CN105296649B - 一种改良简化的植物染色体荧光原位杂交方法 - Google Patents

一种改良简化的植物染色体荧光原位杂交方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种改良简化的植物染色体荧光原位杂交方法。由于该方法不包括杂交前对标本玻片的长时间脱水过程和杂交后对标本制片的多次漂洗流程，因此是一种对生物细胞样品中的核内染色体进行快速原位杂交的技术。所述方法主要涉及：1）通过变温催芽、8‑羟基喹啉预处理和卡诺固定液固定植物根尖分生区细胞分裂旺盛的组织，获得图像清晰、染色体分散良好的中期分裂相标本；2)不同标记荧光探针混合后，一次变性完并低温保存，可实现长期多次使用；3)标本制片采用NaOH醇溶液变性；4）杂交反应过程中，通过简化多步脱水、漂洗等操作步骤，从而极大地精简了整个繁琐的杂交流程。尤其是，所述方法特别适用于快速大规模检测和分析植物远缘及近缘杂交种中的外源染色体和染色体片段，同时很好地保持了标本染色体形态和结构的真实性。

Description

一种改良简化的植物染色体荧光原位杂交方法
技术领域
本发明涉及一种改良的基于碱变性的荧光原位杂交方法，由于该方法不包括杂交前对标本玻片的长时间脱水过程和杂交后对标本制片的多次漂洗流程，因此是一种对生物细胞样品中的核内染色体进行快速原位杂交的技术，属于分子细胞遗传学及染色体工程技术领域。
背景技术
荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是20世纪80年代在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种重要的非放射性分子细胞遗传学技术，是以非放射性荧光标记取代放射性同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。FISH技术是根据核酸碱基互补配对原理，用半抗原标记DNA（或者ＲNA）探针，与经过变性的单链核酸序列互补配对，通过带有荧光基团的抗体去识别半抗原进行检测，或者用荧光基团对探针进行直接标记并与目标序列结合，最后利用荧光显微镜直接观察目标序列在细胞核、染色体或切片组织中的分布情况。从其诞生发展至今，FISH技术已完全克服了同位素杂交的不足，诸如探针不稳定、自显影时间长、放射线的散射使得空间分辨率不高以及同位素操作较繁琐等，逐渐形成了安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点，不但能显示细胞分裂中期分裂相，还能显示细胞分裂间期核。截至目前，FISH已被广泛应用于染色体的识别、DNA序列或基因的定位、核型分析、基因组进化研究、物理图谱的构建、转基因生物的鉴定等；
在植物远缘及近缘杂交种的遗传学分析与育种研究中，FISH技术在外源染色体的识别、畸变染色体的检测与分析方面发挥着重要的作用，为染色体或基因组的研究提供了强大的工具。无论是创建用于染色体细胞作图的遗传突变体，还是创制育种上的新种质资源，开展大量的基于FISH技术的遗传材料筛选是必不可少的。这就要求具有一套周期短、简单、易于操作、高效的FISH技术。然而纵观当前广泛使用的经典荧光原位杂交方法，虽然经过了不断的改进与完善，但关键的杂交程序操作复杂，步骤繁琐，极大地降低了实验效率。此外，有些经典杂交程序操作过程作中还需要使用具有毒性的变性试剂，不仅对实验操作人员的身体健康构成威胁，而且对生态环境造成危害；
针对现有FISH技术操作步骤繁琐与周期长，以及部分方法存在的安全隐患等问题，本发明在利用成本低廉、易于配制、无毒性、重复利用率高的NaOH醇溶液作为变性剂的基础上，通过简化脱水和漂洗等繁杂步骤，不仅极大地缩短了试验流程，而且避免了经典杂交方法中由于热变性和冗长漂洗等引起的染色体失真问题，保持了染色体的最佳形态，更有利于对外源染色体的鉴定与结构组成分析以及染色体间相互重组的观察。故本发明既体现了简单高效、生态环保、经济实用的特征和优势，特别适用于快速大规模检测和分析植物远缘或近缘杂交种中的外源染色体和染色体片段，同时又很好地保持了标本染色体形态和结构的真实性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种简便、高效、实用，能够规模化检测分析或筛选植物远缘及近缘杂交种中外源染色体和染色体片段的荧光原位杂交方法，其包括以下步骤：
1) 根尖培养。将植物种子置于底层铺有湿润滤纸的培养皿中，在23℃黑暗培养箱中催芽，待种子露白后，连同培养皿一起转移至4℃冰箱，放置1-3天。然后继续转移到23℃黑暗培养箱中继续催芽，至根系长约2-3cm；
2) 标本制作。a. 取材：剪取1）中发芽种子的～1cm根尖，迅速投放到盛有1×10-6M 8-羟基喹啉的小瓶中（提前置于冰水混合物中），在0℃的冰箱中放置14-20h。b. 固定：将根系转移到盛有卡诺固定液（V无水乙醇:V冰醋酸=3:1）的离心管中，在30℃下固定2～3天（或在室温下固定3-5天）。c. 染色：用醋酸洋红染色根系15-20分钟。d. 制片：用解剖针或解剖刀片切取带有分生区的根尖组织，放在载玻片上，滴加一滴45%醋酸溶液，加盖盖玻片，然后用拇指轻压或用竹签轻敲使细胞分散良好。e. 镜检：装片于显微镜，观察细胞内染色体分布情况，并将分散良好的玻片标本保存于-70℃以下冰柜；
3) 探针标记。利用CTAB法或植物基因组提取试剂盒提取植物基因组DNA，利用随机引物法标记基因组的荧光探针，以及利用PCR法标记DNA片段荧光探针（注意双标记要设计两种不同颜色的探针）。将标记的荧光探针按适当比例与杂交液按一定体积比一起混合，在沸水浴中变性8-10分钟，立即置于-20℃的酒精缸中20分钟以上，后将变性探针杂交液保存于-4℃；
4) 荧光原位杂交。a. 脱色：从-70℃冰柜中取出标本玻片，用刀片撬除盖玻片，置于42-45℃的45%醋酸中脱色2-3分钟（若制片过程中未对根尖染色，此步骤则省略），用洗耳球吹干或空气晾干。b. 变性：将风干的标本制片浸于0.15当量NaOH醇溶液（70%乙醇）中，变性5分钟。c. 脱水：将变性后玻片依次通过70%、70%、99%乙醇中分别脱水5分钟，然后立即吹干。d. 杂交：向吹干标本制片目标区域滴加10-15µL变性探针杂交液，加盖盖玻片。将标本玻片放入保湿的杂交盒中，然后置于30℃培养箱杂交～6h。e. 漂洗：将杂交后的标本制片移掉盖玻片后浸入2×SSC溶液中，漂洗5分钟，拿出玻片迅速用蒸馏水冲洗2-3下，立即吹干。g.抗体反应：向吹干标本制片滴加10-15µL抗体（若为双标记探针检测，则抗体为各探针对应抗体的混合抗体），加盖盖玻片，放入保湿杂交盒中，置于30℃培养箱反应1h（若探针为单一的荧光素标记，此步骤则省略）。f. 复染：取出抗体反应后的标本玻片并移掉盖玻片，用蒸馏水冲洗2-3下，立即吹干，滴加10-15µL DAPI染色液，加盖盖玻片，室温染色5分钟以上；
5) 镜检。将原位杂交后的标本玻片装于荧光显微镜上，观察并分析杂交信号。选取染色体分布均匀、荧光杂交信号清晰的细胞视野照相，并保存；
上述的标记探针与原位杂交液的混合比例取决于最低的噪信比（即在获得最低的背景信号下，但能够得到足够强的荧光原位杂交信号以保证镜检和照相），可以根据不同来源的标记探针与具体不同的实验目的选配体积比。整个荧光原位杂交操作步骤，除非特别说明，均在室温下进行。
有益效果
本发明的技术优势及有益效果在于：
1) 根系固定前，采用变温催芽处理，并通过低浓度（1×10-6 M）8-羟基喹啉预处理根系，更有利于获得细胞分裂中期染色体分裂相；
2) 变性前，标本制片在45%醋酸中脱色后，空气晾干或吹干后可以直接进入变性过程，无需在酒精中进行长时间的脱水过程，缩减了反应步骤，缩短了实验时间；
3) 利用0.15当量NaOH醇溶液对染色体进行变性，替代了经典的加热变性或用有毒致畸变性剂的变性，省去了加热变性所需的设备（如水浴锅或电热板等）或储存有毒变性剂的特殊器皿，而且NaOH醇溶液可连续多次使用，变性成本低，方法操作简单；同时变性效果好，且变性原料安全、低碳、环保，重复利用率高；
4) 标记探针与杂交液混合完成变性后，可长期低温保存，荧光原位杂交实验过程中可直接使用，从而省去了每次原位杂交实验中探针杂交液现用现配的繁琐操作，简化了实验步骤；
5) 整个杂交反应过程在相对较低的温度（30℃)下进行, 故减少了非特异杂交反应, 从而降低了噪音或背景信号的干扰。另外，此反应条件下无需使用封阻DNA，所得荧光原位杂交信号与经典方法37℃下使用封阻DNA 所得信号相当；
6) 原位杂交结束后，标本制片的漂洗只需2×SSC结合数次迅速的蒸馏水冲洗过程，极大地简化了实验步骤，缩短了实验时间。同时减少了由于冗长而繁琐的漂洗过程导致的染色体变形（如染色体外形肿胀或变粗糙等）问题，进而实现了染色体形态的保真性；
7) 本发明方法整体操作简单，实验流程短，既可以用于植物染色体的核型分析、杂交植物外源染色体的检测分析，也可以用于大规模外源变异染色体的筛选。
附图说明
附图1：黑麦1R染色体的双体异附加系的荧光原位杂交分析
箭头所示为1R染色体，图中最亮色代表黑麦亚端粒特异重复序列pSc200的FISH信号，次亮色代表黑麦染色体的GISH信号；
附图2：黑麦7R染色体与小麦易位系染色体组成的荧光原位杂交分析
箭头所示为7R与小麦染色体的易位，图中最亮色代表黑麦亚端粒特异重复序列pSc200的FISH信号，次亮色代表黑麦染色体的GISH信号。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明：
实施例1 植物外源染色体的鉴定
所用试材黑麦及黑麦-小麦附加系种子，来自江苏省中国科学院植物所保存的种质资源；
1.1根尖培养：将种子置于底层铺有湿润滤纸的培养皿中，在23℃黑暗培养箱中催芽14-24h，待种子露白后，转移至4℃冰箱放置1-3天。然后继续放回23℃黑暗培养箱中继续催芽，至根系长约2-3cm；
1.2标本制作：a. 取材：剪取1）中发芽种子的～1cm根尖，迅速投放到盛有1×10-6 M 8-羟基喹啉的小瓶中（提前置于冰水混合物中），在0℃的冰箱中预处理14-20h。b. 固定：将根系转移到卡诺固定液（V无水乙醇:V冰醋酸=3:1），在30℃下固定～3天。c. 染色：用醋酸洋红染色根系15-20分钟。d. 制片：用解剖刀切取带有分生区细胞分裂旺盛的根尖组织，放在载玻片上，滴加45%醋酸溶液，加盖盖玻片，然后用竹签轻敲使细胞分散良好，后用拇指压片并烤片。e. 镜检：装片于显微镜，观察细胞内染色体分布情况，并将分散良好的玻片标本保存于-70℃以下冰柜；
1.3探针标记。利用CTAB法提取黑麦基因组DNA，利用Biotin-High-Prime标记黑麦基因组获得基因组荧光探针(GISH探针)，采用Digoxigenin-11-dUTP 标记黑麦亚端粒特异序列pSc200获得FISH探针。杂交液（ISH）的配制为（100ml体系）：20×SSC 10mL、50%硫酸葡聚糖20mL、去离子甲酰胺50mL以及微量鲑鱼精DNA及20mL双蒸水。将GISH与FISH以及杂交液（ISH）按体积比VGISH:VFISH:VISH=5:1:20一起混合，在沸水浴中变性8分钟，立即置于-20℃的酒精缸中 >20分钟，后将变性探针杂交液保存于-4℃；
1.4荧光原位杂交：a. 脱色：从冰柜中取出标本玻片，撬除盖玻片后，置于42-45℃的45%醋酸中脱色2-3分钟，用洗耳球吹干。b. 变性：将风干的标本制片浸于0.15当量NaOH/70%醇溶液中，变性5分钟。c. 脱水：将变性后玻片依次通过70%、70%、99%乙醇中分别脱水5分钟，然后立即吹干。d. 杂交：向吹干标本制片目标区域滴加15µL变性探针杂交液，加盖盖玻片。将标本玻片放入保湿的杂交盒中，然后于30℃培养箱孵育～6h。e. 漂洗：将杂交后的标本制片移掉盖玻片后浸入2×SSC溶液中，漂洗5分钟后，拿出玻片迅速用蒸馏水冲洗2-3下，立即吹干。f. 抗体反应：向吹干的标本制片滴加15µL抗体［FITC（Roche）与CY3（invitrogen）按说明溶解稀释后等体积混合］，加盖盖玻片，放入保湿杂交盒于30℃培养箱反应1h。g. DAPI复染：拿出标本制片并移掉盖玻片，用蒸馏水冲洗2-3下，立即吹干，滴加15µL DAPI染色液，加盖盖玻片，室温染色5分钟以上；
1.5镜检与拍照：将原位杂交后的标本玻片装于荧光显微镜上，观察并分析杂交信号，对染色体分散良好、杂交信号清晰的细胞照相保存；
结果见附图1；
实施例2 植物染色体结构变异的检测与分析
所用试材小麦种子，来自于江苏省中国科学院植物所保存的种质资源；
2.1 根尖培养：同实施例1.1；
2.2 标本制作：同实施例1.2；
2.3 探针标记：同实施例1.3；
2.4 荧光原位杂交：同实施例1.4；
结果见附图2；
以上列举的仅是本发明的两个具体实施例。本发明同样适用于其它植物染色体上的荧光原位杂交，尤其是植物远缘及近缘杂交种中外源染色体的快速鉴定以及异源多倍体植物基因组组成与进化的研究分析。凡是在本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种改良简化的植物染色体荧光原位杂交方法，其特征在于：由以下步骤组成：
1)根尖培养，将植物种子置于底层铺有湿润滤纸的培养皿中，在23℃黑暗培养箱中催芽，待种子露白后，连同培养皿一起转移至4℃冰箱，放置1-3天；然后继续转移到23℃黑暗培养箱中继续催芽，至根系长2-3cm；
2)标本制作，a.取材：剪取1)中发芽种子的1cm根尖，迅速投放到盛有1×10-6M8-羟基喹啉的小瓶中，在0℃的冰箱中放置14-20h；b.固定：将根系转移到盛有卡诺固定液的离心管中，在30℃下固定2～3天；c.染色：用醋酸洋红染色根系15-20分钟；d.制片：用解剖针或解剖刀片切取带有分生区的根尖组织，放在载玻片上，滴加一滴45％醋酸溶液，加盖盖玻片，然后用拇指轻压或用竹签轻敲使细胞分散良好；e.镜检：装片于显微镜，观察细胞内染色体分布情况，并将分散良好的标本玻片保存于-70℃冰柜；
3)探针标记，提取植物基因组DNA，利用随机引物法标记基因组的荧光探针，以及利用PCR法标记DNA片段荧光探针；将基因组的荧光标记探针和DNA片段荧光探针以5:1的体积比与杂交液混合，在沸水浴中变性8-10分钟，立即置于-20℃的酒精缸中20分钟以上，后将变性探针杂交液保存于-4℃；
4)荧光原位杂交，a.脱色：从-70℃冰柜中取出标本玻片，用刀片撬除盖玻片，置于42-45℃的45％醋酸中脱色2-3分钟，用洗耳球吹干或空气晾干；b.变性：将风干的标本玻片浸于0.15当量含70％乙醇的NaOH醇溶液中，变性5分钟；c.脱水：将变性后玻片依次通过70％、70％、99％乙醇中分别脱水5分钟，然后立即吹干；d.杂交：向吹干的标本玻片目标区域滴加10-15μL变性探针杂交液，加盖盖玻片；将标本玻片放入保湿的杂交盒中，然后置于30℃培养箱杂交6h；e.漂洗：将杂交后的标本玻片移掉盖玻片后浸入2×SSC溶液中，漂洗5分钟，拿出玻片迅速用蒸馏水冲洗2-3次，立即吹干；f.抗体反应：向吹干标本玻片滴加10-15μL抗体，加盖盖玻片，放入保湿杂交盒中，置于30℃培养箱反应1h；g.复染：取出抗体反应后的标本玻片并移掉盖玻片，用蒸馏水冲洗2-3次，立即吹干，滴加10-15μL DAPI染色液，加盖盖玻片，室温染色5分钟以上；
5)镜检；
其中，所述植物为黑麦或小麦。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106636320B (zh) * 2016-03-10 2020-09-18 河北农业大学 一种白菜成熟花粉细胞荧光原位杂交的方法
CN108760706B (zh) * 2018-06-08 2021-08-06 农业部环境保护科研监测所 一种快速筛选镉低积累水稻品种的方法
CN109856330B (zh) * 2019-01-29 2021-05-28 南京农业大学 一种通过人工调控提高菊花根尖有丝分裂相的方法
CN112708659A (zh) * 2021-03-17 2021-04-27 西北农林科技大学 一种适用于葡萄果实及胚珠的rna原位杂交方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102119662A (zh) * 2010-12-24 2011-07-13 黑龙江八一农垦大学 离体培养条件下纤维亚麻多倍体诱导方法
CN102251054A (zh) * 2011-08-17 2011-11-23 江苏省农业科学院 通过两个dna重复序列鉴别杂草稻籼粳性的方法
CN102559909A (zh) * 2012-02-15 2012-07-11 四川农业大学 一种悬钩子属植物中期染色体荧光原位杂交方法
CN104006997A (zh) * 2014-06-10 2014-08-27 中国科学院西北高原生物研究所 一种赖草属植物根尖染色体制片方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102119662A (zh) * 2010-12-24 2011-07-13 黑龙江八一农垦大学 离体培养条件下纤维亚麻多倍体诱导方法
CN102251054A (zh) * 2011-08-17 2011-11-23 江苏省农业科学院 通过两个dna重复序列鉴别杂草稻籼粳性的方法
CN102559909A (zh) * 2012-02-15 2012-07-11 四川农业大学 一种悬钩子属植物中期染色体荧光原位杂交方法
CN104006997A (zh) * 2014-06-10 2014-08-27 中国科学院西北高原生物研究所 一种赖草属植物根尖染色体制片方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A drop-spreading technique to produce cytoplasm-free mitotic preparations from plants with small chromosomes;S. C. Andras,et al;《Chromosome Research》;19991231;第7卷;641-647 *
普通小麦-簇毛麦6V代换系45S rDNA和5SrDNA位点的FISH分析;杨学明等;《植物遗传资源学报》;20110630;第12卷(第3期);464-467 *
波兰小麦和矮兰麦45S rDNA和5S rDNA基因位点FISH分析;廖进秋等;《遗传》;20070430;第29卷(第4期);449-454 *

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