CN105210676A - 荷叶离褶伞菌株Finc-L6及其栽培方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食用菌技术领域，具体涉及荷叶离褶伞Finc-L6菌株及其栽培方法和应用。本发明提供的荷叶离褶伞菌株名称为Finc-L6，其是通过菌株Finc-LD-2和菌株Finc-LD-3作为亲本杂交，经系统选育获得，属于荷叶离褶伞(Lyophyllum？decastes)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC？No.11201，保藏日期为2015年8月13日。本发明提供的技术方案，填补了荷叶离褶伞杂交育种的空白，并且获得的新菌株具有栽培周期短出菇时间较为集中，单产高，朵型优美，保鲜期长，非常适合于大面积推广种植，市场前景广阔。
Description
技术领域
本发明属于食用菌技术领域，具体涉及荷叶离褶伞Finc-L6菌株及其栽培方法和应用。
背景技术
荷叶离褶伞(拉丁文名称Lyophyllumdecastes)，隶属担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymeno-myceyes)、伞菌目(Agaricales)、白蘑科(Tricholomataceae)、离褶伞属(Lyophyllum)，是国内外食用菌界竞相研究培育的优良食用菌。荷叶离褶伞菌肉肥厚细腻、清香扑鼻、口感脆滑、味道鲜美、营养丰富，并且在对人体细胞的修复作用和在治疗心血管性疾病、抗衰老等方面已显示出极大的优越性，是一种食药兼用的名贵食用菌，其食药用价值被越来越多的人所接受和认可，未来具有广阔的市场前景。
食用菌的常规育种方法主要包括选择育种、杂交育种、诱变育种和原生质体融合育种。选择育种是指人工定向选择自然条件下发生的有益变异，通过长期去劣存优逐步选育出新品种的方法。杂交育种是指种内不同品种间进行杂交，使遗传基因重新组合，并在杂交后代中筛选出优良新品种的方法。杂交育种的方向性和目的性都比较明确，与选择育种相比，育种周期短并且收效显著。
迄今为止，荷叶离褶伞新品种主要以野生驯化即选择育种方法获得，但是，由于过度的采摘，野生的荷叶离褶伞已经少之又少，选择育种愈加困难。而目前的荷叶离褶伞品种单产还较低，另外，如果希望获得较长的保鲜期则需要大大延长培养周期，对于工业化生产市场化供应来说是一大缺陷。
发明内容
本发明提供了一种荷叶离褶伞菌株Finc-L6及其栽培方法和应用，用以解决目前菌株单产低，保鲜期短，无法满足工厂化栽培及大批量市场供应的要求。
本发明提供的荷叶离褶伞菌株名称为Finc-L6，其是通过菌株Finc-LD-2和菌株Finc-LD-3作为亲本杂交，经系统选育获得，属于荷叶离褶伞(Lyophyllumdecastes)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.11201，保藏日期为2015年8月13日。
其中荷叶离褶伞菌株Finc-LD-2已在中国专利CN103202175A中公开，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉市武汉大学，保藏编号为CCTCCNo.M2013006。
荷叶离褶伞菌株Finc-LD-3已在中国专利CN103210849A中公开，保藏于保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉市武汉大学，保藏编号为CCTCCNo.M2013007。
培养所述荷叶离褶伞Finc-L6得到的孢子也属于本发明的保护范围。
所述荷叶离褶伞Finc-L6作为亲本进行杂交育种中的应用也属于本发明的保护范围。
培养所述荷叶离褶伞Finc-L6得到的菌丝体也属于本发明的保护范围。
栽培所述荷叶离褶伞Finc-L6得到的子实体也属于本发明的保护范围。
本发明还提供了所述荷叶离褶伞Finc-L6的子实体的一种栽培方法，包括如下步骤：
1)接种与发菌：将所述荷叶离褶伞Finc-L6的栽培种接入栽培种培养基，在温度23～28℃，空气相对湿度75％，二氧化碳浓度2000～3500ppm条件下培养50～55天；
2)子实体原基形成：出菇温度设定为15℃～18℃，空气相对湿度93％～100％，二氧化碳浓度1000～2000ppm，前6天，光照强度10～50Lux，之后光照强度200～300Lux，每天间隙式开启层架灯刺激出菇，菇盖接近成熟时采收。
优选地是，步骤1)中，所述栽培种培养基按重量百分比计，包括34-36％的栽培种培养料和64～66％的水，所述栽培种培养料包括木屑20％、玉米芯15％、森林腐殖质40％、米糠10％、麸皮5％和玉米粉10％。
本发明所述荷叶离褶伞Finc-L6的形态特征如下：
菌丝：白色，气生菌丝发达，菌丝致密，菌落边缘圆整；
菌盖：直径为3±1.8cm，颜色为黄褐色，菌盖边缘有一圈灰白色圆圈状环纹，断面呈圆山型，菌盖表面有细小绒毛，质地脆嫩；
菌褶：乳白色、笔直排列；孢子印颜色为白色；
菌柄：长度为6-15cm，中粗、菌柄上部浅黄色，下部乳白色，靠近菌盖处的菌柄内部致密紧实，远离菌盖处菌柄中空，菌柄有鳞片，主要着生在靠近菌盖的中上部，呈星点状分布，菌柄簇生。
通过对其子实体、菌丝体及孢子形态特征的观察，判断该菌株的生物学分类命名。
所述荷叶离褶伞Finc-L6的子实体在食品加工中的应用也属于本发明的保护范围。
与现有技术相比，本发明荷叶离褶伞菌株Finc-L6具有以下优点：
(1)子实体培养和栽培周期短，单产高，大大提高了生产效率，降低了生产成本；
(2)单株之间以及单株内单根子实体之间的外观均一度高，有利于机械化和自动化作业；
(3)有效茎重量比例高达95％以上，大幅提高了产品的可食率；
(4)采收周期集中，适宜大面积推广种植；
(5)保鲜期长，有利于存储；
(6)目前荷叶离褶伞种植资源稀缺，本发明提供的菌株综合特性优良，可以作为重要亲本从而培育出更多性能优良的菌株，丰富荷叶离褶伞种类。
综上所述，本发明提供的技术方案，填补了荷叶离褶伞杂交育种的空白，并且获得的新菌株具有栽培周期短出菇时间较为集中，单产高，朵型优美，保鲜期长，非常适合于大面积推广种植，市场前景广阔。
附图说明
图1是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L6和Finc-LD-1的拮抗试验正面图；
图2是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L6和Finc-LD-1的拮抗试验背面图；
图3是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L6和Finc-LD-2的拮抗试验正面图；
图4是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L6和Finc-LD-2的拮抗试验背面图；
图5是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L6和Finc-LD-3的拮抗试验正面图；
图6是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L6和Finc-LD-3的拮抗试验背面图；
图7是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L6和Finc-LD-4的拮抗试验正面图；
图8是实施例2中荷叶离褶伞Finc-L6和Finc-LD-4的拮抗试验背面图；
图9本发明所述荷叶离褶伞Finc-L6栽培的子实体照片；
图10本发明所述荷叶离褶伞Finc-LD-1栽培的子实体照片；
图11本发明所述荷叶离褶伞Finc-LD-2栽培的子实体照片；
图12本发明所述荷叶离褶伞Finc-LD-3栽培的子实体照片；
图13本发明所述荷叶离褶伞Finc-LD-4栽培的子实体照片。
图中所示：
1-Finc-L6、2-Finc-LD-1、3-Finc-LD-2，4-Finc-LD-3，5-Finc-LD-4。
具体实施方式
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
以下实施例中的Finc-LD-1、Finc-LD-2、Finc-LD-3和Finc-LD-4菌株是上海丰科生物科技股份有限公司自主驯化的菌株,保藏于中国典型培养物保藏中心，Finc-LD-1菌株保藏号CCTCCNO:M2013005；Finc-LD-2菌株保藏号CCTCCNO:M2013006；Finc-LD-3菌株保藏号CCTCCNO:M2013007；Finc-LD-4菌株保藏号CCTCCNO:M2013008。
下述实施例所用各种培养基的配方如下：
母种培养基(PDA培养基)：每1L培养基用马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g；
原种培养基：按重量百分比计包括38-40％的原种培养料和60％～62％的水，所述原种培养料按重量百分比计包括木屑50％、米糠25％、麸皮15％和玉米粉10％。
栽培种培养基：按重量百分比计包括34-36％的栽培种培养料和64％～66％的水，所述栽培种培养料按重量百分比计包括木屑20％、玉米芯15％、森林腐殖质40％、米糠10％、麸皮5％和玉米粉10％。
实施例1杂交获得Finc-L6
采用杂交育种方法获取荷叶离褶伞菌株Finc-L6。
具体步骤如下：
1)选择亲本菌株：选取由上海丰科生物科技股份有限公司通过野生驯化的菌株Finc-LD-2和Finc-LD-3为亲本；
2)配制母种培养基、原种培养基和栽培种培养基：各培养基配方已经给出，在此不再赘述；
3)担孢子的分离：将Finc-LD-2和Finc-LD-3的菌盖分别置于培养皿中，24小时后，收集落在培养皿中的孢子，在无菌水中稀释成适当的浓度，并涂布在PDA培养基平板上。在23℃下培养25天，待孢子萌发后用接种环分别接种到PDA斜面试管上。将这些试管在23℃下培养25天，然后从所述的试管中分离出菌丝，并在显微镜下观察锁状联合的形成。将没有锁状联合的菌株储存在冰箱中备用；
4)杂交：将一个单核体和另一个单核体彼此相隔2.5cm接种到新鲜的马铃薯琼脂板中，然后在恒温培养箱中23℃下培养20天。分离菌丝并通过显微镜观察以确定锁状联合的形成，选择具有锁状联合的菌株。通过所述单单杂交的方法获得杂合子300个；
5)把获得的杂合子根据常规的方法进行栽培试验和筛选；
6)获得目标菌株：通过系统筛选，从300个杂合子中，获得一个荷叶离褶伞菌株，培养及栽培周期短，单产高，朵型优美，瘤盖菇出现率低，可食率高，保鲜期长，该菌株被命名为Finc-L6。
实施例2拮抗实验
本发明Finc-L6和2个亲本菌株Finc-LD-2、Finc-LD-3以及2株对照菌株Finc-LD-3，Finc-LD-4为试验材料，所用培养基为PDA培养基。
Finc-L6和Finc-LD-1，Finc-LD-2，Finc-LD-3，Finc-LD-4在平板培养基上分别对峙接种和培养，接种点相距2.5cm，23℃恒温培养25天，本试验结果请参阅表1。
表1不同荷叶离褶伞菌株间拮抗试验
| 品种 | Finc-LD-1 | Finc-LD-2 | Finc-LD-3 | Finc-LD-4 |
| Finc-L6 | 拮抗 | 拮抗 | 拮抗 | 拮抗 |
如图1-8所示，在对峙培养菌落交界处，Finc-L6和Finc-LD-1，Finc-LD-2，Finc-LD-3，Finc-LD-4之间有明显拮抗线，说明Finc-L6是与Finc-LD-1，Finc-LD-2，Finc-LD-3，Finc-LD-4不同的荷叶离褶伞菌株。
实施例3栽培实验
本发明荷叶离褶伞菌株Finc-L6、与亲本菌株Finc-LD-2和Finc-LD-3，以及现有品种Finc-LD-1，Finc-LD-4分别进行培养和栽培，每个菌株栽培500瓶，然后对小批量栽培的结果进行汇总比较，总结出本发明菌株Finc-L6的优势和特点。
本实施例培养基参加栽培种培养基，不再赘述。
栽培瓶容积：850cc，瓶口直径58mm。
培养：温度23～28℃，空气相对湿度75％，二氧化碳浓度2000～3500ppm；
栽培：出菇温度设定为15℃～18℃，空气相对湿度93％～100％，二氧化碳浓度1000～2000ppm，前6天，光照强度10～50Lux，之后光照强度200～300Lux，每天间隙式开启层架灯刺激出菇，菇盖接近成熟时采收。
表2汇总比较以上5种荷叶离褶伞菌株栽培试验结果，具体包括培养周期，栽培周期，单产、有效菇蕾数以及有效茎重量百分比，其中有效菇蕾数是指菌盖直径大于1cm，鲜重大于2g的单根子实体的数量，有效茎重量百分比是指菌盖直径大于1cm，鲜重大于2g的单根子实体的重量之和占单株子实体总重量的比例。
表2荷叶离褶伞菌株栽培试验结果
Finc-L6培养周期为50-55天，栽培周期为26天，不仅较其他菌株时间缩短而且采收周期非常集中，利于大面积推广栽培；另外，平均单产更是高达165g/瓶，有效菇蕾数可达32根，如图9所示，子实体朵型紧凑，商品性状好，可食用性高，利于包装，解决了目前菌株外形差，良品率低导致的无法工厂化生产的问题。
Finc-LD-1培养周期长达90-110天，栽培周期也需要30天，并且平均单产也较低，如图10所示，菌柄粗壮，有效菇蕾数及有效茎重量百分比均较低。
Finc-LD-2的培养周期50-70天，分布较宽，不适于工业化操作，平均单产也较低，如图11所示，畸形菇较多，商品性状差。
Finc-LD-3的培养周期分布也非常宽，同样不适于工业化操作，栽培周期长，生产效率较低。虽然平均单产可达142g/瓶，仍然无法媲美平均单产172g/瓶的Finc-L6，如图12所示，菌柄粗壮，有效菇蕾数低，商品性状差。
Finc-LD-4的培养周期分布同样很宽，栽培周期长，如图13所示，容易开伞，菇盖外翻，商品性状差。
综上所述，通过Finc-L6与Finc-LD-1，Finc-LD-2，Finc-LD-3，Finc-LD-4对比可知，Finc-L6的培养周期和栽培周期都有所缩短，采收周期非常集中，且平均单产都高于Finc-LD-1、Finc-LD-2、Finc-LD-3和Finc-LD-4，有效菇蕾数明显多于Finc-LD-1、Finc-LD-2、Finc-LD-3和Finc-LD-4，有效茎重量百分比更是超过95％，以上特性都充分说明Finc-L6不论是工业化生产还是在商品化、可食用性方面均表现优异。
实施例4菌丝生长的温度梯度试验
(1)本实施例以培养温度为标准，设计4组实验，每组包括Finc-L6，Finc-LD-1，Finc-LD-2，Finc-LD-3，Finc-LD-4共5个菌株，每个菌株重复5次。从Finc-L6，Finc-LD-1，Finc-LD-2，Finc-LD-3，Finc-LD-4马铃薯琼脂板板上分别切取直径为5.0mm的接种块接种到PDA培养基上，分别于18℃、23℃、28℃和33℃培养15天，试验结果见表3。
表3温度对不同荷叶离褶伞菌丝生长速率的影响
结果表明：
1)Finc-L6菌丝生长速度与Finc-LD-1,Finc-LD-2，Finc-LD-3，Finc-LD-4相比较快；
2)Finc-L6的菌丝在23℃生长速度最快，达到4.1961mm/d，当升高到28℃，则生长速度逐渐下降为3.7922mm/d，当温度降低至18℃时，菌丝生长速度大幅下降为2.0255，当33℃时，5个菌株均不能生长，由此可见，荷叶离褶伞Finc-L6菌株的适宜培养温度为23℃～28℃。
实施例5形态特征和生物学特性
形态特征：
Finc-L6，Finc-LD-1，Finc-LD-2，Finc-LD-3，Finc-LD-4具体形态特征的差异请参阅表4。
表4不同菌株形态特征对比
Finc-L6的形态特征：菌丝：白色，气生菌丝发达，菌丝密度中等，菌落边缘圆整；菌盖：直径为3±1.8cm，颜色为黄褐色，菌盖边缘有一圈灰白色圆圈状环纹，断面呈圆山型，菌盖表面有细小绒毛，质地脆嫩；菌褶：乳白色、笔直排列；孢子印颜色为白色；菌柄：长度为6～15cm，中粗、菌柄上部浅黄色，下部乳白色，靠近菌盖处的菌柄内部致密紧实，远离菌盖处菌柄中空，菌柄有鳞片，鳞片主要着生在靠近菌盖的中上部，分布不规律，有效茎重量比例达95％以上。请参阅图9。
Finc-LD-1的形态特征：菌丝：白色，气生菌丝浓密；菌盖：直径为4±2cm，颜色灰白色至灰黄色，呈圆形钢盔状，菌盖表面无花纹，盖缘平滑无鳞片，质地强韧，弹性好，不易碎；菌褶：浅黄色，菌褶笔直排列；菌柄：长度为6～15cm，颜色洁白，菌柄中心有细长空腔，菌柄基部附着少量白色气生菌丝，菌柄表面四周分布花瓣状鳞片，菌柄簇生，基部无接合现象，有效茎重量比例85％以下，请参阅图10。
Finc-LD-2形态特征:菌丝：气生菌丝浓密；菌盖：直径为3±2cm，颜色呈浅黄色，呈圆形，顶部平整，菌盖外围呈条状环纹，盖缘有微小锯齿，菌盖表面无鳞片，质地脆嫩、易碎；菌褶：浅黄色，菌褶断面波状卷曲；菌柄：长度为6～15cm，菌柄上部浅黄，下部洁白，靠近菌盖处的菌柄内部致密紧实，远离菌盖处菌柄中空，菌柄与菌盖结合部位存在白色气生菌丝，菌柄有鳞片，鳞片主要着生在靠近菌盖的中上部，分布不规律，菌柄簇生，基部有接合现象，有效茎重量比例85％以下，请参阅图11。
Finc-LD-3形态特征：菌丝：气生菌丝浓密；菌盖：直径为3±2cm，颜色呈浅黄色，圆形，菌盖表面有细小绒毛，边缘有条状环纹，质地脆嫩、易碎；菌褶：浅黄色，菌褶断面波状卷曲；菌柄：长度为6～15cm，菌柄上部浅黄，下部洁白，靠近菌盖处的菌柄内部致密紧实，远离菌盖处菌柄中空，菌柄有鳞片，鳞片主要着生在靠近菌盖的中上部，分布不规律，菌柄簇生。有效茎重量比例85％以上，请参阅图12。
Finc-LD-4形态特征：菌丝：气生菌丝浓密；菌盖：直径为3±2cm，颜色呈浅黄色，圆形，菌盖表面有细小绒毛，菌盖扁平，极易开伞呈荷叶状，质地脆嫩、易碎；菌褶：浅黄色，菌褶断面波状卷曲；菌柄：长度为6～15cm，菌柄上部浅黄，下部洁白，靠近菌盖处的菌柄内部致密，紧实，远离菌盖处菌柄中空，菌柄有鳞片，鳞片主要着生在靠近菌盖的中上部，分布不规律，菌柄簇生，请参阅图13。
生物学特征：
菌丝体培养温度23℃～28℃，湿度75％，CO2浓度2000ppm～3500ppm，培养周期50d～60d。适宜出菇温度为15℃～18℃，湿度93％～100％，CO2浓度1000～2000ppm，前6天光照强度50Lux～100Lux，之后光照强度200Lux～300Lux，每天间隙式开启层架灯刺激出菇，栽培周期约26d。
菌丝体的致死温度为45℃30min，担孢子的致死温度为50℃15min。
实施例6保鲜试验
本实施例开展荷叶离褶伞菌株Finc-L6与亲本菌株Finc-LD-2和Finc-LD-3，以及现有品种Finc-LD-1，Finc-LD-4保鲜试验。
Finc-L6、Finc-LD-2、Finc-LD-3，以及现有品种Finc-LD-1，Finc-LD-4采收后随即抽取20包，置于冷库(3℃～8℃)保藏至60天，有一株子实体开始霉腐，即为开始变质。不同品种在(3℃～8℃)的保质期请参阅表5。
表5保质期实验结果汇总
| 对比项目 | Finc-L6 | Finc-LD-1 | Finc-LD-2 | Finc-LD-3 | Finc-LD-4 |
| 保质期(天) | 46 | 41 | 28 | 26 | 28 |
由表5可知，Finc-L6开始变质时间为46天，Finc-LD-1保质期为41天，Finc-LD-2，Finc-LD-4保质期为28天，Finc-LD-3的保质期最短为28天。其中仅Finc-LD-1的保质期可与Finc-L6相当，但其培养周期长达90-110天，远远超过Finc-L6的50-55天的培养周期，其他几种菌株的的保质期则远远低于Finc-L6，所以，Finc-L6的综合性能最为优越。
以上描述仅为本发明的实施例，谅能理解，在不偏离本发明构思的前提下，对本发明的简单修改和替换皆应包含在本发明的技术构思之内。
Claims (8)
1.一种荷叶离褶伞菌株，其特征在于，名称为Finc-L6，属于荷叶离褶伞(Lyophyllumdecastes)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.11201，保藏日期为2015年8月13日。
2.一种荷叶离褶伞孢子，其特征在于，为培养权利要求1所述Finc-L6得到的孢子。
3.权利要求1所述Finc-L6的应用，其特征在于，所述Finc-L6作为亲本进行杂交育种。
4.一种荷叶离褶伞菌丝体，其特征在于，为培养权利要求1所述Finc-L6得到的菌丝体。
5.一种荷叶离褶伞子实体，其特征在于，为栽培权利要求1所述Finc-L6得到的子实体。
6.权利要求5所述荷叶离褶伞子实体的栽培方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)接种与发菌：将所述荷叶离褶伞Finc-L6的栽培种接入栽培种培养基，在温度23～28℃，空气相对湿度75％，二氧化碳浓度2000～3500ppm条件下培养50～55天；
2)子实体原基形成：出菇温度设定为15℃～18℃，空气相对湿度93％～100％，二氧化碳浓度1000～2000ppm，前6天，光照强度10～50Lux，之后光照强度200～300Lux，每天间隙式开启层架灯刺激出菇，菇盖接近成熟时采收。
7.根据权利要求6所述栽培方法，其特征在于，步骤1)中，所述栽培种培养基按重量百分比计，包括34-36％的栽培种培养料和64～66％的水，所述栽培种培养料包括木屑20％、玉米芯15％、森林腐殖质40％、米糠10％、麸皮5％和玉米粉10％。
8.权利要求5所述Finc-L6子实体在食品加工中的应用。
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Denomination of invention: Lyophyllum decastes strain Finc-L6 and cultivation method and application thereof Effective date of registration: 20190327 Granted publication date: 20180302 Pledgee: Qingdao high technology financing Company limited by guarantee Pledgor: Shanghai Finc Bio-tech Inc.|Qingdao Fengke Biotechnology Co., Ltd.|HEBEI FENGKE BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY CO., LTD. Registration number: 2019370010031 |
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