CN105255756A - 微生物除臭复合菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种微生物除臭复合菌剂及其制备方法和应用。该微生物除臭复合菌剂包括:乳酸菌4.8-10×10⁸cfu/mL；毛霉菌2-5×10⁶cfu/mL；酵母菌3.9-7.2×10⁷cfu/ml；巨大芽胞杆菌3-10×10⁶cfu/mL；枯草芽胞杆菌7-10×10⁶cfu/mL；总菌数为5.31-10.97×10⁸cfu/mL。该臭复合菌剂由多种微生物菌种经过发酵制成，由于菌群组成、代谢类型、呼吸类型及作用功能多样性特点，使得该复合菌剂能够在粪污中良好生长，并迅速稳定占据有利生态位，从而有效地抑制了产生恶臭物质的腐败菌生长繁殖或对恶臭物质直接降解，实现了恶臭原位源头控制，达到除臭效果。

Description

微生物除臭复合菌剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及微生物技术处理领域，具体而言，涉及一种微生物除臭复合菌剂及其制备方法和应用。

背景技术

随着经济的不断发展，人们生活水平的提高及城市化进程的不断加速，室内外环境污染问题日益突出，城乡居民对生活环境的标准越来越高，对空气质量的要求越来越重视。恶臭作为环境公害之一，直接影响人们的生活质量，甚至危害到人们的健康，已越来越受到人们的关注。规模化畜禽养殖场是恶臭物质产生的重要来源，大量的畜禽粪便及生活垃圾得不到充分有效利用，既浪费资源又污染环境，特别是夏秋之季，养殖场周围大多是臭气熏天，蚊蝇肆虐。养殖场所产生的恶臭含有多种有毒有害成分，其中氨气、硫化氢、硫醇和甲硫醇等是主要有害气体成分，恶臭的排放会对周边环境造成严重污染，人们长期吸入后对身体健康造成严重伤害。养殖业所产生的恶臭已经成为一大公害，引起了各方面的关注，因此，实施恶臭污染控制和管理，开展脱除恶臭气体的研究具有重要意义。

近年来国内市场对畜禽养殖场除臭剂的需求不断增长，市场潜力巨大，但是目前国内生产的除臭剂产品良莠不齐、质量不尽人意难以得到相关企业及单位的认可。其中，利用微生物除臭是广泛应用的一种经济高效环保的方式。微生物除臭的实质是运用特定功能的微生物将一些臭味物质分解转化为无臭的物质或者是抑制臭味物质的产生从而达到去除臭味的目的。生物除臭由于具有无污染、持续性强等特点，己成为环境工作者研究的热点之一。近年来国内研究者大部分集中在单一菌株的筛选，而将多种不同功能的微生物组成微生物菌剂应用于实践中还很少有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种微生物除臭复合菌剂及其制备方法和应用，该微生物除臭复合菌剂对氨气和硫化氢具有较好的去除效果，且对环境无污染。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种微生物除臭复合菌剂，包括:乳酸菌4.8×10⁸-10×10⁸cfu/mL；毛霉菌2×10⁶-5×10⁶cfu/mL；酵母菌3.9×10⁷-7.2×10⁷cfu/mL；巨大芽胞杆菌3×10⁶-1×10⁷cfu/mL；枯草芽胞杆菌7×10⁶-1×10⁷cfu/mL；总菌数为5.31×10⁸-10.97×10⁸cfu/mL。

进一步地，该微生物除臭复合菌剂包括：乳酸菌4.8×10⁸cfu/mL；毛霉菌2×10⁶cfu/mL；酵母菌3.9×10⁷cfu/mL；巨大芽胞杆菌3×10⁶cfu/mL；枯草芽胞杆菌7×10⁶cfu/mL；总菌数为5.31×10⁸cfu/mL。

根据本发明的另一方面，还提供了一种微生物除臭复合菌剂的制备方法，包括如下步骤：1)固体斜面培养：分别将巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基中，毛霉菌和酵母菌接种于土豆固体培养基中，乳酸菌接种于MRS固体培养基中，恒温培养以使菌株活化；2)一级种子培养：将经步骤1)中活化后的菌株分别相应地接种于牛肉膏蛋白琼脂胨液体培养基、土豆液体培养基和MRS液体培养基中培养，即得一级种子；3)二级种子培养：将步骤2)所得一级种子继续接种培养，即得二级种子液；4)将步骤3)中获得的巨大芽胞杆菌种子液和枯草芽胞杆菌种子液混合发酵有氧培养，获得菌剂A；将步骤3)中获得的乳酸菌种子液、毛霉菌种子液和酵母菌种子液混合发酵有氧培养，获得菌剂B；5)将步骤4)中获得的菌剂A和菌剂B混合，得到微生物除臭复合菌剂。

进一步地，步骤1)中菌株活化的条件为：28～32℃下恒温培养4-6天；优选30℃下恒温培养1-2天；可选地，牛肉膏蛋白胨固体培养基的配方为：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g、蒸馏水1000mL和固体加琼脂20g，pH值为7.0-7.2；土豆固体培养基的配方为：土豆200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL和固体加琼脂20g，pH值为7.0-7.2；MRS固体培养基的配方为蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、吐温801.0mL、磷酸氢二钾2g、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、七水硫酸镁0.58g、四水硫酸锰0.25g和蒸馏水1000mL，pH值为6.2-6.6。

进一步地，步骤2)中的培养条件为：25～35℃下，搅拌速度为160～200rpm下培养2～3天，当液体培养菌密度OD600值达到0.6～0.8时停止培养；优选地，步骤2)中的培养条件为：30℃和搅拌速率为180rpm下培养2天，当液体培养菌密度OD600值达到0.7时停止培养。

进一步地，步骤3)中一级种子均以3～7％的接种量分别接种，于25～35℃且搅拌速率为150～200rpm下培养2～3天；优选以5％的接种量分别接种，于30℃且搅拌速率为180rpm下培养2天。

进一步地，步骤4)中制备菌剂A的步骤包括：将步骤3)中制备的巨大芽胞杆菌种子液和枯草芽胞杆菌种子液均以10～20％的接种量接种于发酵罐中，并在25～35℃、搅拌速率为110～130rpm且通气量为1.0～1.5vvm下混合发酵有氧培养；优选地，将步骤3)中制备的巨大芽胞杆菌种子液和枯草芽胞杆菌种子液均以15％的接种量接种，并在30℃、搅拌速率为120rpm且通气量为1.58vvm下混合发酵有氧培养；

制备所述菌剂B的步骤包括：将所述步骤3)中获得的乳酸菌种子液、毛霉菌种子液和酵母菌种子液以10～20％的接种量接种于发酵罐中混合发酵有氧培养，并于25～35℃、搅拌速率为110～130rpm且通气量为0.8～1.4vvm下混合发酵有氧培养；优选地，将步骤3)中获得的乳酸菌种子液、毛霉菌种子液和酵母菌种子液以15％的接种量接种于发酵罐中，并在30℃、搅拌速率为120rpm且通气量为1.0vvm下混合发酵有氧培养。

进一步地，按照质量百分含量计，混合发酵时的发酵培养基由2.5％糖蜜、0.12％玉米粉、0.33％硫酸铵、0.07％磷酸二氢钾、0.05％硫酸镁、0.05％氯化钙及余量的水组成。

进一步地，在步骤4)中，将菌剂A和菌剂B以体积比1:2～2:1混合；优选将菌剂A和菌剂B以体积比1:1混合。

根据本发明的又一方面，还提供了上述任一种的微生物除臭复合菌剂在畜禽养殖场和垃圾填埋场中的应用；优选地，应用的方法为将微生物除臭复合菌剂用水稀释100倍，按照0.1kg/m²对待除臭区域进行喷洒。

本发明的有益效果：

1)本发明的微生物除臭复合菌剂由多种微生物菌种经过发酵制成，属于多菌型，并且由于菌群组成、代谢类型、呼吸类型及作用功能多样性的特点，使得该微生物除臭复合菌剂能够在粪污中良好生长，迅速稳定占据有利生态位，有效地抑制了产生恶臭物质的腐败菌生长繁殖或对恶臭物质直接降解，实现了恶臭原位源头控制，并且对环境适应能力强，应用范围广，除臭效果比较持久。

2)该微生物除臭复合菌剂由乳酸菌、毛霉菌、酵母菌、巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌等有益微生物构成，由于协调作用，有益菌在粪污中能够进行强有力的生长繁殖，有效地改善了粪便生态环境，减少了粪便中抗生素的使用。

根据下文对本发明具体实施例的详细描述，本领域技术人员将会更加明了本发明的上述以及其他目的、优点和特征。

具体实施方式

为了解决现有技术中对养殖业或者垃圾场所产生的恶臭处理效果不佳的问题，本发明提供了一种微生物除臭复合菌剂，包括：乳酸菌4.8×10⁸-10×10⁸cfu/mL；毛霉菌2×10⁶-5×10⁶cfu/mL；酵母菌3.9×10⁷-7.2×10⁷cfu/mL；巨大芽胞杆菌3×10⁶-1×10⁷cfu/mL；枯草芽胞杆菌7×10⁶-1×10⁷cfu/mL；总菌数为5.31×10⁸-10.97×10⁸cfu/mL。

其中，乳酸菌J2(Lactobacillus)发酵产酸，能够抑制病原微生物的生长。毛霉菌J3(Mucor)能糖化淀粉并能生成少量乙醇，产生蛋白酶、脂肪酶、果胶酶、凝乳酶等。酵母菌J6(Saccharomycetes)是毕赤酵母菌，可以分泌激素等生理活性物质，为有益微生物繁殖提供所需基质，在分解恶臭中起到增强功效。巨大芽胞杆菌LS-1(Bacillusmegetarium)可以产生多种酶，抑制腐败微生物如大肠杆菌，黄色葡萄球菌等的生长，减少臭味的产生。枯草芽胞杆菌LS-2(Bacillussubtilis)可以产生枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，对腐败微生物具有抑制作用，同时其产生的纤维素酶，脂肪酶等能加速畜禽粪便，垃圾等的分解，减少臭味的产生。

因此，本发明通过采用菌群组成、代谢类型、呼吸类型及作用功能多样性的菌株复合，并对其进行配伍和配比优化组合，通过微生物之间的协同作用，构建出了能够在粪污中良好生长的多菌型微生物除臭复合菌剂。该微生物除臭复合菌剂能够有效地抑制产生恶臭物质的腐败菌生长繁殖，或对恶臭物质直接降解，且能够在较短的时间内实现恶臭原位源头控制，对NH₃及H₂S具有较强的去除效果，有效地降低了粪便等释放的恶臭强度，达到了恶臭原味控制的目的。更重要的是，该微生物除臭复合菌剂实现了5种菌株的有效配比组合，组合后的菌剂比单菌除臭效果明显提高，且对环境无任何污染。

在本发明的一个较佳实施例中，微生物除臭复合菌剂包括：乳酸菌4.8×10⁸cfu/mL；毛霉菌2×10⁶cfu/mL；酵母菌3.9×10⁷cfu/mL；巨大芽胞杆菌3×10⁶cfu/mL；枯草芽胞杆菌7×10⁶cfu/mL；总菌数为5.31×10⁸cfu/mL。

根据本发明的另一个方面，还提供了一种微生物除臭复合菌剂的制备方法，包括如下步骤：1)固体斜面培养：分别将巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基中，毛霉菌和酵母菌接种于土豆固体培养基中，乳酸菌接种于MRS固体培养基中，恒温培养以使菌株活化。在本发明的一个优选实施例中，牛肉膏蛋白胨固体培养基的配方为：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g、蒸馏水1000mL和固体加琼脂20g，pH值为7.0-7.2。土豆固体培养基的配方为：土豆200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL和固体加琼脂20g，pH值为7.0-7.2。MRS固体培养基的配方为蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、吐温801.0mL、磷酸氢二钾2g、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、七水硫酸镁0.58g、四水硫酸锰0.25g和蒸馏水1000mL，pH值为6.2-6.6。采用上述配方的培养基能够使得各菌株迅速繁殖，具有提高菌株发酵数量的效果和优势。

在本发明的一个优选实施例中，步骤1)中选择菌株活化的条件为：28～32℃下恒温培养4-6天。在一个较佳实施例中，菌株活化的条件为30℃下恒温培养1-2天。通过对菌株的恒温培养活化条件进行选择，有利于菌株迅速繁殖，从而具有提高发酵效率的优势。

待步骤1)完成菌株活化后，进行步骤2)即一级种子培养：将经步骤1)中活化后的菌株分别相应地接种于液体牛肉膏蛋白琼脂胨培养基、液体土豆培养基和液体MRS培养基中培养，即得一级种子。其中，步骤2)中的培养条件为：25～35℃下，搅拌速率为160～200rpm下培养2～3天，当液体培养菌密度OD600值达到0.6～0.8时停止培养。如果培养温度太高或者太低会出现菌数过低问题，不利于其功能的发挥。如果搅拌速率太高或太低会带来菌数过低，次级代谢产物少等问题，也不利于功能的发挥。同样，如果培养时间太长会导致部分死亡，时间太短会造成菌数量过低。因此，本发明将培养温度、搅拌速率以及培养时间控制在上述数值范围内，并且在液体培养菌密度OD600值达到0.6～0.8时停止培养，获得了质量较高的一级种子。

在本发明的一个较佳实施例中，步骤2)中的培养条件为：30℃和搅拌速率为180rpm下培养2天，当液体培养菌密度OD600值达到0.7时停止培养。

3)二级种子培养：将步骤2)所得一级种子继续接种培养，即得二级种子液。在二级种子培养时需要注意3～7％的接种量分别接种，控制培养的温度以及搅拌速率，否则会出现菌数过低问题。因此，在本发明的一个典型实施例中，在步骤3)中将一级种子均以3～7％的接种量分别接种，于25～35℃且搅拌速率为150～200rpm下培养2～3天。在本发明的一个较佳实施例中，将一级种子均以5％的接种量分别接种，于30℃和搅拌速率180rpm下培养2天。

步骤4)：将步骤3)中获得的巨大芽胞杆菌种子液和枯草芽胞杆菌种子液混合发酵有氧培养，获得菌剂A。将步骤3)中获得的乳酸菌种子液、毛霉菌种子液和酵母菌种子液混合发酵有氧培养，获得菌剂B。将步骤4)中获得的菌剂A和菌剂B混合，得到微生物除臭复合菌剂。优选地，将菌剂A和菌剂B以体积比1:2～2:1混合。较优选地，将菌剂A和菌剂B以体积比1:1混合。

在本发明的一个优选实施例中，步骤4)中制备菌剂A的步骤包括：将步骤3)中制备的巨大芽胞杆菌种子液和枯草芽胞杆菌种子液均以10～20％的接种量接种于发酵罐中，并在25～35℃、搅拌速率为110～130rpm且通气量为1.0～1.5vvm下混合发酵有氧培养。制备菌剂B的步骤包括：将步骤3)中获得的乳酸菌种子液、毛霉菌种子液和酵母菌种子液以10～20％的接种量接种于发酵罐中混合发酵有氧培养，并于25～35℃、搅拌速率为110～130rpm且通气量为0.8～1.4vvm下混合发酵有氧培养。

在本发明的一个较佳实施例中，将步骤3)中制备的巨大芽胞杆菌种子液和枯草芽胞杆菌种子液均以15％的接种量接种，并在30℃、搅拌速率为120rpm且通气量为1.58vvm下混合发酵有氧培养。将步骤3)中获得的乳酸菌种子液、毛霉菌种子液和酵母菌种子液以15％的接种量接种于发酵罐中，并在30℃、搅拌速率为120rpm且通气量为1.0vvm下混合发酵有氧培养。

优选地，按照质量百分含量计，在混合发酵时的发酵培养基由2.5％糖蜜、0.12％玉米粉、0.33％硫酸铵、0.07％磷酸二氢钾、0.05％硫酸镁、0.05％氯化钙及余量的水组成。

根据本发明的另一方面，还提供了上述任一种的微生物除臭复合菌剂在畜禽养殖场和垃圾填埋场中的应用。在本发明的一个优选实施例中，该应用的方法为将微生物除臭复合菌剂用水稀释100倍，按照0.1kg/m²对待除臭区域进行喷洒。

本发明实施例的微生物除臭复合菌剂中所采用的菌株J2(乳酸菌)、J3(毛霉菌)、J6(酵母菌)、LS-1(巨大芽孢杆菌)、LS-2(枯草芽孢杆菌)为市售产品，可以购买于北京沃土天地生物科技有限公司。

下面将结合具体实施例进一步说明本发明的有益效果。

实验例1

1)固体斜面培养：分别将LS-1和LS-2接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基中，J3和J6接种于土豆固体培养基中，J2接种于MRS固体培养基中，于30℃恒温培养2天，使菌株活化。其中，乳酸菌4.8×10⁸cfu/mL；毛霉菌2×10⁶cfu/mL；酵母菌3.9×10⁷cfu/mL；巨大芽胞杆菌3×10⁶cfu/mL；枯草芽胞杆菌7×10⁶cfu/mL；总菌数为5.31×10⁸cfu/mL。牛肉膏蛋白胨固体培养基配方为：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000mL，固体加琼脂20g，pH7.0-7.2。土豆培养基配方为：土豆200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL，固体加琼脂20g，pH7.0-7.2。MRS培养基配方为蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，吐温801.0mL，磷酸氢二钾2g，醋酸钠5g，柠檬酸二铵2g，七水硫酸镁0.58g，四水硫酸锰0.25g，蒸馏水1000mL，pH6.2-6.6。

2)一级种子培养：将步骤1)活化的菌株，分别接种于上述液体培养基中，于30℃，180rpm下培养2天，当液体培养菌密度OD600值达到0.7时停止培养，即得一级种子。

3)二级种子培养：将步骤2)所得一级种子以5％的接种量分别接种于5L的三角瓶中，30℃条件下，培养2天，即得二级种子液；

4)将步骤3)中获得的LS-1，LS-2种子液以15％的接种量接种于300L发酵罐中。按照质量百分含量计，发酵培养基为糖蜜2.5％、玉米粉0.12％、硫酸铵0.33％，磷酸二氢钾0.07％，硫酸镁0.05％，氯化钙0.05％，余量为水。于30℃，120rpm，通气量1.5vvm下进行高密度发酵培养，获得菌剂A。

将步骤3)中获得的J2，J3，J6种子液以15％的接种量接种于300L发酵罐中，于30℃，120rpm，通气量1.0vvm下进行高密度发酵培养，获得菌剂B。

5)将步骤4)及步骤5)中获得的菌剂A和菌剂B以体积比1:1混合，得到微生物除臭复合菌剂。

实施例2-3

其制备方法与实施例1相同，不同之处在于各菌株的配比、发酵温度、搅拌速率、发酵时间等，具体见表1。

对比例1-2

其制备方法与实施例1相同，不同之处在于各菌株的配比，具体见表1。

表1

分别采用实施例1-3所制备的微生物除臭复合菌剂对新鲜鸡粪的除臭效果进行测定，具体操作如下：

将50g拌有25％锯末的风干鸡粪放入1000mL烧杯中，调节含水量到50％左右，121℃下消毒30min，均按10％接种量分别接入实施例和对比例中培养好的除臭复合菌剂，并充分混匀，分别将盛有20mL稀硫酸溶液的50mL小烧杯和装有20mL乙酸锌-乙酸钠溶液的50mL小烧杯置于杯中。用双层塑料薄膜密封后，置于30℃恒温室中发酵培养。每个处理重复3次，培养过程中每隔3天，取出小烧杯检测氨气和硫化氢的释放量。

结果表明，本发明的微生物除臭复合菌剂对NH₃的去除率达到63.4～73.7％，对H₂S的去除率达到68.95％。

为了进一步说明本发明的微生物除臭复合菌剂的有益效果，下面分别采用实施例1-3和对比例1-2中所制备的微生物除臭复合菌剂对畜禽养殖场的除臭效果进行测定，具体操作如下：

将实施例1-3和对比例1-2中得到的微生物除臭复合菌剂分别兑水稀释100倍，分别按0.1Kg/m²对相同条件下的畜舍分别进行喷洒，本次试验选取的北京昌平区兴昌养殖场，选取的畜禽养殖场圈舍面积为1200m²，全程密闭不透风。喷洒频率为1次/天，上午9：00。

采用五点法(畜舍四个角落及中心采样)采样。采样工具有NH₃、H₂S吸收仪和大气采样器，记录采样时温度、大气压和湿度。样品送往北京是畜禽养殖环境监测中心测定，分别用硼酸吸收-盐酸滴定法和锌氨络盐吸收-比色法测定NH₃和H₂S含量。具体结果详见表2。

表2

从表2中的数据可以看出，当采用本发明的微生物除臭复合菌剂对畜禽养殖场进行喷洒除臭后，其臭气强度、氨气浓度、硫化氢浓度以及TVOC浓度均比空白对照组明显降低，其中臭气的强度降低高达76.3％，NH₃的去除率高达69.20％，H₂S的去除率达到68.10％，TVOC浓度降低率高达67.6％。具体分析，由于本发明的微生物除臭复合菌剂由多种微生物菌型经过发酵制成，由于菌群组成、代谢类型、呼吸类型及作用功能多样的特点以及各菌株之间的协同作用，使得微生物菌剂能够在粪污中良好生长，迅速稳定占据有利生态位，从而有效地抑制产生恶臭物质的腐败菌生长繁殖或对恶臭物质直接降解，实现了恶臭原位源头控制，有效地改善了畜禽养殖场的环境，利于养殖效益提高。

至此，本领域技术人员应认识到，虽然本文已详尽示出和描述了本发明的多个示例性实施例，但是，在不脱离本发明精神和范围的情况下，仍可根据本发明公开的内容直接确定或推导出符合本发明原理的许多其他变型或修改。因此，本发明的范围应被理解和认定为覆盖了所有这些其他变型或修改。

Claims (10)

1.一种微生物除臭复合菌剂，其特征在于，包括：

2.根据权利要求2所述的微生物除臭复合菌剂，其特征在于，包括：

3.一种微生物除臭复合菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)固体斜面培养：分别将巨大芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基中，毛霉菌和酵母菌接种于土豆固体培养基中，乳酸菌接种于MRS固体培养基中，恒温培养以使菌株活化；

2)一级种子培养：将经所述步骤1)中活化后的菌株分别相应地接种于牛肉膏蛋白琼脂胨液体培养基、土豆液体培养基和MRS液体培养基中培养，即得一级种子；

3)二级种子培养：将所述步骤2)中制备的所述一级种子继续接种培养，即得二级种子液；

4)将所述步骤3)中获得的巨大芽胞杆菌种子液和枯草芽胞杆菌种子液混合发酵有氧培养，获得菌剂A；将所述步骤3)中获得的乳酸菌种子液、毛霉菌种子液和酵母菌种子液混合发酵有氧培养，获得菌剂B；

5)将所述步骤4)中获得的所述菌剂A和所述菌剂B混合，得到所述微生物除臭复合菌剂。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，

所述步骤1)中菌株活化的条件为：28～32℃下恒温培养4-6天；优选30℃下恒温培养1-2天；

可选地，所述牛肉膏蛋白胨固体培养基的配方为：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g、蒸馏水1000mL和固体加琼脂20g，pH值为7.0-7.2；所述土豆固体培养基的配方为：土豆200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL和固体加琼脂20g，pH值为7.0-7.2；所述MRS固体培养基的配方为蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、吐温801.0mL、磷酸氢二钾2g、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、七水硫酸镁0.58g、四水硫酸锰0.25g和蒸馏水1000mL，pH值为6.2-6.6。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，

所述步骤2)中的培养条件为：25～35℃下，搅拌速度为160～200rpm下培养2～3天，当液体培养菌密度OD600值达到0.6～0.8时停止培养；

优选地，所述步骤2)中的培养条件为：30℃和搅拌速率为180rpm下培养2天，当液体培养菌密度OD600值达到0.7时停止培养。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，

所述步骤3)中所述一级种子均以3～7％的接种量分别接种，于25～35℃且搅拌速率为150～200rpm下培养2～3天；

优选以5％的接种量分别接种，于30℃且搅拌速率为180rpm下培养2天。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，

所述步骤4)中制备所述菌剂A的步骤包括：将步骤3)中制备的巨大芽胞杆菌种子液和枯草芽胞杆菌种子液均以10～20％的接种量接种于发酵罐中，并在25～35℃、搅拌速率为110～130rpm且通气量为1.0～1.5vvm下混合发酵有氧培养；

优选地，将步骤3)中制备的巨大芽胞杆菌种子液和枯草芽胞杆菌种子液均以15％的接种量接种，并在30℃、搅拌速率为120rpm且通气量为1.5vvm下混合发酵有氧培养；

制备所述菌剂B的步骤包括：将所述步骤3)中获得的乳酸菌种子液、毛霉菌种子液和酵母菌种子液以10～20％的接种量接种于发酵罐中混合发酵有氧培养，并于25～35℃、搅拌速率为110～130rpm且通气量为0.8～1.4vvm下混合发酵有氧培养；

优选地，将所述步骤3)中获得的乳酸菌种子液、毛霉菌种子液和酵母菌种子液以15％的接种量接种于发酵罐中，并在30℃、搅拌速率为120rpm且通气量为1.0vvm下混合发酵有氧培养。

8.根据权利要求3-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，按照质量百分含量计，所述混合发酵时的发酵培养基由2.5％糖蜜、0.12％玉米粉、0.33％硫酸铵、0.07％磷酸二氢钾、0.05％硫酸镁、0.05％氯化钙及余量的水组成。

9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤4)中，将所述菌剂A和所述菌剂B按照体积比1:2～2:1混合；优选地，将所述菌剂A和所述菌剂B按照体积比1:1混合。

10.一种权利要求1-3中任一项所述的微生物除臭复合菌剂在畜禽养殖场或垃圾填埋场中的应用；优选地，应用的方法为将所述微生物除臭复合菌剂用水稀释100倍，按照0.1kg/m²对待除臭区域进行喷洒。