CN105218692A - 一种黄精β-半乳聚糖及其制备方法和抑制细胞凋亡的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了黄精β-半乳聚糖HJW0？S300-2在抗衰老或防晒作用的化妆品中的应用，其中所述聚糖的结构式如下：，分子量范围在8-15KDa，其平均分子量Mw为10KDa。本发明还涉及上述黄精β-半乳聚糖在抑制成纤维细胞凋亡中的应用以及包含这种黄精β-半乳聚糖的化妆品。

Description

一种黄精β-半乳聚糖及其制备方法和抑制细胞凋亡的应用

技术领域

本发明涉及从中草药黄精分离纯化得到的β-半乳聚糖HJW0S300-2的抑制细胞凋亡的作用。具体涉及该多糖制备用于抗衰老作用以及防晒功能的化妆品以及保健品中。

背景技术

黄精(Polygonatumsibiricum)，又名老虎姜、鸡头姜，为百合科黄精属多种植物的干燥块茎。黄精具有滋肾养阴，补中益气，延年益寿等功效。主要分布于甘肃和陕西。药理研究表明，黄精具有抗衰老、增强免疫、提高学习和记忆能力、抗炎、抗病毒、降血糖等作用。黄精含有黄精皂苷、烟酸、糖类、醌类、氨基酸及微量元素。对黄精水提物的化学成分进行分析的过程中发现，黄精水提物的主要有效成分为黄精多糖。黄精在治癣、抗衰老等方面的作用，与其水溶性成分密切相关。黄精多糖具有多种生理功能，例如黄精多糖具有抗菌、抗炎、抗氧化、调节免疫力、抗肿瘤等功效(林产化学与工业，2005,25(2)：80-82；中成药，2012,34(4)：694-697；中草药，2006，37(8)：1132-1134；Carbohydratepolymers,2007,70:304-309)。但是，迄今为止对黄精多糖中的单一均一组分的研究报道还不多，对于各种单一组分的构效关系以及药理活性作用机制也不明确。这种情况并不利于黄精多糖的应用和开发。

由于多糖是极性大分子化合物，酸性条件下能引起多糖苷链的断裂。因此，它常用的提取分离方法大多为热水提取，酶提取法。提取液中的游离蛋白质主要用Sevage法、三氟乙酸法和三氟三氯乙烷法三种方法沉淀去除。小分子杂质可用一定截留范围的透析袋，利用透析法除去。得到透析袋内物质浓缩醇沉后的植物提取粗多糖。

本发明首次从黄精中分离纯化得到β-半乳聚糖HJW0S300-2，经过甲基化、¹³CNMR、¹HNMR分析可知，该多糖是一种新型的β-半乳聚糖，与已知报道的黄精均一多糖的结构不同。

由于各种因素，导致现代人皮肤不断出现各种问题，如皱纹，痤疮，皮肤黝黑，雀斑等。据了解，目前女性最关心、最热门的保养项目为“抗衰老保养”。皮肤，作为一个可见的外在器官，使得我们能意识到衰老的过程。因此，皮肤被认为是研究衰老最理想的器官模型。皮肤衰老的主要特征表现于干燥，色素沉着，气色不好，毛细管扩张，松弛，产生皱纹。皮肤衰老可分为内源性衰老和外源性衰老。根据自由基理论认为，衰老可由大量的活性氧自由基(ROS)所造成的结果。ROS可作为正常细胞代谢形成的副产物，也可以是由于环境因素如UV照射以及外界的一些刺激所产生。在正常生理条件下，细胞会自我形成复杂而精细的抵御系统抑制增加的氧化压力。但是，这种抵御系统会被一些内在或者外在的因素破坏，如衰老，疾病，紫外线照射，环境污染等。一旦这一平衡打破，细胞中的ROS水平会增加，从而引起氧化损伤。严重的氧化应激和生物分子的氧化损伤可导致细胞凋亡。

为了满足人们对抗衰老产品的需求，已经将抗坏血酸及其衍生物，原花青素，茶多酚、或具有抗氧化作用的物质用于美容或医学药物中，然而将它们加入化妆品时会可能带来皮肤安全性，配方和稳定性等问题，因此人们对抗衰老新化合物的开发还在不断进行中。

近年来随着对植物多糖研究的不断深入，人们发现许多中草药富含活性多糖成分，具有抗衰老，抗老年痴呆等多种作用，且都与其抗氧化作用密切相关。同时，多糖，做为一种活性绿色化合物，不会在体内堆积，能提高产品的安全性。多糖具有良好的亲水性，也使得其能更好地与化妆品其他成分配伍。

我们发现，用于改善皮肤，抗氧化作用的含有黄精80％醇提物的化妆品组合物是已知的(CN102209527A)，但是黄精多糖在皮肤抗衰老的应用还未见报导。同时关于黄精多糖对大鼠抗氧化作用(中国现代医生，49(5)：6-11，2011)，对血管内皮细胞损伤的保护作用(时珍国医国药，22(3)：623-624，2011)以及清除自由基作用(湖南中医药杂志，22(4)：90-96，2006)已有报导，但是关于黄精多糖对皮肤成纤维细胞的抗氧化作用还未知，而对于从黄精粗多糖中分离纯化出的确定结构的均一多糖单组分对皮肤成纤维细胞的抗氧化作用更为未知。本发明首次研究了黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2能有效抑制H2O2对成纤维细胞的氧化损伤引起的凋亡。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2保护细胞免受氧化损伤，在抗成纤维细胞凋亡方面的应用。本发明的黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2能保护成纤维细胞由H₂O₂的刺激引起的凋亡。通过MTT检测细胞活力以及从流式细胞仪检测活细胞百分数，都能说明HJW0S300-2能保护细胞免受损伤。Westernblot结果表明，HJW0S300-2能抑制H₂O₂引起的细胞内Caspase3的活化，进一步证实了该多糖具有抑制细胞凋亡作用，因而有望开发为抗衰老的功效添加剂并应用。

在本发明的一方面，提供了一种新型的黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2，该黄精β-半乳聚糖的结构式重复单元如下：

分子量范围在8-15KDa，其平均分子量Mw为10KDa。

本发明的另一方面涉及黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2的制备方法，该方法包括以下步骤：

a)脱脂，然后热水提取；

b)透析，然后脱蛋白，然后碱中和；

c)透析，然后醇沉；

d)收集沉淀，得到水提黄精粗多糖HJW；

e)水提黄精粗多糖用DEAE-纤维素阴离子交换柱层析进行分离，洗脱后透析，得到产物HJW0；

f)取步骤e)所得产物HJW0，上SephacrylS-300凝胶柱，洗脱后透析，得到最终产物HJW0S300-2。

在本发明的一个实施方式中，所述步骤a)包括取黄精生药材，用有机溶剂浸泡脱脂，然后用热水提取。在本发明的一个实施方式中，所述步骤b)包括合并提取液，浓缩，用流动水透析，透析内液浓缩后加入30％(w/v)的三氟乙酸水溶液脱蛋白，然后碱中和至pH值7.0-8.0。在本发明的一个实施方式中，所述步骤c)包括用流动水透析，透析内液浓缩后，加入2-5倍体积的95％乙醇进行醇沉。在本发明的一个实施方式中，所述步骤d)包括收集沉淀，用无水乙醇和丙酮洗涤，烘干，得到水提黄精粗多糖HJW。在本发明的一个实施方式中，所述步骤e)包括水提黄精粗多糖用DEAE-纤维素阴离子交换柱层析进行分离，用去离子水进行洗脱，洗脱液浓缩后用去离子水透析，透析液经减压浓缩并冷冻干燥，得到产物HJW0。在本发明的一个实施方式中，所述步骤f)包括取步骤e)所得产物HJW0，用氯化钠溶解，离心，上清液上SephacrylS-300凝胶柱，用0.2mol/L氯化钠溶液洗脱，洗脱液浓缩后用去离子水透析，透析液经减压浓缩并冷冻干燥，得到最终产物HJW0S300-2。

在本发明的一个优选实施方式中，使用的有机溶剂选自：乙醇，丙酮，氯仿。

在本发明的一个优选实施方式中，所述步骤a)使用的温度范围：60～100℃。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述步骤a)一直进行到采用硫酸-苯酚法检测无颜色。

在本发明的又一个优选实施方式中，所述步骤b)中加入三氟乙酸水溶液脱蛋白的操作是以1:1(v/v)的浓缩液:三氟乙酸水溶液加入的。

在本发明的另一方面，提供了一种黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2在抗衰老或防晒作用的化妆品中的应用，其中所述聚糖的结构式如下：

分子量范围在8-15KDa，其平均分子量Mw为10KDa。在一个实施方式中，所述聚糖的比旋光度为[α]²⁵ _D+42°，其中测定条件为25℃，浓度为5mg/ml的水溶液。

在本发明的另一方面，提供了一种黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2在抑制成纤维细胞凋亡中的应用，其中所述聚糖的结构式如下：

分子量范围在8-15KDa，其平均分子量Mw为10KDa。在一个实施方式中，所述聚糖的比旋光度为[α]²⁵ _D+42°，其中测定条件为25℃，浓度为0.5mg/ml的水溶液。

在本发明的另一方面，提了一种具有抗衰老或防晒作用的化妆品，其特征在于，所述化妆品包含本发明制备得到的黄精β-半乳聚糖以及化妆品领域可接受的赋形剂。在一个实施方式中，所述化妆品选自：洁面乳、化妆水、乳液、膏霜、啫喱、面膜。在一个优选的实施方式中，所述黄精β-半乳聚糖的使用量为0.0001％-10％(w/w)。优选的浓度范围为0.001％-5％(w/w)。更优选的浓度范围为0.005％-1％(w/w)。最优选的是黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2在0.005％-0.05％(w/w)的浓度范围。

在本发明的又一方面，提供了本发明的黄精β-半乳聚糖在制备具有抗衰老或防晒作用的化妆品中的应用。

附图说明

图1是本发明的黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2的红外图谱。

图2是本发明的黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2的HPLC图谱。

图3是本发明的黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2的气相图谱。

图4是本发明的黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2的¹HNMR图。

图5是本发明的黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2的¹³CNMR图。

图6是本发明的黄精β-半乳聚糖HJW的提取工艺流程图。

图7为黄精半乳聚糖HJW0S300-2对成纤维细胞活性的影响结果。

图8为黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2保护细胞的MTT结果。

图9为黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2抗凋亡作用的流式结果。

图10为黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2抑制Caspase-3蛋白活化的结果。

具体实施方式

本发明的发明人在经过了广泛而深入的研究之后发现了一种新的黄精β-半乳聚糖。

下面结合具体的实施例进一步阐述本发明。但是，应该明白，这些实施例仅用于说明本发明而不构成对本发明范围的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另有说明，所有的百分比和份数按重量计。

本发明实施例中使用的仪器设备如下：

SHB-III循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸易有限公司。

85-2型恒温磁力搅拌器：上海思乐仪器有限公司。

DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱：上海一恒科技有限公司。

N-1100D-WD真空旋转蒸发仪：日本EYELA公司。

UV260可见分光光度计：日本Shimadzu。

GL-21M低温高速离心机：上海离心机研究所有限公司。

Labconco大型冷冻干燥机：美国Labconco公司。

Edwards小型冷冻干燥机：英国Edwards公司。

全波长双板多功能仪(酶标仪)：美国BMGLabtech公司Novostar

细胞培养箱：美国ThermoserialII

流式细胞仪：美国BectonDicksonFACSCalibur

实施例1：黄精β-半乳聚糖的提取

取2.0kg黄精生药材(产地：安徽，购自上海华宇药业有限公司)，加有机溶剂(如乙醇，丙酮，氯仿等)，室温下浸泡，五天一次共两次，以除去脂溶性小分子。倾去上清液，固体静置于通风处晾干，然后用热水进行提取，每次加入约20-40L，提取时间为5-7小时，用苯酚-硫酸法检测提取液的糖含量，至糖反应不明显为止，共计提取6次。每次的提取液经过滤合并，加热浓缩至小体积，对流动水透析两天，透析内液浓缩后离心，1：1(v/v)加入30％的三氯乙酸溶液去除蛋白，在4℃条件下反应2-4小时，加碱(如NaOH，KOH，CH₃COONa等)溶液中和至pH值为7左右后扎袋对流动水透析48小时，透析内液浓缩后离心至小体积，上清液加入2-5倍体积的95％乙醇，静置过夜。离心收集沉淀，分别经无水乙醇和丙酮洗涤后，于40℃真空干燥，得水提粗多糖HJW为55g。

水提黄精粗多糖HJW用DEAE-纤维素阴离子交换柱(60cm×5cm)层析进行分离，用去离子水进行洗脱。水提粗多糖HJW(30g)上样，去离子水洗脱收集，经浓缩透析，冻干得白色絮状物HJW02.6g。取150mgHJW0，用2ml的0.2mol/L氯化钠溶解，离心，上清液上SephacrylS-300凝胶柱，洗脱液经去离子水透析，透析袋内液冷冻干燥后得到白色粉末，为HJW0S300-2。

物化性质测定：按照多糖的常规方法，以分子量已知的右旋糖酐T-700，T-110，T-80，T-40，T-11为标准，绘制分子量与出峰时间的标准曲线，使用AgilentHPGPC(Ultrahydragel500串联Ultrahydragel2000柱)测定HJWS300-2平均分子量为经HPLC检测为一均一多糖，分子量Mw为10KDa。使用旋光仪Perkin-Elmer241M测得HJW0S300-2比旋光度为[α]²⁵ _D+42°(c0.5mg/ml，H₂O)。

糖组成分析：取3mgHJW0S300-2样品，110℃下用2M三氟乙酸(TFA)水解2小时，水解产物冷却后于40℃减压浓缩蒸干，重复操作4-5次，以除尽未反应的TFA。然后用3ml去离子水溶解样品，加入20-30mg硼氢化钠，室温下还原3小时(间歇震荡)，然后用25％乙酸中和多余的硼氢化钠，至溶液不再产生气泡，pH应在4-5之间，加甲醇多次，减压蒸干，110℃加热10分钟，除去残留的水分，加3ml醋酐，密塞，100℃反应1小时，冷却，加甲苯4-5次(每次2-3ml)共蒸除去多余醋酐，直至完全干燥。所得的乙酰化产物用10ml氯仿萃取，经等体积蒸馏水洗涤4次，氯仿层用无水硫酸钠干燥，浓缩至0.1ml后用岛津GC-14B气相色谱仪分析。结果显示，对照标准样品，只有半乳糖的峰，所以该多糖为半乳聚糖。

化学结构鉴定：

核磁共振分析：室温下，取30mgHJW0S300-2，用500μl重水溶解后，用核磁共振仪BruckerAM-400获得其¹HNMR以及¹³CNMR谱图。

甲基化分析：取10mgHJW0S300-2样品于甲基化反应瓶中，加入2ml干燥DMSO，密塞，室温搅拌15min，使样品完全溶解，加入预先磨成粉状的NaOH约20mg，继续搅拌10min，然后冰浴约5min，在冰水浴下缓慢滴加约0.3ml碘甲烷(滴加速度：12滴/min)，然后在室温下继续搅拌反应30min。减压除去过量的碘甲烷，溶液对去离子水透析24h(2L×4)，透析内液减压浓缩至2～3ml，冷冻干燥，重复甲基化反应3～4次后，取少量样品进行IR光谱检测，如IR谱图中在3300cm^-1左右的O-H振动吸收峰消失，则表明该多糖样品已经完全甲基化，否则则表明样品未甲基化完全，还需要继续进行甲基化反应1～2次。

表1：HJW0S300-2的全甲基化后的气质连用(GC-MS)图谱分析结果

在糖化学领域中，即使重复单元一样，但由于分子量不一样，其空间结构会不同，这种空间结构的变化可以带来活性的显著变化。与已报道的黄精β-半乳聚糖(Carbohydratepolymers,2007,70:304-309)相比较，可以发现其重复单元也不一样，同时分子量相差一半以上。可认为本发明中的黄精β-半乳聚糖为一新型的多糖化合物。

实施例2：黄精β-半乳聚糖对成纤维细胞生长活性的影响

原代人成纤维细胞(购自Lifetechnologies)。在96孔板内加入含有人体成纤维细胞的培养基悬浮液200μl，细胞浓度为3000个。37℃5％CO₂培养箱孵育24小时，吸出培养基，分别加入含有姜黄素(做为抗氧化阳性药物，购自国药集团)以及HJWS300-2的培养基200μl，使其终浓度分别为5μM和0.01％，0.05％。培养基为含有10％胎牛血清(Gibico)、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的DMEM培养基。37℃5％CO₂培养箱培养72小时。去除培养基，加入配置好的10％MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，sigma公司)的培养基，37℃5％CO₂培养箱培养4小时。去除孔中的培养基和MTT，加入二甲亚砜(DMSO)150μL/孔，立即用酶标仪测定OD₅₇₀值。结果表明，HJWS300-2在浓度分别为0.01％以及0.05％的浓度下，均没有表现出细胞毒性也没有显示出促进细胞增殖的作用。

实施例3：黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2保护细胞的MTT筛选试验

在开发抗衰老产品过程中，有不少关于抗氧化的细胞模型和生化模型。UV以及H₂O₂为两种常用的自由基来源。据研究表明，H₂O₂与UV的作用具有相似性，同时H₂O₂易于操作。正因为如此，目前很多抗氧化实验都是用H₂O₂进行刺激来模拟UV对皮肤细胞的损伤。

在96孔板内加入含有人体成纤维细胞的培养基悬浮液200μl，细胞浓度为3000个。37℃5％CO₂培养箱孵育24小时，吸出培养基，分别加入含有姜黄素(国药集团，5g)以及HJWS300-2的培养基200μl，使其终浓度分别为5μM和0.01％，0.05％。培养基为含有10％胎牛血清(Gibico)、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的DMEM培养基。37℃5％CO₂培养箱培养72小时。去除培养基，加入含有终浓度为0.0035％H₂O₂的培养基，37℃5％CO₂培养箱培养2小时。将含有H₂O₂的培养基去除，加入配置好的10％MTT的培养基，37℃5％CO₂培养箱培养4小时。去除孔中的培养基和MTT，加入二甲亚砜(DMSO)150μL/孔，立即用酶标仪测定OD₅₇₀值。结果表明，H₂O₂处理后，细胞存活率下降了60.08％，而在H₂O₂处理前，分别预先用0.1mg/ml以及0.5mg/ml的HJW0S300-2进行孵育，可使得细胞存活率分别增加至51.40％和54.13％。

实施例4：利用流式细胞仪测定黄精β-半乳聚糖对成纤维细胞的抗凋亡作用

在6孔板内加入含有人体成纤维细胞的培养基悬浮液2ml，细胞浓度为1×10⁵个。37℃5％CO₂培养箱孵育24小时，吸出培养基，分别加入含有姜黄素以及HJWS300-2的培养基2ml，使其终浓度分别为5μM和0.05％。培养基为含有10％胎牛血清(Gibico)、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的DMEM培养基。37℃5％CO₂培养箱培养72小时。

去除培养基，加入含有终浓度为0.0035％H₂O₂的培养基，37℃5％CO₂培养箱培养2小时。收集各孔上清液于相应1.5ml离心管内，离心，5000rpm×1min。弃上清液，吸取各孔内剩余培养基于各自离心管内，加适量胰酶(300μL)于已吸净培养基的孔板内，消化。重新吸回离心管内的培养基于各孔内终止消化并吹打贴壁的细胞，离心，3000rpm×5min。弃上清，加1mlPBS(已预冷)于各离心管内，轻轻弹匀，离心，3000rpm×5min。选用AlexaFluor488AnnexinV/Dead细胞凋亡试剂盒(invitrogenV13241)进行实验。加入100μL1×膜联蛋白结合缓冲液于每1.5ml离心管中，再依次加入2μLAlexaFluor488AnnexinV(组分A)和1μL100μg/mlPI工作液。室温避光染色15min。每管加入400μL1×膜联蛋白结合缓冲液，轻轻摇匀，置于冰上。过滤细胞于流式管内，做好标记，准备上流式。

结果表明，H₂O₂处理后，正常细胞比例下降至76.06％，而H₂O₂处理前，预先用0.5mg/ml的HJW0S300-2进行孵育，可使得正常细胞比例分别增加至83.71％。

实施例5：Caspase-3活力检测

Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中Caspase-3为关键的执行分子，在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。正常情况下，Caspase-3以酶原(32KDa)的形式存在于胞浆内。在凋亡早期阶段，Caspase-3会被激活，活化的Caspase-3发生裂解，成为由两个亚基，分子量分别为17KDa和12KDa，最终导致细胞凋亡。

在6孔板内加入含有人体成纤维细胞的培养基悬浮液2ml，细胞浓度为1×10⁵个。37℃5％CO₂培养箱孵育24小时，吸出培养基，分别加入含有姜黄素以及HJWS300-2的培养基2ml，使其终浓度分别为5μM和0.05％。培养基为含有10％胎牛血清(Gibico)、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的DMEM培养基。37℃5％CO₂培养箱培养72小时。

配制12％浓度的SDS-PAGE电泳胶。将生物素化反应后的蛋白加入1×加载缓冲液，100℃条件下煮沸30min，冷却离心后准备上样。在Tris-甘氨酸电泳缓冲液[25mMTris，250mM甘氨酸(pH8.3),0.1％SDS]中以80V电压电泳30min之后换成120V电泳约60min。将胶取下，切去上层胶，置于预冷的转膜液中，浸泡大约30min。量取并剪下大小一致的醋酸纤维素膜(NC膜)一张以及Bio-Rad厚滤纸两张，从正极到负极依次放好滤纸、NC膜、SDS-PAGE胶、滤纸，并赶走气泡，盖好转膜仪，恒流条件下(2mA/cm2)，转膜60min。转膜完毕后，取下NC膜，丽春红S染色观察转膜效果，TBST洗去染液。用TBST+5％脱脂奶粉室温封闭1h。孵育Caspase-3(Cellsignaling公司)和β-肌动蛋白(β-actin)抗体4℃过夜，以β-肌动蛋白抗体做为对照。分别用兔抗和鼠抗的HRP(1：5000)做为第二抗体，孵育1h，结束后，TBST洗膜三次，每次10min。底物孵育5min，X胶片曝光和显影。

结果表明，H₂O₂处理组，激活Caspase-3，使之产生裂分。H₂O₂处理前，预先用0.5mg/ml的HJW0S300-2孵育，与单独用H₂O₂处理组相比较，可抑制Caspase-3的激活，使得裂分Caspase-3的表达下降。这一结果也证明了HJW0S300-2具有抑制细胞凋亡作用。

以下实施例说明了本发明可用于化妆品组合物。可以以常规方式制备这些组合物。它们适宜于皮肤抗衰老用途。

实施例6：一种含有黄精β-半乳聚糖活性物抗衰老膏霜的制备

成分	％浓度(重量)
		黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2	0.05
甘油硬脂酸酯柠檬酸酯	4.0
		甘油硬脂酸酯	2.0
十六十八醇	2.0
		矿物油	10.0
辛酸/癸酸甘油三酯	5.0
		1，3-丁二醇	7.0
防腐剂、香精	适量
		水	至100.0

制备方法：将水、丁二醇搅拌均匀加热至75℃-80℃，得到水相。将甘油硬脂酸酯柠檬酸酯、甘油硬脂酸酯、十六十八醇、辛酸/癸酸甘油三酯、矿物油加入油相锅中，加热至75℃-80℃，搅拌均匀，得到油相。将油相缓慢加入水相中，并不停搅拌，均匀后加入黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2活性物、防腐剂和香精，搅拌均匀，即得。

实施例7：一种含有黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2抗衰老护肤水的制备

成分	％浓度(重量)
		黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2	0.05
1，3-丁二醇	8.0
		透明质酸钠	0.1
防腐剂、水溶性香精	适量
		水	至100

制备方法：将黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2活性物溶于水和丁二醇中，搅拌溶解均匀后，加入防腐剂和香精，搅拌溶解均匀，即得。

Claims (9)

1.一种黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2在抗衰老或防晒作用的化妆品中的应用，其中所述聚糖的结构式如下：

分子量范围在8-15KDa，其平均分子量Mw为10KDa。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述聚糖的比旋光度为[α]²⁵ _D+42°，其中测定条件为25℃，浓度为0.5mg/ml的水溶液。

3.一种黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2在抑制成纤维细胞凋亡中的应用，其中所述聚糖的结构式如下：

分子量范围在8-15KDa，其平均分子量Mw为10KDa。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述聚糖的比旋光度为[α]²⁵ _D+42°，其中测定条件为25℃，浓度为0.5mg/ml的水溶液。

5.一种具有抗衰老或防晒作用的化妆品，其特征在于，所述化妆品包含黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2以及化妆品领域可接受的赋形剂，其中所述聚糖的结构式如下：

分子量范围在8-15KDa，其平均分子量Mw为10KDa。

6.如权利要求5所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品选自：洁面乳、化妆水、乳液、膏霜、啫喱、面膜。

7.如权利要求5述的化妆品，其特征在于，所述黄精β-半乳聚糖的使用量为0.0001％-10％(w/w)。

8.如权利要求5述的化妆品，其特征在于，所述黄精β-半乳聚糖的使用量为0.05％(w/w)。

9.一种黄精β-半乳聚糖HJW0S300-2在制备具有抗衰老或防晒作用的化妆品中的应用，其中所述聚糖的结构式如下：

分子量范围在8-15KDa，其平均分子量Mw为10KDa。