CN105358976B - 胰岛素测定法 - Google Patents
胰岛素测定法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105358976B CN105358976B CN201480017397.3A CN201480017397A CN105358976B CN 105358976 B CN105358976 B CN 105358976B CN 201480017397 A CN201480017397 A CN 201480017397A CN 105358976 B CN105358976 B CN 105358976B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- insulin
- amine compounds
- cushioning effects
- buffer solution
- measuring method
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/575—Hormones
- G01N2333/62—Insulins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明解决这样的问题:提供用于人胰岛素的乳胶凝集免疫测定法和测定试剂,由此抑制血液样品测定过程中的非特异反应。通过携带抗胰岛素抗体的颗粒的免疫反应在含有两种以上类型的具有pH缓冲作用的胺化合物的缓冲液中进行。
Description
技术领域
本发明涉及人胰岛素乳胶凝集免疫测定和测定试剂,利用所述测定和测定试剂可以抑制血液样品测定中的非特异反应。
背景技术
人胰岛素,一种分子量为5807的肽,是用于诊断和治疗糖尿病的重要分子标志物之一。由于与浓度相关的原因,长期以来,竞争性RIA和化学发光免疫测定一直是用于人血液样品中胰岛素测定的主流免疫测定技术。随着近来高灵敏度乳胶浊度免疫测定(LTIA)的出现,已经报道了可用于生化自动分析仪的LTIA试剂,并且一些是可商购的。
非专利文献1中描述的技术是使用固定有抗胰岛素抗体的乳胶颗粒的夹心LTIA。然而,仅有少数夹心LTIA用于实际肽测定应用的事例,并且所述技术涉及需要解决的问题。
引用列表
专利文献
PTL 1:WO2011/010673
非专利文献
NPL 1:Kanto Kagaku Cias Insulin II Attachment(2010年2月产生)
发明概述
技术问题
本发明人通过使用基于利用非专利文献1的方法获得的测量值与相关领域的非均质化学发光酶免疫测定(常规方法)中测量的值的偏差筛选的样品研究了抑制夹心LTIA中非特异反应的方法,并且发现,当用含有两种以上特定pH缓冲剂的缓冲液进行LTIA免疫反应时,可以减小与利用常规方法测量的值的偏差程度。基于该发现完成本发明。
问题的解决方案
具体地,本发明涉及以下各项。
[1]胰岛素测定法,所述测定法用于在含有两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的缓冲液中利用固定有抗胰岛素抗体的颗粒进行免疫反应。
[2]根据[1]所述的测定法,其中所述具有pH缓冲作用的胺化合物选自由HEPES、MES和Tris组成的组。
[3]根据[1]或[2]所述的测定法,其中所述缓冲液具有7.3至7.8的pH。
[4]在胰岛素的颗粒凝集免疫测定中抑制源自血液样品的非特异反应的方法,其中所述方法包括在含有两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的缓冲液中利用固定有抗胰岛素抗体的颗粒进行免疫反应。
发明的有益效果
本发明的测定法使得能够在血液样品测定中抑制非特异反应的同时进行人胰岛素乳胶凝集免疫测定。配制用于免疫测定的pH缓冲剂以实现抗原-抗体反应中的最佳pH,并且使用两种pH缓冲剂以加宽pH缓冲范围,或与主要pH缓冲剂组合以调节pH,已是普遍的做法。然而,在缓冲液中含有两种以上特定pH缓冲剂将抑制非特异反应是全新的发现。
附图简述
[图1]图1表示常规LTIA中获得的测量结果和本发明的测定法中获得的测量结果的相关图,其中上图表示化学发光酶免疫测定(Lumipulse Insulin,Fujirebio)和常规LTIA(Cias Insulin II,Kanto Kagaku)之间的相关性,而下图表示化学发光酶免疫测定(LumipulseInsulin,Fujirebio)和本发明的测定法之间的相关性。
实施方案描述
在本发明的测定法中用作分析物的血液样品是全血、血清或血浆。
用于本发明的测定法的含有两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的缓冲液可以选自由HEPES(2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸)、MES(2-吗啉乙磺酸)和Tris(三(羟甲基)氨基甲烷)组成的组。缓冲液的浓度(当缓冲液含有两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物时,两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的总浓度)理想地是100mM至1000mM,优选为200mM至800mM,更优选为400mM至800mM。缓冲液的优选的pH是7.3至7.8。
可用于本发明的测定法的固定有抗胰岛素抗体的乳胶颗粒可以通过本领域已知方法获得,所述方法包括专利文献1。
用于实施本发明的试剂可以具有普通乳胶凝集免疫测定试剂的形式。例如,所述试剂可以具有其中本发明的缓冲液被用作第一试剂,并且含有固定有抗胰岛素抗体的乳胶颗粒的溶液被用作第二试剂的形式,或其中固定有抗胰岛素抗体的乳胶颗粒被包含在本发明的缓冲液中的单一试剂的形式。
用于实施本发明的试剂可以含有多种可以包含在乳胶凝集免疫测定试剂中的已知组分,包括,例如,金属离子如钙离子和镁离子;离子、非离子和两性表面活性剂;螯合剂如EDTA;多糖和聚合物如硫酸葡聚糖;蛋白质如清蛋白;可商购的封闭剂如Hetero Block(Omega Biologicals,Inc.)、Block Ace(DS Pharma)和BPF(Toyobo);以及抗-IgM抗体。
本发明的测定法可以通过使用以下具体程序来进行。将血液样品加至在分析仪如Hitachi 7170自动分析仪中的主要由pH缓冲液构成的第一试剂,并且在将所述样品孵育后,将含有固定有抗胰岛素抗体的乳胶颗粒的第二试剂加至样品混合物。然后在适当的波长,例如,在570nm的主波长和800nm的亚波长,测量样品的吸光度,以确定胰岛素浓度。
本发明的测定法中具有pH缓冲作用的胺化合物的浓度是基于第一试剂与第二试剂的体积混合比为3:1的情况。
实施例
以下使用实施例更详细描述本发明。
[实施例1]
1.测定程序
在化学发光酶免疫测定(LumipulseInsulin,Fujirebio),常规LTIA(Cias Insulin II,Kanto Kagaku),和本发明的测定法中,测量来自218位患者的血清。
利用专利文献1中描述的固定有抗胰岛素单克隆抗体的乳胶,使用如下制备的第一试剂和第二试剂,来进行本发明的测定。
第一试剂
600mM MES
200mM Tris
200mM NaCl
50μg/mL Hetero Block(Omega Biologicals,Inc.)
200μg/mL抗-IgM抗体
pH7.5
第二试剂
7.5mM Tris
固定有66221抗体的乳胶
固定有66226抗体的乳胶
pH8.0
将血清(10μL)加入至在Hitachi 7170自动分析仪中的第一试剂(150μL),并且在将样品与第一试剂在37℃孵育5min后,将第二试剂(50μL)加入至混合物中。然后在570nm的主波长和800nm的亚波长,在一定时程内的19至34个光度点处,测量样品的吸光度,从而确定胰岛素浓度。
2.测定结果
在常规LTIA中测量的血清样品中,81个样品呈现超过在化学发光酶免疫测定中被当作100的测量值±30%的测量值。另一方面,在本发明的测定中,没有血清超过±30%。通过在X轴上绘制来自化学发光酶免疫测定的测量值并且在Y轴上绘制来自常规LTIA或来自本发明的测定法的测量值,来核对结果的相关性。结果显示在图1中。可以看出,与在常规LTIA中相比,在本发明的测定法中,与化学发光酶免疫测定结果的偏差更小。
工业实用性
本发明使得可能在人胰岛素的乳胶凝集免疫测定中抑制血液样品测定中的非特异反应。本发明的该效应是基于对通常用作pH缓冲剂的胺化合物的选择性使用,并且因此,本发明不在试剂配方设计方面强加任何不必须的限制。这使得本发明高度可用于工业。
对保藏的生物材料的引用
(1)FERM BP-11233
(2)FERM BP-11234
[关于保藏的生物材料的注意事项]
(1)产生66221抗体的杂交瘤66221
-保藏生物材料的保藏机构的名称和地址
国家先进工业科学和技术研究所,国际专利生物保藏机构(The NationalInstitute of Advanced Industrial Science and Technology,International PatentOrganism Depositary)
Chuo 6,1-1-1,Higashi,Tsukuba,Ibaraki,日本(邮政编码305-8566)
-在保藏机构保藏生物材料的日期
2009年4月8日(2009.4.8)(原始保藏日期)
2010年2月17日(2010.2.17)(从原始保藏转为布达佩斯条约下的保藏的日期)
-保藏机构分配的登陆号
FERM BP-11233
(2)生产66226抗体的杂交瘤66226
-保藏生物材料的保藏机构的名称和地址
国家先进工业科学和技术研究所,国际专利生物保藏机构
Chuo 6,1-1-1,Higashi,Tsukuba,Ibaraki,日本(邮政编码305-8566)
-在保藏机构保藏生物材料的日期
2009年4月8日(2009.4.8)(原始保藏日期)
2010年2月17日(2010.2.17)(从原始保藏转为布达佩斯条约下的保藏的日期)
-保藏机构分配的登陆号
FERM BP-11234
Claims (5)
1.胰岛素乳胶凝集免疫测定法,所述测定法用于在含有两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的缓冲液中利用固定有抗胰岛素抗体的乳胶颗粒进行免疫反应,
其中所述两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的总浓度为400mM至1000mM,
其中所述具有pH缓冲作用的胺化合物选自由HEPES、MES和Tris组成的组。
2.根据权利要求1所述的测定法,其中所述两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的总浓度为400mM至800mM。
3.根据权利要求1或2所述的测定法,其中所述缓冲液具有7.3至7.8的pH。
4.在胰岛素的乳胶凝集免疫测定法中抑制源自血液样品的非特异反应的方法,其中所述方法包括在含有两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的缓冲液中利用固定有抗胰岛素抗体的乳胶颗粒进行免疫反应,
其中所述两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的总浓度为400mM至1000mM,
其中所述具有pH缓冲作用的胺化合物选自由HEPES、MES和Tris组成的组。
5.根据权利要求4所述的方法,其中所述两种以上具有pH缓冲作用的胺化合物的总浓度为400mM至800mM。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013074793 | 2013-03-29 | ||
JP2013-074793 | 2013-03-29 | ||
PCT/JP2014/059548 WO2014157723A1 (ja) | 2013-03-29 | 2014-03-31 | インスリン測定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105358976A CN105358976A (zh) | 2016-02-24 |
CN105358976B true CN105358976B (zh) | 2018-11-06 |
Family
ID=51624678
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201480017397.3A Active CN105358976B (zh) | 2013-03-29 | 2014-03-31 | 胰岛素测定法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20160274092A1 (zh) |
EP (1) | EP2980586B1 (zh) |
JP (1) | JP6457933B2 (zh) |
CN (1) | CN105358976B (zh) |
WO (1) | WO2014157723A1 (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6740083B2 (ja) * | 2015-10-23 | 2020-08-12 | 株式会社Lsiメディエンス | 免疫学的測定試薬、測定方法及び測定範囲の拡大方法 |
JP6697314B2 (ja) * | 2016-04-13 | 2020-05-20 | 株式会社Lsiメディエンス | 可溶性インターロイキン2受容体の免疫学的測定法 |
CN106483302A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-03-08 | 浙江达美生物技术有限公司 | 一种胰岛素的测定试剂及其制备方法 |
CN107860930A (zh) * | 2017-11-10 | 2018-03-30 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 一种心型脂肪酸结合蛋白的免疫比浊检测试剂和方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102246039A (zh) * | 2009-07-21 | 2011-11-16 | 积水医疗株式会社 | 胰岛素测定法 |
CN102854325A (zh) * | 2011-07-01 | 2013-01-02 | 复旦大学 | 胰岛素与血清蛋白可逆性结合的亲和力指标测定方法及应用 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5958339A (en) * | 1992-08-31 | 1999-09-28 | Clinical Diagnostic Systems, Inc. | Format for immunoassay in thin film |
JP3756007B2 (ja) * | 1999-01-28 | 2006-03-15 | 富士写真フイルム株式会社 | 乾式分析方法及び乾式分析要素 |
JP2000292424A (ja) * | 1999-04-09 | 2000-10-20 | Mitsubishi Chemicals Corp | 免疫測定方法 |
JP2001235465A (ja) * | 2000-02-24 | 2001-08-31 | Showa Denko Kk | 生体成分の測定方法 |
US20020106708A1 (en) * | 2000-11-13 | 2002-08-08 | Sigma-Aldrich Co. | Assays reagents and kits for detecting or determining the concentration of analytes |
JP4353856B2 (ja) * | 2004-06-08 | 2009-10-28 | 積水メディカル株式会社 | 免疫学的測定試薬 |
JP4718301B2 (ja) * | 2005-10-31 | 2011-07-06 | デンカ生研株式会社 | 塩基性多糖類を含有する免疫測定法用検体処理液組成物及びキット、並びにこれらを用いる免疫測定法 |
-
2014
- 2014-03-31 WO PCT/JP2014/059548 patent/WO2014157723A1/ja active Application Filing
- 2014-03-31 EP EP14775665.4A patent/EP2980586B1/en active Active
- 2014-03-31 CN CN201480017397.3A patent/CN105358976B/zh active Active
- 2014-03-31 US US14/778,444 patent/US20160274092A1/en not_active Abandoned
- 2014-03-31 JP JP2015508826A patent/JP6457933B2/ja active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102246039A (zh) * | 2009-07-21 | 2011-11-16 | 积水医疗株式会社 | 胰岛素测定法 |
CN102854325A (zh) * | 2011-07-01 | 2013-01-02 | 复旦大学 | 胰岛素与血清蛋白可逆性结合的亲和力指标测定方法及应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105358976A (zh) | 2016-02-24 |
EP2980586B1 (en) | 2017-08-16 |
US20160274092A1 (en) | 2016-09-22 |
JP6457933B2 (ja) | 2019-01-23 |
JPWO2014157723A1 (ja) | 2017-02-16 |
EP2980586A1 (en) | 2016-02-03 |
EP2980586A4 (en) | 2016-08-24 |
WO2014157723A1 (ja) | 2014-10-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11536717B2 (en) | Method of agglutination immunoassay | |
Mahler et al. | Development and performance evaluation of novel chemiluminescence assays for detection of anti-PR3 and anti-MPO antibodies | |
US9274125B2 (en) | Method and kit for measuring component in the presence of fatty acid alkanolamide or nonionic polyoxyethylene surfactant | |
CN104849468B (zh) | 检测血清糖蛋白岩藻糖指数的化学发光蛋白芯片、试剂盒及检测方法 | |
CN104849469A (zh) | 一种检测ngal含量的试剂盒及其制备方法 | |
CN106568978A (zh) | 血清淀粉样蛋白a检测方法及试剂 | |
CN105358976B (zh) | 胰岛素测定法 | |
CN104181308B (zh) | 一种稳定的肌钙蛋白i检测试剂 | |
RU2007145635A (ru) | Способ оценки эффективности режима лечения | |
CN112940114B (zh) | 一种抗真菌1,3-β-D-葡聚糖单克隆抗体及其应用 | |
Li et al. | Micro-plate magnetic chemiluminescence immunoassay and its applications in carcinoembryonic antigen analysis | |
Åström et al. | Reverse lectin ELISA for detecting fucosylated forms of α1-acid glycoprotein associated with hepatocellular carcinoma | |
CN112740037A (zh) | 糖化血红蛋白(%)测定方法 | |
JP2023017986A (ja) | 自己抗体の直接イムノアッセイ測定法 | |
Sæderup et al. | Using the hemoglobin-binding Staphylococcus aureus protein IsdH to enable plasma analysis of hemolyzed blood samples | |
Liu et al. | Portable system for rapid field test of CEA in human serum based on chemiluminescence enzyme immunoassay | |
Morris | Traceability and standardization of immunoassays: a major challenge | |
Wheeler | Assays for LH, FSH, and prolactin | |
JP6693134B2 (ja) | リンカー配列を有する抗体及びそれを用いた測定法 | |
Fujimaki et al. | Evaluating the analytical performance of new immunoassay system HISCL‐5000 | |
Schwickart et al. | Immunoassays | |
Purice et al. | Comparison between immunometric methods for the determination of FSH, LH, TSH and PRL hormones in CSF |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |