CN105232391A - 一种组合物及其制备方法 - Google Patents

一种组合物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105232391A
CN105232391A CN201510725088.8A CN201510725088A CN105232391A CN 105232391 A CN105232391 A CN 105232391A CN 201510725088 A CN201510725088 A CN 201510725088A CN 105232391 A CN105232391 A CN 105232391A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compositions
herba centellae
organic solvent
extract
composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510725088.8A
Other languages
English (en)
Inventor
邹亚霖
冯辰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Liangyinzi Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Suzhou Liangyinzi Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Liangyinzi Biotechnology Co Ltd filed Critical Suzhou Liangyinzi Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201510725088.8A priority Critical patent/CN105232391A/zh
Publication of CN105232391A publication Critical patent/CN105232391A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/23Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/42Cucurbitaceae (Cucumber family)
    • A61K36/424Gynostemma
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/10General cosmetic use

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明涉及一种组合物及其制备方法,尤其涉及一种提高皮肤成纤维细胞活性的植物提取物组合物及制备方法;组合物包含:作用于人成纤维细胞并足以活化ERK信号通路、和/或诱导细胞分化的化妆品或药学有效量的积雪草和毛绞股蓝植物提取物,植物提取物是通过有机溶剂提取获得的;以及化妆品或药学可接受的赋形剂;组合物制备方法,包括以下步骤:S1、积雪草提取液制备;S2、毛绞股蓝提取液制备;S3、组合物制备;本发明将积雪草和毛绞股蓝植物提取物混合使用,可以有效提高皮肤成纤维细胞活性,活化ERK信号通路,诱导细胞分化。

Description

一种组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种组合物及其制备方法,尤其涉及一种提高皮肤成纤维细胞活性的植物提取物组合物及制备方法。
背景技术
各种皮肤损伤均会造成不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损,必须通过皮肤细胞增生和细胞间基质的形成来进行组织修复。在此修复过程中,成纤维细胞起着至关重要的作用。以伤口愈合过程为例,成纤维细胞通过有丝分裂大量增殖,并从4~6天开始合成和分泌大量的胶原纤维和基质成分,与新生毛细血管等共同形成肉芽组织,填补伤口组织缺损,为表皮细胞的覆盖创造条件。在伤口愈合中,成纤维细胞主要来源于真皮乳头层的局部成纤维细胞和未分化的间充质细胞,以及血管周围的成纤维细胞和周细胞。内脏损伤时,参与修复过程的成纤维细胞多来自间质和包膜,以及粘膜下或浆膜下层的结缔组织。有观点认为创伤愈合过程中伤处聚集的大量成纤维细胞,一方面是由成纤维细胞通过分裂增殖而来,另一方面,更多地是由邻近的间充质细胞、纤维细胞和毛细血管周细胞等演变或游走到伤处。在创伤修复的后期,成纤维细胞通过分泌胶原酶参与修复后组织的改建。
成纤维细胞是皮肤损伤过程中人体细胞自发性修复的核心,其在损伤部位数量,生物活性等直接决定皮肤修复的程度和速度。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明的目的是提供一种可以有效提高皮肤成纤维细胞活性的植物提取物组合物及其制备方法。
本发明第一方面提供一种组合物,包含:
作用于人成纤维细胞并足以活化ERK信号通路、和/或诱导细胞分化的化妆品或药学有效量的积雪草和毛绞股蓝植物提取物,所述植物提取物是通过有机溶剂提取获得的;以及
化妆品或药学可接受的赋形剂。
本发明所用的植物提取物还包括“合成”提取物,即已知植物组分和/或成分的各种组合,合并所述植物成分以便基本上模拟天然来源的植物提取物的组成和/或活性。这类合成提取物包括在术语“植物提取物”中。合成提取物具有与植物一样的两种或多种、三种或多种或四种或多种活性组分。最优选合成提取物具有与天然提取物基本上相同数量的活性组分。还可以将合成提取物与植物或天然提取物之间的活性组分的数量关联的对应性描述为“共同性百分比”。优选合成提取物具有与植物或天然提取物的化学组成约50%或50%以上的共同性。换句话说,合成提取物具有约50%或50%以上的在植物或天然提取物中发现的活性组分。更优选合成提取物的化学组成与植物或天然提取物的化学组成具有约70%或70%以上的共同性。最好的情况是,合成提取物具有与植物或天然提取物的化学组成约90%或90%以上的共同性。
就在本发明组合物中的应用而言,植物或成分和/或活性成分优选直接来源于植物。该成分可以为纯的形式、半纯的形式或不纯的形式。在一个优选实施方案中,该成分为通过有机溶剂提取获得的提取物形式。
简而言之,有机溶剂提取方法包括使用有机溶剂洗涤和萃取植物材料。有机溶剂的非限制性实例包括甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、氯仿、己烷、二甲苯和石油醚。正如本领域众所周知的,可以将提取器用于有机溶剂提取。
有机溶剂提取包括从植物中收集含有所需成分的原料,诸如种子、针叶、叶、根、树皮、球果、茎、根茎、愈伤组织细胞、原生质体、器官和器官系统和分生组织。将这些植物材料研磨成小颗粒大小且然后用可测量的装料机的原料入口将其放入提取器。用推进器将植物原料推入提取器,并且使植物原料缓慢向前运动。可以通过在废物排出出口的顶部的溶剂入口将有机溶剂(例如乙醇)加入提取器中。由于重力和平衡的差异,溶剂向前流动至原料入口,浸透原料并且从溶剂入口的对侧流出。由于植物材料和溶剂彼此反向运动,所以植物材料被恒定浸入含有低浓度提取物的溶液中。作为平衡的结果,可以通过相对于低浓度的溶液连续提取植物材料获得高产量的植物成分。
适合于提取出植物成分的提取时间一般以约1-8小时为宜,更优选为约2-6小时并且最优选为约3-5小时。提取温度为约30℃-90℃,优选约40℃-70℃,并且更优选约50℃-60℃。然后将收集的提取物精细过滤以便除去碎片并且可以直接使用或例如通过蒸馏溶剂或通过常规加工进行浓缩,并且还可以粉末形式提供提取物。
类似地,水-有机溶剂提取包括最初从植物中收集含有所需生物碱的原料,诸如植物的种子、针叶、叶、根、树皮、球果、茎、根茎、愈伤组织细胞、原生质体、器官和器官系统和分生组织,将它们研磨成小颗粒大小。根据所需提取物在酸性或碱性或碱性条件下的溶解度和稳定性的不同,将磨碎的植物材料浸入为酸性或碱性的水溶液。就在酸性条件下提取而言,将诸如盐酸或硫酸这类酸加入到水中,例如浓度约为3%(w/v)。就在碱性条件下提取而言,将诸如氢氧化钠或碳酸钠这类碱加入到水中。提取时间和提取温度一般与上述有机溶剂提取方法中使用的类似。
然后收集提取物并且精细过滤以便除去碎片。可以将碱性剂(例如氨)或酸化剂(例如硫酸)加入到提取物中以便通过调整pH中和该溶液,这取决于收集的提取物的酸度或碱度。可以直接使用含水提取物,将其浓缩或干燥。或者,然后可以将有机溶剂加入到中和的溶液中以便将提取物的活性成分从水相转移到有机相中。这类有机溶剂的实例包括,但不限于乙醇、异丙醇、丁醇、戊醇、己醇和二甲苯。包含溶于有机溶剂的转移的提取物活性成分的提取物可以直接使用,作为浓缩物使用或被干燥。
可以将含有不同成分的不同植物彼此混合并且提取。这种混合提取的方法可以优选用于提取那些含有与在用于提取的溶剂,诸如乙醇中具有类似的溶解度的成分的植物。可以浓缩提取物混合物并且将其储存在适宜的溶剂中。
优选的,本发明中所述组合物为选自由气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉末、贴剂、发蜡、溶液、手按泵型喷雾剂、棒状物和湿纸巾组成的组的产品形式。
本发明包括包含化妆品或皮肤病学可接受的制剂的组合物,该制剂适合于接触活的动物组织,包括人体组织,而对使用者实际上无不利生理效应。可以将本发明包括的组合物制成任何化妆品和/或皮肤病学上合适的形式,优选制成化妆水或霜剂,而且还可以为无水或含水基料形式,以及可喷雾的液体形式。其它用于本发明组合物的合适的化妆品形式包括:例如乳液、唇、唇彩、化妆水、面膜、软膏、摩丝、贴剂、发蜡、溶液、喷雾剂、蜡基棒状物或湿纸巾。此外,本发明关注的组合物可以包括一种或多种相容的化妆品可接受的本领域技术人员常用和已知的辅助剂,诸如着色剂、芳香剂、润肤剂、保湿剂、防腐剂、维生素、螯合剂、增稠剂、麻醉剂、抗过敏剂、抗真菌剂、抗微生物剂、其它消炎剂、抗氧化剂、消毒剂、去色素剂、成膜剂、昆虫驱避剂、药物活性剂、耐光剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂等以及诸如芦荟、黄春菊等的其它植物制剂并且在下文中进一步描述。
可以用于本发明局部用组合物的化妆品或皮肤病学可接受的赋形剂包括,但不限于:一种或多种含水系统;甘油;C1-4醇类;脂肪醇类;脂肪醚类;脂肪酯类;多元醇类;二醇类;植物油;矿物油;脂质体;层状脂质物质;硅油;水;或其任意组合。
在本发明中,赋形剂可以为水相、油相、水包蜡型乳剂、水包硅氧烷型乳剂、硅氧烷包水型乳剂、水包油型乳剂或油包水型乳剂的形式。水相为一种或多种水溶性或水分散性组分的混合物,其在室温(25℃)下可以为液体、半固体或固体。赋形剂包括或可以为在可以含有增稠剂或胶凝剂的水或水-醇载体中的混悬液、分散液或溶液的形式。本领域技术人员可以基于本领域技术人员掌握的知识选择合适的化妆品形式、其中包含的组分及其制备方法。
所述的组合物可以包括水相,该水相可以含有水或水与至少一种亲水性有机溶剂的混合物,所述的亲水性有机溶剂诸如为醇,尤其是含有2-5个碳原子的直链或支链低级一元醇,例如乙醇或丙醇;多元醇,例如丙二醇、山梨醇、甘油、双甘油、泛醇或聚乙二醇及其混合物。该水相可以占组合物总重的约0.5重量%-约99.99重量%。
当本发明的组合物为乳剂形式时,该组合物还可以任选包含表面活性剂,优选其含量占组合物重量的约0.1重量%-约30重量%,且特别是约1重量%-约20重量%。
本发明的组合物还可以包含增稠聚合物,诸如两亲聚氨基甲酸酯;聚丙烯酸均聚物或共聚物;聚酯和/或基于烃的树脂。可以将聚合物溶于或分散于化妆品可接受的赋形剂并且任选与增塑剂合并。
本发明的组合物还可以包含油相,所述的油相含有在室温(25℃)下为液体的油溶性或油分散性组分和/或在室温下为固体的油状或蜡状物质,诸如蜡、半固体、树胶及其混合物。该油相还可以含有有机溶剂。
本发明的组合物可以进一步包含常用于化妆品领域中的任何组分。这些组分包括防腐剂、水相增稠剂(多糖生物聚合物、合成聚合物)和脂肪相增稠剂、芳香剂、亲水性和亲脂性活性剂及其混合物。这些不同组分的量为常用于化妆品领域以便实现其预期目的的量,并且范围一般为占组合物重量的约0.01-20%。这些组分的性质及其用量必须与本发明组合物的生产方法相容。
优选的,其中所述的植物提取物基于组合物总重量的存在量为0.0001wt%-50wt%。
本发明的组合物还可以具有一种或多种下列活性剂、组分或辅助剂:麻醉剂;抗过敏剂;抗真菌剂;消毒剂;螯合剂;着色剂;缓和剂;润肤剂;乳化剂;芳香剂;保湿剂;润滑剂;增湿剂;pH调节剂;颜料改变剂;防腐剂;稳定剂;表面活性剂;增稠剂;粘度调节剂;维生素;或其任意的混合物。这些不同物质的量为常用于化妆品或药物领域的量,例如它们可以占组合物总重的约0.01%-20%。
本发明第二方面提供一种上述组合物的制备方法,包括以下步骤:
S1、积雪草提取液制备:将积雪草粉碎后用蒸馏水浸泡静置后过滤得到积雪草初级滤液,将积雪草初级滤液浓缩后加入有机溶剂,经搅拌、过滤后得到积雪草次级滤液,将积雪草次级滤液减压蒸馏后使用蒸馏水溶解残渣得到积雪草提取液;
S2、毛绞股蓝提取液制备:将毛绞股蓝粉碎后用有机溶剂浸泡静置后过滤得到毛绞股蓝滤液,将毛绞股蓝滤液减压蒸馏后使用蒸馏水溶解残渣得到毛绞股蓝提取液;
S3、组合物制备:将积雪草提取液与毛绞股蓝提取液混合均匀后,加入赋形剂制备而成。
上述方法中所涉及的有机溶剂、赋形剂等,参照本发明第一方面中所提及的方案实施,在实施过程中,可相应地进行调整,例如,采用不同的有机溶剂提取方法,使用不同的赋形剂,形成不同的物相,添加化妆品中常用成分,或是添加活性剂、组分或辅助剂等。
优选的,所述有机溶剂为乙醇。
优选的,所述组合物为选自由气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉末、贴剂、发蜡、溶液、手按泵型喷雾剂、棒状物和湿纸巾组成的组的产品形式。
本发明第三方面提供一种积雪草和毛绞股蓝植物提取物在制备组合物中的用途,所述组合物用于人成纤维细胞并足以活化ERK信号通路、和/或诱导细胞分化;所述植物提取物是通过有机溶剂提取获得的。
优选的,所述有机溶剂为乙醇。
借由上述方案,本发明至少具有以下优点:本发明将积雪草和毛绞股蓝植物提取物混合使用,可以有效提高皮肤成纤维细胞活性,活化ERK信号通路,诱导细胞分化。
上述说明仅是本发明技术方案的概述,为了能够更清楚了解本发明的技术手段,并可依照说明书的内容予以实施,以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
附图说明
图1是本发明第一实施例中积雪草提取液凝胶过滤层析后紫外光检测结果图;
图2是本发明第一实施例中重复实验积雪草提取液凝胶过滤层析后紫外光检测结果图;
图3是本发明第二实施例中MTT法测定32组样品对人成纤维细胞的促进增值作用结果图;
图4是本发明第二实施例中三组样品混合后分别稀释200、400和800倍后对人成纤维细胞的促进增值作用结果图;
图5是本发明第三实施例中三组样品混合后分别稀释200、400和800倍后免疫印迹法检测对ERK信号通路活化的结果图;
图6是本发明第四实施例中水剂组小鼠处理后的伤口愈合图;
图7是本发明第四实施例中膏剂组小鼠处理后的伤口愈合图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例,对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
实施例一
本发明一较佳实施例所述的一种组合物,可通过以下方式制备,同时采用凝胶过滤层析的方式分离不同浓度的组分,以便进一步检测:
S1、积雪草提取液制备:
1)将新鲜野生的积雪草粉碎后用12倍质量蒸馏水浸泡,低温静置30天;
2)将所得积雪草提取液过滤;浓缩提取液至1:1.2(ml:g);
3)加入50%乙醇,充分搅拌,取滤液弃去沉淀;
4)滤液减压蒸馏,残渣干燥后,加残渣质量5倍的蒸馏水溶解保存待用;
5)采用凝胶过滤层析Sephadex继续分离:
a、将所述野生植物积雪草的提取物调整至浓度为15%备用;
b、将G—75葡聚糖凝胶柱用tris—HCl缓冲液(0.1mol/L,ph=8.0)平衡备用;
c、将备好的原料液12000r/min下离心10min,弃沉淀,取2ml上样,用tris—HCl缓冲液(0.1mol/L,ph=8.0)洗脱,流速控制在0.3ml/min,对样品进行收集,每管接样量3ml;
d、接样直至葡聚糖凝胶柱内留出样品在波长280nm下测得的紫外值低于0.1停止收集;
e、将收集得到的样品按收集时间标号,每隔一管测量在波长280nm下的紫外值以管数为横轴,紫外值为纵轴做图,实测数据如图1所示;
f、分别收集第一峰附近32管样品,按图中本次流程实际分别收集了管号为45-76的样品,重编号分别为T1至T32;
g、将32组样品(T1-T32)于-4℃密闭环境中保存待用;这32组样品分子量检测后结果为约5000-7000D。
6)重复试验两次,并采用凝胶过滤层析Sephadex继续分离,以验证本发明中积雪草的提取物制备方法的稳定性,结果如图2所示,图中A和B分别为两次重复试验的结果,与前述试验经统计分析,无显著差异(pvalue>0.05),可见采用上述方法提取积雪草提取物成分较为一致、可控。
S2、毛绞股蓝提取液制备:
1)用10倍质量的70%乙醇浸泡,低温静置30天;
2)将提取液过滤,滤液减压蒸馏;
3)残渣干燥后,加5倍于残渣量的水溶解。
S3、组合物前处理:
1)将提取得到的32管野生植物积雪草提取物样品(T1-T32)分别与野生植物毛叶绞股蓝的提取物混合,得到32管组合物样品;
2)将32管组合物样品分别37℃恒温摇床震荡60min,混合均匀后在15℃8000rpm经离心1小时以上;
3)加入总重量0.01%的十二烷基硫酸纳及0.015%的聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯;
4)用匀质器,高速匀质15分钟,在摄氏3-5度恒温中静置24小时后,得到组合物编号分别为A1-A32,装入特制容器中贮存待用。
实施例二
本发明所述的一种组合物,对于皮肤成纤维细胞活化的检测,采用MTT法测定A1-A32组样品对人成纤维细胞(HSF)的促进增殖作用,方法如下:
培养人皮肤成纤维细胞(HSF),使其复苏。
将对数生长期的HSF细胞用胰蛋白酶消化,接种细胞用含10%胎小牛血清的培养液把消化好的HSF细胞悬浮,待细胞变圆后吸出胰蛋白酶。
细胞计数后以每孔2000个将细胞接种到96孔板,每孔200ul,每组设3个平行孔。板周边的孔不加细胞,防止有边缘效应。留空白孔调零,以不加样品的细胞作为活性阴性对照。
在37℃、5%CO2的培养箱内培养24h后,分别加入编号为A1-A32的32个组别的样品组和空白对照组(50ng/ml的EGF),同时保留不加样品的细胞作为活性阴性对照组。每组设3个平行孔,继续培养24h,加入MTT溶液20ul继续培养4h。
终止培养,弃培养液,加入二甲基亚砜(DMSO)150ul/孔,振荡,在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值,并求平均值,结果如图2所示,其中,空白对照组和阴性对照组的OD值分别为0.492和0.379。由图中可知,A2至A16管的组合物,对成纤维细胞(HSF)的促进增殖作用较为明显,高于阴性对照组,A9-A11管的组合物,甚至超过了采用EGF的空白对照组,而EGF对成纤维细胞(HSF)的促进增殖作用是为本领域所公知的。
将A9、A10和A11三管混合后,分别稀释200、400、800倍后再次测定样品对人成纤维细胞(HSF)的促进增殖作用,结果如图3所示,图中S表示样品(Sample),P<0.05表示统计学上具有显著意义,即表明与阴性对照组相比,S-200、S-400、S-800及浓度为50ng/ml的EGF均能显著促进HSF的生长,而这4组(样品组和空白对照组)之间并无明显差异。
实施例三
根据本发明实施例二中的组合物,采用Westernblot法来检测其对ERK信号通路的活化情况。
1、蛋白质提取
取经过促进增殖的成纤维细胞200mg,利用液氮、迅速粉碎;加1.0mL总蛋白提取液(内含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂),置匀浆器中反复研磨,使组织进一步匀浆化后,再冰浴60min,4℃、12000r/min离心15min;吸取上清液,用Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度;再加入上样缓冲液,调整各样本蛋白浓度至4μg/μL的相同终浓度制成上样蛋白样品。
2、免疫印迹法检测
将上样蛋白样品于100℃下加热3min,使其蛋白质变性;采用SDS-PAGE不连续电泳系统进行垂直板电泳,每孔加样20μL;在5%浓缩胶电泳时采用低电压(80V),在12%分离胶电泳时采用高电压(120V),待溴酚蓝迁移到分离胶底部0.5cm处时,关闭电源;使用转膜装置,将分离胶上的蛋白条带转移至NC膜上;将电转膜封闭(4℃,12h);PBST洗膜,加入一抗,4℃,12h;PBST洗膜,加入1:4000稀释的酶标二抗,室温,1h;PBST洗膜,将膜浸入试剂发光显色。结果如图4所示,图中S表示样品(Sample),S-200、S-400、S-800表示将A9、A10和A11三管混合后分别稀释200、400、800倍的样品,空白对照表示浓度为50ng/ml的EGF的样品,该图是利用Westernblot法检测不同浓度样品对ERK信号通路的活化情况,其中ERK的磷酸化(p-ERK1/2)表示ERK呈活化状态,条带越亮表示磷酸化即活化程度越高,而ERK1/2及β-actin代表内参,表示所用的蛋白量是一样的,由图可见,A9、A10和A11三管组合物样品显著活化了ERK信号通路。
在传统的表皮修复理论中,更多地关注皮肤的营养补充,都是从皮肤的外部给皮肤注入水分和营养。但科学证实皮肤能从外部吸收的东西非常有限,特殊的细胞膜结构让细胞物质不能随便进出。进出的机制是受特定信息载体控制的,信息载体当作用于皮肤细胞时,能迅速将信息传递给细胞受体,使细胞快速进行反应。
在当代社会膳食营养过剩的今天,皮肤修复的过程中并不单纯的只是缺乏某种或某几种物质,更多的细胞内源修复信息的表达缺失。修复的关键是最大限度降低紊乱控制信息的表达,增强皮肤细胞固有信号通路的表达程度,从而加速皮肤损伤部位的愈合。
细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulatedkinase,ERK)是介导和调控细胞外信号到细胞内反应的重要激酶。ERK信号通路是细胞外信号传递入细胞内的主要通路,而且与细胞的增殖和分化密切相关。ERK1/2包括ERK1和ERK2两种异构体。总ERK1/2包括磷酸化ERK1/2(phospho-ERK1/2,p-ERK1/2)和非磷酸化ERK1/2两个部分。磷酸化ERK1/2是ERK1/2的活性形式。
ERK涉及调节在不同细胞内包括减数分裂、有丝分裂、有丝分裂后期的功能等一系列生理过程,其信号传递途径是涉及调节细胞生长、发育及分裂的信号网络的核心。
实施例四
根据本发明实施例二中的组合物,采用小鼠创伤修复实验,来进一步验证组合物对于皮肤损伤部位的愈合作用。具体实验方法为:
1、根据不同剂型,小鼠分为两组(水剂组和膏体组)进行处理,每组三只,共六只,水剂组分别编号为1、2、3,膏体组分别编号为4、5、6;
小鼠麻醉后,均于背部左右各开一个约8mm半径的孔。
2、水剂组小鼠头左方孔和右方孔分别采用水制剂的组合物(实验组)和蒸馏水(对照组)处理,每天处理2次,组合物采用实施例二中将A9、A10和A11三管混合并稀释后的组合物。结果如表1所示,可见经过本发明实施例二中组合物处理的小鼠皮肤损伤部位,愈合速度明显加快。如图5所示,图中A-D分别代表编号为3的小鼠,在第1、3、5、7、9天伤口的愈合状况。
表1水剂组小鼠皮肤损伤部位的伤口面积对照表(面积单位mm3)
3、膏体组小鼠头左方孔和右方孔分别采用膏体制剂的组合物(实验组)和凡士林(对照组)处理,每天处理2次,组合物采用实施例二中将A9、A10和A11三管混合并稀释后的组合物。结果如表2所示,可见经过本发明实施例二中组合物处理的小鼠皮肤损伤部位,愈合速度明显加快。除此之外,采用膏体剂型的组合物,对于小鼠皮肤损伤部位的愈合效果,优于水剂型的组合物。如图6所示,图中A-D分别代表编号为4的小鼠,在第1、3、5、7、9天伤口的愈合状况。
表2膏体组小鼠皮肤损伤部位的伤口面积对照表(面积单位mm3)
以上所述仅是本发明的优选实施方式,并不用于限制本发明,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和变型,这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种组合物,其特征在于:包含:
作用于人成纤维细胞并足以活化ERK信号通路、和/或诱导细胞分化的化妆品或药学有效量的积雪草和毛绞股蓝植物提取物,所述植物提取物是通过有机溶剂提取获得的;以及
化妆品或药学可接受的赋形剂。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于:所述组合物为选自由气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉末、贴剂、发蜡、溶液、手按泵型喷雾剂、棒状物和湿纸巾组成的组的产品形式。
3.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于:其中所述的植物提取物基于组合物总重量的存在量为0.0001wt%-50wt%。
4.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于:所述有机溶剂为乙醇。
5.一种组合物制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
S1、积雪草提取液制备:将积雪草粉碎后用蒸馏水浸泡静置后过滤得到积雪草初级滤液,将积雪草初级滤液浓缩后加入有机溶剂,经搅拌、过滤后得到积雪草次级滤液,将积雪草次级滤液减压蒸馏后使用蒸馏水溶解残渣得到积雪草提取液;
S2、毛绞股蓝提取液制备:将毛绞股蓝粉碎后用有机溶剂浸泡静置后过滤得到毛绞股蓝滤液,将毛绞股蓝滤液减压蒸馏后使用蒸馏水溶解残渣得到毛绞股蓝提取液;
S3、组合物制备:将积雪草提取液与毛绞股蓝提取液混合均匀后,加入赋形剂制备而成。
6.根据权利要求5所述的组合物制备方法,其特征在于:所述有机溶剂为乙醇。
7.根据权利要求5所述的组合物制备方法,其特征在于:所述组合物为选自由气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉末、贴剂、发蜡、溶液、手按泵型喷雾剂、棒状物和湿纸巾组成的组的产品形式。
8.积雪草和毛绞股蓝植物提取物在制备组合物中的用途,其特征在于:所述组合物用于人成纤维细胞并足以活化ERK信号通路、和/或诱导细胞分化;所述植物提取物是通过有机溶剂提取获得的。
9.根据权利要求8所述的用途,其特征在于:所述有机溶剂为乙醇。
CN201510725088.8A 2015-10-30 2015-10-30 一种组合物及其制备方法 Pending CN105232391A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510725088.8A CN105232391A (zh) 2015-10-30 2015-10-30 一种组合物及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510725088.8A CN105232391A (zh) 2015-10-30 2015-10-30 一种组合物及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105232391A true CN105232391A (zh) 2016-01-13

Family

ID=55030401

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510725088.8A Pending CN105232391A (zh) 2015-10-30 2015-10-30 一种组合物及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105232391A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111743785A (zh) * 2019-03-28 2020-10-09 珀莱雅化妆品股份有限公司 一种具有美白紧致功效的纳米纤维膜及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104983656A (zh) * 2015-06-19 2015-10-21 广州科玛生物科技有限公司 一种cc霜及其制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104983656A (zh) * 2015-06-19 2015-10-21 广州科玛生物科技有限公司 一种cc霜及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王磊 等,: ""积雪草贰对人成纤维细胞增殖的影响"", 《齐齐哈尔医学院学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111743785A (zh) * 2019-03-28 2020-10-09 珀莱雅化妆品股份有限公司 一种具有美白紧致功效的纳米纤维膜及其制备方法
CN111743785B (zh) * 2019-03-28 2021-10-22 珀莱雅化妆品股份有限公司 一种具有美白紧致功效的纳米纤维膜及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5850929B2 (ja) Magp−1に刺激を与えて皮膚の外観を改善する組成物
CN103520014B (zh) 含有来自水耕栽培人参的人参皂苷f2的皮肤外用剂组合物
ES2934960T3 (es) Composición cosmética que comprende un extracto acuoso de frutos de rosa
CN107106617A (zh) 包含来自南极假交替单胞菌的细菌细胞外产物的化妆品和/或药物组合物及其用途
CN103037880B (zh) 含有构树的提取物的组合物
US10182981B2 (en) Method of regulating a skin condition
CN106924316A (zh) 含高山火绒草植物细胞培养提取物的皮肤外用剂组合物及其制造方法
US11045669B2 (en) Hydroalcoholic extract of Schinus molle, cosmetic compositions comprising the same and cosmetic uses thereof
CN103857383B (zh) 含有枸杞和松叶的混合提取物作为有效成分的活化视黄酸受体的抗老化用组合物
US10335363B2 (en) Skin care composition and method of making the same
CN114224787A (zh) 包含植物种子油脂的组合物及其应用
CN105873584B (zh) 用于促进脂肪细胞分化的包含羟基吡喃酮衍生物化合物的化妆品组合物
CN105899186A (zh) 含有可用于美容、皮肤或美容保健合成物的蔗糖酯活性成分的植物萃取物
CN105232391A (zh) 一种组合物及其制备方法
KR20140013370A (ko) 백화고 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물
JP2010222273A (ja) 養毛剤組成物
CN104125832A (zh) 杨桃提取物作为cpt-1调节剂的用途及其组合物
Saraç et al. Determination of the activities of horse chestnut (Aesculus hippocastanum L.) extract against liver cancer proteins
CN107743398A (zh) 含有狼毒萃取物或其级分的用于伤口治疗的组合物和治疗个体的伤口的方法
KR101415997B1 (ko) 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물
KR101570808B1 (ko) 지방줄기세포 배양액 추출물과 하수오 줄기세포 배양 추출물을 함유하는 육모 또는 양모용 조성물
Saptawati et al. Formulation of Yodium Leaf Extract (Jatropha Multifida L.) Cream for Cuts Healing in Wistar Male Rats (Rattus novergicus)
JP6629271B2 (ja) Endo180産生促進剤
KR20190083090A (ko) 영여자 추출물 함유 멀티라멜라 소포 및 이의 제조 방법
CN117982375A (zh) 促进细胞增殖和活力的植物油组合物

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160113

RJ01 Rejection of invention patent application after publication