CN105254631A

CN105254631A - 一种具有抗肿瘤性能的苦参碱衍生物

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Publication number: CN105254631A
Application number: CN201410325726.2A
Authority: CN
Inventors: 陶遵威; 张娜; 周运琴; 王文彤; 崔晓燕; 张国庆
Original assignee: TIANJIN INST OF MEDICAL AND MEDICINAL SCIENCES
Current assignee: TIANJIN INST OF MEDICAL AND MEDICINAL SCIENCES
Priority date: 2014-07-10
Filing date: 2014-07-10
Publication date: 2016-01-20
Anticipated expiration: 2034-07-10
Also published as: CN105254631B

Abstract

一种苦参碱衍生物，本发明提供了一种高活性，低毒性的，具有良好抗肿瘤性能的苦参碱衍生物，及其在制备抗肿瘤药物中的用途。

Description

一种具有抗肿瘤性能的苦参碱衍生物

【技术领域】

本发明涉及一种衍生物，具体讲涉及一种具有抗肿瘤性能的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐。

【背景技术】

苦参碱广泛存在于豆科植物苦参、苦豆子及广豆根中，1958年首次被分离和确认，是中药苦参的主要活性成分之一，研究表明，苦参碱具有解热、降温、镇痛、镇静、保护心肌缺血、减轻心肌损伤、抗心律失常、防止肝纤维化及抗乙型肝炎病毒等多种药理作用。目前，苦参碱用于临床的主要制剂有苦参碱注射液、苦参碱栓、苦参碱滴眼液、苦参碱肠溶片、苦参碱胶丸等。近年来的研究显示，苦参碱具有广谱抗肿瘤作用，且对正常细胞不产生破坏作用，甚至能升高白细胞数，提高机体免疫功能。虽然苦参碱具有广谱的抗肿瘤作用，但是其抗肿瘤活性不高，且自身没有可以修饰的基团，在临床上的应用受到限制。若选用具有协同作用的抗癌基团或药物对苦参碱进行修饰，有望获得肿瘤活性强的衍生物。

美法仑为左旋体苯丙氨酸氮芥，为多发性骨髓瘤的首选药，对多种良性、恶性肿瘤均具有较好疗效，其化学名称为4-(双2-氯乙基)氨基-L-苯丙氨酸。苯达莫司汀兼具有烷化剂和嘌呤类似物(抗代谢药)的双重作用，临床上可用于治疗霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤和乳腺癌等多种恶性肿瘤，其结构式为4-{5-[双-(2-氯乙基)氨基]-1-甲基-2-苯并咪唑基}-丁酸。环磷酰胺是临床上常规使用的强效抗癌药物，在体外无抗肿瘤活性，通过在肝脏代谢并在癌细胞内分解之后所产生的活性代谢产物为磷酰氮芥二氯，磷酰氮芥二氯的结构式为二(2-氯乙基)氨基磷酰二氯。氮芥类药物具有抗瘤谱广，对肿瘤细胞杀伤力强等优点，作用靶点是DNA，但亦存在治疗效率低、选择性差、毒副作用大等缺点，使其不能广泛地应用于临床。甘草次酸具有较好的肝靶向潜能，其具有良好的保肝解毒及一定的抗癌作用，并能促进癌细胞凋亡。肝细胞膜上存在大量甘草次酸的特异性结合位点，因此甘草次酸具有较强的肝分布特征和肝细胞靶向性。以上几种药物本身都具有的较强的抗肿瘤活性，而且含有羧基或磷酰基更方便联结进行修饰。

【发明内容】

本发明的目的在于提供一种高活性的，低毒性，具有良好抗肿瘤性能的苦参碱衍生物及其药学上可接受的盐类。

一种苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其结构是以下通式Ⅰ：

Rx为Rx₁、Rx₂、Rx₃、Rx₄、Rx₅、Rx₆或Rx₇：

第二种苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：其结构用通式Ⅱ所示：

Rx为Rx₁、Rx₂、Rx₃、Rx₄、Rx₅、Rx₆或Rx₇：

制备上述苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐所采用的原料包括槐果碱。

第三种苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：其结构用通式Ⅲ表示：

Rx为Rx₁、Rx₂、Rx₃、Rx₄、Rx₅、Rx₆或Rx₇：

优选的，制备所述通式Ⅰ，反应生成的中间体1为13-(2-羟基)乙氧基苦参碱，由槐果碱与钠和乙二醇反应生成，所述中间体1的结构式为：

再一优选的，通式Ⅰ的制备方法为，中间体1与美法仑、苯达莫司汀、二(2-氯乙基)氨基磷酰二氯、3-羰基-18α-甘草次酸、3-羰基-18β-甘草次酸、苯甲酸氮芥或苯丁酸氮芥反应生成。

该反应适宜的溶剂包括水、甲苯、吡啶、氯仿、二氯甲烷。

洗脱剂包括石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇中的一种或几种的混合液。

优选的，制备所述通式Ⅱ的苦参碱衍生物，反应生成的中间体为13-(2-氨基)乙氧基苦参碱，所述中间体的结构式为：

再一优选的，通式Ⅱ的制备方法为，中间体2与美法仑、苯达莫司汀、二(2-氯乙基)氨基磷酰二氯、3-羰基-18α-甘草次酸、3-羰基-18β-甘草次酸、苯甲酸氮芥或苯丁酸氮芥反应生成。

该反应适宜的溶剂包括水、四氢呋喃(THF)、甲苯、吡啶、氯仿、二氯甲烷、三氯甲烷。

洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇中的一种或几种的混合液。

优选的，制备所述通式Ⅲ，反应生成的中间体为苦参酸乙酯，所述中间体的结构式为：

再一优选的，所述的中间体苦参酸乙酯是由苦参碱先与NaOH的醇溶液生成苦参酸，再与乙醇反应制得。

另一优选方案中通式Ⅲ的制备方法为，中间体3与美法仑、苯达莫司汀、二(2-氯乙基)氨基磷酰二氯、3-羰基-18α-甘草次酸、3-羰基-18β-甘草次酸、苯甲酸氮芥或苯丁酸氮芥反应生成。

洗脱剂为石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇或几种的混合液。

所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐具有在制备抗肿瘤药物中的用途。

优选的，所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐具有在制备抗肿瘤药物中的用途，其中所述肿瘤为肝癌、乳腺癌和骨肉瘤。

苦参碱衍生物治疗上可接受的盐是指盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、氢溴酸盐、草酸盐、柠檬酸盐或甲磺酸盐等。

以下为用本发明方法合成的化合物一览表：

本发明提供了一种苦参碱衍生物及其药学上可接受的盐，较苦参碱相比，抗肿瘤活性有了明显的提高，扩大了抗肿瘤药物的种类，给癌症患者多了一种治疗的选择。

【具体实施方式】

主要仪器与试剂

RY-1型显微熔点仪(温度计未效正)；BRUKERAC-P400核磁仪(TMS为¹HNMR的内标)；VGZAB-HS型质谱仪；德国贺利氏公司Vanio-EL型元素分析仪。

槐果碱购于盐池县都顺生物化工有限公司，美法仑购于苏州市立德化学有限公司，苯达莫司汀购于海格生物科技科技(上海)有限公司；二氯甲烷与三氯甲烷使用前均用CaH₂重蒸过，并加入4A°分子筛保存；吡啶使用前用KOH重蒸过，并加入4A°分子筛保存；其他试剂均为市售分析纯，使用前未经处理。实施例中所述1％的NaOH是指1gNaOH溶于100mL去离子水。

实施例1

制备通式Ⅰ所示的苦参碱衍生物的方法：

13-(2-羟基)乙氧基苦参碱(化合物1)的制备

向干燥的100mL的三口烧瓶中加入30mL干燥乙二醇，N₂气氛保护下投入0.10g钠丝，升温至50℃，搅拌反应。待钠丝完全消失，停止加热，冷却至室温。取2.00g槐果碱溶于10mL乙二醇，缓慢滴入上述反应瓶中，逐渐升温至60℃，TLC跟踪反应进程，23h后，向反应液中加入10mL水终止反应，用15mL氯仿萃取三次，合并萃取液，无水Na₂SO₄干燥过夜，过滤，减压浓缩得黄色油状物粗品。用乙酸乙酯和乙醇体积比为80：1的混合液进行洗脱，柱色谱分离得淡黄色固体1.72g，产率68.8％，熔点m.p.为57℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)，δ_H：4.32(1H，dd，J＝12.9，4.4Hz，17-He)，3.94(1H，td，J＝10.0，5.6Hz，11-H)，3.80(1H，dd，J＝5.5，2.0Hz，17-Ha)，3.68-3.65(2H，m，19-H)，3.57-3.48(2H，m，18-H)，3.05(1H，m，13-H)，2.79(2H，dd，J＝16.4，13.4Hz，2、10-He)，2.59-2.41(3H，m，2、10-Ha，14-He)，2.26-2.19(1H，m，6-H)，2.07(1H，s，OH)，1.98-1.37(14H，m，14-Ha，CH，CH₂)。元素分析，C₁₇H₂₈N₂O₃，实测值(计算值)，％：C66.15(66.20)；H9.03(9.15)；O15.61(15.56)；N9.21(9.08)。MS(ESI)m/z：309.33(M+H)⁺。

1-113-{2-[4-(双2-氯乙基)氨基-L-苯丙氨酸酯基]乙氧基}苦参碱(KSJ-1)的制备

向50mL的单口圆底烧瓶中加入30mL甲苯，取0.50mL浓H₂SO₄缓慢滴加到甲苯中。充分混匀后，加入0.40g化合物1，搅拌溶解。搅拌下分多次加入0.10g美法仑，继续搅拌至澄清。于烧瓶顶部安置分水器及冷凝管，升温至125～130℃回流反应5.5h，分水器除去反应产生的水。后处理时，减压蒸除反应液中的甲苯，得棕色油状物，加入10mL蒸馏水，用1％的NaOH溶液调节至pH＝7～8，用15mL氯仿萃取三次，合并萃取液，无水Na₂SO₄干燥过夜，过滤，减压浓缩得黄色油状物粗品。用石油醚和乙酸乙酯体积比为1：1的混合液进行洗脱，色谱柱分离得目标化合物为黄色油状物0.12g，产率61％。¹HNMR(CDCl₃，400Hz)，δ_H：7.10(2H，d，J＝7.9Hz，ArH)，6.63(2H，d，J＝7.8Hz，ArH)，5.64(2H，d，J＝34.5Hz，NH₂)，4.34(1H，dd，J＝12.8，3.6Hz，21-H)，4.29-4.07(2H，m,19-H)，3.99(1H，dd，J＝14.8，9.8Hz，17-He)，3.84(1H，m，22-H)，3.74-3.61(10H，m，2×CH₂Cl，2×NCH₂，18-H)，3.20-2.91(2H，m，11-H，17-Ha)，2.79(3H，m，6、13、22-H)，2.53(2H，dd，J＝54.4，17.0Hz，2、10-He)，2.30-2.16(2H，m，2、10-Ha)，2.10(1H，m，14-He)，1.75-1.21(13H，m，14-Ha，CH，CH₂)。元素分析，C₃₀H₄₄Cl₂N₄O₄，实测值(计算值)，％：C61.03(60.50)；H7.47(7.45)；O10.77(10.75)；N9.27(9.41)；Cl11.45(11.90)。MS(ESI)m/z：595.3(M+H)⁺。

1-213-[2-(4-{5-[双-(2-氯乙基)氨基]-1-甲基-2-苯并咪唑基}-丁酸酯基)乙氧基]苦参碱(KSJ-2)的制备

向50mL的单口圆底烧瓶中加入30mL甲苯，取0.50mL浓H₂SO₄缓慢滴加到甲苯中。充分混匀后，加入0.40g化合物1，搅拌溶解。搅拌下分多次加入0.10g苯达莫司汀，继续搅拌至澄清。于烧瓶顶部安置分水器及冷凝管，升温至125～130℃回流反应5.5h，分水器除去反应产生的水。后处理时，减压蒸除反应液中的甲苯，得棕色油状物，加入10mL蒸馏水，用1％的NaOH溶液调节至pH＝7～8，用15mL氯仿萃取三次，合并萃取液，无水Na₂SO₄干燥过夜，过滤，减压浓缩得黄色油状物粗品。用石油醚和乙酸乙酯体积比为8：1混合液进行洗脱，色谱柱分离得目标化合物为淡黄色油状物，产率53％。¹HNMR(CDCl₃，400Hz)，δ_H：7.23-7.17(1H，m，ArH)，7.13-7.04(1H，m，ArH)，6.80(1H，d，J＝10.7Hz，ArH)，4.38(1H，dd，J＝12.8，4.1Hz，17-He)，4.02-3.65(13H，m，2×CH₂Cl，N-CH₃，2×NCH₂，19-H)，3.10(1H，t，J＝12.7Hz，17-Ha)，2.87(4H，dt，J＝25.5，9.9Hz，18-H，23-H)，2.61-2.47(4H，m，11-H，2、10-He，13-H)，2.19(4H，dt，J＝24.6，7.7Hz，21-H，2、10-Ha)，2.04(3H，m，14-He，22-H)，1.78-1.39(14H，m，14-Ha，CH，CH₂)。元素分析，C₃₃H₄₇Cl₂N₅O₄，实测值(计算值)，％：C61.46(61.10)；H7.34(7.30)；O9.68(9.87)；N10.87(10.80)；Cl10.65(10.93)。MS(ESI)m/z：648.5(M+H)⁺。

1-313-{2-[P-[二(2-氯乙基)氨基]-P-羟基-磷酰酯基]-乙氧基}苦参碱(KSJ-3)的制备

1-3-1二(2-氯乙基)胺盐酸盐的制备

取干燥的250mL三口圆底烧瓶，装置上机械搅拌和顶部带有干燥管及毒气处理装置的冷凝管，加入22.00g经过钠丝处理过的二乙醇胺与30mL的三氯甲烷，冰浴下搅拌混合均匀。用恒压滴液漏斗向其中缓慢滴入20mL二氯亚砜与20mL三氯甲烷的混合溶液，立即有白色固体产生，约1h滴加完毕，升至40℃恒温，并继续搅拌3h。减压蒸去溶剂以及过量的氯化亚砜，得黄色固体，在乙醇和丙酮的混合液中重结晶，得白色固体19.24g，产率51.72％。熔点m.p.216℃(文献值216℃)。

1-3-2二(2-氯乙基)氨基磷酰二氯的制备

取干燥的50mL的三口圆底烧瓶，其顶部装有干燥管及毒气处理装置的冷凝管，加入4g二(2-氯乙基)胺盐酸盐和25mLPOCl₃，升温至105℃，搅拌回流18h。减压蒸去过量的POCl₃，得棕黑色油状粘稠物，用丙酮和石油醚混合溶剂热提取，活性炭脱色，用乙醚重结晶，得无色透明片状结晶3.13g，产率53.11％。熔点m.p.53～54℃(文献值^[1 ^1]55～56℃)。

1-3-313-{2-[P-[二(2-氯乙基)氨基]-P-羟基-磷酰酯基]-乙氧基}苦参碱的制备

向干燥的50mL的三口圆底烧瓶中，加入0.62g化合物1和3mL无水吡啶，搅拌混合均匀。冰浴条件下，用恒压滴液漏斗缓慢滴加0.78g二(2-氯乙基)氨基磷酰二氯的30mL氯仿溶液，约1h滴加完毕，升温至50℃，并继续搅拌，用TLC检测反应进程。反应结束后，抽滤，滤液减压浓缩得黄色油状物，用二氯甲烷和甲醇体积比为30：1的混合液进行洗脱，色谱柱分离的目标化合物为淡黄色油状物0.39g，产率38％。¹HNMR(MeOD，400Hz)，δ_H：4.69-4.32(2H，m，19-CH₂)，4.12-3.91(2H，m，18-CH₂)，3.89-3.58(7H，m，2×CH₂Cl，17-He，11-H)，3.40(10H，m，2×NCH₂，17-Ha，6-H，14-H，2、10-He)，3.03(2H，dd，J＝33.4，13.1Hz，2、10-Ha)，2.53(2H，dd，J＝43.3，17.2Hz，12-H)，2.19-1.71(10H，m，CH，CH₂)。元素分析，C₂₁H₃₆Cl₂N₃O₅P，实测值(计算值)，％：C49.24(49.22)；H7.10(7.08)；O15.62(15.61)；N8.11(8.20)；Cl13.95(13.84)；P5.97(6.04)。MS(ESI)m/z：1023.0(2M-H)^-。

1-413-[2-(3-羰基-18α-甘草次酸酯基)乙氧基]苦参碱(KSJ-4)的制备

100mL的三口烧瓶中，加入0.6g的18α-甘草次酸，取50ml的THF溶解，冰浴条件下，于0.5h时间内，缓慢滴加5mL的Jones(琼斯)试剂，溶液由无色透明变为棕绿色，继续搅拌1.5h，TLC跟踪反应进程，原料反应完全，进行后处理。向反应体系中加入60ml的水，有大量的白色沉淀生成，抽滤，滤饼用大量的水多次洗涤至水洗液pH值到6-7左右，经减压真空干燥得白色固体，产率约为95％。

向100mL的三口烧瓶中，加入0.48g的3-羰基-18α-甘草次酸，取50ml的CH₂Cl₂溶解，冰浴条件下缓慢滴加1mL的草酰氯，滴加完毕后升至室温搅拌0.5h，继续将温度升至50℃回流反应2h，反应完毕后浓缩得油状物，直接进行下一步反应。

于100mL的三口烧瓶中将上述油状物溶于30mL的CH₂Cl₂中，另取1g的化合物1和3mL的吡啶溶于20mL的CH₂Cl₂中，然后于冰浴条件下缓慢滴加到上述油状物的CH₂Cl₂液中，滴加时间约为1h，滴加完毕后升至室温继续搅拌16h，TLC跟踪反应进程，原料反应完全，减压浓缩得黄色油状物粗品。用石油醚-乙酸乙酯(4：3)混合液进行洗脱，柱色谱分离得淡黄色固体0.2g，产率30.8％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.69(s,1H，32-H),4.35(d,J＝11.0Hz,1H,17-He),4.22(t,J＝4.4Hz,2H,19-H),3.99(m,1H,17-Ha),3.85(m,1H,11-H),3.67(t,J＝9.6Hz,2H,18-H),3.08(m,1H,13-H),2.99–2.91(m,1H,14-He),2.82(m,2H,2、10-He),2.70–2.42(m,4H,6-H,22-He,38-H,29-H),2.40–2.33(m,1H,22-Ha),2.30–2.13(m,4H,2、10-Ha,14-Ha,21-He),2.12–1.80(m,11H,5-H,7-H,8、9-He,12-He,21-Ha,25-H,39-H,41-H),1.65–1.36(m,13H，3-H,4-H,8、9-Ha,12-Ha,26、27、42-He,49-H),1.38-1.19(m,13H,26、27、42-Ha,35-H,36-H,45-H,47-H),1.16(s,6H,43-H,44-H),1.09(d,J＝15.0Hz,6H,46-H,48-H).元素分析，C₄₇H₇₀N₂O₆，实测值(计算值)，％：C74.35(74.37)；H9.31(9.30)；O12.67(12.65)；N3.68(3.69)。MS(ESI)m/z：759.9(M+H)⁺。

1-513-[2-(3-羰基-18β-甘草次酸酯基)乙氧基]苦参碱(KSJ-5)的制备

100mL的三口烧瓶中，加入0.6g的18β-甘草次酸，取50ml的THF溶解，冰浴条件下，0.5h内缓慢滴加5mL的Jones(琼斯)试剂，此时溶液由无色透明变为棕绿色，继续搅拌1.5h，TLC跟踪反应进程，原料反应完全，进行后处理。向反应体系中加入60ml的水，有大量的白色沉淀生成，抽滤，滤饼用大量的水多次洗涤至水洗液PH值到6-7左右，经减压真空干燥得白色固体，产率约为95％。

于100mL的三口烧瓶中，加入0.48g的3-羰基-18β-甘草次酸，取50ml的CH₂Cl₂溶解，冰浴条件下缓慢滴加1mL的草酰氯，滴加完毕后升至室温搅拌0.5h，继续将温度升至50℃回流反应2h，反应完毕后浓缩得油状物，直接进行下一步反应。

于100mL的三口烧瓶中将上述油状物溶于30mL的CH₂Cl₂中，另取1g的化合物1和3mL的吡啶溶于20mL的CH₂Cl₂中，然后于冰浴条件下缓慢滴加到上述油状物的CH₂Cl₂液中，滴加时间约为1h，滴加完毕后升至室温继续搅拌16h，TLC跟踪反应进程，原料反应完全，减压浓缩得黄色油状物粗品。用石油醚和乙酸乙酯体积比为4：3的混合液进行洗脱，柱色谱分离得淡黄色固体0.2g，产率30.8％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.69(s,1H，32-H),4.35(d,J＝11.0Hz,1H,17-He),4.22(t,J＝4.4Hz,2H,19-H),3.99(m,1H,17-Ha),3.85(m,1H,11-H),3.66(t,J＝9.6Hz,2H,18-H),3.06(m,1H,13-H),2.98–2.92(m,1H,14-He),2.82(m,2H,2、10-He),2.69–2.40(m,4H,6-H,22-He,38-H,29-H),2.39–2.32(m,1H,22-Ha),2.31–2.13(m,4H,2、10-Ha,14-Ha,21-He),2.13–1.76(m,11H,2、10-Ha,14-Ha,21-He,5-H,7-H,8、9-He,12-He,21-Ha,25-H,39-H,41-H),1.63–1.38(m,13H，3-H,4-H,8、9-Ha,12-Ha,26、27、42-He,49-H),1.38-1.20(m,13H,26、27、42-Ha,35-H,36-H,45-H,47-H),1.16(s,6H,43-H,44-H),1.07(d,J＝15.0Hz,6H,46-H,48-H).元素分析，C₄₇H₇₀N₂O₆，实测值(计算值)，％：C74.35(74.37)；H9.31(9.30)；O12.67(12.65)；N3.68(3.69)。MS(ESI)m/z：759.9(M+H)⁺。

1-613-(2-{4-[4-(双2-氯乙基)氨基-苯基]-丁酸酯基}-乙氧基)苦参碱(KSJ-6)的制备

向50mL的单口圆底烧瓶中加入30mL甲苯，取0.50mL浓H₂SO₄缓慢滴加到甲苯中。充分混匀后，加入0.40g化合物1，搅拌溶解。搅拌下分多次加入0.10g苯丁酸氮芥，继续搅拌至澄清。于烧瓶顶部安置分水器及冷凝管，升温至125～130℃回流反应5.5h，分水器除去反应产生的水。后处理时，减压蒸除反应液中的甲苯，得棕色油状物，加入10mL蒸馏水，用1％的NaOH溶液调节pH＝7～8，用15mL氯仿萃取三次，合并萃取液，无水Na₂SO₄干燥过夜，过滤，减压浓缩得黄色油状物粗品。用石油醚和乙酸乙酯体积比为1：1的混合液进行洗脱，色谱柱分离得目标化合物为黄色油状物0.13g，产率66％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.07(2H,d,J＝7.0Hz,ArH),6.62(2H,d,J＝7.0Hz,ArH),4.35(1H,dd,J＝4.3Hz,17-He),4.18(2H,m,19-H),3.99(1H,m,13-H),3.85(1H,m,11-H),3.80(4H,t,J＝7.0Hz,2×CH₂Cl),3.75(2H,t,J＝5.0Hz,18-H),3.66(4H,t,J＝7.0Hz,2×NCH₂),3.09(1H,t,J＝10.5Hz,17-Ha),2.81(2H,t,J＝13.9Hz,2、10-He),1.26-2.62(23H,m,2、10-Ha,CH₂,CH).元素分析，C₃₁H₄₅Cl₂N₃O₄，实测值(计算值)，％：C62.57(62.62)；H7.79(7.63)；Cl11.77(11.92)；N7.09(7.07)；O10.78(10.76)。；MS(ESI)m/z：616.33(M+Na)⁺

1-713-{2-[4-(双2-氯乙基)氨基-苯甲酸酯基]-乙氧基}苦参碱(KSJ-7)的制备

向50mL的单口圆底烧瓶中加入30mL甲苯，取0.50mL浓H₂SO₄缓慢滴加到甲苯中。充分混匀后，加入0.40g化合物1，搅拌溶解。搅拌下分多次加入0.10g苯甲酸氮芥，继续拌至澄清。于烧瓶顶部安置分水器及冷凝管，升温至125～130℃回流反应5.5h，分水器除去反应产生的水。后处理时，减压蒸除反应液中的甲苯，得棕色油状物，加入10mL蒸馏水，用1％的NaOH溶液调节pH＝7～8，用15mL氯仿萃取三次，合并萃取液，无水Na₂SO₄干燥过夜，过滤，减压浓缩得黄色油状物粗品。用石油醚和乙酸乙酯体积比为1：1的混合液进行洗脱，色谱柱分离得目标化合物为黄色油状物0.11g，产率56％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.94(2H,d,J＝8.9Hz,ArH),6.66(2H,d,J＝8.9Hz,ArH),4.40(2H,m,19-H),4.36(1H,dd,J＝4.3Hz,17-He),3.99(1H,s,13-H),3.85(1H,m,11-H),3.81(4H,t,J＝7.0Hz,2×CH₂Cl),3.75(2H,t,J＝4.8Hz,18-H),3.66(4H,t,J＝7.0Hz,2×NCH₂),3.08(1H,t,J＝11.5Hz,17-Ha),2.79(2H,t,J＝13.9Hz,2、10-He),1.26-2.26(17H,m,2、10-Ha,CH2,CH).元素分析，C₂₈H₃₉Cl₂N₃O₄，实测值(计算值)，％：C60.80(60.87)；H7.18(7.11)；Cl12.88(12.83)；N7.55(7.60)；O11.59(11.58)。MS(ESI)m/z：574.33(M+Na)⁺。

实施例2

通式Ⅱ苦参碱衍生物的制备方法

13-(2-氨基)乙氧基苦参碱(化合物2)的制备

向干燥的100mL的三口烧瓶中加入30mL干燥乙醇胺，N₂气氛保护下投入0.10g钠丝，升温至50℃，搅拌反应。待钠丝完全消失，停止加热，冷却至室温。取2.00g槐果碱溶于10mL乙醇胺，缓慢滴入上述反应瓶中，逐渐升温至60℃，TLC跟踪反应进程，23h后，原料反应完全，进行后处理。向反应液中加入10mL水终止反应，用15mL氯仿萃取三次，合并萃取液，无水Na₂SO₄干燥过夜，过滤，减压浓缩得黄色油状物粗品。用乙酸乙酯和乙醇体积比为80：1的混合液进行洗脱，柱色谱分离得淡黄色固体1.72g，产率65.3％。m.p.78℃。

2-113-(2-{2-氨基-3-[4-(双2-氯乙基)氨基-苯基]-丙酰胺基}-乙氧基)苦参碱(KSJ-8)的制备

取1mmol的美法仑溶于15mL的THF中，室温搅拌下加入1.1mmolN′-二环己基碳二亚胺(DCC)，加完后搅拌15min，然后加入1mmol的化合物2(13-(2-氨基)乙氧基苦参碱)和0.5mmol二甲氨基吡啶(DMAP)，室温搅拌48h。过滤，15mL二氯甲烷洗涤滤饼3次，合并有机相，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯和乙醇的混合液为洗脱剂，柱色谱分离得纯品约0.06g，产率30％。¹HNMR(CDCl₃，400Hz)，δ_H：7.20(2H，d，J＝7.9Hz，ArH)，6.78(2H，d，J＝7.8Hz，ArH)，6.46(2H，d，J＝34.5Hz，NH₂)，4.39(1H，dd，J＝12.8，3.6Hz，21-H)，4.12(1H，dd，J＝14.8，9.8Hz，17-He)，3.99-3.89(2H，m,19-H)，3.80(1H，m，22-H)，3.76-3.61(8H，m，2×CH₂Cl，2×NCH₂)，3.56(1H，m，18-H)，3.20-2.91(2H，m，11-H，17-Ha)，2.79(3H，m，6、13、22-H)，2.62(2H，dd，J＝54.4，17.0Hz，2、10-He)，2.33-2.18(2H，m，2、10-Ha)，2.10(1H，m，14-He)，1.85-1.30(13H，m，14-Ha，CH，CH₂)。元素分析，C₃₀H₄₅Cl₂N₅O₃，实测值(计算值)，％：C60.56(60.60)；H7.64(7.63)；Cl11.94(11.92)；N11.77(11.78)；O8.09(8.07)。MS(ESI)m/z：594.33(M+H)⁺

2-213-[2-(4-{5-[双-(2-氯乙基)氨基]-1-甲基-2-苯并咪唑基}-丁酰胺基)乙氧基]苦参碱(KSJ-9)的制备

向反应容器中加入0.001mol的苯达莫斯汀，冰浴条件下滴加含有1mL氯化亚砜的二氯甲烷溶液，然后加热回流1h，至无气泡产生，将溶剂蒸干，得到棕色固体。然后将0.001mol的化合物2以及0.14g碳酸钾放入上述固体中，加入30mL的三氯甲烷，回流22h，反应完全。蒸干溶剂，加入蒸馏水将碳酸钾溶解，用10mL乙酸乙酯萃取3次，收集有机层，无水硫酸钠干燥过夜，过滤，过柱分离，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯体积比为2：1的混合溶液，所得产物为黄色油状物约0.10g，产率51％。¹HNMR(CDCl₃，400Hz)，δ_H：7.21-7.14(1H，m，ArH)，7.13-7.06(1H，m，ArH)，6.80(1H，d，J＝10.7Hz，ArH)，4.42(1H，dd，J＝12.8，4.1Hz，17-He)，3.91-3.72(13H，m，2×CH₂Cl，N-CH₃，2×NCH₂)，3.65(2H，m,19-H)，3.10(1H，t，J＝12.7Hz，17-Ha)，2.87(4H，dt，J＝25.5，9.9Hz，18-H，23-H)，2.58-2.42(4H，m，11-H，2、10-He，13-H)，2.30(4H，dt，J＝24.6，7.7Hz，21-H，2、10-Ha)，2.19(3H，m，14-He，22-H)，1.80-1.40(14H，m，14-Ha，CH，CH₂)。元素分析，C₃₃H₄₈Cl₂N₆O₃，实测值(计算值)，％：C61.16(61.20)；H7.49(7.47；Cl10.97(10.95)；N12.97(12.95)；O7.43(7.41)。MS(ESI)m/z：647.32(M+H)⁺

2-313-(2-{P-[二(2-氯乙基)氨基]-P-羟基-磷酰氨基}-乙氧基)苦参碱(KSJ-10)的制备

向干燥的50mL的三口圆底烧瓶中，加入0.62g化合物2和3mL无水吡啶，搅拌混合均匀。冰浴条件下，用恒压滴液漏斗缓慢滴加0.78g二(2-氯乙基)氨基磷酰二氯的30mL氯仿溶液，约1h滴加完毕，升温至50℃，并继续搅拌，用TLC检测反应进程。反应结束后，抽滤，滤液减压浓缩得黄色油状物，用二氯甲烷和甲醇体积比为30：1的混合液进行洗脱，色谱柱分离的目标化合物为淡黄色油状物0.41g，产率40％。¹HNMR(CDCl₃，400Hz)，δ_H：7.21-7.14(1H，m，ArH)，7.13-7.06(1H，m，ArH)，6.80(1H，d，J＝10.7Hz，ArH)，4.42(1H，dd，J＝12.8，4.1Hz，17-He)，3.91-3.72(13H，m，2×CH₂Cl，N-CH₃，2×NCH₂)，3.65(2H，m,19-H)，3.10(1H，t，J＝12.7Hz，17-Ha)，2.87(4H，dt，J＝25.5，9.9Hz，18-H，23-H)，2.58-2.42(4H，m，11-H，2、10-He，13-H)，2.30(4H，dt，J＝24.6，7.7Hz，21-H，2、10-Ha)，2.19(3H，m，14-He，22-H)，1.80-1.40(14H，m，14-Ha，CH，CH₂)。元素分析，C₃₃H₄₈Cl₂N₆O₃，实测值(计算值)，％：C49.28(49.32)；H7.31(7.29)；Cl13.87(13.86)；N10.98(10.96)；O12.53(12.51)；P6.06(6.07)。MS(ESI)m/z：511.19(M+H)⁺

2-413-[2-(3-羰基-18α-甘草次酰胺基)乙氧基]苦参碱(KSJ-11)的制备

于100mL的三口烧瓶中将上述油状物溶于30mL的CH₂Cl₂中，另取1g的化合物2和3mL的吡啶溶于20mL的CH₂Cl₂中，然后于冰浴条件下缓慢滴加到上述油状物的CH₂Cl₂液中，滴加时间约为1h，滴加完毕后升至室温继续搅拌16h，TLC跟踪反应进程，原料反应完全，减压浓缩得黄色油状物粗品。用石油醚和乙酸乙酯体积比为4：3的混合液进行洗脱，柱色谱分离得淡黄色固体0.2g，产率30.8％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.73(s,1H，32-H),4.35(d,J＝11.0Hz,1H,17-He),3.96(t,J＝4.4Hz,2H,19-H),3.90(m,1H,17-Ha),3.85(m,1H,11-H)，3.36(t,J＝9.6Hz,2H,18-H),3.10(m,1H,13-H),2.98–2.91(m,1H,14-He),2.82(m,2H,2、10-He),2.70–2.42(m,4H,6-H,22-He,38-H,29-H),2.40–2.35(m,1H,22-Ha),2.30–2.10(m,4H,2、10-Ha,14-Ha,21-He),2.12–1.76(m,11H,5-H,7-H,8、9-He,12-He,21-Ha,25-H,39-H,41-H),1.65–1.36(m,13H，3-H,4-H,8、9-Ha,12-Ha,26、27、42-He,49-H),1.30-1.20(m,J＝16.0,12.0Hz,13H,26、27、42-Ha,35-H,36-H,45-H,47-H),1.16(s,6H,43-H,44-H),1.10(d,J＝15.0Hz,6H,46-H,48-H).元素分析，C₃₃H₄₈Cl₂N₆O₃，元素分析，C₄₇H₇₁N₃O₅，实测值(计算值)，％：C74.42(74.46)；H9.46(9.44)；O10.58(10.55)；N5.538(5.54)。MS(ESI)m/z：m/z：758.9(M+H)⁺。

2-513-[2-(3-羰基-18β-甘草次酰胺基)乙氧基]苦参碱(KSJ-12)的制备

向100mL的三口烧瓶中，加入0.48g的3-羰基-18β-甘草次酸，取50ml的CH₂Cl₂溶解，冰浴条件下缓慢滴加1mL的草酰氯，滴加完毕后升至室温搅拌0.5h，继续将温度升至50℃回流反应2h，反应完毕后浓缩得油状物，直接进行下一步反应。

于100mL的三口烧瓶中将上述油状物溶于30mL的CH₂Cl₂中，另取1g的化合物2和3mL的吡啶溶于20mL的CH₂Cl₂中，然后于冰浴条件下缓慢滴加到上述油状物的CH₂Cl₂液中，滴加时间约为1h，滴加完毕后升至室温继续搅拌16h，TLC跟踪反应进程，原料反应完全，减压浓缩得黄色油状物粗品。用石油醚和乙酸乙酯体积比为4：3的混合液进行洗脱，柱色谱分离得淡黄色固体0.2g，产率30.8％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.69(s,1H，32-H),4.35(d,J＝11.0Hz,1H,17-He),4.01(t,J＝4.4Hz,2H,19-H),3.96(m,1H,17-Ha),3.78(m,1H,11-H),3.35(t,J＝9.6Hz,2H,18-H),3.08(m,1H,13-H),2.99–2.91(m,1H,14-He),2.82(m,2H,2、10-He),2.65–2.48(m,4H,6-H,22-He,38-H,29-H),2.40–2.32(m,1H,22-Ha),2.30–2.10(m,4H,2、10-Ha,14-Ha,21-He),2.12–1.75(m,11H,5-H,7-H,8、9-He,12-He,21-Ha,25-H,39-H,41-H),1.65–1.35(m,13H，3-H,4-H,8、9-Ha,12-Ha,26、27、42-He,49-H),1.32-1.26(m,J＝16.0,12.0Hz,13H,26、27、42-Ha,35-H,36-H,45-H,47-H),1.16(s,6H,43-H,44-H),1.09(d,J＝15.0Hz,6H,46-H,48-H).元素分析，C₃₃H₄₈Cl₂N₆O₃，元素分析，C₄₇H₇₁N₃O₅，实测值(计算值)，％：C74.42(74.46)；H9.46(9.44)；O10.58(10.55)；N5.538(5.54)。MS(ESI)m/z：m/z：758.9(M+H)⁺。

2-613-(2-{4-[4-(双2-氯乙基)氨基-苯基]-丁酰基}-乙氧基)苦参碱(KSJ-13)的制备

向反应容器中加入0.001mol的苯丁酸氮芥，冰浴条件下滴加含有1mL氯化亚砜的二氯甲烷溶液，然后加热回流1h，至无气泡产生，将溶剂蒸干，得到棕色固体。然后将0.001mol的化合物2以及0.14g碳酸钾放入上述固体中，加入30mL的三氯甲烷，回流22h，反应完全。蒸干溶剂，加入蒸馏水将碳酸钾溶解，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，收集有机层，无水硫酸钠干燥过夜，过柱分离，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯体积比为3：1的混合溶液，所得产物为黄色油状物，产率66％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)7.02(2H,d,J＝7.0Hz,ArH),6.62(2H,d,J＝7.0Hz,ArH),4.35(1H,dd,J＝4.3Hz,17-He),3.94(2H,m,19-H),3.92(1H,m,13-H),3.85(1H,m,11-H),3.82(4H,t,J＝7.0Hz,2×CH₂Cl),3.66(2H,t,J＝5.0Hz,18-H),3.61(4H,t,J＝7.0Hz,2×NCH₂),3.09(1H,t,J＝10.5Hz,17-Ha),2.86(2H,t,J＝13.9Hz,2、10-He),2.62-1.21(23H,m,2、10-Ha,CH₂,CH).元素分析，C₃₁H₄₆Cl₂N₄O₃，实测值(计算值)，％：C62.68(62.72)；H7.83(7.81)；Cl11.93(11.94)；N9.45(9.44)；O8.11(8.09)。MS(ESI)m/z：615.23(M+Na)⁺

2-713-{2-[4-(双2-氯乙基)氨基-苯甲酰基]-乙氧基}苦参碱(KSJ-14)的制备

向反应容器中加入0.001mol的苯甲酸氮芥，冰浴条件下滴加含有1mL氯化亚砜的二氯甲烷溶液，然后加热回流1h，至无气泡产生，将溶剂蒸干，得到棕色固体。然后将0.001mol的化合物2以及0.14g碳酸钾放入上述固体中，加入30mL的三氯甲烷，回流22h，反应完全。蒸干溶剂，加入蒸馏水将碳酸钾溶解，用10mL乙酸乙酯萃取3次，收集有机层，无水硫酸钠干燥过夜，过柱分离，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯体积比为4：1的混合溶液，所得产物为黄色油状物，产率56％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.56(2H,d,J＝8.9Hz,ArH),6.66(2H,d,J＝8.9Hz,ArH),4.36(1H,dd,J＝4.3Hz,17-He),4.15(2H,m,19-H),3.99(1H,s,13-H),3.85(1H,m,11-H),3.81(4H,t,J＝7.0Hz,2×CH₂Cl),3.64(2H,t,J＝4.8Hz,18-H),3.61(4H,t,J＝7.0Hz,2×NCH₂),3.08(1H,t,J＝11.5Hz,17-Ha),2.72(2H,t,J＝13.9Hz,2、10-He),2.28-1.26(17H,m,2、10-Ha,CH₂,CH).元素分析，C₂₈H₄₀Cl₂N₄O₃，实测值(计算值)，％：C60.94(60.97)；H7.32(7.31)；Cl12.85(12.86)；N10.17(10.16)；O8.72(8.70)。MS(ESI)m/z：573.13(M+Na)⁺。

实施例3

通式Ⅲ的苦参碱衍生物的制备方法

苦参酸的制备

向100mL的三口烧瓶中加入4.96g(0.02mol)的苦参碱，50mL的无水乙醇，7.5g(0.1875mol)NaOH固体，于105℃下反应，TLC检测反应进程，6h后，原料反应完全，进行后处理。待反应液冷却后，置于冰浴中，用稀硫酸中和反应液至中性，抽滤除去硫酸钠，收集液体，浓缩至干，得到白色固体4.30g，即为苦参酸，产率80.83％，m.p.197～198℃(文献值^[6]：197.7～198.5℃)。

苦参酸乙酯(化合物3)的制备

于100mL单口烧瓶中加入1.33g(0.005mol)苦参酸，40mL无水乙醇，在0℃下向其中滴加3.0mL的二氯亚砜，搅拌0.5h，在65℃下回流4h。反应液冷却至室温，将溶剂蒸干，向其中加入三氯甲烷约40mL，并用碳酸钾调节PH至碱性，过滤，收集有机层，蒸干溶剂，加入丙酮，抽滤，收集白色固体1.03g，产率70％，熔点m.p.209～210℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)，δ_H:4.15(2H，m，J＝6Hz，OCH₂)，4.36(1H，dd，J＝17Hz，17-He)，3.85(1H，m，J＝5Hz，11-H)，3.10(1H，t，J＝10.8Hz，17-Ha)，2.85(2H，t，J＝17.2Hz，2、10-He)，3.0(1H，s，NH),2.43(2H，m，J＝6Hz，COCH₂)，2.40-1.28(17H，m，2、10-Ha，CH₂，CH)，1.25(3H，t，J＝7.2Hz，CH₃)。元素分析，C₁₇H₃₀N₂O₂，实测值(计算值)，％：C69.23(69.35)；H10.26(10.27)；N9.53(9.47)。MS(ESI)m/z:295.3(M+H)⁺。

3-116-{2-氨基-3-[4-(双2-氯乙基)氨基-苯基]-丙酰基}苦参酸乙酯(KSJ-15)的制备

取1mmol的美法仑溶于15mL的THF中，室温搅拌下加入1.1mmolN′-二环己基碳二亚胺(DCC)，加完后搅拌15min，然后加入1mmol的化合物3(苦参酸乙酯)和0.5mmol二甲氨基吡啶(DMAP)，室温搅拌48h。过滤，二氯甲烷洗涤滤饼(15mL×3)，合并有机相，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯和乙醇的混合液为洗脱剂，柱色谱分离得纯品约0.07g，产率35.6％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.23(2H,d,J＝7.6Hz,ArH),6.74(2H,d,J＝7.8Hz,ArH),4.96(2H,d,J＝34.5Hz,NH2),4.35(2H,m,18-H),3.98(1H,dd,J＝14.8,9.8Hz,17-He),3.88(4H,t,J＝9Hz,2×CH₂Cl),3.68(4H,t,J＝10Hz,2×NCH₂),3.61(1H,m,21-H),3.46(1H,m,17-Ha),3.38-3.28(3H,m,11、22-H),3.21-3.13(1H,m,6-H),3.05-2.95(2H,m,2、10-He),2.91-2.76(4H,m,2、10-Ha,5、7-H),2.58(2H,t,J＝22Hz,14-H),2.34-2.21(8H,m,3、4、8、9-H),2.13-1.62(7H,m,CH,CH₂),1.42(3H,m,CH₃)。元素分析，C₃₀H₄₁Cl₂N₄O₃，实测值(计算值)，％：C61.92(61.95)；H7.98(7.97)；Cl12.18(12.19)；N9.64(9.63)；O8.27(8.25)。MS(ESI)m/z：581.29(M+H)⁺

3-216-(4-{5-[双-(2-氯乙基)氨基]-1-甲基-2-苯并咪唑基}-丁酰基)苦参酸乙酯(KSJ-16)的制备

取1mmol的苯达莫斯汀溶于15mL的THF中，室温搅拌下加入1.1mmolN′-二环己基碳二亚胺(DCC)，加完后搅拌15min，然后加入1mmol的化合物3(苦参酸乙酯)和0.5mmol二甲氨基吡啶(DMAP)，室温搅拌48h。过滤，二氯甲烷洗涤滤饼(15mL×3)，合并有机相，减压蒸除溶剂，乙酸乙酯和乙醇的混合液为淋洗剂，柱色谱分离得纯品约0.06g，产率32％。¹HNMR(CDCl₃，400Hz)，δ_H：7.42(1H，m，ArH)，7.03(1H，m，ArH)，6.75(1H，d，J＝10.7Hz，ArH)，4.41(2H，m，18-H)，4.11(1H，dd，J＝12.8，4.1Hz，17-He)，3.92(3H，s，NCH₃)，3.70(4H,t,J＝9Hz,2×CH₂Cl),3.61(4H,t,J＝10Hz,2×NCH₂)，3.45(1H，t，J＝12.7Hz，17-Ha)，3.38-3.28(1H，m，11-H)，2.73-2.62(2H，m，23-H),2.58-2.41(2H，m，14-H)2.41-2.35(5H，m，2、10-He,6-H,21-H)，2.30-2.10(6H，m，2、10-Ha,5、7-H，22-H)，2.03-1.46(9H，m，CH，CH₂)，1.34(3H,m,CH₃).元素分析，C₃ ₀H₄₁Cl₂N₄O₃，实测值(计算值)，％：C62.41(62.45)；H7.80(7.78)；Cl11.19(11.17)；N11.02(11.03)；O7.57(7.56)。MS(ESI)m/z：634.32(M+H)⁺

3-316-{P-[二(2-氯乙基)氨基]-P-羟基-磷酰基}苦参酸乙酯(KSJ-17)的制备

向干燥的50mL的三口圆底烧瓶中，加入0.62g化合物3和3mL无水吡啶，搅拌混合均匀。冰浴条件下，用恒压滴液漏斗缓慢滴加0.78g二(2-氯乙基)氨基磷酰二氯的30mL氯仿溶液，约1h滴加完毕，升温至50℃，并继续搅拌，用TLC检测反应进程。反应结束后，抽滤，滤液减压浓缩得黄色油状物，用二氯甲烷和甲醇体积比为25：1的混合液进行洗脱，色谱柱分离的目标化合物为淡黄色油状物0.40g，产率39％。¹HNMR(MeOD，400Hz)，δ_H：4.23(2H，m，18-H)，3.61(4H,t,J＝7.6Hz,2×CH₂Cl),3.50(1H，dd，J＝11.2，3.8Hz，17-He)，3.12(4H,t,J＝8Hz,2×NCH₂)，2.91(1H，m，11-CH₂)，2.88(1H，t,J＝9Hz,17-Ha)，2.75(2H，m，14-H)，2.60-2.48(5H，m，2、10-H,6-H),2.23-2.09(6H，m，5、7-H,13-H,4、8-He)，1.98-1.72(8H，m，4、8-He，CH，CH₂)，1.28(3H,m,CH₃).元素分析，C₃₀H₄₁Cl₂N₄O₃，实测值(计算值)，％：C50.57(50.60)；H7.69(7.68)；Cl14.21(14.23)；N8.44(8.43)；O12.86(12.84)；P6.22(6.21)。MS(ESI)m/z：498.2(M+H)⁺

3-416-(3-羰基-18α-甘草次酰基)苦参酸乙酯(KSJ-18)的制备

于100mL的三口烧瓶中将上述油状物溶于30mL的CH₂Cl₂中，另取1g的化合物3和3mL的吡啶溶于20mL的CH₂Cl₂中，然后于冰浴条件下缓慢滴加到上述油状物的CH₂Cl₂液中，滴加时间约为1h，滴加完毕后升至室温继续搅拌16h，TLC跟踪反应进程，原料反应完全，减压浓缩得黄色油状物粗品。用石油醚和乙酸乙酯体积比为4：3的混合液进行洗脱，柱色谱分离得淡黄色固体0.18g，产率27.7％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.73(s,1H，32-H),4.42(d,J＝11.0Hz,1H,17-He),4.34(t,J＝4.4Hz,2H,18-H),3.99-3.86(m,1H,17-Ha),3.83-3.75(m,1H,11-H),3.08-3.01(m,2H,13-H),2.99–2.91(m,1H,14-He),2.82-2.73(m,2H,2、10-He),2.70–2.42(m,4H,6-H,22-He,38-H,29-H),2.40–2.33(m,1H,22-Ha),2.30–2.10(m,4H,2、10-Ha,14-Ha,21-He),2.12–1.80(m,11H,5-H,7-H,8、9-He,12-He,21-Ha,25-H,39-H,41-H),1.65–1.36(m,13H，3-H,4-H,8、9-Ha,12-Ha,26、27、42-He,49-H),1.30-1.25(m,J＝16.0,12.0Hz,13H,26、27、42-Ha,35-H,36-H,45-H,47-H),1.22(m，3H，19-H)，1.16(s,6H,43-H,44-H),1.09(d,J＝15.0Hz,6H,46-H,48-H).元素分析，C₄₇H₇₂N₂O₅，实测值(计算值)，％：C75.73(75.76)；H9.76(9.74)；N3.75(3.76)；O10.76(10.74).MS(ESI)m/z：745.54(M+H)⁺

3-516-(3-羰基-18β-甘草次酰基)苦参酸乙酯(KSJ-19)的制备

于100mL的三口烧瓶中将上述油状物溶于30mL的CH₂Cl₂中，另取1g的化合物3和3mL的吡啶溶于20mL的CH₂Cl₂中，然后于冰浴条件下缓慢滴加到上述油状物的CH₂Cl₂液中，滴加时间约为1h，滴加完毕后升至室温继续搅拌16h，TLC跟踪反应进程，原料反应完全，减压浓缩得黄色油状物粗品。用石油醚和乙酸乙酯体积比为4：3的混合液进行洗脱，柱色谱分离得淡黄色固体0.19g，产率29.3％。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.62(s,1H，32-H),4.36(d,J＝11.0Hz,1H,17-He),4.27(t,J＝4.4Hz,2H,18-H),3.99-3.86(m,1H,17-Ha),3.83-3.75(m,1H,11-H),3.08-3.01(m,2H,13-H),2.99–2.86(m,1H,14-He),2.82-2.72(m,2H,2、10-He),2.70–2.42(m,4H,6-H,22-He,38-H,29-H),2.40–2.33(m,1H,22-Ha),2.30–2.10(m,4H,2、10-Ha,14-Ha,21-He),2.15–1.80(m,11H,5-H,7-H,8、9-He,12-He,21-Ha,25-H,39-H,41-H),1.65–1.36(m,13H，3-H,4-H,8、9-Ha,12-Ha,26、27、42-He,49-H),1.30-1.25(m,J＝16.0,12.0Hz,13H,26、27、42-Ha,35-H,36-H,45-H,47-H),1.22(m，3H，19-H)，1.20(s,6H,43-H,44-H),1.09(d,J＝15.0Hz,6H,46-H,48-H).元素分析，C₄₇H₇₂N₂O₅，实测值(计算值)，％：C75.73(75.76)；H9.76(9.74)；N3.75(3.76)；O10.76(10.74).MS(ESI)m/z：745.54(M+H)⁺

3-616-{4-[4-(双2-氯乙基)氨基-苯基]-丁酰基}苦参酸乙酯(KSJ-20)的制备

向反应容器中加入0.001mol的苯丁酸氮芥，冰浴条件下滴加含有1mL氯化亚砜的二氯甲烷溶液，然后加热回流1h，至无气泡产生，将溶剂蒸干，得到棕色固体。然后将0.001mol的化合物3以及0.14g碳酸钾放入上述固体中，加入30mL的三氯甲烷，回流22h，反应完全。蒸干溶剂，加入蒸馏水将碳酸钾溶解，用10mL乙酸乙酯萃取3次，收集有机层，无水硫酸钠干燥过夜，过柱分离，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯体积比为4：1的混合溶液，所得产物为黄色油状物，产率55％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.13(2H,d,J＝8Hz,ArH),6.68(2H,d,J＝7.9Hz,ArH),4.20(2H,m,18-H),3.71(4H,t,J＝8.7Hz,2×CH₂Cl),3.62(4H,t,J＝9.6Hz,2×NCH₂),3.54(1H，dd，J＝11.2，3.8Hz，17-He)，3.38(1H,m,11-H),3.40(1H,m,17-Ha),2.75-2.64(2H,m,23-H),2.64-2.33(11H,m,2、10-H,5、6、7、14、21-H),2.11-2.01(2H,m,22-H),1.98-1.53(11H,m,CH,CH₂),1.52(3H,m,CH₃).实测值(计算值)，％：C64.10(64.13)；H8.17(8.16)；Cl12.21(12.23)；N7.23(7.24)；O8.28(8.27)。MS(ESI)m/z：580.23(M+H)⁺

3-716-{4-[N,N-二(2-氯乙基)]}苯甲酰苦参酸乙酯(KSJ-21)的制备

向反应容器中加入0.001mol的苯甲酸氮芥，冰浴条件下滴加含有1mL氯化亚砜的二氯甲烷溶液，然后加热回流1h，至无气泡产生，将溶剂蒸干，得到棕色固体。然后将0.001mol的化合物3以及0.14g碳酸钾放入上述固体中，加入30mL的三氯甲烷，回流22h，反应完全。蒸干溶剂，加入蒸馏水将碳酸钾溶解，用10mL乙酸乙酯萃取3次，收集有机层，无水硫酸钠干燥过夜，过柱分离，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯体积比为3：1的混合溶液，所得产物为黄色油状物，产率58％。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)，δ_H:7.87(1H，m，J＝2.4Hz，ArH)，7.36(1H，d，J＝8.4Hz，ArH),6.59(2H，m，J＝8.4Hz，ArH),4.36(1H，m，J＝17Hz，17-He)，4.05(2H，m，J＝7.2Hz，OCH₂)，3.85(1H，m，J＝5Hz，11-H)，3.75(4H，t，J＝6.8Hz，2×CH₂Cl)，3.57(4H，t，J＝6.8Hz，2×NCH₂)，3.48(1H，d，J＝10.8Hz，17-Ha),2.82(2H，m，J＝17.2Hz，2、10-He)，2.76(2H，m，J＝11.2Hz，COCH₂)，2.18-1.32(17H，m，2、10-Ha，CH₂，CH)，1.16(3H，t，J＝7.2Hz，CH₃)。元素分析，C₂₈H₄₁Cl₂N₃O₃，实测值(计算值)，％：C62.22(62.45)；H7.63(7.67)；N7.87(7.80)；Cl13.11(13.17)。MS(ESI)m/z:538.4(M+H)⁺。

通过本发明制备的苦参碱衍生物的制备方法得到的苦参碱衍生物，其构成纯度在99％或以上。

药理实验

实验材料：

人乳腺癌MCF-7细胞株、人肝癌SMMC-7721、小鼠骨肉瘤S180细胞株常规培养于含10％小牛血清的1640培养基中，37℃，5％CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3-4d传代1次。由天津市医药科学研究所细胞室提供。

MTT(批号：0793Scientificresearchspescial公司)；RPMI1640培养基(批号：NTF0886Hyclone公司)；新生牛血清(批号：090605杭州四季青生物工程材料有限公司)；二甲基亚砜(DMSO)等其余试剂均为国产分析纯。

仪器CO₂培养箱型号(BB16/BB5060上海力创科学仪器有限公司)，美国；酶联免疫检测仪(型号：InfiniteM200Tecan公司瑞士产)；倒置显微镜(型号：CK奥林巴斯公司日本产)超净工作台(北京半导体设备一厂)。

实验操作及结果：

1KSJ系列化合物对肝癌细胞的抑制作用

用MTT法测试目标化合物对人体肝癌细胞SMMC-7721的体外抗肿瘤活性。取处于指数生长期的状态良好的细胞，制成每毫升含5×10³个细胞的悬液。将细胞悬液接种于96孔培养板中，每孔100μL，分样品组、对照组(不加样品)和空白组(只有培养基)，每组设定4个复孔。置于恒温CO₂培养箱中培养24h换液，加入受试化合物(化合物用DMSO溶解后用PBS稀释，对照组浓度分别为0.008，0.016，0.031，0.063，0.125，0.250，0.500，1.00，2.00，4.00，8.00(μmol∕mL)，样品组浓度分别为0.001，0.002，0.004，0.008，0.016，0.032，0.064，0.130，0.250，0.500，1.00(μmol∕mL)。每孔100μL，培养48h加入MTT，每孔10μL，于培养箱中反应4h后吸去上清液，每孔加入150μLDMSO，在平板摇床上振摇5min，用酶联免疫检测仪在波长570nm处测定每孔的吸收度，计算细胞抑制率后再由统计软件求出IC₅₀值。

表1KSJ系列化合物对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

2KSJ系列化合物对乳腺癌细胞的抑制作用

用MTT法测试目标化合物对乳腺癌细胞MCF-7的体外抗肿瘤活性。取处于指数生长期的状态良好的细胞，制成每毫升含5×10³个细胞的悬液。将细胞悬液接种于96孔培养板中，每孔100μL，分样品组、对照组(不加样品)和空白组(只有培养基)，每组设定4个复孔。置于恒温CO₂培养箱中培养24h换液，加入受试化合物(化合物用DMSO溶解后用PBS稀释，对照组浓度分别为0.008，0.016，0.031，0.063，0.125，0.250，0.500，1.00，2.00，4.00，8.00(μmol∕mL)，样品组浓度分别为0.001，0.002，0.004，0.008，0.016，0.032，0.064，0.130，0.250，0.500，1.00(μmol∕mL)。每孔100μL，培养48h加入MTT，每孔10μL，于培养箱中反应4h后吸去上清液，每孔加入150μLDMSO，在平板摇床上振摇5min，用酶联免疫检测仪在波长570nm处测定每孔的吸收度，计算细胞抑制率后再由统计软件求出IC₅₀值。

表2KSJ系列化合物对乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用

3KSJ系列化合物对骨肉瘤细胞S180的抑制作用

用MTT法测试目标化合物对骨肉瘤细胞S180的体外抗肿瘤活性。取处于指数生长期的状态良好的细胞，制成每毫升含5×10³个细胞的悬液。将细胞悬液接种于96孔培养板中，每孔100μL，分样品组、对照组(不加样品)和空白组(只有培养基)，每组设定4个复孔。置于恒温CO₂培养箱中培养24h换液，加入受试化合物(化合物用DMSO溶解后用PBS稀释，对照组浓度分别为0.002，0.004，0.008，0.016，0.031，0.063，0.125，0.250，0.500，1.00，2.00(μmol∕mL)，样品组浓度分别为0.001，0.002，0.004，0.008，0.016，0.032，0.064，0.130，0.250，0.500，1.00(μmol∕mL)。每孔100μL，培养48h加入MTT，每孔10μL，于培养箱中反应4h后吸去上清液，每孔加入150μLDMSO，在平板摇床上振摇5min，用酶联免疫检测仪在波长570nm处测定每孔的吸收度，计算细胞抑制率后再由统计软件求出IC₅₀值。

表3KSJ系列化合物对骨肉瘤细胞S180的抑制作用

药理实验结果表明：在以苦参碱和美法仑为对照药、与KSJ系列化合物同时给药的情况下，研究KSJ系列化合物对人体肝癌细胞SMMC-7721和乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用，通过对比它们的抑制率和IC₅₀值发现：KSJ系列所有化合物的抗肿瘤活性都优于对照药苦参碱，其中KSJ-1、KSJ-2、KSJ-4、KSJ-5、KSJ-6、KSJ-7、KSJ-8、KSJ-9、KSJ-11、KSJ-12、KSJ-13、KSJ-14、KSJ-15、KSJ-16、KSJ-18、KSJ-19、KSJ-20和KSJ-21都优于对照药美法仑；研究KSJ系列化合物对骨肉瘤细胞S180的抑制作用，通过对比它们的抑制率和IC₅₀值发现：KSJ系列所有化合物的抗肿瘤活性都优于对照药苦参碱，其中KSJ-1优于对照药美法仑，KSJ-4、KSJ-8、KSJ-11、KSJ-15、KSJ-18和对照药美法仑抗肿瘤相当。

Claims

1.一种苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：所述衍生物的结构式如式Ⅰ所示：

Rx为下述Rx₁、Rx₂、Rx₃、Rx₄、Rx₅、Rx₆或Rx₇：

2.一种苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：所述衍生物的结构式如式Ⅱ所示：

Rx为下述Rx₁、Rx₂、Rx₃、Rx₄、Rx₅、Rx₆或Rx₇：

3.一种苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：所述衍生物的结构式如式Ⅲ所示：

Rx为下述Rx₁、Rx₂、Rx₃、Rx₄、Rx₅、Rx₆或Rx₇：

4.如权利要求1或2所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：制备所述苦参碱衍生物所采用的原料包括槐果碱。

5.如权利要求1所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：制备所述式Ⅰ的中间体为结构式如下的13-(2-羟基)乙氧基苦参碱：

6.如权利要求2所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：制备所述式Ⅱ的中间体为结构式如下的13-(2-氨基)乙氧基苦参碱：

7.如权利要求3所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：制备所述式Ⅲ的中间体为结构式如下的苦参酸乙酯：

8.如权利要求7所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐，其特征在于：所述的中间体苦参酸乙酯是苦参碱与NaOH的醇溶液生成苦参酸后，再与乙醇反应制得该中间体苦参酸乙酯。

9.如权利要求1-3任一所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。

10.如权利要求9所述的苦参碱衍生物及其治疗上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途，其中所述用途为治疗肝癌、乳腺癌和骨肉瘤的药物。