CN105307681A

CN105307681A - 结合il-23的抗体

Info

Publication number: CN105307681A
Application number: CN201480012747.7A
Authority: CN
Inventors: C.B.贝勒; S.W.布赖特; D.S.吉拉尔; K.K.基克利
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2013-03-08
Filing date: 2014-03-04
Publication date: 2016-02-03
Anticipated expiration: 2034-03-04
Also published as: EP4311558A3; EP2964258B1; CN105307681B; US9688753B2; CY1123589T1; US20140255422A1; UA123198C2; MY171226A; KR20170103037A; AU2014226094A1; PH12015501994A1; TW201520225A; MX2015011959A; FR23C1036I1; KR101775115B1; US9023358B2; MX370396B; MA38382A1; EP4311558A2; BR112015019611B1

Abstract

本发明提供了结合至人IL-23的pi？9亚基并且以具有高亲和性、选择性和中和性能为特征的抗体。所述抗体可用于治疗或预防选自多发性硬化、风湿性关节炎、牛皮癣、炎症性肠道疾病、强直性脊椎炎、移植物抗宿主疾病、狼疮和代谢综合征的自身免疫或炎症状况。抗体还可用于治疗癌症。

Description

结合IL-23的抗体

本发明涉及结合人白介素-23（IL-23）的抗体及其用途。

白介素-23（IL-23）是二硫键连接的异二聚体细胞因子，由p19和p40亚基构成。它是细胞因子白介素-12（IL-12）家族的部分。IL-12是70kDa的异二聚体细胞因子，其由共价连接的p40和p35亚基组成。IL-12在保护性先天性和适应性免疫应答的发展和肿瘤监视中起关键作用。IL-12还通过其促进1型辅助T细胞（Th1）应答的能力涉及炎症应答。然而，IL-12在炎症应答中的功能作用已经随相关细胞因子，IL-23的发现而被重新评估。IL-23由与IL-12相同的p40亚基构成但是是和p19亚基共价配对。用于测定IL-12作用的很多试剂是直接针对IL-12/IL-23共有的p40亚基，意指先前归于IL-12的活性可能已由IL-23介导。IL-23缺陷小鼠的开发使研究者能够区分IL-12和IL-23之间的活性并且将IL-23鉴定为自身免疫/炎症应答的重要介体。

功能性的IL-23受体是IL-12Rβ1亚基（其与IL-12受体共享）和IL-23R亚基的异二聚体。对IL-23的受体与Janus激酶2（Jak2）组成地相关，并且主要激活STAT3，比IL-12具有更少的STAT4活化作用。

IL-23受体在活化/记忆T-细胞和自然杀伤（NK）细胞上表达。单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞也在低水平表达IL-23受体。IL-23支持幼稚CD4+ T细胞至称为Th17细胞的细胞新亚型的分化和维持，其区别于典型的Th1和Th2细胞。Th17细胞生产白介素-17A（IL-17A）和白介素-17F（IL-17F）。Th17细胞生产一系列已知驱动炎症应答的其它因子，所述其它因子包括已知推动炎症应答的肿瘤坏死因子，包括肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、CXCL1和CCL20。NK细胞和先天淋巴样细胞诸如淋巴样组织诱导（LTi）样细胞表达IL-23受体和视黄酸相关孤儿受体（ROR）γ并且生产IL-17以应答IL-23。IL-1β和IL-23还共刺激γ-δT细胞以在没有T细胞受体参与下诱导IL-17生产。

存在确实的证据显示IL-23应答细胞与自身免疫炎症疾病和癌症有关。特别地，IL-23特异性抑制剂（即，抑制IL-23但不抑制IL-12的抑制剂）将会特别有用，因为不影响IL-12而抑制IL-23被假设将治疗受益最大化而将抑制宿主防御的风险最小化。

特异地结合至IL-23的p19亚基的抗体是潜在有用的抑制剂，参见，例如WO 2007/024846和WO 2007/027714。在WO 2007/024846中公开的抗体具有的问题，至少是组织交叉反应性的潜在可能，特别地，结合视网膜组织的潜在可能（这是安全问题）。此外，在WO 2007/024846中公开的抗体，至少具有次优的物理-化学性能，例如，极端的疏水性导致聚集，其对工业规模的抗体的生产形成了显著的障碍。另外，尚没有靶向IL-23的p19亚基的抗体已被批准用于治疗用途。

因此，仍然对IL-23抗体存在需求。特别地，对以高亲和性结合至IL-23（特别地，人IL-23）的p19亚基，并且不结合至相关细胞因子家族成员IL-12的p40亚基的IL-23抗体仍存在需求。更特别地，在此对以高亲和性结合至IL-23的p19亚基并且不显著展现组织交叉反应性（特别地，视网膜组织交叉反应性）的IL-23抗体仍存在需求。还对具有促进开发、生产或配制的药物可接受物理-化学特性的IL-23抗体存在需求。

本发明提供了结合至人IL-23的p19亚基的抗体，其包括轻链和重链，其中轻链包括轻链可变区（LCVR）并且重链包括重链可变区（HCVR），其中LCVR包括氨基酸序列LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包括氨基酸序列HCDR1、HCDR2、HCDR3，其中LCDR1是SEQ ID NO:4，LCDR2是SEQ ID NO:5，LCDR3是SEQ ID NO:6，HCDR1是SEQ ID NO:1，HCDR2是SEQ ID NO:2和HCDR3是SEQ ID NO:3。

在本发明的实施方案中，抗体包括轻链和重链，其中轻链包括轻链可变区（LCVR）并且重链包括重链可变区（HCVR），其中LCVR的氨基酸序列是SEQ ID NO: 8，并且HCVR的氨基酸序列是SEQ ID NO: 7。

在本发明的进一步的实施方案中，抗体包括两条轻链可变区（LCVR）和两条重链可变区（HCVR），其中每个LCVR的氨基酸序列是SEQ ID NO: 8并且每个HCVR的氨基酸序列是SEQ ID NO: 7。

在本发明的还进一步的实施方案中，抗体包括轻链和重链，其中轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 10并且重链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 9。

在本发明的还进一步的实施方案中，抗体包括两条轻链和两条重链，其中每条轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 10并且每条重链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 9。

本发明提供了结合至人IL-23的p19亚基的抗体，其包括轻链和重链，其中轻链包括轻链可变区（LCVR）并且重链包括重链可变区（HCVR），其中LCVR包括互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且HCVR包括互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且其中LCDR1由氨基酸序列SEQ ID NO:4组成，LCDR2由氨基酸序列SEQ ID NO:5组成，LCDR3由氨基酸序列SEQ ID NO:6组成，HCDR1 由氨基酸序列SEQ ID NO:1组成，HCDR2由氨基酸序列SEQ ID NO:2组成，并且HCDR3由氨基酸序列SEQ ID NO:3组成。

本发明还提供了结合至人IL-23的p19亚基的抗体，其包括轻链和重链，其中轻链包括轻链可变区（LCVR）并且重链包括重链可变区（HCVR），其中LCVR链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 8并且HCVR链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 7。

本发明还提供了结合至人IL-23的p19亚基的抗体，其包括轻链和重链，其中轻链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 10并且重链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 9。

本发明还提供了结合至人IL-23的p19亚基的抗体，其包括两条轻链和两条重链，其中每条轻链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 10并且每条重链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 9。

本发明的抗体的氨基酸序列在下文中提供。

本发明还提供了在位于SEQ ID NO: 15的第81位-第99位和第115位-第140位氨基酸之内的构象表位结合至人IL-23的p19亚基的抗体。

本发明还提供了在位于SEQ ID NO: 15的第81位-第99位和第115位-第140位氨基酸之内的构象表位结合至人IL-23的p19亚基的抗体，其中抗体至少接触SEQ ID NO: 15的氨基酸残基94P、95S、97L、98P、99D、123W、130S、133P和137W。

在本发明还进一步的实施方案中，抗体对人IL-23的p19亚基是选择性的。

当结合至人IL-23的p19亚基时，本发明的抗体阻止了人IL-23至IL-23受体的IL-23亚基的结合。因此，本发明的抗体抑制了人IL-23在IL-23受体的人IL-23亚基上的活性。

本发明的抗体不阻止人IL-23至IL-23受体的IL-12Rβ1亚基的结合，并且因此，不抑制人IL-23在IL-23受体的IL-12Rβ1亚基上的活性。

抗体没有可检测地结合至人IL-23和人IL-12共享的p40亚基。

在本发明还进一步的实施方案中，抗体具有对人IL-23的p19亚基的中和活性。

在本发明还进一步的实施方案中，本发明的抗体具有小于或等于约90 pM的IC₅₀。优选地，本发明的抗体具有小于或等于约74 pM的IC₅₀。如在实施例1中标题为“在鼠脾细胞中通过抗体I的人或食蟹猴IL-23的体外中和”的部分描述的，在体外鼠脾细胞测定中测量IC₅₀值。

在本发明的还进一步的实施方案中，本发明的抗体是选择性的并且对人IL-23的p19亚基具有中和活性。

在本发明还进一步的实施方案中，本发明的抗体对人IL-23具有约10 pM至约30 pM的解离平衡常数（K_D）。优选地，本发明的抗体对人IL-23具有约21 pM的K_D。如在实施例1中标题为“通过表面等离子共振（BIAcore ）对抗体I的亲和性结合测量”的部分描述的，通过在37℃下的结合动力学建立了K_D值。本发明的抗体进一步使用对人IL-23的p19亚基约2.2 x 10⁶ M^-1秒^-1至约2.6 x 10⁶ M^-1秒^-1的k_on 速率进行表征。优选地，本发明的抗体对人IL-23的p19亚基具有约2.43 x 10⁶ M^-1秒^-1的k_on速率。本发明的抗体甚至进一步使用对人IL-23的p19亚基的约0.30 x 10^-4 秒^-1至约0.70 x 10^-4 秒^-1的k_off速率进行表征。优选地，本发明的抗体对人IL-23的p19亚基具有约0.52 x 10^-4 秒^-1的k_off速率。

本发明的抗体以高亲和性结合至人IL-23的p19亚基。为了本公开的目的，术语“高亲和性”指的是至少约21 pM的K_D。如在实施例1中标题为“通过表面等离子共振（BIAcore ）对抗体I的亲和性结合测量”的部分描述的，K_D值是通过在37℃下的结合动力学建立的。

不像结合至人IL-23的某些现有技术抗体，本发明的抗体没有显著地展现组织交叉反应性。特别地，本发明的抗体没有显著地结合至视网膜组织。

本发明的抗体具有药物可接受的物理-化学性能，其包括在生理和实验室条件下的药物可接受的溶解性，和药物可接受的化学和物理稳定性，其中在如实施例1中标题为“IL-23抗体的物理-化学性能”的部分描述的条件范围内观察到抗体保持单体形式和非常少的高分子量（HMW）聚集。

本发明进一步提供了药物组合物，其包括本发明的抗体和一种或多种药物可接受载体、稀释剂或赋形剂。更特别地，本发明的药物组合物进一步包括一种或多种另外的治疗剂。

本发明还提供了在患者中治疗或预防状况的方法，其包括对有需要的患者施用有效量的本发明的抗体，其中状况是选自多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、炎症性肠道疾病、强直性脊椎炎、移植物抗宿主疾病、狼疮和代谢综合征的自身免疫或炎症状况。

本发明还提供了在患者中治疗或预防状况的方法，其包括对需要其的患者施用有效量的本发明的抗体，其中状况是癌症。

在本发明的实施方案中，癌症是黑素瘤、结肠癌、卵巢癌、头颈癌、肺癌、乳腺癌或胃癌。

本发明还提供了用于在治疗中使用的本发明的抗体。

更特别地，本发明提供用于在选自多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、炎症性肠道疾病、强直性脊椎炎、移植物抗宿主疾病、狼疮和代谢综合征的自身免疫或炎症状况的治疗或预防中使用的本发明的抗体。

本发明还提供了用于在癌症的治疗或预防中使用的本发明的抗体。

本发明提供了本发明的抗体在制备用于选自多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、炎症性肠道疾病、强直性脊椎炎、移植物抗宿主疾病、狼疮和代谢综合征的自身免疫或炎症状况的治疗或预防的药物中的用途。

本发明还提供了本发明的抗体在制备用于癌症的治疗或预防的药物的生产中的用途。

本发明还涉及编码上文描述的本发明抗体的多核苷酸。

本发明提供了DNA分子，其包括编码具有氨基酸序列SEQ ID NO: 10的轻链多肽的多核苷酸序列。

本发明还提供了DNA分子，其包括编码具有氨基酸序列SEQ ID NO: 9的重链多肽的多核苷酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了编码本发明的抗体的多核苷酸，其中由SEQ ID NO:11编码HCVR并且由SEQ ID NO:12编码LCVR。

在进一步的实施方案中，本发明提供了编码本发明的抗体的多核苷酸，其中由SEQ ID NO:13编码重链并且由SEQ ID NO:14编码轻链。

本发明的多核苷酸可以以RNA的形式或以DNA的形式，其中DNA包括cDNA和合成DNA。DNA可以是双链的或单链的。作为遗传密码冗余性或简并性的结果，编码本发明的抗体的编码序列可以变化。

编码本发明的抗体的多核苷酸可以包括以下：只编码抗体的序列、抗体的编码序列和另外的编码序列诸如前导序列或分泌序列或前蛋白序列；抗体的编码序列和非编码序列，诸如内含子或蛋白质的编码序列的非编码序列5'和/或3'。因此，术语“编码抗体的多核苷酸”涵盖这样的多核苷酸，其可包括不仅蛋白质的编码序列，还有包括另外的编码和/或非编码序列的多核苷酸。

本发明的多核苷酸将在序列操作地连接至编码控制序列后在宿主细胞中表达。表达载体是通常在宿主生物体中可复制的（要么作为附加体，要么作为宿主染色体DNA的整合部分）。通常地，表达载体将含有选择标记物，例如，四环素、新霉素和二氢叶酸还原酶，以允许检测使用期望的DNA序列转化的那些细胞。

本发明提供了重组宿主细胞，其包括了包括编码具有氨基酸序列SEQ ID NO: 10的轻链多肽的多核苷酸的DNA分子和包括编码具有氨基酸序列SEQ ID NO: 9的重链多肽的多核苷酸序列的DNA分子，其中细胞能够表达包括重链和轻链的抗体，其中重链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 9并且轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 10。

本发明的抗体可以容易地在哺乳动物细胞诸如CHO、NS0、HEK293或COS细胞中；在细菌细胞诸如大肠杆菌（E. coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）或荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescence）中；或在真菌或酵母细胞中生产。使用本领域熟知的技术培养宿主细胞。

可以将含有目的多核苷酸序列（例如，编码抗体多肽的多核苷酸和表达控制序列的多核苷酸）的载体通过熟知的方法转化至宿主细胞中，其变化取决于细胞宿主的类型。例如，对原核细胞通常使用氯化钙转化，而可以对其它细胞宿主使用磷酸钙处理或电穿孔。

可以使用蛋白质纯化的多种方法，并且这样的方法是本领域已知的并且在，例如， Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990) and Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 3rd Edition, Springer, NY (1994)中描述。

本发明提供了生产结合至人IL-23的p19亚基的抗体的方法，所述抗体包括重链和轻链，其中重链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 9并且轻链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 10，所述方法包括步骤：

a) 在使得所述抗体表达的状况下培养权利要求7的重组宿主细胞；和

b) 从所述宿主细胞回收表达的抗体。

进一步地，本发明提供了生产结合至人IL-23的p19亚基的抗体的方法，所述抗体具有重链和轻链，其中重链的氨基酸序列是SEQ ID NO:9并且轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO:10，所述方法包括步骤：

a) 在使得所述多肽序列表达的状况下，培养包括编码由SEQ ID NO:9给出的多肽序列的第一多核苷酸序列和编码由SEQ ID NO:10给出的多肽序列的第二多核苷酸序列的重组宿主细胞；和

b) 从所述宿主细胞回收包括重链和轻链的抗体，其中所述重链的多肽序列由SEQ ID NO:9给出，并且所述轻链的多肽序列由SEQ ID NO:10给出。

在上文描述的方法的一个实施方案中，编码由SEQ ID NO:9给出的多肽序列的第一多核苷酸序列和编码由SEQ ID NO:10给出的多肽序列的第二多核苷酸序列是相同核酸分子的部分。

在实施方案中，本发明提供了通过前文提及的方法生产的抗体。

在进一步的实施方案中，通过前文提及的方法生产的抗体具有两条重链和两条轻链，其中每条重链的多肽序列是由SEQ ID NO:9给出，并且每条轻链的多肽序列是由SEQ ID NO:10给出。

本发明的抗体是IgG型抗体并且具有四条氨基酸链（两条“重”链和两条“轻”链），其通过链内和链间的二硫键交联。当在某些生物系统中表达时，具有天然人Fc序列的抗体在Fc区域被糖基化。抗体还可以在其它位置被糖基化。

每条重链由N-末端HCVR 和重链恒定区（“HCCR”）组成。将人重链分类为γ、μ、α、δ或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。可以将人IgG抗体进一步分至亚型，例如，IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄。

由于对参与Fc受体介导的炎症机制或对激活补体减少的能力而导致减少的效应子功能（effector function），优选地，本发明的抗体含有来源于人IgG₄ Fc区的Fc部分。

更优选地，本发明的抗体含有IgG₄-PAA Fc部分。IgG₄-PAA Fc部分具有在第223位（S223P; SEQ ID NO: 9）丝氨酸至脯氨酸的突变，在第229位（F229A; SEQ ID NO: 9）苯丙氨酸至丙氨酸的突变和在第230位（L230A; SEQ ID NO: 9）亮氨酸至丙氨酸的突变。S223P突变是铰链突变（hinge mutation），其阻止了半抗体形成（在IgG₄ 抗体中半分子的动态交换的现象）。F229A和L230A突变进一步减少了已降低的人IgG₄ 同种型的效应子功能。

每种重链类型还通过具有本领域中熟知序列的特别的恒定区进行表征。对于IgG重链恒定区由三个结构域（CH1、CH2和CH3）组成。

将轻链分类为κ或λ，其各自通过本领域已知的特别的恒定区进行表征。每条轻链由LCVR和轻链恒定区（“LCCR”）组成。优选地，本发明的抗体包括κ轻链。

每条轻链/重链对的可变区形成了抗体结合位点。HCVR和LCVR区可以进一步细分为高变区，被称为互补决定区（“CDR”），穿插有更保守的区域，被称为框架区（“FR”）。每个HCVR和LCVR由三个CDR和四个FR构成，按以下顺序从氨基末端至羧基末端安排：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、 FR4。因此，重链的三个CDR被称为“HCDR1、HCDR2和HCDR3”，并且轻链的三个CDR被称为“LCDR1、LCDR2和LCDR3”。CDR含有形成与抗原特异的相互作用的大部分残基。目前存在三种为抗体CDR排列的系统，其被用于序列描述。Kabat CDR定义（Kabat 等人, “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）是基于抗体序列可变性。Chothia CDR定义（Chothia 等人, “Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins”, Journal of Molecular Biology, 196, 901-917 (1987); Al-Lazikani 等人, “Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins”, Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997)）是基于抗体的三维结构和CDR环的拓补结构。Chothia CDR定义和Kabat CDR定义除了HCDR1和HCDR2之外是相同的。North CDR定义（North 等人, “A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations”, Journal of Molecular Biology, 406, 228-256 (2011)）是基于具有大量晶体结构的近邻传播聚类（affinity propagation clustering）。

对于本发明的目的，使用三种方法的共识以定义CDR。在轻链CDR的情况中，使用Kabat和Chothia CDR定义。在HCDR1的情况中，使用Kabat和Chothia CDR定义的混合。HCDR1的Kabat定义在重链的第一个半胱氨酸后8个残基起始并且长度为5个残基，而HCDR1的Chothia定义在该半胱氨酸后3个残基起始并且长度为7个残基。本发明的抗体的HCDR1由Chothia起始位置和Kabat结束位置定义。在HCDR2的情况中，使用了Kabat定义，在HCDR3的情况中，使用了North、Kabat和Chothia CDR定义的混合。HCDR3的Kabat定义包括重链的第95-第102位的残基（对于本发明的抗体为SEQ ID NO: 13）并且通常在半胱氨酸三个残基后起始。HCDR3的Chothia定义和Kabat定义相同。HCDR3的North定义包括重链第93-第102位的残基（对于本发明的抗体为SEQ ID NO: 13）并且通常在半胱氨酸残基后立刻起始。本发明的抗体的HCDR3通过North起始位置和Kabat/Chothia/North结束位置定义。

表1显示了本发明的抗体的示例性CDR排列。

表1：CDR定位

本发明的抗体是经工程改造的抗体，其已经被设计为具有人源的框架、铰链区和恒定区，其与来源于人基因组序列的框架和恒定区一致或基本一致（基本人源）。完全的人框架、铰链区和恒定区是那些人种系序列以及具有天然发生的体细胞突变和那些经工程改造突变的序列。本发明的抗体可以包括来源于含有一种或多种氨基酸替换、缺失或添加的完全的人框架、铰链区和恒定区的框架、铰链区和恒定区。进一步地，本发明的抗体优选在人中基本无免疫原性。

可以各自或组合地使用多种不同的人框架序列作为本发明的抗体的基础。优选地，本发明的抗体的框架区是人源的或基本人源（至少95%、97%或99%人源）。人源的框架区的序列可以从The Immunoglobulin Factsbook, by Marie-Paule Lafranc, Gerard Lefranc, Academic Press 2001, ISBN 012441351获得。

本发明的抗体的框架序列充当“供体”可变框架区，并且可以被用于使用本领域已知的方法学产生具有本文中指定的相同CDR的另外的抗体。此外，本发明的抗体的框架序列可以与其它已知的人框架序列比较以产生另外的抗体。因此，该信息可以用于在这些位置将另一个选择的同源人框架区“回复突变”至供体氨基酸残基。进一步地，可以在另外的人框架中检测任何“稀有”氨基酸，使得共有区或供体的氨基酸残基可以在相应位置使用。

生产和纯化抗体的方法是本领域熟知的并且可以在例如Harlow和Lane (1988) Antibodies. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York, Chapters 5-8和15中发现。例如，可以使用人IL-23或其片段免疫小鼠，并且产生的抗体可以随后被回收、纯化，并且使用本领域熟知的常规方法确定氨基酸序列。本发明的抗体经工程改造以含有围绕来源于非人抗体的CDR的一种或多种人框架区。人框架种系序列可以从ImMunoGeneTics (IMGT)通过他们的网址http://imgt.cines.fr，或从TheImmunoglobulin Facts Book by Marie-Paule Lefranc and Gerard Lefranc, Academic Press, 2001, ISBN 012441351获得。特别的，用于在本发明的抗体中使用的种系轻链框架包括02。

用于在本发明的抗体中使用的特别的种系重链框架区包括VH1-69。

本发明的经工程改造的抗体可以使用已知方法制备和纯化。例如，可以将编码重链（例如，由SEQ ID NO: 9给出的氨基酸序列）和轻链（例如，由SEQ ID NO: 10给出的氨基酸序列）的cDNA序列克隆并经工程改造至GS（谷氨酰胺合成酶）表达载体中。可以随后将经工程改造的免疫球蛋白表达载体稳定地转染至CHO细胞中。抗体的哺乳动物表达将导致糖基化，其通常是在Fc区中高度保守的N-糖基化位点上。稳定的克隆可以对特异地结合至人IL-23的抗体的表达进行验证。在生物反应器中可以将阳性克隆在用于抗体生产的无血清培养基中扩大。可以通过常规技术将抗体分泌至其中的培养基纯化。例如，可以将培养基方便地施加于已使用相容缓冲液诸如磷酸盐缓冲液平衡的Protein A或G Sepharose FF柱。将柱洗涤以移除非特异性结合组分。将结合的抗体通过例如pH梯度洗脱，并且通过诸如SDS-PAGE检测抗体级分，并且随后合并。可以使用常规技术将抗体浓缩和/或无菌过滤。可溶的聚集体和多聚体可以通过常规技术有效地移除，其包括大小排阻层析、疏水相互作用层析、离子交换层析、羟基磷灰石层析。可以将产物立即冷冻，例如在-70℃，或可以冻干。

本发明的抗体是单克隆抗体。如在本文中使用的“单克隆抗体”或“mAb”指的是来源于单一拷贝或克隆的抗体，其包括例如，任何真核、原核或噬菌体克隆并且不是指生产它的方法。其单克隆抗体可以通过例如，杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术、合成技术，例如CDR-移植或本领域已知的这样的或其它技术的组合进行生产。

在本发明的另一个实施方案中，抗体或编码相同抗体的核酸，是以分离的形式提供。

本发明的抗体，或包括相同抗体的药物组合物，可以通过非肠道途径（例如，皮下的、静脉内的、腹腔的、肌内的或经皮的）施用。

本发明的药物组合物可以通过本领域熟知的方法（例如，Remington: The Science and Practice a/Pharmacy, 19^th edition (1995), (A. Gennaro 等人, Mack Publishing Co.）)制备，并且包括在本文中公开的抗体，和一种或多种药物可接受载体、稀释剂或赋形剂。例如，本发明的抗体可以使用试剂诸如柠檬酸钠、柠檬酸、聚山梨醇酯80、氯化钠和蔗糖配制，并且产生的组合物可以随后冻干并且在2℃ - 8℃贮存。冻干的组合物可以随后使用注射用无菌水在施用前重构。

如在本文中使用的，术语“结合至人IL-23的p19亚基”，指的是本发明的抗体与由氨基酸序列SEQ ID NO: 15给出的人IL-23的p19亚基上的表位可检测的相互作用。如在实施例1中标题为“通过表面等离子共振（BIAcore ）对抗体I的亲和性结合测量”部分描述的，通过在37℃下的结合动力学测量本发明的抗体和人IL-23的p19亚基之间的相互作用。

如在本文中使用的术语“表位”指的是紧密结合在蛋白质（抗原）表面并且和抗体相互作用的氨基酸残基。在此有两种广泛类型的表位：线性表位和构象表位。

如在本文中使用的术语“线性表位”指的是蛋白质特定区域的连续的一级氨基酸序列。

如在本文中使用的术语“构象表位”指的是由本发明的抗体接触的抗原氨基酸序列的不连续部分。构象表位通过天然蛋白质的结构以及序列定义；这些表位可以是连续的或不连续的。表位的组分可以位于蛋白质的不同部分，其在折叠的天然蛋白质结构中彼此接近。在本发明的背景下，本发明的抗体在SEQ ID NO: 15的第81-99位和第115-140位氨基酸之内结合至构象表位，其中抗体至少接触SEQ ID NO: 15的氨基酸残基94P、95S、97L、98P、99D、123W、130S、133P和137W。然而，构象表位不限于这些氨基酸残基并且可以包括SEQ ID NO: 15的第81-99位和第115-140位氨基酸中的另外的氨基酸残基。

如在本文中使用的术语“没有显著地结合视网膜组织”指的是不存在本发明的抗体与人和食蟹猴视网膜组织可检测的相互作用。如实施例1中标题为“视网膜组织交叉反应性：通过免疫组织化学的体外分析”的部分描述的，本发明的抗体和人和食蟹猴视网膜组织之间的相互作用在免疫组织化学测定中进行评估。如在上下文中使用的术语“显著地”指的是人和食蟹猴视网膜组织的视觉评估，以确定本发明的抗体是否结合至所述人和食蟹猴的视网膜组织。

如在本文中使用的关于本发明的抗体的术语“选择性的”指的是结合人IL-23的p19亚基但是不结合至人IL-23和人IL-12共享的p40亚基的抗体。

如在本文中使用的，术语“中和”指的是“中和抗体”，其意在指抑制人IL-23的生物学活性。如使用小鼠脾细胞生物测定（参见实施例1中标题为“在鼠脾细胞中通过抗体I的人或食蟹猴IL-23的体外中和”的部分）或人IL-23中和测定（参见实施例1中标题为“人IL-23的中和：极性的、局部的”的部分）所确定的测量IL-23生物学活性的一种或多种指示物，可以评估该人IL-23生物学活性的抑制。

如在本文中使用的术语“K_D”意在指特定的抗体-抗原相互作用的解离常数。其通过以下公式计算：

K_off/K_on = K_D。

如在本文中使用的术语“k_on”，意在指以单位：M^-1秒^-1测量的向前的或复合物形成的反应的缔合常数或结合速率常数（on rate constant），或比反应速率。

如在本文中使用的术语“k_off”，意在指以单位：秒^-1测量的对来自抗体/抗原复合物的抗体的解离的解离常数或解离速率常数（off rate constant）或比反应速率。

如在本文中使用的术语“IC₅₀”，意在指在实施例1的标题为“在鼠脾细胞中通过抗体I的人或食蟹猴IL-23的体外中和”的部分中描述的生物测定中在小鼠脾细胞内中和50%的IL-23生物活性所需的本发明的抗体的有效浓度。

如在本文中使用的术语“多核苷酸”，意在包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的。

如在本文中使用的术语“分离的”指的是在细胞环境中游离于或基本游离于其它大分子种类的蛋白质、肽或核酸。

如在本文中使用的术语“基本游离”，意指包括多于存在的大分子种类的80%（基于摩尔的），优选地多于90%和更优选地多于95%的目的蛋白质、肽或核酸。

“患者”是哺乳动物，优选地是人。

术语“治疗”指的是减缓、中断、阻止、缓解、停止、减少或逆转存在的症状、病症、状况或疾病的进程或严重性。

如在本文中使用的，术语“有效量”指的是本发明的抗体的量或剂量，在将其单一剂量或多剂量施用至患者后，在处于治疗的患者中提供了期望的效果。有效量可以通过参与的诊断医生，如本领域的技术人员，通过考虑数种因素诸如哺乳动物的物种；其大小、年龄和基本健康；涉及的特定疾病；疾病的程度或严重性；个体患者的应答；施用的特别的抗体；施用的模式；施用的制备物的生物利用度特征；选择的剂量方案和任何伴随药物的使用容易地确定。

实施例

以下实施例进一步说明了本发明。然而，应当理解的是实施例是通过说明并且非限制的方式陈述，并且可以由本领域普通技术人员进行多种修饰。

实施例1

抗体的生产

该实施例的抗体I包括两条重链和两条轻链，每条重链具有由SEQ ID NO: 9给出的氨基酸序列，并且每条轻链具有由SEQ ID NO: 10给出的氨基酸序列。抗体I可以按以下制作并纯化。将合适的宿主细胞，诸如HEK293或CHO，使用用于分泌抗体的使用最优的预定HC：LC载体比例的表达系统或编码重链（SEQ ID NO: 9）和轻链（SEQ ID NO: 10）两者的单一载体系统进行瞬时或稳定转染。将已经分泌抗体的澄清的培养基使用多种常规技术中任意的技术进行纯化。例如，培养基可以方便地实施于已使用相容缓冲液诸如磷酸盐缓冲液（pH7.4）平衡的Protein A或G柱。将柱洗涤以移除非特异性结合组分。将结合的抗体通过例如pH梯度（诸如0.1M磷酸钠缓冲液 pH6.8至0.1M柠檬酸钠缓冲液pH2.5）洗脱。将抗体级分中和（例如，通过在pH8.0添加1/10^th体积的1M TRIS）、检测（诸如通过SDS-PAGE），并且随后合并。进一步的纯化是任选的，取决于意图的用途。可以使用常规技术将抗体浓缩和/或无菌过滤。可以通过常规技术将可溶的聚集体和多聚体有效地移除，其包括大小排阻层析、疏水相互作用层析、离子交换层析、或羟基磷灰石层析。在这些层析步骤后抗体的纯度大于99%。可以将产物在-70℃立即冷冻，或可以冻干。

通过表面等离子体共振（BIAcore）的亲和结合测量

使用 BIAcore Biosensor 2000和BIAevaluation软件以与传质模型1：1的结合确定对人、食蟹猴或兔IL-23的抗体亲和性（K_D）。捕获蛋白质（蛋白A，Calbiochem）通过游离的氨基基团偶联至使用N-乙基-N-（二甲氨丙基）-碳化二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）的混合物的CM4生物传感芯片的流通池1和2的羧基上。流通池使用含有0.01 M HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.005 % 表面活性剂 P20的缓冲液在80 µL/分钟的流速下监控。抗体I在流通池2被捕获，以产生总共40至60的应答单位（RU）。将IL-23的递增浓度的多个循环随后注射至流通池1和2（对人和猴IL-23 0.62 nM至30 nM，对兔IL-23 30nM至240 nM）上，随后在每个循环之间使用甘氨酸-HCl（pH 1.5）进行再生步骤。将流通池1作为对照监控IL-23的非特异性结合并且数据反映了流通池2减去流通池1。每个循环包括抗体捕获步骤，随后是在30分钟的解离时期的以一个浓度的IL-23注射，随后再生。将注射缓冲液替换IL-23的两个循环作为对照用于基线消减和修正与抗体I从蛋白质A表面解离相关的漂移。在37 ^oC测量亲和性。用人、猴或兔IL-23进行两次测定。抗体I分别与333 nM小鼠IL-23、200 nM大鼠IL-23、333 nM人IL-12、500 nM人IL-27、或833 nM人IL-35各自测试两次。

使用与传质模型1：1的结合对每个抗原评估结合速率(k_on ) 和解离速率 (k_off ) 。根据公式：K_D = k_off /k_on 根据结合动力学计算亲和性（K_D）。

表2-抗体I的结合参数

使用该方法抗体I产生了对人、食蟹猴和兔IL-23的浓度依赖的结合应答。使用在芯片表面捕获的抗体I的80-100应答单位，在30nM（人和猴）和240nM（兔）的浓度下获得了IL-23结合的饱和度。在测试的条件下，人、猴或兔IL-23对抗体I的结合亲和性（K_D）分别为21、55或53,000 pM（表1）。小鼠IL-23、大鼠IL-23、人IL-12、人IL-27或人IL-35在这些条件下不结合至抗体I。

IL-23结合至IL-23受体的体外抑制

通过游离的氨基基团将重组人IL-23R/Fc偶联至使用N-乙基-N-（二甲氨丙基）-碳化二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）的混合物的CM4生物传感芯片的流通池2上的羧基。使用相同方法将重组人IgG₁ Fc (R&D Systems, Inc.)偶联至相同芯片的流通池1。使用相同方法将小鼠抗-6X HIS 抗体(R&D Systems, Inc.)偶联至相同芯片的流通池4。使用小鼠抗-6X HIS预捕获含有HIS标签的人IL-12Rβ1/Fc (R&D Systems, Inc.)。使用含有0.01 M HEPES, pH 7.4、150 mM NaCl, 0.005% 表面活性剂 P20的缓冲液以30 µL/分钟的流速监控流通池。将重组人IL-23添加或不添加16X摩尔过量抗体I预孵育90分钟。将每种组合以150 µL的总体积注射至流通池1、2和4，随后是使用甘氨酸-HCl（pH 1.5）在每个测试之间的再生步骤。将流通池1作为对照使用以监控IL-23对芯片的非特异结合。使用BIAevaluation软件以制备各自结合传感图的重叠图（overlay）。

使用体外功能测定使抗体I中和人IL-23。此外，抗体I阻止了IL-23至IL-23R/Fc的结合。在表3中显示了数据：

（A）IL-23结合至IL-23R/Fc；

（B）抗体I/IL-23复合体没有结合至IL-23R/Fc；

（C）IL-23结合至IL-12Rβ1/Fc；和

（D）抗体I/IL-23复合体结合至IL-12Rβ1/Fc。

表3：抗体I对IL-23结合IL-23R的影响

因此，抗体I中和了IL-23，因为其抑制了IL-23至IL-23R亚基的结合。另外地，抗体I没有抑制IL-23至IL-12Rβ1亚基的结合。

在鼠脾细胞中通过抗体I的人或食蟹猴IL-23的体外中和

为了抗体I的评估，使用了给定IL-17最大生产约50%的人或食蟹猴IL-23浓度（16 pM）。评估了抗体I 800,000至4.4 pM范围的剂量应答。在添加至细胞前在37^oC 下将抗体I或IgG₄对照抗体与人或食蟹猴IL-23在分别的孔中组合90分钟（预孵育混合）。

使用IL-23和IL-2刺激的来自C57BL/6小鼠的脾细胞产生IL-17（Aggarwal, S. 等人, “Interleukin-23 Promotes a Distinct CD4 T Cell Activation State Characterized by the Production of Interleukin-17”, Journal of Biological Chemistry, 278 (3): 1910-1914 2003）。将小鼠脾细胞以5x10⁶ WBC/mL在测定培养基（含有10 % FBS, 1 % 非必需氨基酸、1 mM丙酮酸钠、100 U/mL 青霉素、100 µg/ml 链霉素、0.00035 % 2-巯基乙醇、50 ng/mL 人IL-2的具有L-谷氨酰胺的RPMI1640 ）中重悬，并且以每孔100 µL的体积分配至96-孔培养平板中。将抗体I/IL-23的预培养混合物以每孔100 µL分配并且在37 ^oC在5 % CO₂中培养。48小时后，使用来自R&D Systems (DY421)的商业的ELISA试剂盒对培养上清液测试mIL-17，其根据试剂盒中的说明书在每个稀释度中使用一式两孔进行。使用数据的4参数曲线拟合确定IC₅₀ 。

小鼠脾细胞产生IL-17以应答人或食蟹猴IL-23。抗体I中和人或食蟹猴IL-23。计算的IC₅₀ 对人IL-23为82 + 11 pM并且对食蟹猴IL-23为120 + 14 pM，各自n=2（表4）。这些结果证明抗体I能够在体外中和人或食蟹猴IL-23。

表4：在体外人或和食蟹猴IL-23中和测定中的IC₅₀

人IL-23的中和：急性的、局部的

在实验前和研究期间，使动物（来自Jackson Labs，C57BL/6只雌性，8周大）正常地居住（最少在到达后72小时）和喂养。使用电推剪将毛发从小鼠背部移除，并且在3天后使小鼠（每组n=10）接受抗体I或IgG₄ 同种型对照抗体（每只小鼠0.54 mg）的皮下注射。在接下来的两天，使用人IL-23在背部一侧的一个位置（1 µg在50 µL中，使用无菌盐水稀释）使用29号针对小鼠进行皮内注射。在背部的另一侧使用无菌盐水作为媒介物对照。在最后的人IL-23注射24小时后将小鼠处死并且从IL-23注射一侧和无菌盐水注射一侧移出皮肤样品，对毛发边界维持至少5 mm远。将皮肤样品直接在液氮中冷冻用于mRNA研究。

通过在Lysing Matrix A 摇管(Qbiogene Inc./Bio101 Systems)中的均化作用，随后是RNeasy Mini kit cleanup (Qiagen, Inc.)将总RNA从冷冻的皮肤组织分离。以260 nm的分光光度吸收确定RNA浓度。使用High-Capacity cDNA反转录试剂盒 (PE Applied Biosystems)将RNA反转录至cDNA。全部反应一式三份在ABI Prism 7900HT (PE Applied Biosystems)上执行，以确定测定的mRNA的相对丰度。从PE Applied Biosystems获得对小鼠IL-17A（Mm00439618_m1）、小鼠IL-17F（Mm00521423_m1）和小鼠角蛋白-16（Mm00492979_g1）的引物探针组。将18S和GAPD两者作为内源对照测量，使基因表达水平中的可变性标准化。使用Delta (△-△) Ct方法分析表达数据。将各自的Ct值作为一式三份测量的平均值计算。将实验执行两次。根据需要使用未配对的t-测试。将P < 0.05视为统计学显著的。

为探究抗体I的全身施用是否能够中和对人IL-23的局部应答，将人IL-23蛋白质皮内注射至小鼠以研究皮肤IL-23暴露的下游结果。每天使用盐水溶液处理的野生型小鼠的皮肤没有显示出小鼠IL-17A或小鼠IL-17F可检测的水平。

然而，人IL-23的注射诱导了小鼠IL-17A和小鼠IL-17F的mRNA表达（表5）。使用抗体I而不是同种型对照抗体处理使得人IL-23诱导的IL-17A和IL-17F mRNA表达消失。

表5：人IL-23诱导的鼠IL-17A和IL-17F mRNA表达的体内中和。

此外，人IL-23注射诱导了与角蛋白-16（增殖相关的细胞角蛋白）表达增加相关的表皮增厚。角蛋白-16的诱导被抗体I的施用显著地抑制（鼠角蛋白-16的诱导倍数为，对同种型对照抗体 5.21 ± 2.72相比对抗体I 1.23 ±0.72，p = 0.0003）。

总共地，这些结果显示在急性的局部体内测定中抗体I有效地抑制了人IL-23诱导的小鼠IL-17A、IL-17F和角蛋白-16 mRNA产生。

视网膜组织交叉反应性：通过免疫组织化学的体外分析

将新鲜冷冻的人和食蟹猴的视网膜组织切片（5-7μm厚）在恒冷切片机上切割。在室温下将切片在丙酮中固定约10分钟，允许在室温下干燥过夜并且在约-80℃贮存至使用。随后将丙酮固定的玻片从冷冻机中移除并且允许在室温下干燥过夜。随后的步骤在室温下执行。将玻片在1X Morphosave™中孵育约15分钟以保护形态学。将玻片在1X PBS中洗涤10分钟并且随后在室温下在0.3% H₂O₂的1X PBS中孵育约20分钟以淬灭内源过氧化氢酶活性。孵育后，将玻片在1X PBS中洗涤两次约5分钟。通过在抗生物素蛋白溶液和生物素溶液中连续孵育（每个约15分钟）将内源生物素封闭。在生物素中孵育后，使用封闭抗体溶液将组织切片封闭30分钟。以最优浓度（2.5 或5 μg/mL）或五倍最优浓度（25 μg/mL）将抗体I和对照人IgG₄ 施加于切片，并且在室温下孵育1小时。随后将切片润洗并且使用生物素化的小鼠抗-人IgG₄ 抗体（2.5 μg/mL）孵育30分钟。使用链霉亲和素-生物素-山葵过氧化氢酶缀合物和二氨基联苯胺产色底物检测结合的初级/二级抗体复合物。

在全部实验中将使用人IL-23转染的CHO细胞作为阳性对照样品使用。将亲本CHO（不转染的）细胞作为阴性对照样品使用并且不染色。没有在使用同种型对照抗体（人IgG4）染色的连续切片中观察到结合。抗体I没有显著地结合视网膜组织。

对抗体I的表位作图：丙氨酸扫描

使用酵母展示抗原的表位作图的背景

执行表位作图研究以确定抗体I结合所需的人IL-23 p19亚基（SEQ ID NO: 15）中特异的氨基酸。通过使用丙氨酸扫描连同酵母展示平台完成抗体I的表位作图。

通过在PyMOL中分析鉴定人IL-23的p19亚基的暴露的氨基酸位置。IL-23的p19亚基的暴露的或部分暴露的位置在表6中显示。将确定没有暴露的那些位置从该研究忽略，即，只有暴露的或部分暴露的人IL-23的p19亚基的氨基酸位置被突变。因此，没有研究所有位置。

虽然表位作图只在IL-23的p19亚基上执行（没有在IL-23的p40亚基上执行表位作图，因为抗体I没有可检测地结合至p40亚基），但是人IL-23的p19亚基和p40亚基两者均必须在酵母展示平台中共表达。

构建了单一酵母展示的人IL-23的p19亚基的丙氨酸突变体并且为了鉴定表位确定了抗体结合。通过测量抗体突变体相比于野生型酵母展示的抗原的亲和力，有可能确定氨基酸侧链对抗体结合的能量贡献。

突变体文库构建

将p40基因克隆至可溶表达质粒，pYKY中，其具有尿嘧啶选择标记物。将p19亚基基因克隆至酵母展示质粒pEMD3中，其在N-末端含有色氨酸选择标记物和V5标签，并且在C-末端连接至GPDL2锚定蛋白，其允许在色氨酸可选标记物下在酵母表面进行展示。用于克隆的限制性酶切位点分别在pYKY质粒中为XhoI 和BamHI ，和在pEMD3 质粒中为AvrII和XmaI。

将丙氨酸突变在每个暴露的位置导入并且使用V5抗体和抗体I的双阳性染色进行测试。使用位点定向诱变（Kunkel 诱变）将一系列p19 丙氨酸突变体构建在pEMD3质粒中。简而言之，pEMD3载体的含有尿嘧啶的ssDNA在转化至CJ236 (New England Biolabs)中后被生产。转化的单菌落过夜生长并且随着使用M13K07辅助噬菌体（New England Biolabs）感染将ssDNA拯救并且使用QIAprep spin M13试剂盒将ssDNA纯化。通过在85℃变性5分钟，经1小时缓慢降温至55℃，在55℃位置5分钟，随后在冰上冷却，将编码丙氨酸突变的寡核苷酸以20:1的摩尔比例对尿嘧啶模板进行退火。随后使用T4聚合酶、T4连接酶和dNTP（Invitrogen）完成第二条链合成。将反应电穿孔至Top10大肠杆菌（E.coli）（Invitrogen）中并且挑选单菌落，使用QIAprep miniprep试剂盒（Qiagen）制备dsDNA并且通过测序确认突变。随后将p19突变体与p40 pYKY质粒共转化至BJ5464酵母（ATCC）中，并且在没有色氨酸和尿嘧啶的完全最小培养基（complete minimal media）中生长。

对抗原结合的失去的突变抗原文库的选择

为了鉴定抗体表位，通过流式细胞术选择失去抗体结合的突变的抗原文库。使用两种抗体染色酵母细胞，其中一种是作图的并且其中一种不是。针对失去了对第一种抗体的结合，但是保留了对第二种抗体的结合，选择酵母展示的抗原突变体。对第二种抗体结合的保留确保了突变体是基于表位中的突变选择，而不是选择了未折叠的或展示差的突变体。

对于本分析，第一种抗体（即，将其表位作图的抗体）是抗体I并且第二种抗体是抗-V5抗体。首先用抗-V5抗体（Invitrogen）和抗体I将酵母染色并且随后使用二级山羊抗-小鼠IgG_2a (Invitrogen, Alexa Fluor^® 647)以检测抗-V5抗体（表达/展示）并且使用山羊抗-人κRPE（Southern Biotech）以检测抗体I。在Becton Dickinson LSRII上通过流式细胞术分析酵母，其中通过光散射、V5/Alexa647 和抗体I/PE染色基于门控细胞收集了50,000个事件。对每个抗体I和抗-V5抗体结合的数据分析使用FACSDiva v6.1.2软件执行，其计算了双染色的酵母细胞的百分比。

结果

由于展示的蛋白质分配，最多50%的酵母将展示IL-23 p19。双阳性酵母细胞的检测证明在研究中的氨基酸位置没有涉及抗体I对IL-23的结合。仅V5染色的检测证明蛋白质被表达并且在酵母表面展示，并且研究的氨基酸位置对抗体I的结合是重要的。其确定了相比于相邻的残基，在双阳性染色中被证明有>50%减少的那些残基对结合是重要的。这些残基在表7中被强调。一些位置证明了V5和抗体I两者结合的缺少，暗示氨基酸残基可以是蛋白质构象所需的。对IL-23 p19亚基（SEQ ID NO: 15）中每个暴露的或部分暴露的氨基酸位置的系统研究证明，基于对V5和抗体I结合的双阳性染色减少量（表7）位置94P、95S、97L、98P、99D、123W、130S、133P和137W对抗体I对于人IL-23的结合是重要的。

还使用氢-氘交换执行表位作图。该氢-氘交换表位作图的结果说明抗体I的表位是人IL-23（SEQ ID NO: 15）的第81位-第99位和第115位-第140位残基中的构象表位。

表6：成熟人IL-23 p19亚基的暴露的或部分暴露的氨基酸序列

表7：对抗体I的表位作图数据

IL-23抗体的物理-化学性能

抗体I具有药学可接受的溶解性、化学稳定性和物理稳定性。

A. 溶解性

足够地高溶解性对能够方便的给药是期望的。例如，将1 mg/kg剂量通过1.0ml注射至100kg的患者中将需要100mg/ml的溶解性。此外，在高浓度下使抗体维持在单体状态，没有高分子量（HMW）聚集也是期望的。

抗体I是在生理样缓冲液（PBS，pH7.4）中以约1mg/ml并且在两种药物产品制剂条件下（10mM柠檬酸，pH6，加和减150mM NaCl）配制。在维持相同的缓冲液条件下，将抗体通过Amicon Ultra 30 kDa分子量过滤器（Millipore, UFC803204）以2000xG离心以浓缩抗体。持续离心直到达到了溶解限制或设备的最小滞留体积。在全部三种条件下实现了大于100mg/ml的溶解度。

使用大小排阻层析（SEC）以评估随着抗体制剂的浓度增加至大于100mg/ml是否出现高分子量（HMW）多聚物增加。将起始抗体溶液和浓缩的抗体溶液注射至使用由12mM磷酸盐、500mM NaCl，pH7.4组成的流动相的TSK3000 SWXL柱（TOSOH Bioscience）上。在任何测试的制剂条件下没有观察到可溶多聚物的大量增加（通过SEC，< 0.6% HMW的多聚物）。

B. 化学稳定性

将抗体I以1mg/mL在10mM缓冲液（pH4、5、6和7的10mM柠檬酸；pH8的10mM TRIS）中配制，并且在4℃、25℃或40℃下孵育4周。通过SEC（参见上文方法）、阳离子交换层析 [CEX; Dionex, 其使用缓冲液A (20mM磷酸钠, pH 5.8, 0.36% CHAPS) 和缓冲液B (20mM磷酸钠, pH 5.8, 0.36% CHAPS, 200mM氯化钠)之间的梯度]、CE-SDS（在还原条件下使用蛋白质230芯片的Agilent Bioanalyzer）和通过酶促消化材料的LC-MS表征监控化学稳定性。

甚至在40℃ 4周后，抗体I在pH 5-8 下仍稳定对抗多聚物形成（SEC）。在pH4，在40℃观察到显著的多聚物但是在25℃没有（4wk）。通过CE-SDS的预期的肽键水解或剪切在pH 4 (40℃)是明显的。在pH4.0的降解水平是 IgG₄抗体通常的。高于pH4（pH5-8）的水平是低的，并且没有随时间的一致的变化并且因此很可能代表背景噪音。

该假设与LC-MS分析一致，其没有在pH 6检测到剪切，而在pH 4测量了抗体剪切的通常水平。带电变体中的变化通过CEX监控。起始材料由三个显著的主峰组成，其使得该测定的分辨能力减少到最小。通常，在25℃和40℃应激下的样品比4℃对照更高，但是水平没有随孵育时间增加（实际上在一些情况下减少）。在pH 6.0的百分比变化（4 wk在25℃减去4℃对照）是2.5%。LC-MS分析指示大多数修饰位于CDR区域之外并且是在其它IgG4抗体通常的水平。在CDR中的三个降解位点被鉴定变化小于1%（pH 6; 4wk 在 25℃ 减去 4℃对照）。CDR中缺少降解位点也与在pH 4、6或8在40℃下孵育4周后BIACore亲和性或化学计量学中没有显著变化一致。

C. 物理稳定性

i) 冻融稳定性

在以下条件下配制抗体I

a) 在10mM柠檬酸中1mg/mL，pH 6.0；

b) 在10mM柠檬酸中1mg/mL，pH 6.0，0.02% Tween-80；

c) 在10mM柠檬酸中1或50 mg/ml，pH 6.0，150 mM NaCl；和

d) 在10mM柠檬酸中 1或50 mg/ml，pH 6.0，150 mM NaCl；0.02% Tween-80。

将这些制剂放置于控制在1℃/分钟的冷冻容器（Nalgene, 5100-0001）中并且在-80℃冷冻机中冷冻至少8小时并且随后移出并在室温下解冻至少8小时。该冷冻/解冻循环重复达三次。将样品在一次和三次冻融循环后移出，并且通过SEC分析HMW多聚物（参见在上文部分A中描述的SEC方法）和通过HIAC颗粒计数器(具有低体积附加的Pacific Scientific模型9703)分析不可溶颗粒形成。在任何测试条件下没有观察到随三次冻融循环在HMW多聚物形成上的显著增加。对于1 mg/ml制剂，只在不含有Tween-80的制剂中观察到HIAC颗粒计数的显著增加。在50 mg/ml，颗粒计数是其它表现良好的IgG4抗体通常所表现的，其具有在不含Tween-80下大约1500 次计数/mL和在含有Tween-80下降低至大约280的颗粒计数（> 10微米）。

ii) 在高浓度维持静止

在以下条件下在50mg/mL配制抗体：

a) 10 mM柠檬酸，pH 6.0， 150 mM NaCl；和

b) 10 mM柠檬酸，pH 6.0， 150 mM NaCl，0.02% Tween-80

将这些制剂在4 ℃和25℃维持静置4周。HIAC 颗粒计数（具有低体积附加的Pacific Scientific模型9703）中的变化在4周后在25℃下被测量。

对含有Tween的制剂的HICA颗粒计数（> 10微米）平均为290 次计数/mL (270和310)并且对不含有Tween的制剂适当地更高，为804 次计数/mL (728和880)。这些结果是展示出良好物理稳定性的其它IgG4抗体通常表现的。这两种制剂还在玻璃管而不是标准的塑料eppendorf管中贮存。对于在玻璃中贮存的样品的颗粒计数低4至8倍（对于含有和不含有Tween分别为平均35和191次计数/mL）。

序列表

<110> Eli Lilly and Company

<120> 结合IL-23的抗体

<130> X19760

<150> 61/774732

<151> 2013-03-08

<160> 15

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 1

Gly Tyr Lys Phe Thr Arg Tyr Val Met His

1 5 10

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 2

Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 3

Ala Arg Asn Trp Asp Thr Gly Leu

1 5

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 4

Lys Ala Ser Asp His Ile Leu Lys Phe Leu Thr

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 5

Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 6

Gln Met Tyr Trp Ser Thr Pro Phe Thr

1 5

<210> 7

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 7

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Arg Tyr

20 25 30

Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Trp Asp Thr Gly Leu Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Asp His Ile Leu Lys Phe

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Met Tyr Trp Ser Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 441

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 9

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Lys Phe Thr Arg Tyr

20 25 30

Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Trp Asp Thr Gly Leu Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

225 230 235 240

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

245 250 255

Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp

260 265 270

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

275 280 285

Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

290 295 300

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

305 310 315 320

Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

325 330 335

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu

340 345 350

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

355 360 365

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

370 375 380

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

385 390 395 400

Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

405 410 415

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

420 425 430

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440

<210> 10

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Asp His Ile Leu Lys Phe

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Met Tyr Trp Ser Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 11

<211> 345

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 11

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata taaattcact cgttatgtta tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatat attaatcctt acaatgatgg tactaactac 180

aatgagaagt tcaaaggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaaactgg 300

gacacaggcc tctggggcca aggcaccact gtcacagtct cctca 345

<210> 12

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 12

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgca aggcaagtga ccacattctc aaatttttaa cttggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcaaccagtt tggaaactgg ggtcccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaaatg tattggagta ctccgttcac gttcggaggg 300

gggaccaagg tggaaataaa a 321

<210> 13

<211> 1323

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 13

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata taaattcact cgttatgtta tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatat attaatcctt acaatgatgg tactaactac 180

aatgagaagt tcaaaggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaaactgg 300

gacacaggcc tctggggcca aggcaccact gtcacagtct cctcagcctc caccaagggc 360

ccatcggtct tcccgctagc gccctgctcc aggagcacct ccgagagcac agccgccctg 420

ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480

ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540

agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcacga agacctacac ctgcaacgta 600

gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagagagttg agtccaaata tggtccccca 660

tgcccaccct gcccagcacc tgaggccgcc gggggaccat cagtcttcct gttcccccca 720

aaacccaagg acactctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 780

gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat 840

aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 900

ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 960

aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagag 1020

ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 1080

acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga aagcaatggg 1140

cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 1200

ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc aggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc 1260

tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacacaga agagcctctc cctgtctctg 1320

ggt 1323

<210> 14

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 14

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgca aggcaagtga ccacattctc aaatttttaa cttggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcaaccagtt tggaaactgg ggtcccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaaatg tattggagta ctccgttcac gttcggaggg 300

gggaccaagg tggaaataaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gc 642

<210> 15

<211> 170

<212> PRT

<213> 智人

<400> 15

Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln

1 5 10 15

Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val

20 25 30

Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp

35 40 45

Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg

50 55 60

Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe

65 70 75 80

Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu

85 90 95

Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu

100 105 110

Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile

115 120 125

Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe

130 135 140

Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val

145 150 155 160

Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro

165 170

Claims

1.结合至人IL-23的p19亚基的抗体，其包括轻链和重链，其中所述轻链包括轻链可变区（LCVR）并且所述重链包括重链可变区（HCVR），其中所述LCVR包括氨基酸序列LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且所述HCVR包括氨基酸序列HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中LCDR1是SEQ ID NO:4、 LCDR2是SEQ ID NO:5、LCDR3是SEQ ID NO:6、HCDR1是SEQ ID NO:1、HCDR2是SEQ ID NO:2并且HCDR3 是SEQ ID NO:3。

2.根据权利要求1的抗体，其中所述轻链包括轻链可变区（LCVR）并且所述重链包括重链可变区（HCVR），其中所述LCVR的氨基酸序列是SEQ ID NO: 8并且所述HCVR的氨基酸序列是SEQ ID NO: 7。

3.根据权利要求2的抗体，其包括两个轻链可变区（LCVR）和两个重链可变区（HCVR），其中每个LCVR的氨基酸序列是SEQ ID NO: 8并且每个HCVR的氨基酸序列是SEQ ID NO: 7。

4.根据权利要求1或2的抗体，其中所述轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 10并且所述重链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 9。

5.根据权利要求4的抗体，其包括两条轻链和两条重链，其中每条轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 10并且每条重链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 9。

6.结合至人IL-23的p19亚基的抗体，其包括轻链和重链，其中所述轻链包括轻链可变区（LCVR）并且所述重链包括重链可变区（HCVR），其中所述LCVR包括互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且所述HCVR包括互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且其中LCDR1由氨基酸序列SEQ ID NO: 4组成、LCDR2由氨基酸序列SEQ ID NO: 5组成、LCDR3由氨基酸序列SEQ ID NO: 6组成、 HCDR1由氨基酸序列SEQ ID NO: 1组成、HCDR2由氨基酸序列SEQ ID NO: 2组成并且HCDR3由氨基酸序列SEQ ID NO: 3组成。

7.结合至人IL-23的p19亚基的抗体，其包括轻链和重链，其中所述轻链包括轻链可变区（LCVR）并且所述重链包括重链可变区（HCVR），其中所述LCVR链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 8并且所述HCVR链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 7。

8.结合至人IL-23的p19亚基的抗体，其包括轻链和重链，其中所述轻链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 10并且所述重链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 9。

9.DNA分子，其包括编码具有氨基酸序列SEQ ID NO: 10的轻链多肽的多核苷酸序列。

10.DNA分子，其包括编码具有氨基酸序列SEQ ID NO: 9的重链多肽的多核苷酸序列。

11.分离的多核苷酸，其编码权利要求1-8中任一项的抗体。

12.根据权利要求11的分离的多核苷酸，其中所述重链可变区（HCVR）由SEQ ID NO: 11编码，并且所述轻链可变区（LCVR）由SEQ ID NO: 12编码。

13.根据权利要求11或12的分离的多核苷酸，其中所述重链由SEQ ID NO: 13编码，并且所述轻链由SEQ ID NO: 14编码。

14.根据权利要求11-13中任一项的多核苷酸，其中所述多核苷酸可操作地连接至表达控制序列。

15.载体，其包括根据权利要求14的多核苷酸。

16.重组宿主细胞，其包括权利要求9所述的DNA分子和权利要求10所述的DNA分子，其中所述细胞能够表达包括重链和轻链的抗体，其中所述重链包括氨基酸SEQ ID NO: 9并且所述轻链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 10。

17.使用权利要求11-13中任一项的多核苷酸转化的重组宿主细胞，所述细胞能够表达包括重链和轻链的抗体，其中所述重链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 9，并且所述轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 10。

18.根据权利要求16或权利要求17的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞是选自CHO、NS0、HEK293和COS细胞的哺乳动物宿主细胞。

19.用于生产包括重链和轻链的结合至人IL-23的p19亚基的抗体的方法，其中所述重链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 9并且轻链包括氨基酸序列SEQ ID NO: 10，所述方法包括步骤：

a) 在使得所述抗体表达的条件下培养权利要求16-18中任一项的重组宿主细胞；和

b) 从所述宿主细胞回收表达的抗体。

20.用于生产包括重链和轻链的结合至人IL-23的p19亚基的抗体的方法，其中所述重链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 9并且所述轻链的氨基酸序列是SEQ ID NO: 10，所述方法包括步骤：

a) 在使得所述多肽序列表达的条件下培养包括编码由SEQ ID NO: 9给出的多肽序列的第一多核苷酸序列和编码由SEQ ID NO: 10给出的多肽序列的第二多核苷酸序列的重组宿主细胞；和

b) 从所述宿主细胞回收包括重链和轻链的抗体，其中所述重链的多肽序列由SEQ ID NO: 9给出并且所述轻链的多肽序列由SEQ ID NO: 10给出。

21.通过权利要求19或权利要求20所述的方法生产的抗体。

22.药物组合物，其包括根据权利要求1-8和21中任一项的抗体，和一种或多种药学可接受载体、稀释剂或赋形剂。

23.在患者中治疗或预防自身免疫或炎症状况的方法，其包括对有需要的患者施用有效量的根据权利要求1-8和21中任一项的抗体，其中所述状况选自多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、炎症性肠道疾病、强直性脊柱炎、移植物抗宿主疾病、狼疮和代谢综合征。

24.在患者中治疗或预防癌症的方法，其包括对有需要的患者施用有效量的根据权利要求1-8和21中任一项的抗体。

25.根据权利要求24在患者中治疗癌症的方法，其中所述癌症是黑素瘤、结肠癌、卵巢癌、头颈癌、肺癌、乳腺癌或胃癌。

26.根据权利要求1-8和21中任一项的抗体，其在治疗中使用。

27.根据权利要求1-8和21的抗体，其用于在自身免疫或炎症状况的治疗中使用，其中所述状况选自多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、炎症性肠道疾病、强直性脊柱炎、移植物抗宿主疾病、狼疮和代谢综合征。

28.根据权利要求1-8和21中任一项的抗体，其用于癌症的治疗用途。

29.用于根据权利要求28用途的抗体，其中所述癌症是黑素瘤、结肠癌、卵巢癌、头颈癌、肺癌、乳腺癌或胃癌。