CN105191831B - 一种鸡胚蛋性别鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鸡胚蛋性别鉴定方法，基于尿囊液中雌激素含量对鸡胚蛋性别进行鉴定，包括如下步骤：步骤1，鸡胚蛋尿囊液采集；步骤2，尿囊液的预处理；步骤3，尿囊液中雌激素浓度检测；步骤4，根据尿囊液中雌激素浓度判断鸡胚蛋性别；所述雌激素为雌二醇E2或雌激素硫酸盐E1。本发明所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，在鸡胚发育阶段对其进行性别鉴定，以达到提高生产效益。本发明使得在鸡胚发育阶段进行性别鉴定得以实现。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体说是一种鸡胚蛋性别鉴定方法。尤指基于尿囊液中雌激素含量的鸡胚蛋性别鉴定的方法，所述雌激素为雌二醇E2或雌激素硫酸盐E1。
背景技术
鸡的性别与其生产力息息相关。在商品鸡蛋生产中，母鸡作为唯一的生产工具，而公鸡不具备生产能力要被淘汰。在受精蛋的生产中，而公鸡只作为受精蛋的生产工具之一，数量极少，只有鸡总数量的3％，其余公鸡也要被淘汰。在商品肉鸡生产中，由于公鸡比母鸡需要的饲料少，生产母鸡肉鸡的成本要比公鸡高5％以上，大型的肉鸡厂会将小母鸡淘汰。据统计，仅在2001年，德国有9200万只雏鸡被杀，在美国和欧盟则更达到了惊人的2.82亿和2.26亿只。在中国，对北京周边蛋鸡场的调查发现，很多具有孵化能力的蛋鸡场在小公鸡出雏后即出售，大部分作为生产原料被宰杀。受精的发生先于蛋壳的形成，且在鸡育种上并不能控制性别的偏向。因此，如何在鸡胚发育阶段对其进行性别鉴定，并根据生产需要对不同性别雏鸡进行重新配置和合理处理，不仅可以极大的提高养鸡业的生产效益，同时还可以有效避免伦理问题。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种鸡胚蛋性别鉴定方法，在鸡胚发育阶段对其进行性别鉴定，以达到提高生产效益。
为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：
一种鸡胚蛋性别鉴定方法，其特征在于：基于尿囊液中雌激素含量对鸡胚蛋性别进行鉴定，包括如下步骤：
步骤1，鸡胚蛋尿囊液采集；
步骤2，尿囊液的预处理；
步骤3，尿囊液中雌激素浓度检测；
步骤4，根据尿囊液中雌激素浓度判断鸡胚蛋性别；
所述雌激素为雌二醇E2或雌激素硫酸盐E1。
在上述技术方案的基础上，步骤1的具体步骤为：
步骤1.1，在种鸡蛋进行孵化8到17天后，在室温条件下选取鸡胚蛋进行表面消毒，
步骤1.2，将鸡胚蛋长轴固定在水平方向并静置10到20分钟，
步骤1.3，对鸡胚蛋表面进行钻孔，
步骤1.4，负压抽取尿囊液：使用靠负压的抽取装置从孔中扎入蛋壳，扎入深度保持在5毫米以内，抽取液体的量不超过5毫升，抽取到的液体即为鸡胚蛋尿囊液，
步骤1.5，抽取完成后再次对蛋孔处消毒，用滴管抽取融化为液体的石蜡滴涂在蛋孔处，待石蜡冷却后将蛋孔完全堵住。
在上述技术方案的基础上，步骤1.1中，所述室温指温度大于15℃，小于40℃。
在上述技术方案的基础上，步骤1.1中，孵化8到17天的鸡胚蛋用75％医用酒精或1：2500的高锰酸钾溶液进行表面消毒。
在上述技术方案的基础上，步骤1.3中，对鸡胚蛋表面进行钻孔时，对于鸡胚蛋长轴竖直与短轴竖直孵化两种孵化方式，钻孔位置不同：
对于鸡胚蛋长轴竖直孵化，步骤1.2后，选择距离最高点15到25mm的长轴上小头位置的点，将鸡胚蛋位置保持不动，用光源从蛋底部向上照射，用微型钻避开血管进行竖直钻孔，钻孔完成后进行消毒并将蛋沿长轴顺时针旋转45度，再次消毒同样采用75％医用酒精或1：2500的高锰酸钾溶液；
对于鸡胚蛋短轴竖直孵化，步骤1.2后，选择距离最高点8到15mm的长轴上大头位置的点，将鸡胚蛋位置保持不动，用光源从蛋底部向上照射，用微型钻避开血管与气室进行竖直钻孔，钻孔完成后进行消毒并将蛋沿长轴顺时针旋转45度，再次消毒同样采用75％医用酒精或1：2500的高锰酸钾溶液。
在上述技术方案的基础上，步骤1.3中，所述微型钻钻头直径为0.5毫米的钻头。
在上述技术方案的基础上，步骤1.4中，所述靠负压的抽取装置为注射器，且所用针头直径为0.45毫米或0.5毫米。
在上述技术方案的基础上，步骤2的具体步骤为：
步骤2.1，将采集到的尿囊液注入无菌离心管中，使用每分钟2000到3000转转速的离心机离心20分钟，
步骤2.2，仔细收集离心处理后的上清液，收集过程中如有沉淀形成，应该再次按步骤2.1进行离心处理；
采用光源照射避开血管钻孔的方法能省略步骤2，对不采取避开血管钻孔的方法必须进行步骤2。
在上述技术方案的基础上，步骤2.1中所述无菌离心管为1.5毫升或2毫升的无菌离心管。
在上述技术方案的基础上，步骤3所述尿囊液中雌激素浓度检测采用酶联免疫分析法、放射免疫分析法、时间分辨荧光免疫分析法、拉曼光谱分析法、液相色谱分析法中的任意一种。
在上述技术方案的基础上，判别鸡胚蛋性别的依据是尿囊液中雌激素的浓度，将尿囊液中雌激素浓度在阈值以上的鸡胚蛋判断为雌胚，浓度在阈值以下的鸡胚蛋判断为雄胚。
在上述技术方案的基础上，判断鸡胚蛋性别的尿囊液中的雌二醇E2浓度的阈值为109.9pg/ml，
判断鸡胚蛋性别的尿囊液中的雌激素硫酸盐E1浓度的阈值为380.6pg/ml。
本发明所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，在鸡胚发育阶段对其进行性别鉴定，以达到提高生产效益。本发明使得在鸡胚发育阶段进行性别鉴定得以实现。
附图说明
本发明有如下附图：
图1本发明的流程图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
如图1所示，本发明所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，具体说是基于尿囊液中雌激素含量对鸡胚蛋性别进行鉴定，包括如下步骤：
步骤1，鸡胚蛋尿囊液采集；
步骤2，尿囊液的预处理；
步骤3，尿囊液中雌激素浓度检测；
步骤4，根据尿囊液中雌激素浓度判断鸡胚蛋性别；
所述雌激素为雌二醇E2或雌激素硫酸盐E1。
本发明所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，将鸡胚蛋尿囊液中雌激素浓度在阈值以上的鸡胚蛋判断为雌胚，浓度在阈值以下的鸡胚蛋判断为雄胚。
在上述技术方案的基础上，步骤1的具体步骤为：
步骤1.1，选取孵化8到17天的鸡胚蛋：在种鸡蛋进行孵化8到17天后，在室温条件下选取鸡胚蛋进行表面消毒，
步骤1.2，将鸡胚蛋长轴固定在水平方向并静置10到20分钟，
步骤1.3，对鸡胚蛋表面进行钻孔，
步骤1.4，负压抽取尿囊液：使用靠负压的抽取装置(例如消毒注射器)从孔中扎入蛋壳，扎入深度保持在5毫米以内，抽取液体的量不超过5毫升，优选缓慢抽取1到1.5毫升液体，抽取到的液体即为鸡胚蛋尿囊液，
步骤1.5，抽取完成后再次对蛋孔处消毒，用滴管抽取融化为液体的石蜡滴涂在蛋孔处，待石蜡冷却后将蛋孔完全堵住。
更进一步，对【步骤1.1】、【步骤1.3】、【步骤1.5】中打孔前、打孔后、封口前都进行消毒，与不消毒进行对比试验：
1、对100个受精打孔样本进行消毒，
2、对100个受精打孔样本未进行消毒，
3、对100个受精样本不做任何处理，
三种处理方式后的样本均在相同条件下进行孵化，对最后的出雏结果进行统计，统计结果显示：
1、100个进行消毒的受精打孔样本中有93个样本正常出雏，孵化率为93％，
2、100个未进行消毒的受精打孔样本中有70个能进行正常出雏，孵化率为70％，
3、100个不做任何处理的受精样本有98个样本正常出雏，孵化率为98％，
对比不做任何处理受精样本出雏率的98％，消毒的受精打孔样本的出雏率为93％，占不做任何处理受精样本的95％，可以推定尿囊液采集过程中采取一定措施的打孔对孵化率影响很小，此方法有一定的应用前景。
对比进行消毒的受精打孔样本出雏率的93％，未进行消毒的受精打孔样本孵化率为70％，占消毒的受精打孔样本的75％，可以推定消毒可以明显提高最后的孵化率，此措施是实施过程中必要的步骤。
更进一步，对【步骤1.3】中对鸡胚蛋用光源从蛋底部向上照射，用微型钻避开血管进行钻孔，进行对比试验：将100个经过光源照射避开血管钻孔的鸡胚蛋样本与100个不采取避开血管措施直接进行钻孔的鸡胚蛋样本进行对比实验。
100个避开血管钻孔的鸡胚蛋样本有97个正常出雏，出雏率为97％，100个不采取措施直接进行钻孔的鸡胚蛋样本有83个正常出雏，出雏率为84％，占采取光源照射避开血管钻孔的鸡胚蛋样本出雏率的86％，可以推定此措施可以明显提高最后的孵化率，此措施是实施过程的必要步骤。
在上述技术方案的基础上，步骤1.1中，所述室温指温度大于15℃，小于40℃。
在上述技术方案的基础上，步骤1.1中，孵化8到17天的鸡胚蛋用75％医用酒精或1：2500的高锰酸钾溶液进行表面消毒。
在上述技术方案的基础上，步骤1.3中，对鸡胚蛋表面进行钻孔时，对于鸡胚蛋长轴竖直(大头朝上)与短轴竖直孵化两种孵化方式，钻孔位置不同：
对于鸡胚蛋长轴竖直孵化，步骤1.2后，选择距离最高点15到25mm的长轴上小头位置的点，将鸡胚蛋位置保持不动，用光源从蛋底部向上照射，用微型钻避开血管进行竖直钻孔，钻孔完成后进行消毒并将蛋沿长轴顺时针旋转45度，再次消毒同样采用75％医用酒精或1：2500的高锰酸钾溶液；
对于鸡胚蛋短轴竖直孵化，步骤1.2后，选择距离最高点8到15mm的长轴上大头位置的点，将鸡胚蛋位置保持不动，用光源从蛋底部向上照射，用微型钻避开血管与气室进行竖直钻孔，钻孔完成后进行消毒并将蛋沿长轴顺时针旋转45度，再次消毒同样采用75％医用酒精或1：2500的高锰酸钾溶液。
经实验发现：
1、将120个长轴竖直(大头朝上)孵化方式的蛋分为三组，第一组40个胚蛋按照步骤1.3的方式进行采集，结果显示，使用2.5ml注射器可以顺利采集到1.5ml以上尿囊液的样本数为40。第二组样本钻孔后未进行旋转，40个样本中仅有30个使用2.5ml注射器可以顺利采集到1.5ml以上尿囊液。第三组在胚蛋最高点进行钻孔，不进行旋转，40个样本中有26个使用2.5ml注射器可以顺利采集到1.5ml以上尿囊液。对以上数据分析，可以推定，长轴竖直(大头朝上)孵化方式的蛋钻孔位置的选取以胚蛋水平放置时距离最高点15到25mm的长轴上为最佳，旋转可以提高采集到尿囊液的水平。
2、将120个短轴竖直孵化方式的蛋分为三组，第一组40个胚蛋按照步骤1.3的方式进行采集，结果显示，使用2.5ml注射器可以顺利采集到1.5ml以上尿囊液的样本数为40。第二组样本钻孔后未进行旋转，40个样本中仅有32个使用2.5ml注射器可以顺利采集到1.5ml以上尿囊液。第三组在胚蛋最高点进行钻孔，不进行旋转，40个样本中有25个使用2.5ml注射器可以顺利采集到1.5ml以上尿囊液。对以上数据分析，可以推定，短轴轴竖直孵化方式的蛋钻孔位置的选取以胚蛋水平放置时距离最高点8到15mm的长轴上为最佳，旋转可以提高采集到尿囊液的水平。
在上述技术方案的基础上，步骤1.3中，所述微型钻钻头直径为0.5毫米的钻头。钻头需经过消毒。
在上述技术方案的基础上，步骤1.4中，所述靠负压的抽取装置为注射器，例如为2毫升注射器，且所用针头直径为0.45毫米或0.5毫米。
在上述技术方案的基础上，步骤2的具体步骤为：
步骤2.1，将采集到的尿囊液注入无菌离心管中，使用每分钟2000到3000转转速的离心机离心20分钟，
步骤2.2，仔细收集离心处理后的上清液，收集过程中如有沉淀形成，应该再次按步骤2.1进行离心处理。
采用光源照射避开血管钻孔的方法能省略步骤2，对不采取避开血管钻孔的方法必须进行步骤2。
更进一步，对光源照射避开血管钻孔的鸡胚蛋样本采集到的尿囊液样本对离心与不离心进行对比实验：将对光源照射避开血管钻孔的鸡胚蛋样本采集到的尿囊液样本每个样本平均分成2份，将其中一份尿囊液样本进行离心取上清液进行酶联免疫法检测雌二醇与雌激素硫酸盐，对另一份尿囊液样本不做任何处理直接进行酶联免疫法检测雌二醇与雌激素硫酸盐。
对最后的检测结果进行分析，对每个样本进行一一对应后，对雌二醇残差标准差进行统计，最大值为7pg/ml，最小值为–2pg/ml，残差平均值为3.5pg/ml，对雌激素硫酸盐残差标准差进行统计，最大值为11pg/ml，最小值为–5pg/ml，残差平均值为5pg/ml，可以发现此结果对最后性别鉴定影响极小。可以推定，采用光源照射避开血管钻孔的方法可以省略尿囊液离心取上清液的步骤，进而省去45分钟的前处理时间。
更进一步，对不采取避开血管钻孔的鸡胚蛋样本采集到的尿囊液样本对离心与不离心进行对比实验：将不采取避开血管钻孔的鸡胚蛋样本采集到的尿囊液样本每个样本平均分成2份，将其中一份尿囊液样本进行离心取上清液进行酶联免疫法检测雌二醇与雌激素硫酸盐，对另一份尿囊液样本不做任何处理直接进行酶联免疫法检测雌二醇与雌激素硫酸盐。
对最后的检测结果进行分析，对每个样本进行一一对应后，对雌二醇残差标准差进行统计，最大值为105pg/ml，最小值为–22pg/ml，残差平均值为68pg/ml，对雌激素硫酸盐残差标准差进行统计，最大值为188pg/ml，最小值为–46pg/ml，残差平均值为92pg/ml，可以发现此结果对最后的性别判断影响极大。
可以推定，采取光照避开血管的方式采集尿囊液可以省去离心取上清液的步骤，节省更多的时间与成本。
在上述技术方案的基础上，步骤2.1中所述无菌离心管为1.5毫升或2毫升的无菌离心管。
在上述技术方案的基础上，步骤3所述尿囊液中雌激素浓度检测采用酶联免疫分析法、放射免疫分析法、时间分辨荧光免疫分析法、拉曼光谱分析法、液相色谱分析法中的任意一种。
所述各分析方法均按现有公知技术实施即可，本发明无任何改进，以下以酶联免疫法测量雌二醇E2举例说明，其他不再逐一详述。
在上述技术方案的基础上，以酶联免疫法测量雌二醇E2的具体步骤为：
步骤3.1，将浓度为48ng/L、32ng/L、16ng/L、8ng/L、4ng/L的雌二醇标准溶液，每种取50ul加入到酶标板中，每种浓度加入到2个板孔中，
步骤3.2，在同种浓度的板孔中选一个加入40ul稀释液，然后加入10ul离心收集到上清液，将上清液加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
另一个板孔不加任何液体并设为对照孔，
步骤3.3，将酶标板用封板膜封板后，置于37℃水浴锅中保温30分钟
步骤3.4，将封板膜小心除去，甩干弃去液体，每板加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干，
步骤3.5，每孔加入50ul辣根过氧化物酶标记的检测抗体，空白孔除外，
步骤3.6，将酶标板用封板膜重新封板后置37℃水浴锅中保温60分钟后将封板膜小心除去，甩干弃去液体，每板加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干，
步骤3.7，每孔加入两种显色剂各50ul，轻轻振荡混匀，37℃条件下避光显色15分钟后加入50ul终止液，终止反应，
步骤3.8，将酶标板加入酶标仪中，使用空白孔调零，在450纳米波长下测定各孔的吸光度，检测必须在加入终止液15分钟内进行，
步骤3.9，以雌二醇抗体的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的吸光度值由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数5即为尿囊液中雌二醇的实际浓度。
在上述技术方案的基础上，步骤4的具体步骤为：判别鸡胚蛋性别的依据是尿囊液中雌激素的浓度，将尿囊液中雌激素浓度在阈值以上的鸡胚蛋判断为雌胚，浓度在阈值以下的鸡胚蛋判断为雄胚。
在上述技术方案的基础上，判断鸡胚蛋性别的尿囊液中的雌二醇E2浓度的阈值为109.9pg/ml，
判断鸡胚蛋性别的尿囊液中的雌激素硫酸盐E1浓度的阈值为380.6pg/ml。
以下为具体实施例。
实施例一
选取孵化10天的鸡胚蛋300个(农大5号150个、农大3号150个)，按上述方法采集尿囊液样本，基于酶联免疫法分析雌二醇E2和雌激素硫酸盐E1的浓度。
出雏后，通过羽速进行性别鉴别，结果发现：
农大5号孵化为公鸡的鸡胚蛋尿囊液中雌二醇E2含量在12.5～105.5pg/ml之间、雌激素硫酸盐E1含量在124.4～220.8pg/ml之间，孵化为母鸡的鸡胚蛋尿囊液中雌二醇E2含量在114.3～215.7pg/ml之间、雌激素硫酸盐E1含量在540.3～815.9pg/ml之间。
农大3号孵化为公鸡的鸡胚蛋尿囊液中雌二醇E2含量在38.5～101.2pg/ml之间、雌激素硫酸盐E1含量在132.5～207.6pg/ml之间，孵化为母鸡的鸡胚蛋尿囊液中雌二醇E2含量在131.3～185.7pg/ml之间、雌激素硫酸盐E1含量在563.7～805.2pg/ml之间。
实施例二
选取孵化10天的鸡胚蛋300个(农大3号)，按上述方法采集尿囊液样本，基于酶联免疫法(150个)与液相色谱分析法(150个)分析雌二醇E2和雌激素硫酸盐E1的浓度。
出雏后，通过羽速进行性别鉴别，结果发现：
采用酶联免疫法的检测结果为：孵化为公鸡的鸡胚蛋尿囊液中雌二醇E2含量在38.5～101.2pg/ml之间、雌激素硫酸盐E1含量在132.5～207.6pg/ml之间，孵化为母鸡的鸡胚蛋尿囊液中雌二醇E2含量在131.3～185.7pg/ml之间、雌激素硫酸盐E1含量在563.7～805.2pg/ml之间。
采用液相色谱分析法的检测结果为：孵化为公鸡的鸡胚蛋尿囊液中雌二醇E2含量在5.1～97.1pg/ml之间、雌激素硫酸盐E1含量在91.5～190.9pg/ml之间，孵化为母鸡的鸡胚蛋尿囊液中雌二醇E2含量在121.7～200.1pg/ml之间、雌激素硫酸盐E1含量在546.5～877.1pg/ml之间。
两种方案所得结果，均满足性别判别的要求，通过阈值判别，与最终雏鸡的性别进行对比，准确率为100％。
本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。
Claims (9)
1.一种鸡胚蛋性别鉴定方法，其特征在于：基于尿囊液中雌激素含量对鸡胚蛋性别进行鉴定，包括如下步骤：
步骤1，鸡胚蛋尿囊液采集；
步骤2，尿囊液的预处理；
步骤3，尿囊液中雌激素浓度检测；
步骤4，根据尿囊液中雌激素浓度判断鸡胚蛋性别；
所述雌激素为雌二醇E2或雌激素硫酸盐E1；
步骤1的具体步骤为：
步骤1.1，在种鸡蛋进行孵化8到17天后，在室温条件下选取鸡胚蛋进行表面消毒，步骤1.1中，孵化8到17天的鸡胚蛋用75％医用酒精或1：2500的高锰酸钾溶液进行表面消毒；
步骤1.2，将鸡胚蛋长轴固定在水平方向并静置10到20分钟，
步骤1.3，对鸡胚蛋表面进行钻孔，
步骤1.4，负压抽取尿囊液：使用靠负压的抽取装置从孔中扎入蛋壳，扎入深度保持在5毫米以内，抽取液体的量不超过5毫升，抽取到的液体即为鸡胚蛋尿囊液，
步骤1.5，抽取完成后再次对蛋孔处消毒，用滴管抽取融化为液体的石蜡滴涂在蛋孔处，待石蜡冷却后将蛋孔完全堵住；
步骤1.3中，对鸡胚蛋表面进行钻孔时，对于鸡胚蛋长轴竖直与短轴竖直孵化两种孵化方式，钻孔位置不同：
对于鸡胚蛋长轴竖直孵化，步骤1.2后，选择距离最高点15到25mm的长轴上小头位置的点，将鸡胚蛋位置保持不动，用光源从蛋底部向上照射，用微型钻避开血管进行竖直钻孔，钻孔完成后进行消毒并将蛋沿长轴顺时针旋转45度，再次消毒同样采用75％医用酒精或1：2500的高锰酸钾溶液；
对于鸡胚蛋短轴竖直孵化，步骤1.2后，选择距离最高点8到15mm的长轴上大头位置的点，将鸡胚蛋位置保持不动，用光源从蛋底部向上照射，用微型钻避开血管与气室进行竖直钻孔，钻孔完成后进行消毒并将蛋沿长轴顺时针旋转45度，再次消毒同样采用75％医用酒精或1：2500的高锰酸钾溶液。
2.如权利要求1所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，其特征在于：步骤1.1中，所述室温指温度大于15℃，小于40℃。
3.如权利要求1所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，其特征在于：步骤1.3中，所述微型钻钻头直径为0.5毫米的钻头。
4.如权利要求1所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，其特征在于：步骤1.4中，所述靠负压的抽取装置为注射器，且所用针头直径为0.45毫米或0.5毫米。
5.如权利要求1所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，其特征在于，步骤2的具体步骤为：
步骤2.1，将采集到的尿囊液注入无菌离心管中，使用每分钟2000到3000转转速的离心机离心20分钟，
步骤2.2，仔细收集离心处理后的上清液，收集过程中如有沉淀形成，应该再次按步骤2.1进行离心处理；
采用光源照射避开血管钻孔的方法能省略步骤2，对不采取避开血管钻孔的方法必须进行步骤2。
6.如权利要求5所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，其特征在于：步骤2.1中所述无菌离心管为1.5毫升或2毫升的无菌离心管。
7.如权利要求1所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，其特征在于：步骤3所述尿囊液中雌激素浓度检测采用酶联免疫分析法、放射免疫分析法、时间分辨荧光免疫分析法、拉曼光谱分析法、液相色谱分析法中的任意一种。
8.如权利要求1所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，其特征在于步骤4的具体步骤为：判别鸡胚蛋性别的依据是尿囊液中雌激素的浓度，将尿囊液中雌激素浓度在阈值以上的鸡胚蛋判断为雌胚，浓度在阈值以下的鸡胚蛋判断为雄胚。
9.如权利要求8所述的鸡胚蛋性别鉴定方法，其特征在于：判断鸡胚蛋性别的尿囊液中的雌二醇E2浓度的阈值为109.9pg/ml，
判断鸡胚蛋性别的尿囊液中的雌激素硫酸盐E1浓度的阈值为380.6pg/ml。
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Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106834460A (zh) * | 2017-01-23 | 2017-06-13 | 扬州大学 | 一种鸡胚蛋性别快速鉴定方法 |
| CN106962273B (zh) * | 2017-03-28 | 2021-06-22 | 枞阳县横山生态农业有限公司 | 一种提升母鸡生产特性的胚蛋孵化方法 |
| CN107041325B (zh) * | 2017-04-06 | 2020-06-05 | 四川农业大学 | 一种禽胚蛋无损性别判定方法 |
| CN108802002B (zh) * | 2018-05-08 | 2020-11-17 | 华南农业大学 | 一种快速无损鉴别解除滞育的蚕卵拉曼光谱模型构建方法 |
| CN117629987A (zh) * | 2023-12-06 | 2024-03-01 | 华中农业大学 | 一种鸡胚蛋性别鉴定方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1232545A (zh) * | 1996-10-04 | 1999-10-20 | 恩布里克斯公司 | 用卵对禽进行分类的方法 |
| CN1313726A (zh) * | 1998-10-20 | 2001-09-19 | 恩布里克斯公司 | 确定禽蛋的尿囊液体的位置的方法 |
| US6365339B1 (en) * | 1998-09-04 | 2002-04-02 | Bechtel Bwxt Idaho, Llc | Gender determination of avian embryo |
| CN1649487A (zh) * | 2001-04-17 | 2005-08-03 | 恩布雷克斯公司 | 具有识别特点的选择性处理禽蛋的方法和装置 |
| WO2011028099A2 (en) * | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Visser's-Gravendeel Holding B.V. | Method for preparing an invasive test of an egg and for determining a gender of an embryo in an egg |
| CN104698173A (zh) * | 2015-02-26 | 2015-06-10 | 武汉市畜牧兽医科学研究所 | 一种鸭胚早期性别鉴定方法及专用试剂盒 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7418922B2 (en) * | 2005-10-05 | 2008-09-02 | Embrex, Inc. | Methods for injecting and sampling material through avian egg membranes |
-
2015
- 2015-09-25 CN CN201510622442.4A patent/CN105191831B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1232545A (zh) * | 1996-10-04 | 1999-10-20 | 恩布里克斯公司 | 用卵对禽进行分类的方法 |
| US6365339B1 (en) * | 1998-09-04 | 2002-04-02 | Bechtel Bwxt Idaho, Llc | Gender determination of avian embryo |
| CN1313726A (zh) * | 1998-10-20 | 2001-09-19 | 恩布里克斯公司 | 确定禽蛋的尿囊液体的位置的方法 |
| CN1649487A (zh) * | 2001-04-17 | 2005-08-03 | 恩布雷克斯公司 | 具有识别特点的选择性处理禽蛋的方法和装置 |
| WO2011028099A2 (en) * | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Visser's-Gravendeel Holding B.V. | Method for preparing an invasive test of an egg and for determining a gender of an embryo in an egg |
| CN104698173A (zh) * | 2015-02-26 | 2015-06-10 | 武汉市畜牧兽医科学研究所 | 一种鸭胚早期性别鉴定方法及专用试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 鸡胚性别鉴定——家禽科学研究的新视点;王健 等;《中国家禽》;20031231;第25卷(第14期);第23-33页 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102021127696B3 (de) | 2021-10-25 | 2023-03-09 | Technische Universität Dresden, Körperschaft des öffentlichen Rechts | Verfahren und Anordnung zur in-ovo Geschlechtsbestimmung von Vogeleiern |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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