CN101482496B - 水环境体系中有机砷饲料添加剂排放预警监测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种环境监测技术领域水环境体系中有机砷饲料添加剂排放预警监测方法，步骤为：配制四膜虫培养基；配制阿散酸标准样品溶液/洛克沙砷标准样品溶液；采集实际水样并分离提取有机砷饲料添加剂化合物；在配制的培养基中接入四膜虫虫种后分装入样品培养管中；在样品培养管中分别加入有机砷饲料添加剂标准溶液，采用吸光光度法分析测定相应四膜虫细胞密度；将实际水样样品干预作用于相应四膜虫生物模型，分析测定相应四膜虫细胞密度；根据四膜虫细胞密度值间比较以及比照实际水样样品干预作用后的相应四膜虫细胞密度值，实现污染物存在的浓度范围，从而，快速预警相应实际环境水样中有机砷饲料添加剂污染物排放情况。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种环境监测技术领域的方法。具体地说，涉及的是一种水环境体系中有机砷饲料添加剂排放预警监测方法。
背景技术
目前，对氨基苯胂酸(p-arsanilic Acid，阿散酸)和3-硝基-4-羟基-苯胂酸(roxarsone，洛克沙胂)作为两种主要的有机胂饲料添加剂在国际上广泛应用，其具有促进肉类生长、增进皮肤色素沉淀、抑制球虫卵和支原体、抗大肠杆菌等作用，用于猪、鸡的饲养可提高产肉、产蛋率，从而达到提高饲料效率的目的。1964年，美国食品和药品管理局(FDA)允许将洛克沙胂应用于鸡饲料的生产，并于1983年正式批准其用作猪、鸡的促生长剂。20世纪80年代我国也开始引进阿散酸；1996年，我国农业部批准了有机胂制剂的使用，随后我国逐渐开始大量生产，并逐步推广应用于畜禽饲养业。
但值得指出的是，在禽畜饲养过程中，有机胂添加剂可通过动物粪便排放、相应养殖厂污水废水排放、以及生产运转系统废弃物排放等多种形式释放进入到周边水、土壤等自然环境循环体系中，大量蓄积，并转化为毒性更强的无机砷化合物，并通过食物链进入人体后，可能造成人体中枢神经系统失调，直接导致大脑和视神经萎缩的发病率升高，对人体健康的危害特别重大。2008年国家环境保护总局将有机砷饲料添加剂确定为高污染、高环境风险的物质之一。
因此，综上所述，建立一种简便、快速、准确的水体中有机砷饲料添加剂污染物排放的系统监测方法，显然具有重要的实际应用意义。
经对现有技术文献的检索发现，在“Environmental Health Perspectives2008，116，page 4，titled as Angiogenic Potential of 3-Nitro-4-HydroxyBenzene Arsonic Acid(Roxarsone)”(美国《环境健康展望》)曾首次报道，通过洛克沙胂干预作用于人体动脉内皮细胞后，比较分析其相应细胞体系生长等变化结果，探讨不同浓度洛克沙砷的生物毒理毒性效果。但是，人体细胞其培养所需试剂成本高，实验设备条件苛刻，同时同对照组比较相应细胞的生长情况的变化结果，并不能完全从环境生态食物链循环角度，科学地预警监测洛克沙砷等有机砷污染物在水环境中的排放。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种水环境体系中有机砷饲料添加剂排放预警监测方法，可以更加快速、直接、及时地分析预警环境水体中有机胂饲料添加剂化合物的排放情况。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明包括如下步骤：
第一步，配制四膜虫培养基；
所采用的培养基选择以下两种方法中的一种进行配制：
A：称取蛋白胨10g、葡萄糖2g，溶解于1000mL去离子水中，搅拌均匀，分装于150mL锥形瓶中(每瓶80mL培养基)，于121℃高压灭菌锅中灭菌20-30min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存。
B：称取蛋白胨10g、葡萄糖2g、酵母抽提粉1g，溶解于1000mL去离子水中，搅拌均匀，分装于150mL锥形瓶中(每瓶80mL培养基)，于121℃高压灭菌锅中灭菌20-30min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存。
第二步，分别配制有机砷饲料添加剂-阿散酸标准样品溶液/洛克沙砷标准样品溶液；其中相应阿散酸标准样品溶液/洛克沙砷标准样品溶液中总砷浓度分别为100微克/毫升，留存在冰箱冷藏，以备稀释使用。
第三步，采集实际水样并分离提取可能存在的有机砷饲料添加剂化合物；
所述采集的实际水环境样品通过铁掺杂纳米沸石材料，在pH值4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中进行可能存在的阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂的富集吸附处理后，经过高速离心处理后，利用pH值8.5的磷酸盐缓冲溶液中对有机砷进行解吸。
第四步，在第一步所配制的培养基中接入四膜虫虫种后分装入一系列样品培养管中；
所述培养基中接入四膜虫虫种，其中接入虫种密度为1.4×104个/mL，后分装到1.5mL聚四氟乙烯样品管中，每管中四膜虫虫液体积约为1.0mL。
第五步，在第二步中一系列样品培养管中分别加入不同浓度的有机砷饲料添加剂标准溶液作为干预物；
第六步，48小时后，采用吸光光度法分析测定第五步中一系列样品管中相应四膜虫细胞密度：
第七步，使第三步中得到的实际水样样品干预作用于相应四膜虫生物模型，同第六步中所述过程分析测定相应四膜虫细胞密度：
第八步，根据第六步中一系列不同浓度梯度的阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂干预后所对应得到的不同的四膜虫细胞密度值间比较，比照实际水样样品干预作用后所得的相应四膜虫细胞密度值，比较实际环境水体系中阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂污染物存在的浓度范围。从而，快速预警相应实际环境水样中有机砷饲料添加剂污染物排放情况。
本发明选择单细胞原生动物四膜虫作为理想的水体环境中有机砷饲料添加剂污染物预警监测指示模型，四膜虫是一种单细胞真核生物，广泛分布在全球的淡水水域中，属于原生生物门(Protista)纤毛虫纲(Ciliophora)，四膜虫外观呈椭圆长梨状，体长约50微米，全身布满数百根长约4-6微米长的纤毛，纤毛排列成数十条纵列，是不同种间纤毛虫分类的特征之一。由于其(1)在食物链中处于重要位置，是能量流和物质流的重要环节；(2)繁殖周期短，操作方便，成本低廉；(3)不仅具有绝大多数真核细胞中可见的典型的亚细胞结构，而且具备完整生命体所有的细胞器，可以同时反映细胞层次和生命独立个体层次的变化。
本发明根据采集的实际环境水体样品，分离提取其中可能存在的有机砷饲料添加剂化合物后(阿散酸、洛克沙砷)，使其干预作用于四膜虫生物指示模型观察相应生长抑制率结果。后经过同一系列不同浓度有机砷饲料添加剂标准溶液干预四膜虫生物指示模型后，得到的相应四膜虫生长抑制率变化趋势结果进行比较，从而，可以更加快速、直接、及时地分析预警环境水体中有机胂饲料添加剂化合物的排放情况。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实例1
(1)培养基配制；
称取蛋白胨10g、葡萄糖2g，溶解于1000mL去离子水中，搅拌均匀，分装于150mL锥形瓶中(每瓶80mL培养基)，于121℃高压灭菌锅中灭菌20-30min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存。
(2)阿散酸有机砷饲料添加剂标准样品溶液配制；
称取28.98mg阿散酸标准样品、0.05g氢氧化钠，溶解于去离子水中，最后于100mL容量瓶中定容，相应标准溶液中总砷浓度为100微克/毫升，保存在冰箱冷藏，以备稀释使用
(3)采集实际水样并提取可能存在的有机砷饲料添加剂化合物；
取实际水样5.0ml，经过0.45μm过滤膜过滤处理。后放置0.01g纳米铁磁性吸附剂于相应实际水样中，调节其pH值4.5(使用醋酸-醋酸钠缓冲溶液)，于室温下使实际水样中可能存在的目标有机砷饲料添加剂化合物选择性富集于相应纳米铁磁性吸附剂(12小时)。后在10000r/min下高速离心，使相应分离得到的纳米铁磁性吸附剂置于pH值8.5的磷酸盐缓冲溶液中，以有效解吸出可能存在的目标有机砷饲料添加剂化合物(12小时)，最后使用(4)中所述过程过滤出菌后，用去离子水定容至10.0ml待用。
(4)在(1)所配制的培养基中接入四膜虫虫种后分装入一系列样品培养管中；
取80mL(1)中所述培养基接入野生型嗜热四膜虫虫种，(由美国标准生物资源中心提供The Global Bioresources Center)接入虫种密度为1.4×104个/mL，后分装到11个1.5mL聚四氟乙烯样品管中，每管中四膜虫虫液体积约为1.0mL。
(5)在相应一系列样品培养管中分别加入不同浓度的有机砷饲料添加剂标准溶液：
稀释(2)中所述阿散酸标准样品溶液，得到浓度分别为0、5.0ng/ml、10.0ng/ml、50.0ng/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、7.5μg/ml、10.0μg/ml系列阿散酸标准样品溶液。在超净工作台中用一次性无菌注射器分别量取约2.0ml上述系列阿散酸标准样品溶液，经过过滤器中过滤膜除菌(孔径为0.22um过滤膜放入直径为40.0mm过滤器中，高压灭菌30min后使用)。将(4)中所述聚四氟乙烯样品管中分别加入上述阿散酸系列标准样品溶液后，放置在恒温培养箱中，选择28℃下恒温培养48小时。
(6)48小时后，采用吸光光度法分析测定(5)中一系列样品管中相应四膜虫细胞密度：
从恒温培养箱中取出上述系列样品管，放置于超声清洗器中充分振摇混合样品管中相应虫液。后从每一个样品管中取出60.0微升虫液至于一次性塑料比色皿中，利用分光光度法在600纳米波长下检测相应系列样品管中四膜虫细胞密度。
(7)使(3)中得到的实际水样样品干预经作用于相应四膜虫生物模型：
(8)根据(7)中所得四膜虫细胞密度值同(6)中测定的四膜虫细胞密度结果间分析比较，以快速预警相应实际环境水样中有机砷饲料添加剂化合物排放情况；
从畜禽饲养场附近水环境排放体系中所取水样样品经(3)过程富集处理后，干预作用于四膜虫模型后所得的相应四膜虫细胞密度值，同(6)中一系列不同浓度梯度的标准阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂样品溶液干预后所对应得到的不同的四膜虫细胞密度值间比照，分析实际畜禽饲养场附近水环境排放体系中阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂污染物存在的浓度范围。从而，快速预警相应实际环境水样中有机砷饲料添加剂污染物排放情况。
实例2
(1)四膜虫培养基配制；
称取蛋白胨10g、葡萄糖2g、酵母抽提粉1g，溶解于1000mL去离子水中，搅拌均匀，分装于150mL锥形瓶中(每瓶80mL培养基)，于121℃高压灭菌锅中灭菌20-30min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存。
(2)阿散酸有机砷饲料添加剂标准样品溶液配制；
称取28.98mg阿散酸标准样品、0.05g氢氧化钠，溶解于去离子水中，最后于100mL容量瓶中定容，相应标准溶液中总砷浓度为100μg/ml，保存在冰箱冷藏，以备稀释使用。
(3)采集实际水样并提取可能存在的有机砷饲料添加剂化合物；
取实际水样5.0ml，经过0.45μm过滤膜过滤处理。后放置0.01g纳米铁磁性吸附剂于相应实际水样中，调节其pH值4.5(使用醋酸-醋酸钠缓冲溶液)，于室温下使实际水样中可能存在的目标有机砷饲料添加剂化合物选择性富集于相应纳米铁磁性吸附剂(12小时)。后在10000r/min下高速离心，使相应分离得到的纳米铁磁性吸附剂置于pH值8.5的磷酸盐缓冲溶液中，以有效解吸出可能存在的目标有机砷饲料添加剂化合物(12小时)，最后使用(4)中所述过程过滤出菌后，用去离子水定容至10.0ml待用。
(4)在(1)所配制的培养基中接入四膜虫虫种后分装入一系列样品培养管中；
取80mL(1)中所述培养基接入野生型嗜热四膜虫虫种，(由美国标准生物资源中心提供The Global Bioresources Center)接入虫种密度为1.4×104个/mL，后分装到11个1.5mL聚四氟乙烯样品管中，每管中四膜虫虫液体积约为1.0mL。
(5)在相应一系列样品培养管中分别加入不同浓度的有机砷饲料添加剂标准溶液：
稀释(2)中所述阿散酸标准样品溶液，得到浓度分别为0、5.0ng/ml、10.0ng/ml、50.0ng/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、7.5μg/ml、10.0μg/ml系列阿散酸标准样品溶液。在超净工作台中用一次性无菌注射器分别量取约2.0ml上述系列阿散酸标准样品溶液，经过过滤器中过滤膜除菌(孔径为0.22um过滤膜放入直径为40.0mm过滤器中，高压灭菌30min后使用)。将(4)中所述聚四氟乙烯样品管中分别加入上述阿散酸系列标准样品溶液后，放置在恒温培养箱中，选择28℃下恒温培养48小时。
(6)48小时后，采用吸光光度法分析测定(5)中一系列样品管中相应四膜虫细胞密度：
从恒温培养箱中取出上述系列样品管，放置于超声清洗器中充分振摇混合样品管中相应虫液。后从每一个样品管中取出60.0微升虫液至于一次性塑料比色皿中，利用分光光度法在600纳米波长下检测相应系列样品管中四膜虫细胞密度。
(7)使(3)中得到的实际水样样品干预经作用于相应四膜虫生物模型：
(8)根据(7)中所得四膜虫细胞密度值同(6)中测定的四膜虫细胞密度结果间分析比较，以快速预警相应实际环境水样中有机砷饲料添加剂化合物排放情况；
从畜禽饲养场附近水环境排放体系中所取水样样品经(3)过程富集处理后，干预作用于四膜虫模型后所得的相应四膜虫细胞密度值，同(6)中一系列不同浓度梯度的标准阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂样品溶液干预后所对应得到的不同的四膜虫细胞密度值间比照，分析实际畜禽饲养场附近水环境排放体系中阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂污染物存在的浓度范围。从而，快速预警相应实际环境水样中有机砷饲料添加剂污染物排放情况。
实例3
(1)四膜虫培养基配制；
称取蛋白胨10g、葡萄糖2g，溶解于1000mL去离子水中，搅拌均匀，分装于150mL锥形瓶中(每瓶80mL培养基)，于121℃高压灭菌锅中灭菌20-30min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存。
(2)洛克沙砷有机砷饲料添加剂标准样品溶液配制；
称取35.82mg洛克沙砷标准样品、0.05g氢氧化钠，溶解于去离子水中，最后于100mL容量瓶中定容，相应标准溶液中总砷浓度为100微克/毫升，保存在冰箱冷藏，以备稀释使用。
(3)采集实际水样并提取可能存在的有机砷饲料添加剂化合物；
取实际水样5.0ml，经过0.45μm过滤膜过滤处理。后放置0.01g纳米铁磁性吸附剂于相应实际水样中，调节其pH值4.5(使用醋酸-醋酸钠缓冲溶液)，于室温下使实际水样中可能存在的目标有机砷饲料添加剂化合物选择性富集于相应纳米铁磁性吸附剂(12小时)。后在10000r/min下高速离心，使相应分离得到的纳米铁磁性吸附剂置于pH值8.5的磷酸盐缓冲溶液中，以有效解吸出可能存在的目标有机砷饲料添加剂化合物(12小时)，最后使用(4)中所述过程过滤出菌后，用去离子水定容至10.0ml待用。
(4)在(1)所配制的培养基中接入四膜虫虫种后分装入一系列样品培养管中；
取80mL(1)中所述培养基接入野生型嗜热四膜虫虫种，(由美国标准生物资源中心提供The Global Bioresources Center)接入虫种密度为1.4×104个/mL，后分装到11个1.5mL聚四氟乙烯样品管中，每管中四膜虫虫液体积约为1.0mL。
(5)在相应一系列样品培养管中分别加入不同浓度的有机砷饲料添加剂标准溶液：
稀释(2)中所述阿散酸标准样品溶液，得到浓度分别为0、5.0ng/ml、10.0ng/ml、50.0ng/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、7.5μg/ml、10.0μg/ml系列阿散酸标准样品溶液。在超净工作台中用一次性无菌注射器分别量取约2.0ml上述系列阿散酸标准样品溶液，经过过滤器中过滤膜除菌(孔径为0.22um过滤膜放入直径为40.0mm过滤器中，高压灭菌30min后使用)。将(4)中所述聚四氟乙烯样品管中分别加入上述阿散酸系列标准样品溶液后，放置在恒温培养箱中，选择28℃下恒温培养48小时。
(6)48小时后，采用吸光光度法分析测定(5)中一系列样品管中相应四膜虫细胞密度：
从恒温培养箱中取出上述系列样品管，放置于超声清洗器中充分振摇混合样品管中相应虫液。后从每一个样品管中取出60.0微升虫液至于一次性塑料比色皿中，利用分光光度法在600纳米波长下检测相应系列样品管中四膜虫细胞密度。
(7)使(3)中得到的实际水样样品干预经作用于相应四膜虫生物模型：
(8)根据(7)中所得四膜虫细胞密度值同(6)中测定的四膜虫细胞密度结果间分析比较，以快速预警相应实际环境水样中有机砷饲料添加剂化合物排放情况；
从畜禽饲养场附近水环境排放体系中所取水样样品经(3)过程富集处理后，干预作用于四膜虫模型后所得的相应四膜虫细胞密度值，同(6)中一系列不同浓度梯度的标准阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂样品溶液干预后所对应得到的不同的四膜虫细胞密度值间比照，分析实际畜禽饲养场附近水环境排放体系中阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂污染物存在的浓度范围。从而，快速预警相应实际环境水样中有机砷饲料添加剂污染物排放情况。
实例4
(1)四膜虫培养基配制；
称取蛋白胨10g、葡萄糖2g、酵母抽提粉1g，溶解于1000mL去离子水中，搅拌均匀，分装于150mL锥形瓶中(每瓶80mL培养基)，于121℃高压灭菌锅中灭菌20-30min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存。
(2)洛克沙砷有机砷饲料添加剂标准样品溶液配制；
称取35.82mg洛克沙砷标准样品、0.05g氢氧化钠，溶解于去离子水中，最后于100mL容量瓶中定容，相应标准溶液中总砷浓度为100微克/毫升，保存在冰箱冷藏，以备稀释使用。
(3)采集实际水样并提取可能存在的有机砷饲料添加剂化合物；
取实际水样5.0ml，经过0.45μm过滤膜过滤处理。后放置0.01g纳米铁磁性吸附剂于相应实际水样中，调节其pH值4.5(使用醋酸-醋酸钠缓冲溶液)，于室温下使实际水样中可能存在的目标有机砷饲料添加剂化合物选择性富集于相应纳米铁磁性吸附剂(12小时)。后在10000r/min下高速离心，使相应分离得到的纳米铁磁性吸附剂置于pH值8.5的磷酸盐缓冲溶液中，以有效解吸出可能存在的目标有机砷饲料添加剂化合物(12小时)，最后使用(4)中所述过程过滤出菌后，用去离子水定容至10.0ml待用。
(4)在(1)所配制的培养基中接入四膜虫虫种后分装入一系列样品培养管中；
取80mL(1)中所述培养基接入野生型嗜热四膜虫虫种，(由美国标准生物资源中心提供The Global Bioresources Center)接入虫种密度为1.4×104个/mL，后分装到11个1.5mL聚四氟乙烯样品管中，每管中四膜虫虫液体积约为1.0mL。
(5)在相应一系列样品培养管中分别加入不同浓度的有机砷饲料添加剂标准溶液：
稀释(2)中所述阿散酸标准样品溶液，得到浓度分别为0、5.0ng/ml、10.0ng/ml、50.0ng/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、7.5μg/ml、10.0μg/ml系列阿散酸标准样品溶液。在超净工作台中用一次性无菌注射器分别量取约2.0ml上述系列阿散酸标准样品溶液，经过过滤器中过滤膜除菌(孔径为0.22um过滤膜放入直径为40.0mm过滤器中，高压灭菌30min后使用)。将(4)中所述聚四氟乙烯样品管中分别加入上述阿散酸系列标准样品溶液后，放置在恒温培养箱中，选择28℃下恒温培养48小时。
(6)48小时后，采用吸光光度法分析测定(5)中一系列样品管中相应四膜虫细胞密度：
从恒温培养箱中取出上述系列样品管，放置于超声清洗器中充分振摇混合样品管中相应虫液。后从每一个样品管中取出60.0微升虫液至于一次性塑料比色皿中，利用分光光度法在600纳米波长下检测相应系列样品管中四膜虫细胞密度。
(7)使(3)中得到的实际水样样品干预经作用于相应四膜虫生物模型：
(8)根据(7)中所得四膜虫细胞密度值同(6)中测定的四膜虫细胞密度结果间分析比较，以快速预警相应实际饲养场附近环境水样中有机砷饲料添加剂化合物排放情况；
从畜禽饲养场附近水环境排放体系中所取水样样品经(3)过程富集处理后，干预作用于四膜虫模型后所得的相应四膜虫细胞密度值，同(6)中一系列不同浓度梯度的标准阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂样品溶液干预后所对应得到的不同的四膜虫细胞密度值间比照，分析实际畜禽饲养场附近水环境排放体系中阿散酸/洛克沙砷有机砷饲料添加剂污染物存在的浓度范围。从而，快速预警相应实际环境水样中有机砷饲料添加剂污染物排放情况。
Claims (5)
1.一种水环境体系中有机砷饲料添加剂排放预警监测方法，其特征在于，包括如下步骤：
第一步，配制四膜虫培养基；
第二步，分别配制有机砷饲料添加剂-阿散酸标准样品溶液或洛克沙砷标准样品溶液；
第三步，采集实际水样并分离提取可能存在的有机砷饲料添加剂化合物；
第四步，在第一步所配制的培养基中接入四膜虫虫种后分装入一系列样品培养管中；
第五步，在第四步中一系列样品培养管中分别加入不同浓度的有机砷饲料添加剂标准溶液作为干预物；
第六步，48小时后，采用吸光光度法分析测定第五步中一系列样品管中相应四膜虫细胞密度；
第七步，使第三步中得到的实际水样样品干预作用于相应四膜虫虫液，同第六步中所述过程分析测定相应四膜虫细胞密度；
第八步，根据第六步中一系列不同浓度梯度的阿散酸或洛克沙砷有机砷饲料添加剂干预后，得到不同的四膜虫细胞密度值并进行比较，比照实际水样样品干预作用后所得的相应四膜虫细胞密度值，比较实际环境水体系中阿散酸或洛克沙砷有机砷饲料添加剂污染物存在的浓度范围，从而，快速预警相应实际环境水样中有机砷饲料添加剂污染物排放情况。
2.根据权利要求1所述的水环境体系中有机砷饲料添加剂排放预警监测方法，其特征是，所述配制四膜虫培养基选择以下两种方法中的一种进行配制：
A：称取蛋白胨10g、葡萄糖2g，溶解于1000mL去离子水中，搅拌均匀，分装于150mL锥形瓶中，每瓶80mL培养基，于121℃高压灭菌锅中灭菌20-30min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存；
B：称取蛋白胨10g、葡萄糖2g、酵母抽提粉1g，溶解于1000mL去离子水中，搅拌均匀，分装于150mL锥形瓶中，每瓶80mL培养基，于121℃高压灭菌锅中灭菌20-30min，后静置至室温，放置冰箱中4℃保存。
3.根据权利要求1所述的水环境体系中有机砷饲料添加剂排放预警监测方法，其特征是，所述阿散酸标准样品溶液或洛克沙砷标准样品溶液中总砷浓度分别为100微克/毫升，留存在冰箱冷藏，以备稀释使用。
4.根据权利要求1所述的水环境体系中有机砷饲料添加剂排放预警监测方法，其特征是，所述的第三步具体是指：将采集得到的实际水环境样品通过铁掺杂纳米沸石材料，在pH值4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中进行可能存在的阿散酸或洛克沙砷有机砷饲料添加剂的富集吸附处理后，经过离心处理后，利用pH值8.5的磷酸盐缓冲溶液中对有机砷进行解吸。
5.根据权利要求1所述的水环境体系中有机砷饲料添加剂排放预警监测方法，其特征是，所述培养基中接入四膜虫虫种，其中接入虫种密度为1.4×104个/mL，后分装到1.5mL聚四氟乙烯样品管中，每管中四膜虫虫液体积约为1.0mL。
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| CN2009100459524A CN101482496B (zh) | 2009-01-22 | 2009-01-22 | 水环境体系中有机砷饲料添加剂排放预警监测方法 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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