CN105310074A - 用于改善皮肤系统的抗衰老抗氧化剂营养补充剂 - Google Patents

用于改善皮肤系统的抗衰老抗氧化剂营养补充剂 Download PDF

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Abstract

本申请为用于改善皮肤系统的抗衰老抗氧化剂营养补充剂。一种特别适用于减少对皮肤系统的氧化性损伤的包含胶原蛋白、肌肽、辅酶Q10和白藜芦醇的液体抗衰老抗氧化剂营养补充剂。

Description

用于改善皮肤系统的抗衰老抗氧化剂营养补充剂
发明领域
本公开涉及特别适用于抵抗皮肤系统中的氧化性损伤的营养补充剂。
发明背景
氧化应激(oxidativestress)被定义为在活性氧物质(ROS)的产生和抗氧化剂防御之间平衡的扰乱(Finkel和Holbrook2000)，(Kunwar等，2011)。
ROS是包含氧反应性分子的分子；ROS的实例包括自由基、氧离子和过氧化物。
ROS是作为正常氧代谢的天然副产物形成，并在细胞信号传导和动态平稳中起到重要作用。
ROS还可通过推动在不同病理状态例如癌症、心脏病和糖尿病中起到重要作用的几种分子途径发挥作用。
过氧化物和自由基的过量产生导致对细胞组分(包括蛋白质、脂质和DNA)的损伤。而且，一些ROS可以在细胞之间的还原/氧化(氧还)信号传导中担任细胞信使。因此，氧化应激可以引起正常细胞信号传导机制的破坏。
因此，好氧生物体细胞对氧的利用产生了潜在有害的反应性氧代谢产物。
氧化性损伤的量可以随生物体的年龄增长而增加，且它可以是能够引起衰老的主要因素(Sohal和Weindruch，1996)。
从调查研究中显露出来的主要观点是衰老过程中的分子氧化性损伤是普遍存在和显著的，并随年龄增长而呈指数增加。
氧化应激量与年龄相关的增加的主要原因可能与反应性氧代谢产物(ROM)的产生速率的增加、抗氧化防御的下降、受损分子的修复或去除效率的下降相关联。
线粒体的过氧化氢产生也是氧化应激的主要来源之一，且在哺乳动物的多个不同器官中随着年龄增长而增加(Turrens和McCord,1990)。
最近的研究已经调查了性别、年龄和处理时间对于小鼠中由d-半乳糖(d-gal)诱导的脑氧化应激和空间记忆缺陷的影响。雌性小鼠甚至在增加量的脑活性氧物质(ROS)的存在下也没有显示出空间记忆损伤。相反，接受相同量d-gal的雄性小鼠显示出空间记忆缺陷和氧化应激标志物的显著增加(Hao等，2014)。
有趣的是，2014年发表的另一份最近的研究从炼焦厂招募了总共478位工人(272名男性和206名女性)。该研究发现女性比男性更易受氧化应激和多环芳烃(PAH)诱导的染色体损伤的影响，其增加了证明PAH暴露相关的肺癌发生中的性别差异的潜在证据(Guo等，2014)。
皮肤连同毛发和指甲是皮肤系统的主要器官，并代表对外部环境的第一道和主要的屏障。
在皮肤中，自由基损伤可引起支持性结缔组织的退化，导致弹性和回弹性下降。而且，氧化应激可损伤毛囊功能，引起男性和女性的雄激素性脱发(斑秃)。
皮肤暴露于太阳紫外辐射引发光化学反应，这导致ROS形成，且当它们的产生失控时，出现氧化应激。在这种情况发生时，ROS(连同白血细胞中颗粒释放的酶)损害或甚至杀死细胞，损伤DNA并攻击酶和其他化合物。
皮肤拥有防御机制，其与有毒物相互作用并抵抗它们的有害作用(例如作为强效抗氧化剂起作用的非酶性分子和酶性分子)。
这些防御虽然高度有效，但是能力有限，并且可以被压倒，导致ROS水平上升并发生皮肤疾病。
普遍认同的是衰老与氧化性损伤的蛋白质、脂质和核酸的积累之间存在相关性(Levine和Stadtman，2001)。
最近的研究已经显示出皮肤暴露于多种化学和物理环境因素诱导氧化应激，其导致诱发皮肤脂质过氧化以及伴随的抗氧化剂与药物代谢酶水平的调节。
预防或治疗这些ROS介导失调的一个方法是基于不同抗氧化剂的施用，其中术语抗氧化剂是指任何能够在自由基在健康细胞中引起损伤前使自由基稳定或失活的分子。
发明概要
本说明书的目的在于提供具有高抗氧化剂能力的营养补充剂，其能够通过由活性成分发挥的协同效应对抗体内自由基形成而减缓自然衰老过程。
根据本发明，上述目的的实现是由于在随后权利要求(其被理解为形成本公开的整体部分)中特别地重新提及的主题。
本说明书的实施方式提供了包含胶原蛋白、肌肽、辅酶Q10和白藜芦醇的营养补充剂。
在另一个实施方式中，营养补充剂进一步包括包含琉璃苣籽油和月见草油的乳液。
在另一个实施方式中，营养补充剂包含至少一种选自透明质酸、黑胡椒提取物、番茄红素的进一步的成分。
在进一步的实施方式中，本文所述营养补充剂还包括阿萨伊浆果、石榴、维生素中的至少一种，优选维生素C和维生素A。
在另一个实施方式中，本文所述食品补充剂还包括矿物质、添加剂和香料物质。
附图简述
仅通过示例的方式，本发明现将根据所附附图进行描述，其中：
-图1示出了本说明书中公开的营养补充剂的实施方式的生产流程图。
-图2示出了营养补充剂主要成分对于正常人皮肤成纤维细胞(NHDF)的MMP-1合成的作用。在24孔板中生长并在培养基(0)加上营养补充剂主要成分的各种组合中培养(参见表5和6对于添加的描述)48小时的NHDF的上清液中测量MMP-1。数据以培养基对照(在每个实验中归一化到100％)的％表示，并以3次独立实验的平均值±SEM来展示。*表示P<0.05，****P<0.0001。培养基为5.6±1.7ng/ml。
-图3示出了营养补充剂主要成分对于正常人皮肤成纤维细胞(NHDF)的MMP-3合成的作用。在24孔板中生长并在培养基(0)加上营养补充剂主要成分的各种组合(参见表5和6对于添加的描述)中培养48小时的NHDF的上清液中测量MMP-3。数据以培养基对照(在每个实验中归一化到100％)的％表示，并以3次独立实验的平均值±SEM来展示。*表示P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001。培养基对照为0.6±0.3ng/ml。
发明详述
在以下描述中，给出大量具体细节以提供对于实施方式的全面理解。可以在不使用一项或多项具体细节，或者使用其他方法、组分、材料等的情况下实施这些实施方式。在其他情况中，没有详细示出或描述公知的结构、材料或操作以避免使实施方式的表述不清晰。
贯穿本说明书提到的“一个实施方式”或“实施方式”是指与实施方式相关描述的特定特征、结构或特性被包括在至少一个实施方式中。因此，在整个本说明书中各处出现的“在一个实施方式中”或“在实施方式中”的措辞并非必然都涉及相同实施方式。而且，在一个或多个实施方式中，特定特征、结构或特性可以以任何适合的方式组合。
此处给出的标题仅仅是为了方便而非解释实施方式的范围或含义。
本公开的实施方式提供了包含胶原蛋白、肌肽(优选L-肌肽)、辅酶Q10和白藜芦醇(优选T-白藜芦醇)的营养补充剂。
此处所述营养补充剂被赋予高抗氧化剂能力，且它能够减少氧化性损伤并改善皮肤系统。
特别是，它通过增加水和作用和弹性，通过减少皱纹深度和总面积，通过维持健康皮肤、毛发和指甲来产生皮肤状态的改善。
此处所述营养补充剂可以以液体或固体形式实现，即，通过混合固体形式的成分或通过冻干液体制剂。
此处所述营养补充剂包含0.5到10g/50ml的量，优选1.75到7.5g/50ml的量，更优选3到5g/50ml的量的胶原蛋白。
液体营养补充剂中使用的胶原蛋白可以是水解胶原蛋白，优选来自鱼类来源。
肌肽，优选L-肌肽，以10到250mg/50ml的量，优选以20到160mg/50ml的量，更优选以40到80mg/50ml的量存在。
辅酶Q10以5到250mg/50ml的量，优选以9到200mg/50ml的量，更优选以15到150mg/50ml的量存在。
白藜芦醇，优选T-白藜芦醇，以0.2到450mg/50ml的量，优选以1到200mg/50ml的量，更优选以2到80mg/50ml的量存在。
胶原蛋白连同弹性蛋白和透明质酸是皮肤的主要组分，并在提供完整性和弹性中起到关键作用。
然而，随着年龄增长，胶原蛋白减少，导致皮肤弹性的损失及细线和皱纹的形成。
在此公开的营养补充剂中存在的水解胶原蛋白有助于刺激成纤维细胞以产生新的胶原蛋白(I和III型)、透明质酸和弹性蛋白(皮肤中的细胞外组分)。
L-肌肽是在体内自然产生的蛋白质构件(buildingblock)。它在肌肉、脑、心脏和身体的许多其他部分中高度集中。
辅酶Q10(CoQ10)是在身体各处发现但特别在心脏、肝、肾和胰中发现的维生素样物质。
T-白藜芦醇是在红葡萄的皮中和其他水果中以及日本虎杖(Polygonumcuspidatum)的根中发现的抗氧化剂多酚。
由于它的主要成分(即胶原蛋白、L-肌肽、辅酶Q10和T-白藜芦醇)发挥出的协同效应，此处所述的营养补充剂被赋予高抗氧化剂能力，且它能够减少对皮肤系统的氧化性损伤。
特别是，通过抵抗自由基的形成，它通过提高皮肤的弹性和坚固度，通过减少皱纹的干度、深度和总面积来产生皮肤状态的改善。它还维持健康的皮肤、毛发和指甲。
在另一个实施方式中，营养补充剂进一步包括包含琉璃苣籽油和月见草油的乳液。
包含琉璃苣籽油和月见草油的乳液可以以0.5到250mg/50ml的量，优选2到200mg/50ml的量，更优选5到150mg/50ml的量存在。
通过加入包含琉璃苣籽油和月见草油的乳液，此处所述补充剂令人惊奇的表现出对于皮肤光滑度和水合作用的有力效果。
特别是，包含琉璃苣籽油和月见草油的乳液含有γ-亚麻酸(GLA)，也称为Ω-6脂肪酸，其能够改善皮肤光滑度和水合作用。
在另一个实施方式中，营养补充剂包含至少一种选自透明质酸、番茄红素和黑胡椒提取物的进一步的成分。
透明质酸可以以0.5到100mg/50ml的量，优选以1到75mg/50ml的量，更优选以2到40mg/50ml的量存在。
番茄红素可以以0.01到40mg/50ml的量，优选以0.05到10mg/50ml的量，更优选以0.1到5mg/50ml的量存在。
已知通过增加几种物质的胃肠吸收来提高它们的生物利用度的黑胡椒提取物可以以0.2到3.5mg/50ml的量，优选以0.5到2.5mg/50ml的量，更优选以1到2mg/50ml的量存在。
透明质酸(HA)是高分子量多糖(10-104KDa)，其位于结缔组织的细胞外基质中，主要在软结缔组织，特别是皮肤中。HA是由葡萄糖醛酸和N-乙酰葡糖胺的交替单元形成。
番茄红素属于类胡萝卜素家族，并存在于许多水果和蔬菜中。
本发明人发现通过将透明质酸、番茄红素和黑胡椒提取物中的至少一种加入营养补充剂，在皮肤水合作用、抗氧化剂活性和多种物质的生物利用度方面获得了进一步的有力效果。
在本公开内容的进一步的实施方式中，营养补充剂还包括选自阿萨伊浆果、石榴、维生素的至少一种成分，优选维生素C和维生素A。
其他可存在于营养补充剂中的维生素是已知对消费者具有健康益处的任意维生素。
优选地，进一步的维生素选自维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B6、维生素B12、维生素D、生物素和其他水溶性维生素。
在本公开的进一步的实施方式中，此处所述营养补充剂还包括矿物质、添加剂和香料物质。
矿物质可选自锌和铜。
添加剂优选选自无水柠檬酸、磷酸、乳酸、酒石酸、DL-苹果酸和三氯蔗糖。
香料物质可选自桃和荔枝精油。
内酯、酯、脂族高级醇、酮、芳香醛、芳香醇、硫醚、脂肪酸、丙二醇、乙醇、甘油(丙三醇)被用于配置芳香基质(flavorbase)。
表1报告了如上所述的可包括在水基营养补充剂中的成分的含量范围。
表1
成分 含量范围/50ml
胶原蛋白(水解的鱼胶原蛋白) 0.5-10g
L-肌肽 10-250mg
辅酶Q10 5-250mg
T-白藜芦醇 0.2-450mg
透明质酸 0.5-100mg
月见草油和琉璃苣油乳液(20％) 0.5-250mg
番茄红素 0.01-40mg
黑胡椒提取物 0.2-3.5mg
阿萨伊浆果提取物 0-250mg
石榴 0-250mg
维生素C 0-400mg
维生素A 0-400mg
其他维生素 0-400mg
矿物质 0-2.5mg
香料物质 0-200mg
在下文中将给出本说明书的营养补充剂目标的不同实施方式的一些非限制性实施例。
实施例1
已经制备包含下表2中报告的成分的液体形式的营养补充剂—根据图1所示生产流程图—首先加入成分例如水、透明质酸、水解的鱼胶原蛋白、L-肌肽、N-乙酰葡糖胺、无水柠檬酸、DL-苹果酸、黑胡椒提取物、锌、铜、D-生物素、甜菊、盐酸吡哆醇、大豆多糖、维生素D3、石榴浓缩汁、阿萨伊浆果提取物、辅酶Q10、番茄红素，在混合槽(A)中在60±5℃的温度下溶解。然后在温度冷却到低于45℃后将维生素C(L-抗坏血酸)加入混合物中。然后在60±5℃的温度下将水和T-白藜芦醇加入混合槽(B)中。在接下来的步骤中，将混合槽(A)和(B)中存在的成分与香料物质一起加入主分批槽(batchtank)。然后将水、琉璃苣油和月见草油乳液(20％)、d-α-生育酚和β-胡萝卜素乳液加入温度冷却到25±5℃的混合槽(B)中，然后加入主分批槽。在混合全部成分后，加入水以将体积调节到50ml。进行质量控制检查以确保正确的pH、酸度、味道和颜色。在生产过程的最终步骤中，在为了装瓶过程而冷却到85±2℃前，产物经受过滤和在98±2℃下保持30秒的巴氏消毒步骤。在最终包装前，进行在80±2℃保持30秒的第二巴氏消毒步骤。
表2
*NRV＝营养素参考值
下表3示出在此公开的补充剂的营养信息
表3
营养信息 含量50ml
能量 34kcal(144kJ)
蛋白质 5.3g
碳水化合物(其中糖) 0.0g(0.0g)
脂肪(其中饱和物) 1.4g(0.4g)
纤维素 0.0g
钠 0.0mg
营养补充剂基本上不含碳水化合物可以有利地也被患有糖尿病的人采用。
实施例2
已经制备包含下表4中报告的成分的液体形式的营养补充剂—根据图1所示生产流程图—首先加入成分例如水、透明质酸、水解的鱼胶原蛋白、L-肌肽、N-乙酰葡糖胺、无水柠檬酸、DL-苹果酸、黑胡椒提取物、锌、铜、D-生物素、甜菊、盐酸吡哆醇、大豆多糖、维生素D3、石榴浓缩汁、阿萨伊浆果提取物、辅酶Q10、番茄红素，在混合槽(A)中在60±5℃的温度下溶解。然后在温度冷却到低于45℃后将维生素C(L-抗坏血酸)加入混合物中。然后在60±5℃的温度下将水和T-白藜芦醇加入混合槽(B)中。在接下来的步骤中，将混合槽(A)和(B)中存在的成分与香料物质共同加入主分批槽。然后将水、琉璃苣油和月见草油乳液(20％)、d-α-生育酚和β-胡萝卜素乳液加入温度冷却到25±5℃的混合槽(B)中，然后加入主分批槽。在混合全部成分后，加入水以将体积调节到30ml。进行质量控制检查以确保正确的pH、酸度、味道和颜色。在生产过程的最终步骤中，在为了装瓶过程而冷却到85±2℃前，产物经受过滤和在98±2℃保持30秒的巴氏消毒步骤。在最终包装前，进行在80±2℃保持30秒的第二巴氏消毒步骤。
表4
*NRV＝营养素参考值
施用于人的如上所述实现的液体营养补充剂减少了对皮肤系统的氧化性损伤。
特别是，通过抵抗自由基的形成，摄入的液体营养补充剂通过减少皱纹的深度和总面积减少了皮肤干度、改善了皮肤的坚固度和弹性，并产生了抗衰老效果。
它还作用于毛囊功能，从而减少毛发损失并维持健康指甲。
营养补充剂的实现不限于这些实施例，而是可以具有不超出下面的权利要求的限制的变型。
在下文中测试了本公开的营养补充剂目标中含有的主要成分的不同组合，以研究它们对于金属蛋白酶活性的协同效应。
材料和方法
细胞培养
成体正常人真皮成纤维细胞NHDF-ad(Lonza)使用2％胎牛血清(FBS)在成纤维细胞生长培养基(FGM)(Lonza)中生长。以50000细胞/孔的密度在24孔培养板中接种，并在37℃和5％CO2下孵育。在将250μl新鲜培养基加入具有测试成分的各个孔(具有0.3％FBS、100μM抗坏血酸和100μg/ml500kDa硫酸葡聚糖的FGM，以诱导血清饥饿和大分子聚集)之前，允许细胞一式两份地附着48小时。
该研究的阳性对照是拥挤培养基(crowdedmedia)中的5ng/ml重组人TGFβ1(Peprotech)，而阴性对照是单独的拥挤培养基。
所测试成分在表5中列出。
表5
成分 缩写 浓度(μg/ml)
水解的鱼胶原蛋白 C 2000
肌肽 CS 24
辅酶Q10 Q10 10
白藜芦醇 R 1
所测试成分的各种不同组合在表6中给出。
表6
序号 组合
0 单独培养基
1 C
2 C+CS
3 C+CS+Q10
4 C+CS+Q10+R
用不同成分组合孵育48小时后，收集上清液(清除细胞)以评估金属蛋白酶MMP-1、MMP-3表达。
样品制备
通过将168.75μlHBSS-Ca/Mg和18.75μl(10X)胰蛋白酶-EDTA(Sigma)加入到各个孔中使细胞从孔上浮，在37℃下震动孵育20分钟，然后将样品移到含有62.5μl1M草酸的管中，确保样品被混合。酸中的样品在95-100℃下加热1小时。
ELISA测量
使用相关的已建立的ELISA试剂盒(R&DSystems)描述的方法测量总MMP-1和总MMP-3。
结果
评估添加在此公开的营养补充剂的成分对于NHDF细胞的MMP-1和MMP-3合成的影响。
NHDF细胞在单独的培养基(0)或在加入各种不同主要成分组合(1-4，详细内容参见材料和方法部分的表5和表6)的情况下处理48小时。
测试如表5和6中所描述的成分并与单独培养基的影响进行比较。
MMP-1，MMP-3合成
在MMP-1和MMP-3最丰富的单独上清液中测量MMP-1和MMP-3的合成。
MMP-1
看到上清液中MMP-1蛋白质水平响应于本说明书的营养补充剂目标其他主要成分的添加(培养基对照的：1；65.3±13.2％，2；83.3±13.2％，3；64.6±12.5％，4；47.2±9％)非常明显地下降(图3)。
MMP-3
类似地，上清液中MMP-3响应于本说明书的营养补充剂目标的其他主要成分的添加(图4)(培养基对照的：1；76.9±13.7％，2；76.4±19％，3；62.1±12％，4；47±9.6％)明显下降。
在此观察到的结果证明了在此公开的营养补充剂在皮肤系统的改善中的抗衰老、抗氧化剂功效。
成分在正常人真皮成纤维细胞上测试。
评估细胞MMP的表达以检查它们的水平是否是由于所测试成分的抗氧化剂活性而降低。
结果已经显示使用本说明书的营养补充剂目标，上清液中MMP-1和MMP-3合成明显减少。
这些数据表明了营养补充剂在恢复细胞外基质的体内平稳中的益处。
所观察到的对于金属蛋白酶的作用表明营养补充剂的抗氧化剂性质减少了皮肤中胶原蛋白/弹性蛋白的降解。
自然地，虽然本发明的原理保持相同，但是对于纯粹通过示例方式所描述和说明的内容，构造和实施方式的细节可以广泛改变而不背离本发明的范围。
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Claims (10)

1.一种营养补充剂，其包含胶原蛋白、肌肽、辅酶Q10和白藜芦醇。
2.根据权利要求1所述的营养补充剂，其中所述胶原蛋白以0.5到10g/50ml的量，优选1.75到7.5g/50ml的量，更优选3到5g/50ml的量存在。
3.根据权利要求1或2所述的营养补充剂，其中所述肌肽以10到250mg/50ml的量，优选以20到160mg/50ml的量，更优选以40到80mg/50ml的量存在。
4.根据权利要求1到3中任一项所述的营养补充剂，其中所述辅酶Q10以5到250mg/50ml的量，优选以9到200mg/50ml的量，更优选以15到150mg/50ml的量存在。
5.根据权利要求1到4中任一项所述的营养补充剂，其中所述白藜芦醇以0.2到450mg/50ml的量，优选以1.0到200mg/50ml的量，更优选以2.0到80mg/50ml的量存在。
6.根据权利要求1到5中任一项所述的营养补充剂，其进一步包括包含琉璃苣籽油和月见草油的乳液。
7.根据权利要求1到6中任一项所述的营养补充剂，其进一步包含至少一种选自透明质酸、番茄红素和黑胡椒提取物的成分。
8.根据前述权利要求中任一项所述的营养补充剂，其中所述营养补充剂进一步包含至少一种选自阿萨伊浆果、石榴、维生素的成分，优选为维生素C和维生素A。
9.根据权利要求9所述的营养补充剂，其中所述营养补充剂进一步包含选自维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D、生物素的维生素。
10.根据前述权利要求中任一项所述的营养补充剂用于减少皮肤系统的氧化性损伤的非治疗性用途。
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