CN105181962A - 一种类风湿因子检测试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种类风湿因子检测试剂，是由试剂R1和试剂R2组成的；所述试剂R1是由磷酸盐缓冲液、月桂基咪唑啉甜菜碱、双十八烷基二甲基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)、羟基乙叉二膦酸、叠氮化钠和稳定剂SHE-50组成的；所述试剂R2是由磷酸盐缓冲、热聚合I人IgG、胶乳微球、Kathon-CG、烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)和叠氮化钠组成的。本发明试剂中的多种试剂协同作用，试剂的准确度和稳定性好，线性范围更宽，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。
Description
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，具体涉及一种准确度好、线性范围宽的类风湿因子检测试剂。
背景技术
类风湿因子（rheumatoidfactor，RF）检测在临床上是比较常用的检测项目，主要用在对自身免疫性疾病的诊断，特别是对类风湿关节炎的诊断。类风湿因子（RF）是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，是由于溶血性链球菌或其它细菌的代谢产物、慢性病毒等感染因子所引起的。RF最初由Rose和Waller（1984年）在类风湿性关节炎（RA）患者血清中发现。RF主要为19S的IgM，它与天然IgG结合的能力较差，最易与人和动物的变性IgG或免疫复合物中的IgG结合。有研究表明RF阳性率在正常人中只有2%，在老年人中是5%，而在RA患者体内可高达80%，因此普遍认为RF是RA患者体内发现的最有诊断价值的自身抗体，RA患者的RF越高，病越严重。
目前，类风湿因子的检测方法主要有胶乳凝集法、双抗原夹心ELISA法、免疫比浊法等。其中乳胶凝集法易受血脂等因素的影响，干扰因素较多，重复性不好，灵敏度及特异性不高，具有较高的假阳性，且只能进行定性或半定量测定，具有明显的局限性和缺陷。双抗原夹心ELISA法可对各种RF分子进行精确测定，但也存在耗时长，步骤多容易造成较大误差，存在假阳性和假阴性等缺点。免疫比浊法的优点是反应速度快，可以标准化，可以使用全自动生化分析仪，适合大批量的自动化操作。免疫比浊法又分为免疫透射比浊法和速率散射比浊法，临床研究表明免疫透射比浊法的抗干扰能力优于速率散射比浊法，同时免疫透射比浊法的速度更快于速率散射比浊法，但免疫透射比浊法在检测高值时出现偏差，线性范围较窄。
目前市面上主要流通的RF检测试剂盒的检测范围在0-80IU/mL，研究表明在RA患者血清中若IgM型RF的效价>80IU/mL，且伴有严重关节功能障碍时，这就表明患者预后不良。因此，提高RF检测试剂盒的检测线性范围是一项十分具有临床意义的项目。
发明内容
本发明针对现有技术的缺点，在免疫透射比浊法的基础上，优化反应体系，提供了一种准确度好、线性范围宽的类风湿因子检测试剂。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种类风湿因子检测试剂，是由试剂R1和试剂R2组成的；
所述的，试剂R1是由以下组分组成的：
磷酸盐缓冲液50mmol/L
月桂基咪唑啉甜菜碱1ml/L-5ml/L
双十八烷基二甲基氯化铵0.1ml/L-1ml/L
十二烷基三甲基氯化铵0.1g/L-1g/L
烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)2g/L
羟基乙叉二膦酸1ml/L-5ml/L
叠氮化钠0.095%
稳定剂SHE-500.15%
所述的，试剂R2是由以下组分组成的：
磷酸盐缓冲液50mmol/L
热聚合I人IgG30ml/L
胶乳微球5%
Kathon-CG0.05%
烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)2g/L
叠氮化钠0.095%。
所述的，试剂R1和试剂R2的体积比为4:1。
所述的，磷酸盐缓冲液的pH为7.4。
本发明所用的胶乳微球来自于上海元升生物有限公司，产品批号为：PS2702。
本发明的试剂在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上进行，其具体使用方法如下：加入生理盐水、样本或校准品5μl，之后再加入R1试剂280μl预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入70μl的试剂R2反应5min后，主波长为600nm，读取吸光度A2，并计算ΔA。
本发明的有益效果：
1.本发明的试剂R1中添加入了月桂基咪唑啉甜菜碱、十二烷基三甲基氯化铵和双十八烷基二甲基氯化铵三种表面活性剂，能有较好的提高试剂的乳化作用，从而提高试剂的准确度和特异性；
2.本发明采用新型表面活性剂烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)，不仅显著改善试剂的检测性能，而且增强试剂的稳定性和抗干扰能力；
3.本发明的试剂R1中加入了羟基乙叉二膦酸，能够有效的螯合重金属离子，提高试剂的准确性；
4.本发明中的Kathon-CG是一种新型高效环保型广谱杀菌剂、防腐剂，能够有效地增强试剂盒的稳定性，却不会影响试剂的准确度；
5.本发明试剂中的多种试剂协同作用，试剂的准确度和稳定性好，线性范围更宽，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。
附图说明
图1为本发明准确度检测结果图。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
本发明所使用的胶乳微球来自于上海元升生物有限公司，产品批号为：PS2702。
实施例1
一种类风湿因子检测试剂，是由试剂R1和试剂R2组成的；
所述的，试剂R1是由以下组分组成的：
磷酸盐缓冲液50mmol/L
月桂基咪唑啉甜菜碱1ml/L-5ml/L
双十八烷基二甲基氯化铵0.1ml/L-1ml/L
十二烷基三甲基氯化铵0.1g/L-1g/L
烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)2g/L
羟基乙叉二膦酸1ml/L-5ml/L
叠氮化钠0.095%
稳定剂SHE-500.15%
所述的，试剂R2是由以下组分组成的：
磷酸盐缓冲液50mmol/L
热聚合I人IgG30ml/L
胶乳微球5%
Kathon-CG0.05%
烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)2g/L
叠氮化钠0.095%。
所述的，试剂R1和试剂R2的体积比为4:1。
所述的，磷酸盐缓冲液的pH为7.4。
准确度实验
一种类风湿因子检测试剂的检测方法：采用具有双试剂功能的日立7180全自动生化分析仪，加入生理盐水、样本或校准品5μl，之后再加入R1试剂280μl预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入70μl的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA。本实施例所使用的校准品为北京九强生物技术有限公司生产的RF校准品。
将实施例1制备的类风湿因子检测试剂作为实验组，市场上获得认可的一种准确度优异的类风湿因子试剂盒（长春某公司生产）作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测结果如图1。
通过图1的检测数据可知，实验组与对照组的检测结果相关性为0.9993，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的类风湿因子检测试剂盒有高度一致性，证明本试剂盒的准确度好，完全可以满足临床需要。
线性相关性实验
检测方法同上。
实施例1制备的类风湿因子检测试剂作为实验组，市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的类风湿因子试剂盒作为对照组，使用类风湿因子高值样本为80IU/mL，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，依次为80IU/mL、64IU/mL、54IU/mL、32IU/mL、16IU/mL、0IU/mL浓度的样本，每个浓度水平各样本分别测定三次，分别取其平均值，实验结果如表1所示。
表1线性相关性实验结果
| 理论浓度（IU/mL） | 实验组实验结果（IU/mL） | 对照组实验结果（IU/mL） |
| 0 | 0.11 | 0.15 |
| 16 | 15.67 | 15.86 |
| 32 | 31.39 | 32.59 |
| 54 | 54.74 | 55.31 |
| 64 | 63.72 | 62.71 |
| 80 | 82.94 | 76.69 |
| 相关系数r | 0.9993 | 0.9988 |
上述检测结果显示，实施例1和常规试剂检测结果相关性均大于0.990，但实施例1的检测结果大于0.999，与常规试剂相比具有更好的线性相关性，这说明本发明试剂具有更好的线性相关性。
线性范围实验
检测方法同上。
实施例1制备的类风湿因子检测试剂作为实验组，市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的类风湿因子试剂盒作为对照组，使用类风湿因子高值样本为100IU/mL，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，依次为100IU/mL、80IU/mL、60IU/mL、40IU/mL、20IU/mL、0IU/mL浓度的样本，每个浓度水平各样本分别测定三次，分别取其平均值，实验结果如表2所示。
表2线性范围实验结果
由表2可以看出，实验组和对照组检测结果相关性均大于0.990，但实验组的实验结果大于0.999，对照组在80IU/mL-100IU/mL的范围内检测结果相对偏差较大，而实实验组的结果相对偏差较小，这说明本发明试剂在高值范围内具有更好的线性相关性，同时所测的线性范围更宽。
通过验证，本发明的试剂与同类检测试剂对比准确度相关性好，临床检测样本结果一致，能够达到市场对产品的应用要求，并且线性范围更宽，线性相关性更好，是一种良好的类风湿因子（RF）检测试剂。
Claims (3)
1.一种类风湿因子检测试剂，其特征在于，是由试剂R1和试剂R2组成的；
所述试剂R1是由以下组分组成的：
磷酸盐缓冲液50mmol/L
月桂基咪唑啉甜菜碱1ml/L-5ml/L
双十八烷基二甲基氯化铵0.1ml/L-1ml/L
十二烷基三甲基氯化铵0.1g/L-1g/L
烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)2g/L
羟基乙叉二膦酸1ml/L-5ml/L
叠氮化钠0.095%
稳定剂SHE-500.15%
所述试剂R2是由以下组分组成的：
磷酸盐缓冲液50mmol/L
热聚合I人IgG30ml/L
胶乳微球5%
Kathon-CG0.05%
烷基酚聚氧乙烯醚(APEO)2g/L
叠氮化钠0.095%。
2.根据权利要求1所述的类风湿因子检测试剂，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的体积比为4:1。
3.根据权利要求1所述的类风湿因子检测试剂，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH为7.4。
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