CN105203696A - 阿胶药材及其水提取物的多展开剂快速薄层鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种阿胶药材及其水提取物的多展开剂快速薄层鉴别方法。其特征在于:阿胶药材及其水提取物直接鉴别其原有成分的鉴别方法。在三种展开剂中,用紫外光灯365nm配合10%硫酸乙醇溶液显色后透过灯光检视的双重条件,检视了至少5种不同的原有化学成分。方法简便、快捷,样品与对照药材,只需70%甲醇超声,滤液或上清液点样,展开,显色,检视,即可。前处理时间20分钟,处理溶剂7ml,展开时间0.5小时。其效率之高、成本之低、易于推广应用的普及性,是目前已报道方法都无法实现的。结束了阿胶薄层鉴别一直是鉴别水解后氨基酸产物的历史,使阿胶药材及其水提取物的检测指标与临床所服用化学成分一致。
Description
技术领域
本发明涉及一种阿胶药材及其水提取物的多展开剂快速薄层鉴别方法。
背景技术
阿胶是由动物驴的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶,为中国药典历版所收载品种,具补血滋阴,润燥,止血的功效,用于治疗血虚萎黄、眩晕心悸、肌萎无力、心烦不眠、虚风内动、肺燥咳嗽、咯血吐血、尿血便血、崩漏、妇女月经不调、妊娠胎漏等症。主含骨原胶,水解后为多肽与多种氨基酸,具有滋阴补血功效,是一种临床上的常用药材。
从中国药典2005年版开始收入薄层鉴别,是以甘氨酸对照品为对照,苯酚-0.5%硼砂溶液(4∶1)为展开剂,茚三酮试液为显色剂。其供试品溶液制备,是将阿胶,用盐酸水解为氨基酸后,再进行薄层鉴别,操作起来很不方便。曾有人因操作上的难度,以商榷的方式发表论文,谈到薄层鉴别的3大缺陷,1.展开剂配制困难,因为苯酚呈固体状态,加热取用很不方便,加之硼砂不溶于苯酚中。2.薄层展开时间与薄板晾干时间太长,展开要7.5-8小时,晾干要70-80分钟。3.显色时间也长,要30-40分钟。
或许是因为上述原因,中国药典2015年版进行了鉴别修订,修订为采用液质联用鉴别阿胶,样品前处理仍然很麻烦,要加胰蛋白酶酶解阿胶后,以梯度洗脱方式,质谱检测器,电喷雾正离子模式,进行多反应检测,选择质荷比(m/z)539.8(双电荷)→612.4和m/z539.8(双电荷)→923.8作为检测离子对。以规定的离子对在提取的供试品离子流色谱中,应同时呈现与对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。
仪器昂贵,操作复杂,一台液质联用仪少说也要100多万元。试想,有多少阿胶生产企业会为了一项定性鉴别,购置一台液质联用议呢?方法又如何普及推广应用呢?只能批批委托有条件的单位代检,方法的普及推广应用受到了很大程度的限制。
查阅文献得知,目前都是检测的水解之后的氨基酸,展开剂多是正丁醇系列,不但有严重的刺激味。而且展开时间太长,溶剂不易挥干。还未发现阿胶简便、快捷、鉴别其原有成分的薄层鉴别方法报道。
为此,按有关薄层鉴别要尽量鉴别药材或制剂原成分的原则,对阿胶及其水提取物的原有化学成分进行了专题薄层鉴别研究。获得以三种不同展开剂,鉴别阿胶原有化学成分的快速薄层鉴别方法。因为展开剂不同,溶解、分离化学成分的性能不一样,得到的薄层图谱也会不同。不同的薄层图谱,提供了不同组方的阿胶制剂,为排除干扰成分,获得阿胶原有成分检测的快速鉴别方法,提供了可供选择的图谱、展开剂与操作手段。
阿胶药材水提取物或配方颗粒的制备方法取阿胶,适当粉碎,称取14000-15000g,分别加水8倍量,煎煮提取二次,每次1-2小时,滤过,滤液70℃减压浓缩,浓缩液喷雾干燥或70℃减压干燥,得水提取物干膏粉;或加糊精适量,混匀,制粒,分别制成1000g,分装,得水提取物配方颗粒。
发明内容
本发明就是针对阿胶目前薄层鉴别都是检测水解后的氨基酸成分,且方法与展开剂配制,都存在一定的不方便性。中国药典2015年版新修订的液质联用法,又涉及到仪器昂贵,在一般的制药企业很难拥有,无法推广应用,且被检测成分还是水解后的氨基酸,检测指标与临床所用阿胶原有成分不一致,难以真实反映阿胶质量。为此,经过大量的试验探讨研究,发明了样品与对照药材简便、快捷,只需70%甲醇超声,滤液或上清液点样,展开,显色,检视阿胶原有成分的多展开剂快速薄层鉴别方法。在三种展开剂中,其紫外光灯365nm下的荧光斑点,即,图1、3、5的荧光斑点,不是同一种成分,图1的荧光斑点,遇10%硫酸乙醇溶液也呈现颜色,图5的2个荧光斑点,遇10%硫酸乙醇溶液是不呈现颜色的。但透过灯光检视的含量最高的棕褐色主斑点在三种展开剂中都是同一成分,即,图2、4、6的棕褐色斑点,是随着展开剂的极性大小,Rf值由小变大。三种展开剂至少可以检出5种原有成分。为不同组方的阿胶制剂,提供了选择排除干扰,获得阿胶原有成分检测的快速鉴别方法。
本发明解决其技术问题所采用的方案为:
(1)以体积比5∶3∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂
取阿胶对照药材及其水提取物各0.5g,分别加70%甲醇2ml与5ml,提取物超声处理10分钟,滤过,滤液作为供试品溶液;药材超声处理20分钟,取上清液作为对照药材溶液;吸取供试品溶液与对照药材溶液各3~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比5∶3∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂,展开,取出,热风吹干,置紫外光灯365nm下检测,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色荧光主斑点;喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,透过灯光检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色主斑点;
(2)以体积比1∶2∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂
吸取鉴别(1)项下供试品溶液与对照品溶液各3~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比1∶2∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂,展开,取出,热风吹干,置紫外光灯365nm下检测,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色荧光主斑点;喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,透过灯光检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色主斑点;
(3)以体积比5∶8∶2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-水-浓氨为展开剂
吸取鉴别(1)项下供试品溶液与对照品溶液各3~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比5∶8∶2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-水-浓氨为展开剂,展开,取出,热风吹干,置紫外光灯365nm下检测,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色荧光主斑点;喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,透过灯光检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色主斑点。
本发明的原理如下:
依据阿胶中一定存在不需要水解的各种原有化学成分,根据这些化学成分的结构与性质,按照相似相容的提取原则,采用适宜的提取溶剂,简便、快捷地得到供试品与对照药材溶液。再采用不同组合、比例、极性的展开剂,进行展开,各种化学成分就会随着不同的展开剂,依据吸附、解吸附、再吸附、解吸附的能力不同,而在各自的展开剂中呈现出Rf值不同的各种信息斑点,得以鉴别确认。
本发明的创新点及有益效果如下:
1.阿胶药材与其水提取物,不经酸水解,直接鉴别其原有成分的鉴别方法为首次报道。结束了阿胶薄层鉴别一直是鉴别水解后的氨基酸产物的历史,使检测指标与临床所服用的阿胶固有成分一致,利于薄层鉴别成分与功效挂钩,真实地反映阿胶质量。且方法简便、快捷,样品与对照药材只需70%甲醇超声,滤液或上清液点样,展开,显色,检视,即可。前处理时间只需20分钟,前处理溶剂仅7ml,展开时间0.5小时,即在1小时之内完成鉴别,其效率之高、成本之低、易于推广应用的普及性,是目前已报道方法都无法实现的。
2.在三种展开剂中,用紫外光灯365nm配合10%硫酸乙醇溶液显色后透过灯光检视的检视条件,至少检视了5种不同的化学成分,虽然提取物的含量远低于对照药材,但被检出的斑点数目和图谱一致,进一步佐证了提取过程的化学成分流失以及本薄层鉴别对制备工艺的检测意义。为不同组方的阿胶制剂,提供了选择排除干扰,获得阿胶原有成分检测的快速鉴别方法。
3.本鉴别方法与已报道方法的不同之处还在于:本鉴别的展开剂不再是文献报道的展开极缓慢的正丁醇体系,也不是药典的苯酚和硼酸溶液,不但配制方便,而且展开速度快,溶剂挥散快,只需20-30分钟,即可完成一次薄层鉴别。
4.显色剂不再是茚三酮试液,更换为最常用的10%硫酸乙醇溶液,使显色时间缩短,只需数分钟,即呈现出清晰的斑点。
附图说明
图1为体积比5∶3∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂的阿胶药材与水提取物,在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图2为体积比5∶3∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂的阿胶药材与水提取物,显色后透过灯光检视的薄层TLC图。
图3为体积比1∶2∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂的阿胶药材与水提取物,在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图4为体积比1∶2∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂的阿胶药材与水提取物,显色后透过灯光检视的薄层TLC图。
图5体积比5∶8∶2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-水-浓氨为展开剂的阿胶药材与水提取物,在紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图6为体积比5∶8∶2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-水-浓氨为展开剂的阿胶药材与水提取物,显色后透过灯光检视的薄层TLC图。
图1、2为同一块薄层板,不同检视条件下的薄层色谱图,其中,1.2.3为阿胶药材;4.5.6为阿胶水提取物。
图3、4为同一块薄层板,不同检视条件下的薄层色谱图,其中,1.2.3.5.6.7为阿胶水提取物;4.为阿胶对照药材
图5、6为同一块薄层板,不同检视条件下的薄层色谱图,其中,1.2.3为阿胶药材;4.5.6为阿胶水提取物。
本发明具体实施方式如下:
(1)以体积比5∶3∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂
取阿胶对照药材及其水提取物各0.5g,分别加70%甲醇2ml与5ml,提取物超声处理10分钟,滤过,滤液作为供试品溶液;药材超声处理20分钟,取上清液作为对照药材溶液;吸取供试品溶液与对照品溶液各3~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比5∶3∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂,展开,取出,热风吹干,置紫外光灯365nm下检测,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色荧光主斑点;喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,透过灯光检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色主斑点;
(2)以体积比1∶2∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂
吸取鉴别(1)项下供试品溶液与对照品溶液各3~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比1∶2∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂,展开,取出,热风吹干,置紫外光灯365nm下检测,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色荧光主斑点;喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,透过灯光检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色主斑点;
(3)以体积比5∶8∶2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-水-浓氨为展开剂
吸取鉴别(1)项下供试品溶液与对照品溶液各3~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比5∶8∶2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-水-浓氨为展开剂,展开,取出,热风吹干,置紫外光灯365nm下检测,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色荧光主斑点;喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,透过灯光检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色主斑点。
Claims (3)
1.本发明涉及一种阿胶药材及其水提取物的多展开剂快速薄层鉴别方法,其特征在于:
(1)以体积比5∶3∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂
取阿胶对照药材及其水提取物各0.5g,分别加70%甲醇2ml与5ml,提取物超声处理10分钟,滤过,滤液作为供试品溶液;药材超声处理20分钟,取上清液作为对照药材溶液;吸取供试品溶液与对照药材溶液各3~5μl,吸取供试品溶液与对照品溶液各3~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比5∶3∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂,展开,取出,热风吹干,置紫外光灯365nm下检测,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色荧光主斑点;喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,透过灯光检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色主斑点;
(2)以体积比1∶2∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂
吸取鉴别(1)项下供试品溶液与对照品溶液各3~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比1∶2∶5∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂,展开,取出,热风吹干,置紫外光灯365nm下检测,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色荧光主斑点;喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,透过灯光检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色主斑点;
(3)以体积比5∶8∶2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-水-浓氨为展开剂
吸取鉴别(1)项下供试品溶液与对照品溶液各3~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比5∶8∶2∶0.2的乙酸乙酯-甲醇-水-浓氨为展开剂,展开,取出,热风吹干,置紫外光灯365nm下检测,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色荧光主斑点;喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,透过灯光检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色主斑点。
2.根据权利要求1所述的一种阿胶药材及其水提取物的多展开剂快速薄层鉴别方法,其特征在于所述的阿胶水提取物每1g相当原生药材14~15g。
3.根据权利要求1所述的一种阿胶药材及其水提取物的多展开剂快速薄层鉴别方法,其特征在于所述水提取物也可以是其水提取的配方颗粒。
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