CN105325702B - 含有龙胆h的天然抗生素饲料添加剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂，所述的天然抗生素饲料添加剂为含有龙胆H的乙醇水溶液，其中，龙胆H的质量浓度为0.8‑1.3%，乙醇的质量浓度为0.6‑0.9%。所述的含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂在家禽类动物饲料和反刍动物中的应用。本发明公开的天然抗生素饲料添加剂含有的龙胆H，具有(E)‑3,5,4‑三羟基二苯乙烯骨架结构，是一类天然食用抗生素，具有抗耐药性和植物天然抗生素的安全性，符合今后饲用抗生素向高效和低残留方向发展的趋势。该饲用添加剂可确保饲用抗生素的科学应用并有效地降低以往抗生素饲料添加剂的负面作用和不安全因素，应用前景广阔，市场潜力巨大。
Description
技术领域
本发明属于天然产物应用领域，具体涉及一种含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂及其制备方法和应用。
背景技术
世界上各饲料生产国几乎无一不在饲料中添加各种抗生素用以提高饲料报酬。应该说近半个世纪以来，抗生素作为抗菌助长剂添加到饲料中，对控制畜禽疾病的发生，促进畜禽生长发育，提高饲养经济效益确实起到积极的作用。据统计世界上有二十多种抗生素及十几种合成抗菌类药物被应用到饲料中。抗生素作为饲料添加剂的用量是微乎其微的，大多以百万分(mg/kg)计算，即使如此，欧盟还是严格规定了抗生素的使用剂量，一些国家还对使用抗生素的种类做了限制。但是，人们对滥用抗生素产生的负面作用越来越重视，尤其饲用抗生素的安全性和药物残留及抗药性问题，欧盟对滥用抗生素行为严加治理并强调势在必行。然而，抗生素在治疗疾病方面又发挥着不可替代的作用。抗生素作为饲料添加剂，曾对养殖业的发展起到积极作用。但随着时间的推移，科学的进步及人民生活水平的日益提高，人们对抗生素引起的细菌抗药性问题愈发关注，抗生素用作饲料添加剂面临着时代的挑战。因此，发扬祖国传统中医药资源和保健品开发优势，寻找可取代抗生素的天然饲料添加剂或天然饲料新资源，也许是推动和解决我国畜牧养殖业发展瓶颈因素的好方法。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂及其制备方法和应用。
本发明所采用的技术方案是：一种含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂，所述的天然抗生素饲料添加剂为含有龙胆H的乙醇水溶液，其中，龙胆H的质量浓度为0.8-1.3%，乙醇的质量浓度为0.6-0.9%。
所述的含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、取牡丹籽饼粕或葡萄籽饼粕，干燥、粉碎后置于容器中，加入乙醇溶液，至乙醇溶液没过牡丹籽饼粕或葡萄籽饼粕原料，浸泡3天，收集浸提液，然后再重复加入乙醇溶液、浸泡和收集浸提液两次，合并所有浸提液并浓缩至无溶剂，得到粗提物浸膏，备用；
步骤二、将步骤一得到的粗提物浸膏加水溶解，溶解后的混合液置于冰箱中冷藏6-12h，过滤，然后将滤液先用体积比为1:1的环己烷-乙酸乙酯混合溶液萃取，再用体积比为10:1的乙酸乙酯-甲醇混合溶液萃取，萃取完成后收集乙酸乙酯-甲醇萃取液，减压浓缩，得到含有龙胆H的浸膏，备用；
步骤三、向步骤二得到的含有龙胆H的浸膏中加入无水乙醇溶液使浸膏溶解，得到混合溶液，然后向混合溶液中加水稀释，使得到的溶液中龙胆H的质量浓度为0.8-1.3%，乙醇水溶液的质量浓度为0.6-0.9%，即得到含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂。
进一步优化，步骤一所述的乙醇溶液的质量百分比为75-95%。
所述的一种含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂在家禽类动物饲料和反刍动物中的应用。
与现有技术相比，本发明至少具有下述优点及有益效果：
本发明公开的天然抗生素饲料添加剂含有的龙胆H，具有(E)-3,5,4-三羟基二苯乙烯骨架结构，是一类天然食用抗生素，具有抗耐药性和植物天然抗生素的安全性，符合今后饲用抗生素向高效和低残留方向发展的趋势。该饲用添加剂可确保饲用抗生素的科学应用并有效地降低以往抗生素饲料添加剂的负面作用和不安全因素， 应用前景广阔，市场潜力巨大。本发明制备方法简单，制备过程不会造成有效成分的破坏，提取效率高。
附图说明
图1为本发明关于抗耐药菌MRSA的IC50值测定。
具体实施方式
一种含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂，所述的天然抗生素饲料添加剂为含有龙胆H的乙醇水溶液，其中，龙胆H的质量浓度为0.8-1.3%，乙醇的质量浓度为0.6-0.9%。
所述的含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、取牡丹籽饼粕或葡萄籽饼粕，干燥、粉碎后置于容器中，加入乙醇溶液，至乙醇溶液没过牡丹籽饼粕或葡萄籽饼粕原料，浸泡3天，收集浸提液，然后再重复加入乙醇溶液、浸泡和收集浸提液两次，合并所有浸提液并浓缩至无溶剂，得到粗提物浸膏，备用；
步骤二、将步骤一得到的粗提物浸膏加水溶解，溶解后的混合液置于冰箱中冷藏6-12h，过滤，然后将滤液先用体积比为1:1的环己烷-乙酸乙酯混合溶液萃取，再用体积比为10:1的乙酸乙酯-甲醇混合溶液萃取，萃取完成后收集乙酸乙酯-甲醇萃取液，减压浓缩，得到含有龙胆H的浸膏，备用；
步骤三、向步骤二得到的含有龙胆H的浸膏中加入无水乙醇溶液使浸膏溶解，得到混合溶液，然后向混合溶液中加水稀释，加水稀释至含有龙胆H的浸膏在溶液中的质量浓度为18-23%，然后经检测调整使龙胆H的质量浓度为0.8-1.3%，乙醇水溶液的质量浓度为0.6-0.9%，即得到含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂。
进一步优化，步骤一所述的乙醇溶液的质量百分比为75-95%。
所述的一种含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂在家禽类动物饲料和反刍动物中的应用。该饲料添加剂在使用时向饲料中的添加量为每1000g饲料添加0.05-0.5g。
应用研究数据如下：
从牡丹籽中分离得到的龙胆H，为橙色固体，分子式：C48H54O9，分子量：774.38，结构式如下。溶解度：不溶于水，易溶于甲醇和乙醇中，同时暴露空气中易氧化成棕色。该化合物属于白藜芦醇化合物三聚体，具有多酚结构特征显示较强的抗革兰氏阳性菌和抗耐药菌能力。
试验菌株MRSA由河南科技大学一附院提供分离自临床病人；实验阳性对照为万古霉素，如图1所示“万古1”，浓度1mg/mL；阴性对照70%甲醇溶液，如图中的“70%”甲醇；测试品E1，E2，和E3分别代表龙胆H的不同受试浓度为0.47 mg/mL,0.235 mg/mL和0.118 mg/mL；D1，D2和D3代表同类化合物的二聚体D-反式葡萄素的不同受试浓度为0.94mg/mL,0.47 mg/mL 和0.235mg/mL，测试时间18小时。
实验采用琼脂平板稀释法测定对MRSA最小抑菌浓度（IC50），实验结果可知，化合物E（龙胆H）IC50< 0.118 mg/mL，化合物D（D-反式葡萄素）IC50< 0.235 mg/mL，因此化合物龙胆H的抗菌效力远远大于D-反式葡萄素，龙胆H抗耐药菌强，杀菌效力高。
Claims (2)
1.一种含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂的制备方法，天然抗生素饲料添加剂为含有龙胆H的乙醇水溶液，其中，龙胆H的质量浓度为0.8-1.3%，乙醇的质量浓度为0.6-0.9%，其特征在于：制备方法包括以下步骤：
步骤一、取牡丹籽饼粕或葡萄籽饼粕，干燥、粉碎后置于容器中，加入乙醇溶液，至乙醇溶液没过牡丹籽饼粕或葡萄籽饼粕原料，浸泡3天，收集浸提液，然后再重复加入乙醇溶液、浸泡和收集浸提液两次，合并所有浸提液并浓缩至无溶剂，得到粗提物浸膏，备用；
步骤二、将步骤一得到的粗提物浸膏加水溶解，溶解后的混合液置于冰箱中冷藏6-12h，过滤，然后将滤液先用体积比为1:1的环己烷-乙酸乙酯混合溶液萃取，再用体积比为10:1的乙酸乙酯-甲醇混合溶液萃取，萃取完成后收集乙酸乙酯-甲醇萃取液，减压浓缩，得到含有龙胆H的浸膏，备用；
步骤三、向步骤二得到的含有龙胆H的浸膏中加入无水乙醇溶液使浸膏溶解，得到混合溶液，然后向混合溶液中加水稀释，使得到的溶液中龙胆H的质量浓度为0.8-1.3%，乙醇的质量浓度为0.6-0.9%，即得到含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂。
2.如权利要求1所述的一种含有龙胆H的天然抗生素饲料添加剂的制备方法，其特征在于：步骤一所述的乙醇溶液的质量百分比为75-95%。
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