CN105420396A - Terc基因和/或myc基因检测探针及其制备方法和试剂盒 - Google Patents

Terc基因和/或myc基因检测探针及其制备方法和试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及TERC基因和MYC基因检测探针及其制备方法，该方法包括以下步骤：选取针对TERC基因的BAC克隆为CTD-3214J12、RP11-816J6和RP11-778I3中至少一种，或选取BAC克隆为RP11-3K16、CTD-2582E13和RP11-886J24中的至少一种；和/或选取针对MYC基因的BAC克隆为CTD-2511O8，或选取BAC克隆为RP11-440N18和CTD-2205H22中的至少一种；得到质粒DNA；标记。本发明还公开了包含有TERC基因和MYC基因检测探针的试剂盒。本发明通过筛选到最优的TERC基因和MYC检测探针，信号计数行准确、快速，且结果的重复性好。

Description

TERC基因和/或MYC基因检测探针及其制备方法和试剂盒
技术领域
本发明属于生物技术，特别是涉及TERC(ERBB2)基因和/或MYC基因检测探针及其制备方法和试剂盒。
背景技术
宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤。从正常宫颈、宫颈上皮内瘤变到宫颈癌是一个逐渐发展的过程，其发生、发展与多种基因和蛋白质的异常表达或缺失密切相关，是一个复杂的多步骤过程。在子宫颈癌的治疗过程中发现，针对宫颈癌的治疗效果与病理分级相关，CIN及早期宫颈癌(包括原位癌和早期浸润癌)的治疗效果非常好，治疗措施得当，可长期无瘤生存。因此，宫颈癌的早期诊断和准确分级在宫颈癌的防治中非常重要。人类端粒酶RNA(telomeraseRNAcomponent，，TERC)是人类端粒酶的主要组成部份，TERC基因的突变、活化及扩增将导致端粒酶活性的增强。原癌基因MYC(v-mycavianmyelocytomatosisviraloncogenehomolog,MYC)是MYC家族的重要成员，编码细胞核内磷酸化蛋白质。MYC基因是细胞增殖的主要调节基因，其表达的增强可以启动细胞的非控制性增值过程，从而促使大多数人类肿瘤的发生。研究发现，与正常宫颈和低度宫颈癌前病变(CIN1)相比，TERC基因和MYC基因的扩增频率随着宫颈病变的进展而加强，提示检测TERC/MYC基因状态可以辅助临床区分高度与低度宫颈癌前病变，提高细胞学及HPV检测筛查宫颈病变的灵敏度及特异性。
荧光原位杂交(FluorescenceinsituhybridizationFISH)是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。FISH的基本原理是用已知的标记核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。与传统的放射性标记原位杂交相比，荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点，因此在分子细胞遗传学领域受到普遍关注。
杂交所用的探针大致可以分类三类：1)染色体特异重复序列探针，例如α卫星、卫星III类的探针，其杂交靶位常大于1Mb，不含散在重复序列，与靶位结合紧密，杂交信号强，易于检测；2)全染色体或染色体区域特异性探针，其由一条染色体或染色体上某一区段上极端不同的核苷酸片段所组成，可由克隆到噬菌体和质粒中的染色体特异大片段获得；3)特异性位置探针，由一个或几个克隆序列组成。
探针的荧光素标记可以采用直接和间接标记的方法。间接标记是采用生物素标记DNA探针，杂交之后用藕联有荧光素亲和素或者链霉亲和素进行检测，同时还可以利用亲和素-生物素-荧光素复合物，将荧光信号进行放大，从而可以检测500bp左右的片段。而直接标记法是将荧光素直接与探针核苷酸或磷酸戊糖骨架共价结合，或在缺口平移法标记探针时将荧光素核苷三磷酸掺入。直接标记法在检测时步骤简单，临床使用方便。
而目前对于TERC基因和/或MYC基因FISH检测，还缺少灵敏度和特异性高的检测试剂盒。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种TERC基因和/或MYC基因检测探针及其制备方法，所制备的探针可用于检测TERC基因和MYC基因状态，即检测TERC基因和MYC基因的指拷贝数变化，具有很好的特异性。
实现上述目的的技术方案如下。
一种TERC基因和/或MYC基因检测探针的制备方法，包括以下步骤：
(4)选取针对TERC基因的BAC克隆为CTD-3214J12、RP11-816J6和RP11-778I3中至少一种，或选取BAC克隆为RP11-3K16、CTD-2582E13和RP11-886J24中的至少一种；和/或选取针对MYC基因的BAC克隆为CTD-2511O8，或选取BAC克隆为RP11-440N18和CTD-2205H22中的至少一种；
(5)对克隆分别提取质粒，得到质粒DNA，定量；
(6)用荧光素标记质粒DNA，针对同一种基因的质粒DNA所标记的荧光素相同，针对TERC基因和针对MYC基因的检测探针标记的荧光素的颜色不相同，即得。
在其中一个实施例中，针对TERC基因的所述BAC克隆为CTD-3214J12、RP11-816J6和RP11-778I3。
在其中一个实施例中，针对TERC基因的所述BAC克隆为RP11-3K16、CTD-2582E13和RP11-886J24。
在其中一个实施例中，针对MYC基因的BAC克隆为CTD-2511O8。
在其中一个实施例中，针对MYC基因的BAC克隆为RP11-440N18和CTD-2205H22。
在其中一个实施例中，标记荧光素选择本领域已知的荧光染料，优选地，荧光素为AlexaFITC、AlexaRhodamine、TexasRed、pacificDEAC。
在其中一个实施例中，基因探针的标记可以采用现有技术中的方法将相应荧光素标记至双链核酸上，所述方法包括但不限于：随机引物法、切口平移等，标记基因探针可以使用市售的缺口平移标记试剂盒和/或随机引物标记试剂盒，优选abbott和/或Roche公司的NickTranslationKit。本发明步骤(3)优选采用随机引物法、切口平移法对质粒DNA进行荧光素标记。
在其中一个实施例中，所述标记的温度为14℃-18℃，标记的时间为10-14小时。
本发明的另一目的是提供一种TERC基因和MYC基因检测试剂盒。
实现该目的技术方案如下。
一种TERC基因和/或MYC基因检测试剂盒，包括有上述TERC基因和/或MYC基因检测探针。
在其中一个实施例中，包括有用于内控的7号染色体鉴别探针(CSP7)探针，该鉴别探针与TERC基因和MYC基因检测探针标记的荧光素的颜色不相同。
在其中一个实施例中，还包括有用于封闭重复序列的COTHumanDNA，和DAPI复染剂。
本发明具有以下有益效果：
(1)本发明通过筛选到最优的MYC基因扩增检测探针及其组合，采用FISH(FluorescenceIn-SituHybridization)方法对TERC/MYC基因扩增进行检测，信号计数行准确、快速，且结果的重复性好；补充了临床中检测试剂依赖进口的不足，有利于后续该检测探针应用于临床研究，进行宫颈癌早期诊断、分级诊断和指导治疗等方面。
(2)本发明优选克隆检测特异性好，通过本发明所述的TERC/MYC基因扩增检测试剂盒，从基因水平了解MYC基因状态改变，通过异常信号模式、异常信号细胞数的改变，来判断病理分级，在细胞学高度和低度病变中具诊断意义。
附图说明
图1A为是实施例1中TERC基因检测探针序列的示意图。
图1B为是实施例1中MYC基因检测探针序列的示意图。
图2为实施例1中人外周血培养细胞片TERC基因和MYC基因检测探针FISH检测结果图。
图3为实施例4中宫颈脱落细胞样本FISH检测结果图FISH检测结果图，其中，检测信号类型为2R2G2A，检测信号类型为2R2G2A，检测结果为：TERC基因未发生扩增，MYC基因未发生扩增。
图4为实施例4中宫颈组织样本FISH检测结果图，其中，检测信号类型为2R2G2A，检测结果为：TERC基因未发生扩增，MYC基因未发生扩增。
图5为实施例4中宫颈组织样本FISH检测结果图，其中，检测信号类型为3R3G2A，检测结果为：TERC基因扩增，MYC基因扩增。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。本发明所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
实施例1TERC基因和MYC基因检测探针的制备
本实施所述TERC检测探针的制备方法，包括以下步骤：
挑选包含目的基因TERC及两端序列的克隆，如图1A所示。GSPTERC包括两组探针，第一组探针包括第一探针、第二探针和第三探针，具体如下表，其购买于InvitrogenRP11BAC及CTDBAC克隆库。
第二组探针包括第四探针、第五探针和第六探针，具体如下表，其购买于InvitrogenRP11BAC及CTDBAC克隆库。
以下分两组检测探针分别制备。
第一组：
组一 BAC 插入片段起止位置
第一探针 CTD-3214J12 (chr3:169152582..169377736)225Kb
第二探针 RP11-816J6 (chr3:169447253..169494853)48Kb
第三探针 RP11-778I3 (chr3:169492904..169717073)224Kb
本实施所述MYC检测探针的制备方法，包括以下步骤：
挑选包含目的基因MYC及两端序列的克隆，如图1B所示。GSPMYC包括两组探针：
第一组探针包括第一探针，具体如下表，其购买于InvitrogenRP11BAC及CTDBAC克隆库。
第二组探针包括第二探针和第三探针，具体如下表，其购买于InvitrogenRP11BAC及CTDBAC克隆库。
以下分两组检测探针分别制备。
第一组：
组一 BAC 插入片段起止位置
第一探针 CTD-2511O8 chr8:128654266…128867152(213Kb)
第二组：
(2)GSPTERC和GSPMYC基因检测探针制备：使用Qiagen公司的PlasmidMaxiKit，按照说明书要求的操作方法对不同BAC克隆分别进行超低拷贝质粒DNA提取，通过测定260nm和280nm处的吸光度对质粒DNA定量；采用高压灭菌的超纯水稀释为200ng/ul,采用1.5ml的离心管分装，最后将得到的对应TERC基因或MYC基因的1种或2种或4种相应组合的质粒DNA混合，-20℃密封保存。
(3)通过切口平移方法对质粒DNA混合物进行荧光标记，针对GSPTERC基因的每种探针标记的荧光素为Spectrum-Orange，针对GSPMYC基因每种探针标记的荧光素为Spectrum-Green。采用abbott的NickTranslationKit，按如下方案，严格避光条件下在冰上配制PCR反应体系。
配完后震荡混匀，在16℃标记12小时，再80℃孵育10分钟灭活酶。取5ul使用2％琼脂糖凝胶做电泳，要求在50bp～500bp之间存在弥散的带。
对标记产物进行乙醇沉淀和浓缩，按如下方案在1.5ml离心管中依次加入醋酸钠和无水乙醇，避光、冰上配制：
标记产物45ul
醋酸钠(3mol/L)5ul
无水乙醇125ul。
混匀后置于-70℃冰箱中至少2小时，4℃13000rpm离心30分钟，小心去上清，勿搅动沉淀，加入1ml的70％乙醇，4℃13000转/分钟离心15分钟，小心去上清，勿搅动沉淀，避光干燥。使用1ul纯化水溶解沉淀，分别获得GSPTERC和GSPMYC和基因探针，避光、-20℃储存。
4.GSPTERC和GSPMYC基因探针验证：分别使用TERC组一探针+MYC组一探针制备的杂交液，TERC组二探针+MYC组二探针制备的杂交液为待检测试剂，使用人类正常分裂中期淋巴细胞滴片进行探针验证(检测方法参考实施例3)。培养细胞包含中期或间期染色体DNA,荧光原位杂交时，染色体DNA表现为形态上可识别的染色体或是细胞核。如图2(应用于TERC组一探针+MYC组一探针的实验结果)所示：中期染色体的FISH杂交结果图。图中可见红色信号示GSPTERC,绿色信号示GSPMYC，青色信号CSP7(7号染色体鉴定探针，购于D7Z1SpectrumAquaProbe,货号：06J54-007)。图中可见TERC/MYC/7号染色体探针信号明亮，人外周血培养细胞片中在中期染色体上可观察到灵敏度、特异性100％；使用石蜡样本片进行杂交检测，可以清楚的记录三个靶标拷贝数。其它相应的探针验证实验结果与TERC组一探针+MYC组一探针的实验结果相同，图省略。
实施例2：TERC基因和MYC基因检测试剂盒制备方法
TERC基因和MYC基因检测试剂盒包括有TERC/MYC杂交液和DAPI复染剂两个组分，其中TERC和MYC杂交液包含实施例1所述的一组GSPMYC基因探针和一组GSPTERC基因探针的组合。TERC和MYC基因分别有两组检测探针，两种基因的两组可以随意组合，本实施例中，所述TERC基因和MYC基因检测试剂盒为四种，分别为：TERC(组一)+MYC(组一)的组合、TERC(组二)+MYC(组二)的组合、TERC(组一)+MYC(组二)的组合、TERC(组二)+MYC(组一)的组合、CSP7(7号染色体鉴定探针，购于D7Z1SpectrumAquaProbe,货号：06J54-007)，用于杂交环境(促进杂交)的缓冲液组分、封闭重复序列的COTHumanDNA等)。DAPI复染剂主要用于杂交后的细胞复染，其中的DAPI会与DNA结合，使得细胞核显示出蓝色荧光，含有对苯二胺的复染剂可以保持荧光的稳定。
具体配方如下：
(1)杂交液配制
(2)DAPI复染剂配制
10mg的对苯二胺溶于1ml的PBS中，调节pH为9.0，加入9ml甘油，反复震荡混匀，-20℃储存。取2.5μl的DAPI溶液(0.1mg/ml)溶于1ml抗褪色液中，避光条件下反复震荡混匀，-20℃避光密闭保存。
(3)成品组装
组分名称 规格/10test 数量
杂交液 100μl/管 1管
DAPI复染剂 100μl/管 1管
说明书 1份
实施例3：TERC基因和MYC基因检测试剂盒的检测方法
1、玻片预处理
1.玻片放入65±5℃恒温箱中烤片过夜；
2.取出玻片，将其放入室温二甲苯(或环保脱蜡剂)中10分钟；
3.取出玻片，再将其放入另一缸室温二甲苯(或环保脱蜡剂)中10分钟；
4.取出玻片，再将其放入无水乙醇中室温10分钟，去除残留二甲苯(或环保脱蜡剂)；
5.取出玻片，再将其放入100％、90％、70％梯度乙醇室温复水各3分钟；
6.取出玻片，再将其放入灭菌纯化水中室温洗涤3分钟，用无绒纸巾吸取多余水分；
7.取出玻片，再将玻片放入1×EDTA修复液中，高压锅高压修复2分钟(高压锅有气放出，开始发出响声时计时)；
8.冷却至室温后，取出玻片，自来水冲洗干净；
9.取出玻片，将其放入室温2×SSC中3分钟；
10.取出玻片，室温晾干；
11.将玻片正面朝上平放在架子上，在样本区域滴加适量的胃蛋白酶反应液，室温消化5～15分钟；
12.将多余液体甩去，将其放入室温2×SSC中5分钟；
13.取出玻片，再将其放入另一缸室温2×SSC中5分钟；
14.取出玻片，再将其依次放入室温70％，90％，100％梯度乙醇脱水各2分钟；
15.取出玻片，室温晾干。
2、样品和探针同时变性(避光操作)
(3)从-20±5℃冰箱中取出杂交液，震荡混匀，瞬时离心；
(4)加10μl的杂交液到杂交区域，迅速盖上22×22mm盖玻片，轻压使杂交液均匀分布，避免产生气泡；
(5)用橡皮胶沿盖玻片边缘封片，完全覆盖盖玻片和载玻片接触的部位；
(6)将玻片放入杂交仪中，湿润原位杂交仪湿度条，插入湿条，盖上杂交仪上盖，设置“Denat&Hyb”程序，变性85℃5分钟，杂交37℃10～18小时；(若无杂交仪，可使用替代仪器，如恒温热台进行变性，电热烘箱/或水浴锅进行杂交，需注意温度准确及保持杂交湿度)。
3、杂交后洗涤及复染(避光操作)
3.1洗涤前30分钟，将配制好的洗液I,洗液II，放入37±1℃的水浴中，测量以确保温度合适；
3.2关闭杂交仪电源，将玻片取出，轻轻撕去橡皮胶，移去盖玻片(若盖玻片难以去除，可以将其放入洗液I中微微摇晃，以利于其脱落；
3.3玻片放入37±1℃洗液I(2×SSC)中10分钟；
3.4取出玻片，再将其放入37±1℃洗液II(0.1％NP-40/2×SSC)中5分钟；
3.5取出玻片，室温70％乙醇中3分钟；
3.6取出玻片，暗处自然干燥玻片；
3.7室温，滴加10μlDAPI复染剂到22×22mm的盖玻片,载玻片目标区域朝下，轻放于盖玻片上，轻压，避免产生气泡，在暗处存放，待观察。
4、结果分析
相关荧光和DAPI需用合适的滤块观察。
1.使用合适的滤镜，在10×物镜下寻找，在100×物镜下计数；
2.调整合适的焦距，对信号和背景有明确的概念；信号点应位于细胞内；当细胞外存在荧光信号点时，要注意与细胞内信号点区分，最好能避开该区域进行计数；
3.扫视几个细胞区域，要求细胞边界完整、无重叠，DAPI染色均匀，绿色和红色信号清晰；跳过信号弱及没有特定信号或高背景的细胞计数；需要主观辨别的细胞不计数；
4.从选择区域的左上角开始分析，从左到右扫视，观察多个视野；
5.转到100×物镜，调整焦距，在核的不同层次找到所有信号点；
6.在每个细胞内计数信号点；调焦找到每个细胞内的所有信号点，计数一个区域内的两种信号，只计数每种颜色有1个或更多FISH信号的，没有信号或只有单种颜色信号的细胞不计数；记录观察到的细胞总数(正常及异常信号数目)。
4.6.1正常信号：2R2G2A；
4.6.2异常信号：>2R2G2A(TERC扩增)，2G>2G2A(MYC扩增)。
7.设定阴性阈值
随机选取10例以上的样本当阴性质控片。每张阴性质控片随机计数信号完整的100个细胞，统计每例样本中出现异常信号细胞的数目及百分比，统计百分比的平均值及标准差，阴性阈值设定为平均值+3倍标准差。
实施例4：TERC基因和MYC基因检测试剂盒临床使用评价
使用实施例1所述TERC基因和MYC基因检测探针组合，实施例2所述4种检测试剂盒(TERC(组一)+MYC(组一)的组合、TERC(组二)+MYC(组二)的组合、TERC(组一)+MYC(组二)的组合、TERC(组二)+MYC(组一)的组合)对20份临床样本(样本类型为福尔马林固定石蜡包埋组织样本和宫颈脱落细胞样本，其经过病理检测确诊，具体见下表)，分别进行检测。两种探针组合的检测一致性佳。与市售商品化试剂比较，检测结果完全一致，试剂的特异性和灵敏度高。图3和图4以及图5为TERC(组一)+MYC(组一)的组合试剂盒检测结果，图3和图4中所示，检测信号类型为2R2G2A，TERC/MYC未发生扩增；图5中所示，检测信号类型为3R3G2A，TERC/MYC基因扩增。其它不同三种基因探针的组合的检测结果相同，图省略。
TERC(组一)+MYC(组二)的组合、TERC(组二)+MYC(组一)的组合的组合的检测结果，与上表所示结果相同，因篇幅的原因，具体结果省略。
本发明中，针对TERC基因和MYC基因，分别各使用一种探针也能实现相应的检测，但相对探针组合使用而言，组合探针的使用，检测信号会更好，特别是本实施例中TERC(组一)+MYC(组一)的以及TERC(组二)+MYC(组二)组合检测的信号最好。理论上探针长度越长，实际检测时获得的荧光信号亮度越明亮，但因为可能涉及到更多基因序列，所得到的信号复杂性可能性增多，对检测实现的难度也增强。本发明所述针对TERC基因的组一和组二的检测探针的BAC克隆其长度分别为：564Kb和497Kb,均为包含TERC基因及其两端序列的核酸混合物。本发明所述针对MYC基因的组一和组二的检测探针的BAC克隆总长度分别为：213Kb和291Kb,均为包含MYC基因及其两端序列的核酸混合物。
发明人在对本发明所述探针验证中发现，较长的检测探针确实获得更强的荧光信号，并且在对临床样本的检测验证中也获得了相同的结果。因此，在荧光探针的设计中，可以通过适当延长荧光探针长度增加信号亮度，但具体如何组合使用，存在的一定的技术困难，要实现很好的检测结果，除了设计中的经验之外，还需通过临床样本验证评估信号类型差异。
从上述实验检测结果知，在对这些样本进行分子标志物检测后，可以据检测结果对样本进行分子分型，依据检测指标的意义，用于临床治疗方案制定、用药选择和疗效判断。
所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种TERC基因和/或MYC基因检测探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选取针对TERC基因的BAC克隆为CTD-3214J12、RP11-816J6和RP11-778I3中至少一种，或选取BAC克隆为RP11-3K16、CTD-2582E13和RP11-886J24中的至少一种；和/或选取针对MYC基因的BAC克隆为CTD-2511O8，或选取BAC克隆为RP11-440N18和CTD-2205H22中的至少一种；
(2)对克隆分别提取质粒，得到质粒DNA，定量；
(3)用荧光素标记质粒DNA，针对同一种基因的质粒DNA所标记的荧光素相同，针对TERC基因和针对MYC基因的检测探针标记的荧光素的颜色不相同，即得。
2.根据权利要求1所述TERC基因和/或MYC基因检测探针的制备方法，其特征在于，针对TERC基因的BAC克隆为CTD-3214J12、RP11-816J6和RP11-778I3,或为BAC克隆为RP11-3K16、CTD-2582E13和RP11-886J24。
3.根据权利要求1所述TERC基因和/或MYC基因检测探针的制备方法，其特征在于，针对MYC基因的所述BAC克隆为CTD-2511O8，或针对MYC基因的所述BAC克隆为RP11-440N18和CTD-2205H22。
4.根据权利要求1所述TERC基因和/或MYC基因检测探针的制备方法，其特征在于，针对TERC基因的BAC克隆为RP11-3K16、CTD-2582E13和RP11-886J24，以及针对MYC基因的所述BAC克隆为RP11-440N18和CTD-2205H22。
5.根据权利要求1所述TERC基因和/或MYC基因检测探针的制备方法，其特征在于，针对TERC基因的BAC克隆为BAC克隆为CTD-3214J12、RP11-816J6和RP11-778I3，以及针对MYC基因的所述BAC克隆为CTD-2511O8。
6.根据权利要求1所述TERC基因和/或MYC基因检测探针的制备方法，其特征在于，所述荧光素为FITC、Rhodamine、TexasRed、DEAC。
7.根据权利要求1-6任一项所述TERC基因和/或MYC基因检测探针的制备方法，其特征在于，步骤(3)采用随机引物法或切口平移法对质粒DNA进行荧光素标记，所述标记的温度为14℃-18℃，标记的时间为10-14小时。
8.根据权利要求1-7任一项所述的制备方法得到的TERC基因和/或MYC基因检测探针。
9.一种TERC基因和/或MYC基因检测试剂盒，其特征在于，包括有权利要求8所述的TERC基因和MYC基因检测探针。
10.根据权利要求9所述TERC基因和/或MYC基因检测试剂盒，其特征在于，还包括有用于内控的7号染色体鉴别探针，该鉴别探针与TERC基因和MYC基因检测探针标记的荧光素的颜色不相同；还包括有用于封闭重复序列的COTHumanDNA，和DAPI复染剂。
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