CN105177117A - 重症抑郁障碍生物标记物、筛选方法及试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域,涉及重症抑郁障碍生物标记物、筛选方法及试剂盒。本发明提供了一种重症抑郁障碍生物标记物,包括miRNA-1972、miRNA-26b、miRNA-4485、miRNA-4498和miRNA-4743,上述标记物的筛选方法以及检测上述标记物含量的试剂盒;同时还提供了一种预测抗抑郁药疗效的生物标记物,包括miRNA-1972和miRNA-4498,上述标记物的筛选方法以及检测上述标记物含量的试剂盒。本发明的有益效果在于首次提供了重症抑郁障碍生物标记物和预测抗抑郁药疗效的生物标记物,具有较高的特异性和敏感值,有较高的诊断参考价值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,涉及重症抑郁障碍生物标记物、筛选方法及试剂盒。
背景技术
重症抑郁障碍是一种常见的精神疾病,其终生患病率约为2%~14%。重症抑郁障碍者自杀构成所有自杀的1/3-1/2,其共病心血管疾病、心肌梗塞的机率明显高于正常人,严重威胁人类的心身健康。已有研究表明,重症抑郁障碍病人若能早期明确诊断并及时得到有效治疗,可以显著改善患者的心理、生理、社会功能以及工作效率,并大大减少治疗费用。然而,目前对重症抑郁障碍的诊断仍是依靠其临床症状的主观评估,缺乏有效的客观诊断“金标准”,因而在临床上误诊、误治再所难免。另一方面,由于事先未知患者对哪种药物敏感,临床上不得不用“试错法”给药,这不仅影响患者的治疗效果,而且降低其服药依从性,并造成巨大的资源浪费。因此,有必要发现一种具有敏感性和特异性的生物标志物,来提高重症抑郁障碍的诊断科学性,并对其亚型加以区分,以便于针对性地进行药物干预和开展临床科学研究。
MicroRNA是一类小分子非编码单链RNA,通过部分或完全地与靶mRNA的3'非翻译区(3'UTR)互补配对,阻止其翻译或使其降解,从而起到基因转录后调节的作用。约有50%的蛋白质编码基因受到miRNA的精确调控,多个miRNA分子可以共同调节一个基因的表达,一个miRNA分子亦可调控数百、上千个基因的表达。越来越多的研究证明,在大脑的发育、神经发生、神经元成熟及突触形成过程中,miRNA起关键的调控作用。进一步的研究表明,精神疾病的发生、发展中,miRNA亦起重要作用,并与抗精神病药物的疗效有相关性。因此,某些MicroRNA可成为抑郁症诊断和预测抗抑郁药物治疗效果的的生物标记物。
发明内容
本发明要解决的技术问题是:提供重症抑郁障碍生物标记物。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案如下:重症抑郁障碍生物标记物,所述标记物包括miRNA-1972、miRNA-26b、miRNA-4485、miRNA-4498和miRNA-4743。
在本发明的第二方面,提供了上述重症抑郁障碍生物标记物的筛选方法,包括以下步骤:取适量受试者血液,从中提取总RNA,并检测提取到的总RNA浓度;通过miRNA芯片筛查出差异性表达的miRNA;选取若干例重症抑郁障碍患者,设为病例组;选取若干例健康对照者,设为对照组;分别采集血样,提取出外周血单核细胞中的总RNA后进行miRNA的反转录和荧光定量PCR检测,所得数据使用统计学方法进行分析,得到两组间表达水平有显著性差异的miRNA。
在本发明的第三方面,提供了一种重症抑郁障碍诊断试剂盒,其能够测定血液中miRNA-1972、miRNA-26b、miRNA-4485、miRNA-4498和miRNA-4743的含量。
优选的,所述重症抑郁障碍诊断试剂盒含有miRNA-1972、miRNA-26b、miRNA-4485、miRNA-4498和miRNA-4743引物探针,所述探针序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示。
所述试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂,如Taq酶,逆转录酶,缓冲液,dNTPs,MgCl2和DEPC水等;还可以含有标准品和/或对照品。
在本发明的第四方面,还提供了序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的探针的用途,其用于制备重症抑郁障碍诊断试剂盒。
在本发明的第五方面,提供了一种预测抗抑郁药疗效的生物标记物,所述标记物包括miRNA-1972和miRNA-4498。
在本发明的第六方面,提供了上述预测抗抑郁药疗效生物标记物的筛选方法,包括以下步骤:取适量受试者血液,从中提取总RNA,并检测提取到的总RNA浓度;通过miRNA芯片筛查出差异性表达的miRNA;选取若干例重症抑郁障碍患者进行临床药物干预随访观察,对选取得到的患者分别施以临床常用的抗抑郁药,在用药前后分别采集血样,提取出外周血单核细胞中的总RNA后进行miRNA的反转录和荧光定量PCR检测,所得数据使用统计学方法进行分析,得到用药前后表达水平有显著性差异的miRNA。
在本发明的第七方面,提供了一种预测抗抑郁药疗效的生物标记物检测试剂盒,其能够测定血液中miRNA-1972和miRNA-4498的含量。
优选的,所述预测抗抑郁药疗效的生物标记物检测试剂盒含有miRNA-1972和miRNA-4498的引物探针,所述探针序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.4所示。
所述试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂,如Taq酶,逆转录酶,缓冲液,dNTPs,MgCl2和DEPC水等;还可以含有标准品和/或对照品。
在本发明的第八方面,还提供了序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.4所示的探针的用途,其用于制备预测抗抑郁药疗效的试剂盒。本发明的有益效果在于:
1、重症抑郁障碍的诊断将不再只是主观经验判断,而是可以通过microRNA这种客观指标检查,进行确诊,提高诊断准确率,简化诊断过程;
2、有望通过miRNA模拟物和拮抗物(修饰寡核苷酸)改变特定miRNA表达水平能够使异常的基因调控网络和信号通路正常化,进而治疗重症抑郁障碍;
3、有望通过检测特定miRNA表达水平对重症抑郁障碍的用药疗效进行预测;
4、有望通过检测特定miRNA表达水平对重症抑郁障碍患者转归及预后情况进行预测;
5、有望通过miRNA模拟物和拮抗物对特定重症抑郁障碍某种特定症状进行针对性治疗。
附图说明
图1为差异性表达的miRNA的ROC曲线。
图2为重症抑郁障碍病人与对照者间5个miRNA表达结果对比。
具体实施方式
一、研究对象
重症抑郁障碍组:2012年8月至2013年10月,从解放军102医院募集共91例重症抑郁障碍病例。入组标准:1.满足美国精神疾病诊断与统计手册第四版(DSM-IV-TR)诊断标准;2.汉密尔顿量表(24项版)评分≧20分;3.汉族。排除标准:①有双向障碍、精神分裂症、严重神经系统疾病或其它严重躯体疾病者;②入组前3个月内使用过抗抑郁药物及其它精神类药物,或接受过电休克治疗,或有严重脑外伤史者。
健康对照组:同期选择46例健康志愿者,要求汉族,本人及两系亲属中无精神疾病史,本人无严重神经系统疾病或其它严重躯体疾病、严重脑外伤史,近3个月内无严重应激事件。患者组与对照组根据年龄和性别按2:1组成配对。(说明:少数患者组中2病例年龄相差1岁。)
在开展研究前,首先对参加本课题的精神专科医师和研究生进行培训,并取得相关量表的评估者信度,r=0.83。采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、大体评定量表(GAS)在病例入组前、药物治疗3周后、药物治疗6周后分别进行评估。由两位精神科主治医师根据DSM-IV-TR对患者进行诊断,如果出现不一致情况,则请一位精神科主任医师共同讨论后确定诊断。
入组时记录一般情况(姓名、性别、年龄、民族、文化程度、职业、收入水平、婚姻状况、药物成瘾史及精神疾病家族史等)。同样,记录正常对照组一般情况。
本研究获得中国人民解放军第102医院医学伦理委员会批准,所有受试者或受试家属(监护人)均签署知情同意书。
二、研究方法
①使用量表
汉密顿抑郁量表(HAMD)是临床上评定抑郁状态最常用的量表,于1960年由Hamilton编制,有17项、21项和24项3个版本。本研究使用的是24项版本。该量表适用于有抑郁症状的成人,大部分项目采用5级评分法:“无”记0分,“轻度”记1分,“中度”记2分,“重度”记3分,“极重度”记4分;少部分项目采用3级评分法:“无”记0分,“轻~中度”记1分,“重度”记2分。本量表可归纳为7个因子:①焦虑/躯体化;②体重;③认知障碍;④日夜变化;⑤阻滞;⑥睡眠障碍;⑦绝望感。本量表经中国本土化并信、效度检验后,可用于中国人群。
临床疗效总评量表(CGI)最先由WHO设计,用于评定临床疗效,可适用于任何精神科治疗和研究对象。其中疗效总分(GI),采用8级评分法:“未评”记0分,“显著进步”记1分,“进步”记2分,“稍进步”记3分,“无变化”记4分,“稍恶化”记5分,“恶化”记6分,“严重恶化”记7分。本量表经中国本土化并信、效度检验后,可用于中国人群。
②资料收集
入组时记录一般情况(姓名、性别、年龄、民族、文化程度、职业、收入水平、婚姻状况、药物成瘾史及精神疾病家族史等)。由3名精神科主治医师或医师使用汉密顿抑郁量表(HAMD)和临床疗效总评量表(CGI)于用药前及用药6周以上对病例组被试进行评定。评定前,所有参与研究人员进行统一培训,统一方法等,标准化施测过程。其中HAMD使用总分和因子分统计,CGI使用疗效总评分(globalimprovement,GI)统计。
③药物干预
在病例组中随机选取20例进行临床药物干预随访观察。对其采用每日服用文拉法辛(剂量范围150mg-225mg)、舍曲林(剂量范围50mg-150mg)、米氮平(剂量范围22.5mg-45mg)治疗;所服药物均为新型抗抑郁药,对5-羟色胺受体和/或去甲肾上腺素受体的回收具有抑制作用,对抑郁症有较好的疗效,且在治疗剂量下副反应较少。
④主要试剂和耗材
RNA提取试剂盒:miRNeasy血清/血浆提取试剂盒(德国凯杰公司,货号NO.217184);外参试剂:miRNeasy血清/血浆外参(德国凯杰公司,货号.NO.219610);荧光定量PCR引物:TaqManMicroRNAAssays(美国ABI公司);荧光定量PCR试剂:TaqMan通用混合试剂盒Ⅱ(美国ABI公司,货号NO.121207);反转录试剂盒:TaqManMicroRNA反转录试剂盒(美国ABI公司,货号NO.1302146R)。
⑤主要仪器
扫描仪(仪器来源:Affymetrix,型号:Scanner3000);杂交炉(仪器来源:Affymetrix,型号:HybridizationOven640);洗涤工作站(仪器来源:Affymetrix,型号:FluidicsStation450);2100(仪器来源:Agilent,型号:G2939A);2100振荡器(仪器来源:Agilent,型号:9600);NanoDrop(Thermo,2000);PCR仪(ABI,9700);离心机(eppendorf,5418);浓缩仪(eppendorf,5301);离心机(其林贝尔,LX-200);离心机-1(其林贝尔,LX-300);振荡器-1(其林贝尔,GL-88B);磁力搅拌器(其林贝尔,GL-3250B);金属浴-2(博日,HB-100);金属浴-3(博日,CHB-100);电热恒温培养箱(精宏实验设备,XMTD-8222);冰箱(荣事达,BCD-265F);ABI9700型PCR仪(美国ABI公司);天美CT14RD型台式高速冷冻离心机(上海天美生化仪器设备工程有限公司);NanoDrop1000超微量紫外分光光度计(附电脑1套)(美国Thermo公司);ABI7900HTFastRead-TimePCRSystem(附电脑1套)(美国ABI公司);WH-2微型漩涡混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司);JS-400A恒温金属浴(上海培清科技有限公司);DK-8D数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂);SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台(苏净净化设备有限公司);-81℃超低温冰箱(日本三洋公司)。
⑥总RNA提取和miRNA表达谱芯片检测
取3例重症抑郁障碍病例(男性,31岁;男性,30岁;女性,28岁)和3例正常对照者(男性,31岁;男性,30岁;女性,27岁)的外周血样,根据mirVanaTMPARISTMKit试剂盒(AppliedBiosystems,p/nAM1556)的使用说明书提取总RNA。经NanoDrop1000分光光度计(NanodropTechnologies,Wilmington,DE,USA)检测所提取的总RNA的浓度。经Agilent2100Bioanalyzer(AgilentTechnologies)用RNA6000PicoLabChipkit检测,总RNA质量合格(RNA完整指数[RIN]﹥5)。
使用Agilent公司人类miRNA微阵列(HumanmiRNAmicroarraysV2.0)测试各组miRNA的表达。所用芯片为AffymetrixmiRNA3.0,芯片数据库来源于miRBase17.0。该微阵列取自SangerV.10.1数据库,包含723个人类miRNA的探针。每张芯片上样量为1ug,RNA质检合格后,样本的标记、芯片的杂交以及洗脱参照芯片标准流程。首先,总RNA经过PlolyA加尾,再进一步用生物素标记(microRNACompleteLabelingandHybKit[Agilent,USA])。标记好的RNA和芯片杂交(HumanmicroRNAMicroarrayKit[Release16.0,Agilent]),洗涤和染色后利用AffymetrixScanner3000(Affymetrix)扫描得到原始图像。继而采用ExpressionConsole软件(version1.3.1,Affymetrix)处理提取原始数据并进行RMA标准化,并使用用Genesrping软件(version12.5;AgilentTechnologies)进行后续处理。芯片的图像信息通过ScannerControlRev.7.0软件转换为密度值。所有数据均通过内参miR-1228进行标准化。任一样本数据如果在实验重复中变异系数超过15%或能检测到信号的位点占总数少于5%,则被丢弃不进入下一步分析。
⑦实时定量PCR
在miRNA芯片筛查出外周血单核细胞(Peripheralbloodmononuclearcell,以下简称PBMC)中差异性表达的miRNA后,对91例重症抑郁障碍组病人和46例健康对照者中采用实时定量PCR方法进行验证。使用TRIzol试剂(USA)提取出外周血单核细胞中的总RNA后,采用微量紫外分光光度计进行浓度检测,然后将总RNA浓度统一稀释到约40ng/ul。使用TaqManMicroRNAReverseTranscriptionKit(AppliedBiosystems,P/N:4366596)和ABImiRNAPCRAssays进行miRNA反转录和荧光定量PCR检测,检测仪器为ABI7900HT荧光定量PCR仪。每份miRNA反转录反应体系包括总RNA5ul(约200ng)、dNTPmix(100mM)0.15ul、MultiscribeRTenzyme(50U/ul)1.00ul、10×RTBuffer、1.5ul、RNaseInhibitor0.19ul、Nucleasefreewater4.16ul、TaqManMicroRNAAssays3ul,总体积为15ul。反转录条件:16℃反应30分钟、42℃30分钟、85℃5分钟,然后于4℃保存。每份miRNA实时荧光定量PCR检测扩增体系包括TaqManUniversalMasterMixII(AppliedBiosystems,CA)5ul、TaqManMicroRNAAssays(AppliedBiosystems,CA)0.5ul、ddH2O2.5ul、反转录产物2ul,总体积为10ul。miRNA实时荧光定量PCR反应过程为:95℃预变性10分钟、95℃变性15秒及60℃延伸1分钟共40个循环。每个样本进行三次反应,取其平均值。实验中所使用的miRNA特异性茎环引物与TaqMan探针由AppliedBiosystems公司根据目标miRNA序列合成并提供使用。使用SDS2.4和DataAssistv3.0软件进行数据读取和分析,选择RNU48为内参进行数据标准化后,用2-△△CT法进行计算分析差异表达。
实时定量PCR部分由美国GOPATH公司常州基地完成。
⑧统计学处理
所有资料都用()表示。用卡方检验分析病例组和对照组间性别、年龄的差异性。病例组与对照组外周血miRNA表达差异用Wilcoxon秩和检测。利用受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve,ROC曲线)及曲线下面积(AreaUnderTheCurve,AUC)评价差异性表达miRNA的诊断价值。统计工具采用SPSS17.0(Chicago,IL,USA)和GraphpadPrism5.01(GraphpadSoftwareInc.,SanDiego,CA,USA)进行。以P﹤0.05(two-tailed)为差异有统计学意义。
三、研究结果
1、重症抑郁障碍患者与健康对照者相较:外周血单核细胞中miRNA存在差异性表达。共筛选出26个差异性表达的成熟miRNA,其中21个表达上调,5个表达下调;具体数据如表1所示:
表1芯片分析中重症抑郁障碍病人PBMC差异性表达的miRNAs
2、重症抑郁障碍组PBMC中miRNA的CT值均较对照组为低,提示其实际表达水平均较对照组增高。除miRNA-338外,其余9个miRNA表达水平与芯片筛查结果的趋势相一致。两组间表达水平有显著性差异的有miR1972、miR26b、miR4485、miR4498、miR4743等5个miRNA,见表2:
表2抑郁组和对照组PBMC中miRNA的表达水RT-PCR分析平(ΔCT)()
3、ROC曲线分析提示,RT-PCR验证的差异性表达的5个miRNA分子具有重症抑郁障碍的诊断价值。其中miRNA-1972的AUC为0.6071(95%CI:0.505-0.709),miRNA-26b的AUC为0.6247(95%CI:0.523-0.726),miRNA-4485的AUC为0.6122(95%CI:0.509-0.716),miRNA-4498的AUC为0.6213(95%CI:0.519-0.723),miRNA-4743的AUC为0.6229(95%CI:0.521-0.721),5个miRNA的联合ROC曲线的AUC为0.6361,敏感值为54.35%,特异值为79.01%。
用于诊断重症抑郁障碍的试剂盒包括如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的引物探针,可由LifeTechnologies公司购得;还可以有可以有相应PCR技术所需的常用试剂,如:Taq酶,逆转录酶,缓冲液,dNTPs,MgCl2和DEPC水等,这些都是本领域技术人员熟知的;另外还可以含有标准品和/或对照品。
4、有效组用药6周后5种miRNA的ΔCT均升高,其中2种miRNA(miR-1972,,miR-4498),用药前与用药6周后表达差异有统计学意义。治疗无效组中,4种miRNA的ΔCT降低,1种ΔCT升高(miRNA-26b),用药前与用药6周后表达差异均无统计学意义,见表3:
表3有效组与无效组用药前、后miRNA变化(ΔCT差值的中位数)
用于预测抗抑郁药疗效的试剂盒包括如SEQIDNO.1和SEQIDNO.4所示的引物探针,可由LifeTechnologies公司购得;还可以有可以有相应PCR技术所需的常用试剂,如:Taq酶,逆转录酶,缓冲液,dNTPs,MgCl2和DEPC水等,这些都是本领域技术人员熟知的;另外还可以含有标准品和/或对照品。
5、用药过程中,ΔmiRNA-1972、ΔmiRNA-4485、ΔmiRNA-4498、ΔmiRNA-4743与阻滞因子的改善程度呈正相关(P<0.05);ΔmiRNA-26b与日夜变化因子的改善程度呈负相关(P<0.05);ΔmiRNA与GI相关无显著差异(P>0.05),见表4:
表4ΔmiRNA与HAMD量表总分、各因子及GI的相关性分析
6、microRNA靶基因预测,采用TargetScan、MicroRNAorg、及PITA三种算法所预测的相关microRNA的靶基因,其中miR-1972在TargetScan、MicroRNAorg中可预测到靶基因,miR-4485、miR-4498、miR-4743仅在TargetScan中可预测到靶基因,见表5:
表5差异性表达的microRNA所部分预测到的靶基因
7、预测靶基因的GO分析,显示miR-26b所调控的靶基因集合,其主要功能富集在蛋白磷酸化、跨膜转运、钾离子转运、调节细胞周期、神经细胞轴突导向、染色质修饰等生物学过程,信号通路显著富集于癌症信号通路、Wnt信号通路、内质网蛋白加工信号通路、胰岛素信号通路、轴突导向信号通路、谷氨酸能信号通路以及mRNA监视信号通路等;miR-1972的靶基因功能主要富集在离子转运,蛋白磷酸化、调控细胞周期、负性调控转录过程、细胞分化、染色质修饰、物质代谢等生物学过程,信号通路显著富集于MAPK信号通路、Focaladhesion信号通路、ErbB信号通路、轴突导向信号通路、Toll样受体信号通路、GnRH信号通路、T细胞受体信号通路、凋亡信号通路、及mTOR信号通路等;miR-4485的靶基因功能主要富集在神经系统发育、心脏发育、血管生成、脊髓少突细胞特异性分化、神经元定向分化、离子型谷氨酸受体信号通路等生物学过程,信号通路显著富集于内质网蛋白加工信号通路、Notch信号通路、及烟酸/烟酰胺代谢通路;miR-4498的靶基因功能主要富集在多细胞组织发育、正向调节细胞增殖、钠离子转运、凋亡调控、葡萄糖代谢、mRNA降解、及脂蛋白代谢等生物学过程,信号通路显著富集于胰岛素信号通路、黑色素原生成通路、及光传导通路;miR-4743的靶基因功能主要富集在突触传递、骨吸收、神经突触可塑性调节、AMPA选择性谷氨酸受体活性调节、安非他明药物反应、长时记忆、成人运动行为、嗅觉学习过程、视觉学习过程、调节细胞通讯、大脑皮层发育、及社会行为等生物学过程,miR-4743的靶基因信号通路未检索到。
本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。
序列表
<110>张理义;常州杰傲病理诊断技术有限公司
<120>重症抑郁障碍生物标记物、筛选方法及试剂盒
<160>5
<210>1
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<400>1
UCAGGCCAGGCACAGUGGCUCA
<210>2
<211>21
<212>RNA
<213>人工序列
<400>2
UUCAAGUAAUUCAGGAUAGGU
<210>3
<211>20
<212>RNA
<213>人工序列
<400>3
UAACGGCCGCGGUACCCUAA
<210>4
<211>22
<212>RNA
<213>人工序列
<400>4
UGGGCUGGCAGGGCAAGUGCUG
<210>5
<211>23
<212>RNA
<213>人工序列
<400>5
UGGCCGGAUGGGACAGGAGGCAU
Claims (10)
1.重症抑郁障碍生物标记物,所述标记物包括miRNA-1972、miRNA-26b、miRNA-4485、miRNA-4498和miRNA-4743。
2.一种如权利要求1所述的重症抑郁障碍生物标记物的筛选方法,包括以下步骤:取适量受试者血液,从中提取总RNA,并检测提取到的总RNA浓度;通过miRNA芯片筛查出差异性表达的miRNA;选取若干例重症抑郁障碍患者,设为病例组;选取若干例健康对照者,设为对照组;分别采集血样,提取出外周血单核细胞中的总RNA后进行miRNA的反转录和荧光定量PCR检测,所得数据使用统计学方法进行分析,得到两组间表达水平有显著性差异的miRNA。
3.一种重症抑郁障碍诊断试剂盒,其能够测定血液中miRNA-1972、miRNA-26b、miRNA-4485、miRNA-4498和miRNA-4743的含量。
4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于其含有miRNA-1972、miRNA-26b、miRNA-4485、miRNA-4498和miRNA-4743的引物探针,所述探针序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示。
5.序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的引物探针在制备重症抑郁障碍诊断试剂盒中的应用。
6.预测抗抑郁药疗效的生物标记物,所述标记物包括miRNA-1972和miRNA-4498。
7.一种如权利要求4所述的预测抗抑郁药疗效生物标记物的筛选方法,包括以下步骤:取适量受试者血液,从中提取总RNA,并检测提取到的总RNA浓度;通过miRNA芯片筛查出差异性表达的miRNA;选取若干例重症抑郁障碍患者进行临床药物干预随访观察,对选取得到的患者分别施以临床常用的抗抑郁药,在用药前后分别采集血样,提取出外周血单核细胞中的总RNA后进行miRNA的反转录和荧光定量PCR检测,所得数据使用统计学方法进行分析,得到用药前后表达水平有显著性差异的miRNA。
8.一种预测抗抑郁药疗效的试剂盒,其能够测定血液中miRNA-1972和miRNA-4498的含量。
9.如权利要求8所述的试剂盒,其特征在于其含有miRNA-1972和miRNA-4498的引物探针,所述探针序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.4所示。
10.序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.4所示的引物探针在制备预测抗抑郁药疗效的试剂盒中的应用。
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