抗剂，具有抑制人体肿瘤细胞侵袭转移的作用(CN1810247A，CN2005100131598)。

现有技术文献报道，粉防己碱具有消炎、镇痛、抗风湿、抗肿瘤、抗矽肺、降血压、抗心率失常等广泛的药理作用。早年用于治疗风湿痛、关节痛、神经痛；亦适用于单纯性矽肺I、II、III期及各期煤矽肺的治疗；与小剂量放射合并，用于肺癌的治疗。粉防己碱可抑制肿瘤生成(CN02159424.4)；增强氟喹诺酮类药效(CN201210061015.X)；抑制PDGF诱导的肝星状细胞(HSC)的迁移(CN201110274644.6)；抗真菌生物被膜(CN201210069018.8)；与三氧化二砷联合使用，可以降低三氧化二砷毒性，增强其效果(CN200810177336.X)。现今，粉防己碱不仅有口服片剂、注射剂、气雾剂、软胶囊剂等普通剂型，还可制成眼用制剂(CN200410093862.X)。另外，将其制成脂质体、微球等新型给药系统的研究也不断出现。

5-溴粉防己碱是以粉防己碱为先导物进行结构修饰、活性筛选改造而成的一种新型的抗肿瘤药增敏剂，对荷瘤耐药肿瘤裸鼠抑瘤率达40％，在多药耐药的P388/adr细胞中对长春新碱有明显的增敏作用，体内外实验表明，5-溴粉防己碱抑制P-糖蛋白(P-glycoprotein)高度表达而逆转多药耐药，从而增强耐药细胞对抗肿瘤药物的敏感性【JinJetal.，ReversalofmultidrugresistanceofcancerthroughinhibitionofP-glycoproteinby5-bromotetrandrine.CancerChemPharmacol，2005，55(2)：179-188】。

5-氯代汉防己甲素(化合物1)、5-溴汉防己甲素、5，14-二溴汉防己甲素(化合物2)、7-丙氧基汉防己乙素(化合物6)、7-正丁氧基汉防己乙素(化合物7)、7-异丙氧基汉防己乙素(化合物8)、7-异丁氧基汉防己乙素、7-丙酰氧基汉防己乙素、7-丁酰氧基汉防己乙素等衍生物具有逆转多药耐药作用(ZL00113166.4)；汉防己甲素、5-氯汉防己甲素(化合物1)、5-溴汉防己甲素及5，14-二溴汉防己甲素(化合物2)可增强抗感染药物效应(CN200910036825.8)。

7-乙氧基-汉防己乙素(化合物3，YH-200)是由汉防己乙素7位乙氧基取代而合成的(J63179878A)。据报道，7-乙氧基汉防己乙素具有舒张WKY大鼠和自发性高血压大鼠(SHR)大鼠胸主动脉平滑肌的的作用【MatsumuraMetal.，PharmacologicAnalysisof7-O-Ethyl-fangchinoline-InducedVasodilationPropertiesinIsolatedPerfusedCommonCarotidArteriesofWistarKyotoRatsandSpontaneouslyHypertensiveRats.ChemPharmBull，1991，39(10)：2691-2695】和降低SHR大鼠血压的效应【KatoTetal.，EvaluationoftheLong-LastingAntihypertensiveActionof7-O-Ethylfangchinoline.JpnJPharmacol，1994，66：35-46】；另据报道，7-乙氧基-汉防己乙素(化合物3，YH-200)、7-丙氧基汉防己乙素(化合物6)、7-正丁氧基汉防己乙素(化合物7)及7-异丙氧基汉防己乙素(化合物8)对脑卒中自发性高血压大鼠(SPSHR)具有降压作用【KawashimaKetal.，Structureandhypotensiveactivityrelationshipsoftetrandrinederivativesinstroke-pronespontaneouslyhypertensiverats.GenPharmacol，1990，21(3)：343-347】。

已有专利公开了粉防己碱在制备用于预防、缓解和/或治疗抑郁症的新用途(高杉等，CN102274227A)，并有相关文献报道【GaoSetal.，Tetrandrineexertsantidepressant-likeeffectsinanimalmodels：Roleofbrain-derivedneurotrophicfactor.BehBrainRes，2013.238：79-85】。然而，本申请人进一步发现，粉防己碱连续灌胃(每天30mg/kg)给予小鼠14天，不仅造成肝损伤而且对小鼠的自主活动也产生明显的影响。同时还发现，粉防己碱对慢性应激抑郁模型大鼠的焦虑样行为和睡眠障碍没有改善作用，而对绝望行为(强迫游泳不动时间)和快感丧失的改善作用有效剂量与其造成肝损伤的剂量相重叠(每天30mg/kg)。

抑郁症(Depression)是一种临床常见的心境障碍性疾病，发病率逐年增加。据WHO推估，全球已超过3亿患者，目前，居疾病的第4位。据预测，到2020年有可能升为第2位。抑郁症的发病机制复杂，临床症候多样，现有西药作用单一，对抑郁症这一多因素致病的复杂性疾病在治疗上存在不足。目前临床上使用的抗抑郁药具有“延迟起效”、“有效率不高”、“不良反应”等亟待解决的“瓶颈”问题。因此，发现更适于临床治疗的抗抑郁药，成为当前的迫切需要。

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种适于临床使用的疗效好副作用低的预防、缓解和/或治疗抑郁症的药物和方法。

本发明的目的是提供一种适于临床使用的疗效好副作用低的预防、缓解和/或治疗抑郁症的化合物，所述结构如式(I)所示7-烷氧基防己诺林碱类化合物及其药学上可接受的衍生物，包括盐、酯、醚、水合物等：

其中，R₁可选自-C_nH_2n+1或乙酰基，n大于等于1；或n优选大于等于2，或n更优选自2、3、4；R₁进一步优选自乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基；

其中，R₂可选自氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基或酰基；

X₁，X₂，X₃和X₄可以相同或不同，并且各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、硝基、羟基、甲氧基；

在某一具体的实施方案中，R1为甲基时，X₁，X₂，X₃和X₄优选自氟、氯、溴、碘、硝基、羟基、甲氧基；

同时，包括C(1)和C(1’)为RR、SS、1S1’R、1R1’S构型和立体异构体。

根据本发明的目的而言，式(I)化合物不包括粉防己碱、5-甲基粉防己碱、小檗胺、12-乙酰氧基小檗胺及12-(4-氧乙基)-丁氧基小檗胺。

根据本发明的目的而言，当R₁为甲基时，式(I)化合物优选包括5-氯代-汉防己甲素(化合物1)、5，14二溴代-汉防己甲素(化合物2)；而当R₁选自-C_nH_2n+1且n选自2、3、4时，式(I)化合物优选包括7-乙氧基-汉防己乙素(化合物3)、5-溴代-7-乙氧基-汉防己乙素(化合物4)、5，14-二溴代-7-乙氧基-汉防己乙素(化合物5)、7-丙氧基-汉防己乙素(化合物6)、7-正丁氧基-汉防己乙素(化合物7)以及7-异丙氧基-汉防己乙素(化合物8)及其药学上可接受的盐。

GSK-3

GSK-3是一种丝/苏氨酸磷酸激酶，已知有α、β两种亚型。GSK-3氨基端的丝氨酸(GSK-3β的Ser9或GSK-3α的Ser21)磷酸化后，可显著抑制其活性【DajaniRetal.，Crystalstructureofglycogensynthasekinase3beta：structuralbasisforphosphate-primedsubstratespecificityandautoinhibition.Cell，2001，105(6)：721-732】。GSK-3在发育、体内代谢平衡、神经生长和分化、以及细胞凋亡过程中起关键作用。GSK-3活性的异常调节(通常指活性增强)被认为在不同的疾病的发病过程中起重要作用，如神经退行性疾病【Avila，J.etal.，Roleoftauproteininbothphysiologicalandpathologicalconditions.PhysiolRev，2004，84：361-384】，心血管疾病【JuhaszovaM.etal.，Roleofglycogensynthasekinase-3betaincardioprotection.CircRes，2009，104(11)：1240-52；MiuraT.&MikiT.GSK-3beta，atherapeutictargetforcardiomyocyteprotection.CircJ，2009，73(7)：1184-1192】，糖尿病【Eldar-Finkelman，H.Glycogensynthasekinase3：anemergingtherapeutictarget.TrendsMolMed，2002，8：126-132】及病毒性感染【Asenjo，A.etal.，ResiduesinhumanrespiratorysyncytialvirusPproteinthatareessentialforitsactivityonRNAviralsynthesis.VirusRes，2008，132：160-173】等。

GSK-3β通过修改生物钟分子的稳定性，影响昼夜节律的形成【MengQJetal.，Settingclockspeedinmammals：theCK1epsilontaumutationinmiceacceleratescircadianpacemakersbyselectivelydestabilizingPERIODproteins.Neuron，2008，58：78-88】。情感稳定剂锂剂是GSK-3β抑制剂，可以延长昼夜节律。这一效应对于心境稳定剂锂剂，可能具有重要的治疗价值【KlemfussH.，Rhythmsandthepharmacologyoflithium.PharmacolTher，1992，56：53-78】。值得关注的是，许多治疗精神病药物都具有多重机制，如选择性五羟色胺摄取抑制剂和情绪稳定剂锂剂，都可间接或直接的抑制GSK3β，而这一机制有助于这些药物的抗精神病治疗【BeaulieuJMetal.，Akt/GSK3signalingintheactionofpsychotropicdrugs.AnnuRevPharmacolToxicol，2009，49：327-347】。在谷氨酸突触水平，抑制GSK3β，可以抑制NMDA受体依赖的长时程消退能力【DewachterIetal.，GSK3beta，acentre-stagedkinaseinneuropsychiatricdisorders，modulateslongtermmemorybyinhibitoryphosphorylationatserine-9.NeurobiolDis，2009，35：193-200；PeineauSetal.，LTPInhibitsLTDinthehippocampusviaregulationofGSK3[beta].Neuron，2007，53：703-717】，这已是被公认的突触可塑性和记忆之间的生理相关关系【CollingridgeGLetal.，Long-termdepressionintheCNS.NatRevNeurosci，2010，11：459-473】。

从神经病理学角度来讲，GSK-3活性的异常增强与抑郁症病因和病程的发展以及抗抑郁药物治疗机制关系密切【ChenLetal.，GinsengTotalSaponinsReverseCorticosterone-InducedChangesinDepression-LikeBehaviorandHippocampalPlasricity-RelatedProteinsbyInterferingwithGSK-3β-CREBSignalingPathway.EvidBasedComplementAlternatMed.2014；2014：506735.doi：10.1155/2014/506735；WadaA，Lithiumandneuropsychiatrictherapeutics：neuroplasticityviaglycogensynthasekinase-3beta，beta-catenin，andneurotrophincascades.JPharmacolSci，2009，110(1)：14-28；LiuRetal.，Citalopramalleviateschronicstressinduceddepression-likebehaviorsinratsbyactivatingGSK3βsignalingindorsalhippocampus.BrainRes，2012，1467：10-17；LiuSetal.，PossibleassociationoftheGSK3βgenewiththeanxietysymptomsofmajordepressivedisorderandP300waveform.GenetTestMolBiomarkers.2012，16(12)：1382-13899.】

GSK-3抑制剂

关于GSK-3抑制剂及其潜在治疗用途的综述可以参考【CohenP&GoedertM，GSK3inhibitors：developmentendtherapeuticpotential.NatureReviews，2004，3：479-487；HernándezFetal.，GSK3InhibitorsandDisease.Mini-ReviewsinMedicinalChemistry，2009，9(9)：1024-1029.；MedinaM&CastroA，Glycogensynthasekinase-3(GSK-3)inhibitorsreachtheclinic.CurrOpinDrugDiscovDevelop，2008，11(4)：533-543；Eds：MartinezA，CastroA&MedinaM，GlycogenSynthaseKinase3(GSK-3)anditsinhibitors.JohnWiley&Sons，Inc.，2006，Chapter14】等文献。

已有研究报道了数种GSK-3抑制剂的临床应用前景，如靛玉红类(indirubines)【LeclercSetal.，Indirubinsinhibitglycogensynthasekinase-3betaandCDK5/p25，twoproteinkinasesinvolvedinabnormaltauphosphorylationinAlzheimer’sdisease.Apropertycommontomostcyclin-dependentkinaseinhibitors？.JBiolChem.，2001，276：251-260】，马来酰亚胺类(maleimides)【SmithDetal.，3-Anilino-4-arylmaleimides：potentandselectiveinhibitorsofglycogensynthasekinase-3(GSK-3).BioorgMedChemLett，2001，11：635-639】，3-氨基吡唑类(3-aminopyrazoles)【WitheringtonJetal.，5-arylpyrazolo[3，4-b]pyridazines：potentinhibitorsofglycogensynthasekinase-3(GSK-3).BioorgMedChemLett，2003，13：1581-1584】和噻二唑二酮类(thiadiazolidinones)【MartinezAetal.，Firstnon-ATPcompetitiveglycogensynthasekinase3beta(GSK-3beta)inhibitors：thiadiazolidinones(TDZD)aspotentialdrugsforthetreatmentofAlzheimer’sdisease.JMedChem，2002，45：1292-1299】以及处于临床I期的AZD1080【GeorgievskaBetal.，AZD1080，anovelGSK3inhibitor，rescuessynapticplasticitydeficitsinrodentbrainandexhibitsperipheraltargetengagementinhumans.JNeurochem，2013，125(3)：446-456】等。

通过研究，本发明人发现式(I)所示7-烷氧基防己诺林碱衍生物可用作GSK-3抑制剂，具有较强的抑制GHK-3β活性作用。

因此，本发明的目的是提供一种式(I)所示7-烷氧基防己诺林碱衍生物在制备GSK-3抑制剂中的用途。

通过进一步研究，本发明人惊奇地发现，当R₁选自-C_nH_2n+1且n优选自2、3、4时；或者R1为甲基，而X₁和X₃优选自氯和溴时，式(I)结构衍生物具有预料不到的抑制GHK-3β活性的效果。

本发明所述的化合物1-8均显示了较强的抑制GHK-3β活性作用(EC₅₀＜3.5μM)。化合物1-8的半效应浓度(EC₅₀)比式(I)所示同类衍生物粉防己碱、5-甲氧基粉防己碱、小檗胺(12-去甲基粉防己碱)以及12-乙酰氧基小檗胺低3-10倍，具有明显的效能(potency)优势；而且，化合物1-8的改善或治疗绝望、快感丧失、活动能力低下及焦虑等抑郁症状的作用明显优于具有式(I)结构衍生物粉防己碱、5-甲基粉防己碱、小檗胺、12-乙酰氧基小檗胺及12-(4-氧乙基)-丁氧基小檗胺。从最低有效剂量范围来比较，化合物1-8的抗抑郁效能比粉防己碱至少强8倍，且具有更安全、不产生耐药、易得等特征。

本发明中所提出的上述8种化合物对慢性应激抑郁模型大鼠的强迫游泳不动时间、糖水偏爱度、自主活动能力、焦虑及睡眠障碍等各项指标都表现出了较强的效应，均明显强于粉防己碱及其同类衍生物；而化合物1-8的抑制GSK-3β活性的半效应浓度(EC50)，也明显低于粉防己碱及同类衍生物。

本发明的目的是提供一种上述式(I)所述7-烷氧基防己诺林碱衍生物在制备治疗和改善抑郁症状的药物组合物中的应用。

本发明的目的是提供了化合物1-8及其药学上可接受的盐在制备治疗和改善抑郁症状的药物组合物中的用途。

本发明的式(I)所示7-烷氧基防己诺林碱衍生物可单独使用或加入各种抗神经精神类疾病的药物、辅助治疗药物或赋型剂，可制成临床可接受的剂型，用于治疗和改善抑郁症状。

本发明所述实验例中描述的式(I)化合物1-8如下所示，可根据现有技术已知方法进行合成。

化合物1.5-氯代-7-甲氧基汉防己乙素(5-chloro-7-methoxyfangchinolin，Berbaman，5-chloro-6，6′，7，12-tetramethoxy-2，2′-dimethyl-).ESI-MS(m/z)：658.25(M+1)。C₃₈H₄₁N₂O₆C1。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ：2.31(s，3H，NCH₃)，2.70(s，3H，NCH₃)，3.23(s，3H，OCH₃)，3.38(s，3H，OCH₃)，3.76(s，3H，OCH₃)，3.92(s，3H，OCH₃)，6.05～7.34(m，9H，芳香烃H)。

化合物2.5，14二溴代-7-甲氧基汉防己乙素(5，14-dibromo-7-methoxyfangchinolin，Berbaman，5，14-dibromo-6，6′，7，12-tetramethoxy-2，2′-dimethyl-).针状晶体(甲醇)，mp：187-189℃。ESI-MS(m/z)：781.2(M+1)，C₃₈H₄₀N₂O₆Br₂。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ：2.27(s，3H，NCH₃)，2.65(s，3H，NCH₃)，3.24(s，3H，OCH₃)，3.38(s，3H，OCH₃)，3.74(s，3H，OCH₃)，3.89(s，3H，OCH₃)，2.44～3.96(m，14H，烷烃H)，6.02(s，1H，芳香烃H)，6.34(dd，J＝9.0、2.3Hz，1H，芳香烃H)，6.53(s，1H，芳香烃H)，6.60(s，1H，芳香烃H)，6.84(dd，J＝10.0、2.7Hz，1H，芳香烃H)，7.05(dd，J＝10.0、2.7Hz，1H，芳香烃H)，7.07(s，1H，芳香烃H)，7.34(dd，J＝9.0、2.3Hz，1H，芳香烃H)。

化合物3.7-乙氧基-汉防己乙素(7-ethoxyfangchinolin，Berbaman，6，6′，12-trimethoxy-7-ethoxy-2，2′-dimethyl，以下称YH-200)。无色针状晶体(乙醇)，mp：109.5-111.℃。ESI-MS(m/z)：637.33(M+1)，C₃₉H₄₄N₂O₆。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ：0.80(t，3H，OCH₂CH ₃)，2.32(s，3H，NCH₃)，2.58(s，3H，NCH3)，2.40～3.80(m，16H，烷烃H)，3.37(s，3H，OCH3)，3.74(s，3H，OCH3)，3.93(s，3H，OCH₃)，5.95(s，1H，芳香烃H)，6.30(s，1H，芳香烃H)，6.32(dd，J＝9.2、2.1Hz，1H，芳香烃H)，6.50(s，1H，芳香烃H)，6.52(dd，J＝10.2、2.2Hz，1H，芳香烃H)，6.81(dd，J＝9.2、2.1Hz，1H，芳香烃H)，6.83(s，1H，芳香烃H)，6.87(dd，J＝10.2、2.2Hz，1H，芳香烃H)，7.14(s，(dd，J＝9.0、1.0Hz，1H，芳香烃H)，7.36(dd，J＝9.0、1.0Hz，1H，芳香烃H)。

化合物4.5-溴代-7-乙氧基-汉防己乙素(5-bromo-7-ethoxyfangchinolin，Berbaman，5-bromo-6，6′，12-tetramethoxy-7-ethoxy-2，2′-dimethyl-).针状晶(甲醇-乙醚)，mp：146-148℃。ESI-MS(m/z)：716.24(M+1)，C₃₉H₄₃N₂O₆Br。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ：0.81(t，3H，OCH₂CH ₃)，2.32(s，3H，NCH₃)，2.60(s，3H，NCH₃)，2.40～3.80(m，16H，烷烃H)，3.39(s，3H，OCH₃)，3.72(s，3H，OCH₃)，3.92(s，3H，OCH₃)，6.03～7.35(m，9H，芳香烃H)。

化合物5.5，14-二溴代-7-乙氧基-汉防己乙素(5，14-dibromo-7-ethoxyfangchinolin，Berbaman，5，14-dibromo-6，6′，7，12-tetramethoxy-2，2′-dimethyl-)。针状晶体(甲醇)，mp：186-188℃。ESI-MS(m/z)：795.26(M+1)，C₃₉H₄₂N₂O₆Br₂。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ：0.80(t，3H，OCH₂CH ₃)，2.28(s，3H，NCH₃)，2.69(s，3H，NCH₃)，3.38(s，3H，OCH₃)，3.73(s，3H，OCH₃)，3.89(s，3H，OCH₃)，2.44～3.96(m，16H，烷烃H)，6.02(s，1H，芳香烃H)，6.33(dd，J＝9.0、2.3Hz，1H，芳香烃H)，6.54(s，1H，芳香烃H)，6.60(s，1H，芳香烃H)，6.83(dd，J＝10.0、2.7Hz，1H，芳香烃H)，7.04(dd，J＝10.0、2.7Hz，1H，芳香烃H)，7.06(s，1H，芳香烃H)，7.34(dd，J＝9.0、2.3Hz，1H，芳香烃H)。

化合物6.7-丙氧基-汉防己乙素(7-propoxyfangchinolin，Berbaman，6，6′，12-trimethoxy-7-propoxy-2，2′-dimethyl-)。针晶(MeOH)，mp：174.8-176.3；ESI-MS(m/z)：651.35(M+1)，C₄₀H₄₆N₂O₆。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ：0.79(t，3H，OCH₂CH₂CH ₃)，2.32(s，3H，NCH₃)，2.58(s，3H，NCH3)，2.40～3.81(m，18H，烷烃H)，3.37(s，3H，OCH3)，3.73(s，3H，OCH3)，3.92(s，3H，OCH₃)，5.94～7.36(m，10H，芳香烃H)。

化合物7.7-正丁氧基-汉防己乙素(7-butylfangchinolin，Berbaman，6，6′，12-trimethoxy-7-butoxy-2，2′-dimethyl-)。柱状晶(MeOH)；mp：155-156℃；ESI-MS(m/z)：665.38(M+1)，C₄₁H₄₈N₂O₆。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ：0.78(t，3H，OCH₂CH₂CH₂CH ₃)，1.13～3.60(m，20H，烷烃H)，2.32(s，3H，NCH₃)，2.59(s，3H，NCH₃)，3.36(s，3H，OCH₃)，3.73(s，3H，OCH₃)，3.92(s，3H，OCH₃)，5.94～7.36(m，10H，芳香烃H)。

化合物8.7-异丙氧基-汉防己乙素(7-isopropoxyfangchinolin，Berbaman，6，6′，12-trimethoxy-7-isopropoxy-2，2′-dimethyl-)。ESI-MS(m/z)：651.34(M+1)；C₄₀H₄₆N₂O₆。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ：0.76[d，6H，OCH(CH ₃)₂]，2.34(s，3H，NCH₃)，2.62(s，3H，NCH₃)，2.40～3.60(m，15H，烷烃H)，3.34(s，3H，OCH₃)，3.71(s，3H，OCH₃)，3.92(s，3H，OCH₃)，5.86～7.38(m，10H，芳香烃H)。

下面结合具体实验，以化合物1-8为例进一步说明本发明。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1表示式(I)所示双苄基异喹啉类衍生物YH-200(化合物3)对小鼠前额叶皮层、海马、纹状体及下丘脑中GSK-3β磷酸化水平的影响(Mean±SE，n＝4)；*P＜0.05，**P＜0.01与对照组相比(Student’st-test)。

图2表示式(I)所示双苄基异喹啉类衍生物YH-200(化合物3)抗抑郁作用可被5-HT_1A受体拮抗剂pMPPI所抑制(Mean±SE，n＝12-15)。

图3表示5-HT_1A受体拮抗剂pMPPI可以显著抑制式(I)所示双苄基异喹啉类衍生物YH-200(化合物3)诱导的小鼠前额叶皮层、海马、纹状体及下丘脑中的GSK-3β磷酸化水平升高效应(Mean±SE，n＝6)。

图4表示式(I)所示双苄基异喹啉类衍生物YH-200(化合物3)缩短小鼠强迫游泳不动时间和延长不动时间潜伏期的作用可被5-HT_2A受体激动剂DOI所抑制(Mean±SE，n＝12-15)。

图5表示5-HT_2A受体激动剂DOI可以抑制式(I)所示双苄基异喹啉类衍生物YH-200(化合物3)诱导的小鼠前额叶皮层、海马、纹状体及下丘脑中GSK-3β磷酸化水平的升高(Mean±SE，n＝6)。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，但绝不是对本发明范围的限制。下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1GSK-3β活性测定

采用LifeTechnologies公司的Z’-LYTEassay分析方法测定GSK-3β的磷酸化水平。该方法属于荧光分析，是以荧光共振能量转移(FRET)为基础。该系统采用人重组GSK-3(N末端6组氨酸标记的与H350L突变体重组酶，购自Millipore公司，(Billerica，MA，USA)作为多肽底物，两端带有荧光团。如果多肽底物保持完整，就能发生FRET。如果激酶将多肽底物磷酸化，那么在这一系统中加入蛋白酶也不能切割多肽，系统依然发生FRET。但如果底物没有被磷酸化，多肽就会被蛋白酶切断，从而使FRET信号消除。检测采用384孔板进行。反应最终体积为10μl中含有2nM酶，50mMHepespH7.5，50mMMgCl2，1mMEGTA和0.05％Brij-35，用12.5μMATP和2μM底物肽。后者是基于GSK底物蛋白(糖原合成酶I)序列合成的肽，购自Invitrogen(商品名″Ser/Thr9peptide″)，含有641位丝氨酸位点(Ser-641)。该肽的两段都标记荧光素和香豆素。测试是在不同浓度收拾化合物存在下进行的。化合物都溶解在DMSO，DMSO的终浓度为1％。在室温下反应60分钟后，加入5μl蛋白酶试液(试剂盒)，随后继续在室温下反应1小时后，加入5μl反应终止液(试剂盒)停止反应。之后，检测荧光强度，发射光波长为445和520nm，激发光波长为400nm，计算荧光发射比，445nm的发射强度除以520nm的发射强度。

测试板孔分为空白对照孔(未加酶)，酶反应对照孔(未加测试物)以及测试孔(加酶和不同浓度测试物)。测试物的抑制率(Inhibition％)＝(E-S)/(E-B)x100.其中，E为酶反应对照孔的平均发射比；B为空白对照孔的平均发射比；S为测试样品孔的发射比。所测得的每个样品不同浓度的抑制率用于计算每个化合物的半效应浓度(EC₅₀μM)。

表1.抑制GSK-3β活性的EC50值(n＝3)

研究发现(见表1)，本发明所指7-烷氧基汉防己乙素类化合物1-8，均显示了较强的抑制GHK-3β活性作用(EC₅₀＜3.5μM)，化合物1-8的半效应浓度(EC₅₀)比式(I)所示同类衍生物粉防己碱、5-甲氧基粉防己碱、小檗胺(12-去甲基粉防己碱)以及12-乙酰氧基小檗胺低3-10倍，具有明显的效能(potency)优势。

结果提示，化合物1-8较具有治疗与GSK-3β活性异常增高相关联的抑郁疾病。

实施例2

化合物1-8对慢性不可预见性应激(CUS)模型大鼠抑郁行为的改善/治疗作用及其与具有式(I)结构衍生物粉防己碱、5-甲基粉防己碱、小檗胺、12-乙酰氧基小檗胺及12-(4-氧乙基)-丁氧基小檗胺的功效比较。

慢性不可预见性应激模型通常被用作抑郁模型。实验方法：刺激内容包括：强迫游泳(10℃，6min)、夹尾(距尾根1cm处，1min)、禁水(24h)、禁食(24h)、孤养(24h)、悬尾(1h)、制动(2h)、高速水平震荡(120次/min，1h)，足底电击45min(平均1mA，时程1s，1次/1min)。慢性应激时程共计22天，每日一次，随机选取一种刺激方式进行刺激。时间：上午9：00～下午2：00之间。应激第15天起，每日于应激前60min，各组动物分别按体重灌胃给予受试药以及双蒸水(空白组和CUS模型组)。阳性对照药采用丙咪嗪腹腔注射。应激第22-23天进行行为学及睡眠脑电时相分析实验。第21天，在最后一次给药60min后，进行糖水饮用试验，同时进行睡眠脑电记录；第22天进行EPM和强迫游泳试验。

表2.式(I)结构衍生物对慢性不可预见性应激模型鼠强迫游泳、糖水偏好度及自主活动能力的影响(means±SEM，n＝10)。

**P＜0.01与对照组相比；^#P＜0.05，^##P＜0.01与CUS组比较；^$P＜0.05，^$$P＜0.01与粉防己碱60mg/kg组比较。多组间采用随机分组的方差分析比较，组间比较采用SNK检验。

结果1：表2显示，连续7天灌胃给与化合物1-8，在3.75，7.5，15和30mg/kg剂量下，均可明显改善CUS模型大鼠绝望行为(强迫游泳不动时间，P＜0.01)、兴趣丧失(对糖水的偏好程度，P＜0.01)、活动减少(自主活动能力，P＜0.01)等抑郁样行为；粉防己碱(TET)则在高剂量(60mg/kg)下，只对强迫游泳不动时间(P＜0.05)和糖水的偏好度(P＜0.05)显示出一定的改善作用；而式(I)结构衍生物5-甲基粉防己碱、小檗胺、12-乙酰氧基小檗胺及12-(4-氧乙基)-丁氧基小檗胺在15，30和60mg/kg剂量下均未表现出改善作用。在此实验例中，化合物1-8对CUS模型大鼠各项指标的改善/治疗作用均明显优于具有式(I)结构的衍生物粉防己碱(P＜0.01)。比较最低有效剂量范围可知，化合物1-8的功效比粉防己碱强8倍。由此可以发现，以YH-200为代表的化合物1-8，与粉防己碱、5-甲基粉防己碱、小檗胺、12-乙酰氧基小檗胺及12-(4-氧乙基)-丁氧基小檗胺相比较，不仅具有更强的GSK3β活性抑制作用，也具有更高效能的改善快感丧失、绝望、活动能力差以及焦虑等抑郁症状的作用，表明以化合物YH-200为代表的化合物1-8具有明确高效的抗抑郁作用。

结果2：我们还采用国际通用的高架十字迷宫(Elevatedplus-maze，EPM)焦虑试验方法，考察了具有式(I)结构化合物对CUS抑郁模型大鼠焦虑行为的影响。高架十字迷宫由2个相对的开放臂(800x120)和2个相对的封闭臂(500x120x400)以及1个连接4只臂的中央平台(120x120)组成，迷宫底板距地面70cm。测试前将CUS抑郁模型大鼠放入直径40cm的塑料盆中，自主活动5min后迅速置于EPM的中央平台，使其头部正对一个开放臂，释放后立即开始记录5min大鼠活动情况。随后用高架十字迷宫视频分析系统提取大鼠的运动轨迹，并自动计算下述指标：总路程、开臂路程、闭臂路程、开臂区域停留时间、在闭臂区域停留时间、平均速度、总入臂次数、开臂区域的入臂次数、闭臂区域的入臂次数，以及开臂路程占总路程的百分比、开臂区域停留时间占入臂总时间的百分比，进入开臂次数占总入臂次数的百分比。每次实验前后用酒精擦拭各臂，以清除小鼠残留气味。在EPM实验中，通常以进入开臂次数百分比及在开臂停留时间百分比增加作为抗焦虑指标进行研究。反之，若进入闭臂次数百分比及在闭臂停留时间百分比增加则被认为动物出现了焦虑行为。

实验结果表明，与空白对照组相比，CUS模型大鼠，在开臂区域停留时间百分比和进入开臂次数百分比均明显减少(P＜0.01，见表3)，表明CUS模型大鼠出现了焦虑行为。化合物1-8各剂量组(3.75，7.5，15和30mg/kg)均显著增加CUS抑郁模型大鼠在开臂区域的停留时间和进入开臂次数；而式(I)结构衍生物5-甲基粉防己碱、小檗胺、12-乙酰氧基小檗胺及12-(4-氧乙基)-丁氧基小檗胺在15，30和60mg/kg剂量下均未表现出抗焦虑样作用；粉防己碱(TET)则在高剂量(60mg/kg)下，虽然可以增加CUS抑郁模型大鼠进入开臂次数(P＜0.05)，但对在开闭区域停留时间没有改善作用，表明，粉防己碱在高剂量下(60mg/kg)可以改善CUS抑郁模型大鼠的探究行为，但对焦虑样行为没有改善作用。在此试验例中，化合物1-8在3.75mg/kg剂量下，即出现抗焦虑样作用，而粉防己碱只有在60mg/kg剂量下才表现出改善CUS模型大鼠探究行为的作用，表明化合物1-8对CUS模型大鼠焦虑样行为的改善/治疗作用均明显优于具有式(I)结构的衍生物粉防己碱、5-甲基粉防己碱、小檗胺、12-乙酰氧基小檗胺及12-(4-氧乙基)-丁氧基小檗胺(P＜0.01)。比较最低有效剂量，可以发现化合物1-8的效价比粉防己碱强8倍以上。表明以化合物YH-200为代表的化合物1-8具有明确高效的改善抑郁症患者焦虑症状的功效。

表3.式(I)结构衍生物对慢性不可预见性应激模型(CUS)大鼠焦虑样行为的影响(means±SEM，n＝10)。

结果3：睡眠紊乱是神经精神类疾病最常见的症状之一。从治疗角度看，睡眠障碍是神经精神类疾病患者尤其是抑郁症患者最痛苦的事件之一，也是加重神经精神类疾病病情和影响患者康复的主要障碍之一。如抑郁症伴失眠的患者自杀行为发生率，明显高于非失眠组。利用CUS模型大鼠可以模拟神经精神类疾病的睡眠障碍。如表4所示，CUS模型鼠表现出总睡眠(TS)和慢波睡眠(SWS)时间减少，觉醒次数和快眼动(REM)睡眠次数增多等指标为特征的睡眠障碍。YH-200(化合物3)对CUS模型大鼠的睡眠障碍具有明显的改善作用。表明，YH-200可用于治疗和改善抑郁症患者的睡眠障碍(见表4)。

表4.YH-200(30mg/kg，p.o.)CUS抑郁模型大鼠睡眠的改善作用(means±SEM，n＝8)。

REM：rapideyemovementsleep快动眼睡眠，NREM：Non-REMsleep，非快眼动睡眠；SWS：Slow-WaveSleep，慢波睡眠；TS：TotalSleep，总睡眠。*P＜0.05，**P＜0.01与空白组比较；^#P＜0.05与模型组比较(SNK-test)。

实施例3、式(I)所示双苄基异喹啉类衍生物YH-200(化合物3)对小鼠前额叶皮层、海马、纹状体及下丘脑中GSK-3β磷酸化水平的影响(Mean±SE，n＝4)；*P＜0.05，**P＜0.01与对照组相比(Student’st-test)。

取ICR小鼠，灌胃给予试药及溶媒1小时后，断头取脑，分别分离采集前额叶皮层、海马、纹状体及下丘脑，进行蛋白电泳(westernblott)。结果如图1所示，与空白对照组相比，灌胃给予30mg/kgYH-200对小鼠前额叶皮层、海马及纹状体中的p-GSK-3β及total-GSK-3β均未产生明显影响，但使下丘脑中的p-GSK-3β水平明显升高。而60mg/kg剂量的YH-200则显著增加了上述四个脑区的p-GSK-3β水平，而对总GSK-3β水平没有影响。

实施例4、式(I)所示7-烷氧基防己诺林碱衍生物YH-200的抗抑郁作用及其机制与GSK-3β磷酸化水平、5-HT_1A和5-HT_2A受体之间的相关性。

小鼠在强迫游泳模型中出现的不动状态，可以模拟人类的绝望行为状态。将小鼠放入高20cm，直径10cm的圆柱形玻璃缸中，水深15cm，水温25±1℃。小鼠实验前预游泳15min，随后取出，在温暖处擦干，再放回笼中。24小时内，小鼠分别灌胃给药，60min后将小鼠放入上述环境中，测定小鼠在缸中游泳6分钟的后5分钟内累计不动时间。以不动时间缩短作为判断指标。

实验结果表明，化合物1-8均显示了较强的改善代表绝望行为的游泳不动潜伏期和不动时间的作用，提示化合物1-8具有改善绝望行为的作用。图2显示YH-200抗抑郁作用可被5-HT_1A受体拮抗剂pMPPI所抑制(Mean±SE，n＝12-15)。图3结果显示，于灌胃给予YH-200之前15分钟，经腹腔注射给与5-HT_1A受体拮抗剂pMPPI剂，可以显著抑制YH-200诱导的小鼠前额叶皮层、海马、纹状体及下丘脑中的GSK-3β磷酸化水平升高效应(Mean±SE，n＝6)。图4显示YH-200缩短小鼠强迫游泳不动时间和延长不动时间潜伏期的作用可被5-HT_2A受体激动剂DOI所抑制(Mean±SE，n＝12-15)；图5表明，5-HT_2A受体激动剂DOI抑制了YH-200诱导的小鼠前额叶皮层、海马、纹状体及下丘脑中GSK-3β磷酸化水平的升高(Mean±SE，n＝6)。由此可以推测，YH-200抗抑郁效应机制可能与其增强5-HT_1A受体功能，抑制5-HT2A受体活性，并升高GSK-3β磷酸化水平作用相关。图注：*P＜0.05，**P＜0.01与对照组相比；^#P＜0.05，^##P＜0.01与YH-200(60mg/kg)组比较。多组间采用随机分组的方差分析比较，组间比较采用SNK检验(Student-Newman-Keulstest，SNK-test)。

实施例5

化合物1-8及粉防己碱连续灌胃给与14天，对小鼠谷草转氨酶(又称天门冬氨基转移酶，AST)和谷丙转氨酶(又称丙氨酸氨基转移酶，ALT)的影响。

小鼠连续14天给予化合物1-8及粉防己碱后，小鼠内眦取血，室温下放置大约2小时，待凝血后，以3000r/min离心12min，取血清，再次离心。检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)水平。

表5.连续灌胃14天对小鼠血清中AST、ALT及AST/ALT的影响(means

±SEM，n＝10)

*P＜0.05和**P＜0.01与对照组相比(Student’st-test)。

通常天门冬氨酸转氨酶(AST)以及丙氨酸转氨酶(ALT)等存在于肝细胞，当肝细胞损伤时，进入血液，使得血清中的水平升高。因此，天门冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的活性及其比值，可以反映肝损伤程度。我们发现(见表5)，小鼠连续14天灌胃给予化合物1-8(60mg/kg)后，血清中的天门冬氨酸转氨酶(AST)活性、丙氨酸转氨酶(ALT)活性以及二者的比值(AST/ALT)均没有出现明显变化；而连续14天灌胃给予粉防己碱结果表明，在60mg/kg剂量下，粉防己碱使天冬氨酸转氨酶(AST)活性、丙氨酸转氨酶(ALT)活性以及二者的比值(AST/ALT)与对照组相比，均显著升高(P＜0.01)。并且，粉防己碱在30mg/kg剂量下，也可使天门冬氨酸转氨酶(AST)活性(P＜0.01)以及AST/ALT比值(P＜0.05)显著升高。结果表明，对肝脏而言，化合物1-8比粉防己碱更安全。

Claims

1.式(I)所示7-烷氧基防己诺林碱类化合物及药学上可接受的衍生物在制备治疗和改善神抑郁症的药物组合物中的用途。

其中，R₁可选自-C_nH_2n+1或乙酰基，n大于等于1；或n优选大于等于2；或n更优选自2、3、4；R₁进一步优选自乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基；

同时，包括C(1)和C(1′)为RR、SS、1S1′R、1R1′S构型和立体异构体。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，当式(I)化合物中R1为甲基时，X₁，X₂，X₃和X₄优选自氟、氯、溴、碘、硝基。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于式(I)化合物选自5-氯代-汉防己甲素(化合物1)、5，14二溴代-汉防己甲素(化合物2)、7-乙氧基-汉防己乙素(化合物3)、5-溴代-7-乙氧基-汉防己乙素(化合物4)、5，14-二溴代-7-乙氧基-汉防己乙素(化合物5)、7-丙氧基-汉防己乙素(化合物6)、7-正丁氧基-汉防己乙素(化合物7)以及7-异丙氧基-汉防己乙素(化合物8)，及其药学上可接受的盐。

4.一种式(I)所示7-烷氧基防己诺林碱类化合物及药学上可接受的衍生物在制备GSK-3抑制剂中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述GSK-3抑制剂可用于治疗和改善抑郁症。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述式(I)化合物可作为治疗或辅助治疗的有效成分，可以添加任何赋形剂、助溶剂等，制成药学上接受的常规药物制剂。