CN105296144A - 一种用β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶进行大豆油脱色的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的在于提供一种用β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶对对大豆油进行脱色的方法。首先从鸡肠黏膜中提取β-胡萝卜素-15,15′-单加氧酶，测得提取物的蛋白浓度为5.87mg/mL。以三级大豆油的脱色率为指标，研究β-胡萝卜素-15,15′-单加氧酶在不同酶提取液添加量、胆酸钠浓度、反应时间以及搅拌速度的条件下对三级大豆油中β-胡萝卜素中的作用。证实利用β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶对大豆三级油进行脱色，最终得到的酶法脱色的脱色率为32.74％。
Description
技术领域：
本发明属于油脂精炼领域，涉及一种用β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶进行大豆油脱色的方法。
技术背景：
大豆油中主要有三种色素物质：已知成分的有机色素、有机分解产物与由于氧化和无色前体形成的色素。β-胡萝卜素是脱色主要目标脱除物。油脂中的类胡萝卜素使油脂呈红色，吸收400～500nm波长范围的光。
在油脂的精炼工艺中，脱色工艺不是单纯的为了脱去油脂中所有色素，而是为了改善油脂色泽和为油脂脱臭提供合格的原料油品，所以油脂脱色是油脂精炼过程中的关键步骤之一。大豆油的脱色通常使用的是物理方法脱色，即吸附法脱色，常用的脱色剂有活性白土、凹凸棒土、硅藻土等，还可以用活性炭进行脱色。物理脱色具有脱色率高，脱色工艺比较完善的优点。但是，物理脱色会导致脱色后的油中残留脱色剂和脱色剂的气味，并且物理方法脱色过程中的温度等条件会对油的品质带来一定的影响。
近年来，国内外有许多关于β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶裂解β-胡萝卜素的研究。动物体内不能合成维生素A，必须从食物中摄取维生素A原即类胡萝卜素，通过β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶裂解β-胡萝卜素，从而获得维生素A。国内也有学者研究β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶在体外使β-胡萝卜素发生酶解生成维生素A。β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶裂解β-胡萝卜素的方式有两种：中心裂解以及偏心裂解。中心裂解方式指的是β-胡萝卜素在酶的作用下从中间断裂，形成相同的两分子视黄醛，视黄醛接着被还原为视黄醇或视黄酸。偏心裂解则是β-胡萝卜素裂解后的产物为一长链和一短链的β-阿朴胡萝卜素醛。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种用β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶对对大豆油进行脱色的方法。油脂的色素物质主要是β-胡萝卜素，通过β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶裂解β-胡萝卜素达到脱色的目的。β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶裂解β-胡萝卜素的方式有两种：中心裂解以及偏心裂解。中心裂解方式指的是β-胡萝卜素在酶的作用下从中间断裂，形成相同的两分子视黄醛；偏心裂解则是β-胡萝卜素裂解后的产物为一长链和一短链的β-阿朴胡萝卜素醛。物理脱色会导致脱色后的油中残留脱色剂和脱色剂的气味，并且物理方法脱色过程中的温度等条件会对油的品质产生一定的影响，并且分离吸附剂时会造成一定的油脂损失。本专利能够利所涉及的脱色方法由于脱色温度低，酶分离简单，残留量少，因此不会对大豆油的品质产生影响。
本发明利用催化剂脱色具体操作步骤如下：
步骤一、β-胡萝卜素-15，15′单加氧酶的提取：选取健康的肉鸡，屠宰禁食一天自由饮水。宰后立即取肠用生理盐水冲洗干净，再用DTT生理盐水冲洗。洗净后将鸡肠纵向剖开，刮取黏膜。按比例添加缓冲溶液，组织捣碎机匀浆，离心，取上清液得到含有β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶的酶液，测定提取的酶液的蛋白质含量。
步骤二、β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶脱色实验：称取油样于烧杯中，分别加入一定量的β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶、胆酸钠，加入一粒转子，将其置于水浴中搅拌。将反应后的油脂离心后取上层油脂进行测定。用相同体积的缓冲溶液替代β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶液，其他条件不变作为空白样进行同样的操作，测定油脂色泽。
具体实施方式一：
本发明的提供一种用β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶对对大豆油进行脱色的方法。通过以下步骤实现：选取健康的肉鸡，屠宰禁食一天自由饮水。宰后立即取肠用生理盐水冲洗干净，再用1mmol/L的DTT生理盐水冲洗。洗净后将鸡肠纵向剖开，刮取黏膜。按1:5(W:V)的比例添加pH为7.4的缓冲溶液，组织捣碎机匀浆，10000r/min离心40min，取上清液保存，再通过考马斯亮蓝法测定所提取的酶液的蛋白质浓度为5.87mg/ml。二、利用所提取的β-胡萝卜素-15,15′-单加氧酶进行脱色：向一定量的大豆三级油中添加6、8、10、12、14mL所提取的酶液，再向反应体系中添加0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL浓度为0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mmol/L的胆酸盐，在搅拌速度为30、40、50、60、70r/min，温度为30、35、40、45、50℃条件下反应2、3、4、5、6h。以脱色率为指标评价脱色的效果，根据公式计算脱色率：脱色率＝(C0-C1)/C0×100％，式中：C0—脱色前红值，C1—脱色后红值。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式的不同点在于步骤二中添加所提取的酶液的量为8、10、12mL。其它步骤与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式的不同点在于步骤二中添加胆酸盐的浓度为0.3、0.5、0.7mmol/L，添加量为1.0、1.5、2.0mL。其它步骤与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式的不同点在于步骤二中脱色温度为30、35、40℃，搅拌速度为40、50、60/min。其它步骤与具体实施方式一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于脱色时间为3、4、5h。其它步骤与具体实施方式一相同。
Claims (5)
1.一种用β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶对对大豆油进行脱色的方法，其特征在于从鸡肠黏膜中提取的β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶对大豆三级油进行脱色，通过以下步骤实现：
步骤一、选取健康的肉鸡，屠宰禁食一天自由饮水，宰后立即取肠用生理盐水冲洗干净，再用1mmol/L的DTT生理盐水冲洗。刮取黏膜。按1:5(W:V)的比例添加pH为7.4的缓冲溶液，组织捣碎机匀浆，10000r/min离心40min，取上清液得到含有β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶的酶液，测定所提取酶液的蛋白质浓度为5.87mg/ml；
步骤二、称取250mL油样于烧杯中，向大豆三级油中添加6、8、10、12、14mL所提取的酶液，再向反应体系中添加0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL浓度为0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mmol/L的胆酸盐，在搅拌速度为30、40、50、60、70r/min，温度为30、35、40、45、50℃条件下反应2、3、4、5、6h。
2.根据权利要求1所述的β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶对对大豆油进行脱色的方法，其特征在于步骤二中添加所提取的酶液的量为8、10、12mL。
3.根据权利要求1所述的β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶对对大豆油进行脱色的方法，其特征在于步骤二中添加胆酸盐的浓度为0.3、0.5、0.7mmol/L，添加量为1.0、1.5、2.0mL。
4.根据权利要求1所述的β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶对对大豆油进行脱色的方法，其特征在于步骤二中脱色温度为30、35、40℃，搅拌速度为40、50、60/min。
5.根据权利要求1所述的β-胡萝卜素-15，15′-单加氧酶对对大豆油进行脱色的方法，其特征在于步骤二中脱色时间为3、4、5h。
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