CN105168256A

CN105168256A - 酶解金枪鱼美容抗自由基片剂及其制备方法

Info

Publication number: CN105168256A
Application number: CN201510565225.6A
Authority: CN
Inventors: 胡世伟; 吴凯强; 宋文东; 郭健; 纪丽丽; 李世杰; 王亚宁; 姜维; 蔡璐
Original assignee: Zhejiang Ocean University ZJOU
Current assignee: Zhejiang Ocean University ZJOU
Priority date: 2015-09-08
Filing date: 2015-09-08
Publication date: 2015-12-23

Abstract

本发明公开了酶解金枪鱼美容抗自由基片剂及其制备方法，包括采用金枪鱼血为原料，其中：按重量份数含有：金枪鱼血酶解物干粉15-20份；淀粉4-8份；糊精5-12份；酒石酸0.1-0.4份；硬脂酸镁0.2-0.4份。本发明成品安全无毒副作用，抗氧化活性强和易于消化吸收，可消除自由基和抑制脂质过氧化作用。酒石酸、硬脂酸镁的配合使用意想不到的取得了很好的抗氧化成分保持的效果。因而本发明有提取快速、有效成分含量高、安全无毒副作用、无关成分少、抗氧化活性强和易于消化吸收、可消除自由基和抑制脂质过氧化作用的优点。

Description

酶解金枪鱼美容抗自由基片剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种抗氧化制品及其制备方法，尤其涉及酶解金枪鱼美容抗自由基片剂及其制备方法。

背景技术

抗氧化剂是一类可以阻止氧气不良影响，帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害。本发明的高效去自由基片剂加入了金枪鱼血，克服了以往片剂中微量元素的不足，能高效的祛除自由基，同时促进细胞再生。且金枪鱼血制备的抗氧化剂的毒性远远低于人工合成的。具有安全，无毒副作用的优点。

金枪鱼是世界远洋渔业的重要作业鱼种之一，据联合国粮农组织统计，世界金枪鱼年产量超过600万吨，占公海渔业总产量70%以上，在金枪鱼加工过程中产生大量的金枪鱼血。研究表明金枪鱼血中粗蛋白含量也比较高，是良好的蛋白质来源。然而，我国金枪鱼血的加工应用情况不仅如人意，90%以上仍被丢弃，造成金枪鱼资源的极大浪费，也给生态环境带来了较大压力。因此综合高效利用金枪鱼血具有重要的意义。

我国对于金枪鱼血抗氧化剂的研究尚处于空白阶段，对于实际可行的酶解工艺及分离纯化目前鲜见报道。而目前已经报道的甲鱼、河蚌、贻贝等为原料制备抗氧化剂的方法并不适用于以金枪鱼血为原料制备抗氧化剂。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术提供一种提取快速、有效成分含量高、安全无毒副作用、无关成分少、抗氧化活性强和易于消化吸收、可消除自由基和抑制脂质过氧化作用的酶解金枪鱼美容抗自由基片剂及其制备方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：酶解金枪鱼美容抗自由基片剂，包括采用金枪鱼血为原料，其中：按重量份数含有：金枪鱼血酶解物干粉15-20份；淀粉4-8份；糊精5-12份；酒石酸0.1-0.4份；硬脂酸镁0.2-0.4份。本发明成品安全无毒副作用，抗氧化活性强和易于消化吸收，可消除自由基和抑制脂质过氧化作用。酒石酸、硬脂酸镁的配合使用意想不到的取得了很好的抗氧化成分保持的效果。

为优化上述技术方案，采取的措施还包括：抗自由基片剂还含有乙醇。乙醇是作为抗自由基片剂制备中良好的溶剂，同时分离容易，也较为安全。金枪鱼血酶解物的制备步骤如下：

1）将金枪鱼血去腥后，用磷酸缓冲液调节pH,在一定的条件下酶解灭活；

2）将步骤1）制得的样品离心后，取上清液脱盐，干燥后得到金枪鱼血酶解物干粉。本发明金枪鱼血酶解物干粉具有高抗氧化、易吸收的特性，为产品的良好商业特性奠定了基础。磷酸缓冲液调节pH的范围优选在7-9；金枪鱼血去腥优选采用6号轻汽油，并且该轻汽油与金枪鱼血的体积比为4-6：1；酶解所用的酶为胃蛋白酶或胰蛋白酶或木瓜蛋白酶或其组合。6号轻汽油可以去腥，同时出乎意料的取得了保持抗氧化有效成分的效果。适当的轻汽油和鱼血比可以进一步的保留有效成分，避免其不必要的损失。步骤1）中，酶解时条件为温度50-60℃，时间2.5-3.5h；步骤1）中，灭活时条件为温度95-100℃，时间10-15min。通过调节pH等处理，在较高温度灭活后反而仍然留有大量有效成分，提取效果出乎意料的成功，且具有提取处理过程快速的优点。步骤2）中，离心条件为转速8000r/min-10000r/min，时间10-15min，温度为4-10℃。步骤2）中，脱盐的过程为将得到的酶解物制成浓度为15mg/mL-20mg/mL溶液，加入到大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用质量浓度45-55%乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉。采用乙醇带走水分，在除水效果好的情况下又能兼顾后期压片时仍然采用乙醇作为溶剂，极大的避免了无关成分的引入，保证了产品质量，进一步提高了安全性。

由于本发明采用了按重量份数含有：金枪鱼血酶解物干粉15-20份；淀粉4-8份；糊精5-12份；酒石酸0.1-0.4份；硬脂酸镁0.2-0.4份。本发明成品安全无毒副作用，抗氧化活性强和易于消化吸收，可消除自由基和抑制脂质过氧化作用。酒石酸、硬脂酸镁的配合使用意想不到的取得了很好的抗氧化成分保持的效果。因而本发明具有提取快速、有效成分含量高、安全无毒副作用、无关成分少、抗氧化活性强和易于消化吸收、可消除自由基和抑制脂质过氧化作用的优点。

本发明还提供一种处理速度快、工艺方法成熟、无关成分少，产品安全性好、易吸收、抗氧化效果明显的酶解金枪鱼美容抗自由基片剂的制备方法。具体包含如下步骤：

2）将步骤1）制得的样品离心后，取上清液脱盐，得到金枪鱼血酶解物；

3）将金枪鱼血酶解物加入一定量的淀粉、糊精、酒石酸硬脂酸镁并以乙醇混溶，按照湿法压片的流程制成片剂。

本方法的处理速度快、工艺方法成熟、无关成分少，产品安全性好、易吸收、抗氧化效果明显。步骤3）的主要组分按重量份数含有：金枪鱼血酶解物干粉15-20份；淀粉4-8份；糊精5-12份；酒石酸0.1-0.4份；硬脂酸镁0.2-0.4份。混溶时采用适量乙醇即可，一般可控制在0.1至20份，具体看压片工艺可灵活掌握。

具体实施方式

以下结合附实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1：

酶解金枪鱼美容抗自由基片剂及其制备方法，包括采用金枪鱼血为原料，其中：按重量份数含有：金枪鱼血酶解物干粉15-20份；淀粉4-8份；糊精5-12份；酒石酸0.1-0.4份；硬脂酸镁0.2-0.4份。成品安全无毒副作用，抗氧化活性强和易于消化吸收，可消除自由基和抑制脂质过氧化作用。酒石酸、硬脂酸镁的配合使用意想不到的取得了很好的抗氧化成分保持的效果。抗自由基片剂还含有乙醇。乙醇是作为抗自由基片剂制备中良好的溶剂，同时分离容易，也较为安全。金枪鱼血酶解物的制备步骤如下：

2）将步骤1）制得的样品离心后，取上清液脱盐，干燥后得到金枪鱼血酶解物干粉。本发明金枪鱼血酶解物干粉具有高抗氧化、易吸收的特性，为产品的良好商业特性奠定了基础。磷酸缓冲液调节pH的范围优选在7-9；金枪鱼血去腥优选采用6号轻汽油，并且该轻汽油与金枪鱼血的体积比为4-6：1；酶解所用的酶为胃蛋白酶或胰蛋白酶或木瓜蛋白酶或其组合。6号轻汽油可以去腥，同时出乎意料的取得了保持抗氧化有效成分的效果。适当的轻汽油和鱼血比可以进一步的保留有效成分，避免其不必要的损失。所述步骤1）中，酶解时条件为温度50-60℃，时间2.5-3.5h；所述步骤1）中，灭活时条件为温度95-100℃，时间10-15min。通过调节pH等处理，在较高温度灭活后反而仍然留有大量有效成分，提取效果出乎意料的成功，且具有提取处理过程快速的优点。所述步骤2）中，离心条件为转速8000r/min-10000r/min，时间10-15min，温度为4-10℃。所述步骤2）中，脱盐的过程为将得到的酶解物制成浓度为15mg/mL-20mg/mL溶液，加入到大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用质量浓度45-55%乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉。采用乙醇带走水分，在除水效果好的情况下又能兼顾后期压片时仍然采用乙醇作为溶剂，极大的避免了无关成分的引入，保证了产品质量，进一步提高了安全性。包含如下步骤：

下面通过具体例子进一步说明本发明：

（1）取金枪鱼血500mL,加入2000mL的6号轻汽油去腥，除去6号轻汽油，用磷酸缓液调节pH至7；

（2）取上述金枪鱼稀释液加入2.8g胰蛋白酶，在55℃下酶解3h后，迅速升温至95℃，维持10min；

（3）将酶解液在转速为9000r/min，温度为4℃下离心10min，取上清液；

（4）将得到的酶解物制成浓度为15mg/mL溶液，加入到大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用质量浓度55%乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉。

（5）取酶解物干粉20g，淀粉8g，糊精12g，酒石酸0.4g，乙醇适量，硬脂酸镁0.4g混合物均匀，制作软材，通过18目尼龙筛制粒。

（6）将颗粒用压片机压成片剂后，即得成品。

实施例2：

（2）取上述金枪鱼稀释液加入5g胰蛋白酶，在55℃下酶解3h后，迅速升温至100℃，维持15min；

（3）将酶解液在转速为8000r/min，温度为4℃下离心10min，取上清液；

（4）将得到的酶解物制成浓度为20mg/mL溶液，加入到大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用质量浓度55%乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉。

（6）将颗粒用压片机压成片剂后，即得成品。

实施例3：

（2）取上述金枪鱼稀释液加入5g胰蛋白酶，在55℃下酶解3h后，迅速升温至95℃，维持10min；

（4）将得到的酶解物制成浓度为18mg/mL溶液，加入到大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用质量浓度45%乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉。

（6）将颗粒用压片机压成片剂后，即得成品。

实施例4：

（1）取金枪鱼血500mL,加入2200mL的6号轻汽油去腥，除去6号轻汽油，用磷酸缓液调节pH至8；

（2）取上述金枪鱼稀释液加入4.5g胰蛋白酶，在60℃下酶解3h后，迅速升温至100℃，维持10min；

（4）将得到的酶解物制成浓度为15mg/mL-20mg/mL溶液，加入到大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用质量浓度55%乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉。

（6）将颗粒用压片机压成片剂后，即得成品。

实施例5：

（2）取上述金枪鱼稀释液加入4.2g胰蛋白酶，在50℃下酶解3.5h后，迅速升温至95℃，维持10min；

（3）将酶解液在转速为10000r/min，温度为8℃下离心15min，取上清液；

（4）将得到的酶解物制成浓度为18mg/mLL溶液，加入到大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用质量浓度45%乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉。

（6）将颗粒用压片机压成片剂后，即得成品。

美容抗氧化自由基性能检测：

将40只小鼠分成两组，一组定期灌胃美容抗自由基片剂，一组为空白对照组，35天后取肝脏血液测定血样中的GSH-PX活力、SOD活力、GSH活力，结果证明GSH-PX活力较对照组平均提高12%，SOD活力较对照组提高19%，GSH活力较对照组平均提高9-10%。

尽管已结合优选的实施例描述了本发明，然其并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，能够对在这里列出的主题实施各种改变、同等物的置换和修改，因此本发明的保护范围当视所提出的权利要求限定的范围为准。

Claims

1.酶解金枪鱼美容抗自由基片剂，包括采用金枪鱼血为原料，其特征是：按重量份数含有：

金枪鱼血酶解物干粉15-20份；

淀粉4-8份；

糊精5-12份；

酒石酸0.1-0.4份；

硬脂酸镁0.2-0.4份。

2.根据权利要求1所述的酶解金枪鱼美容抗自由基片剂，其特征是：所述的抗自由基片剂还含有乙醇。

3.根据权利要求1所述的酶解金枪鱼美容抗自由基片剂，其特征是：所述的金枪鱼血酶解物的制备步骤如下：

2）将步骤1）制得的样品离心后，取上清液脱盐，干燥后得到金枪鱼血酶解物干粉。

4.根据权利要求3所述的酶解金枪鱼美容抗自由基片剂，其特征是：所述的磷酸缓冲液调节pH的范围优选在7-9；所述的金枪鱼血去腥优选采用6号轻汽油，并且该轻汽油与金枪鱼血的体积比为4-6：1；所述的酶解所用的酶为胃蛋白酶或胰蛋白酶或木瓜蛋白酶或其组合。

5.根据权利要求3所述的酶解金枪鱼美容抗自由基片剂，其特征是：所述步骤1）中，所述的酶解时条件为温度50-60℃，时间2.5-3.5h；所述步骤1）中，所述的灭活时条件为温度95-100℃，时间10-15min。

6.根据权利要求3所述的酶解金枪鱼美容抗自由基片剂，其特征是：所述步骤2）中，所述的离心条件为转速8000r/min-10000r/min，时间10-15min，温度为4-10℃。

7.根据权利要求3所述的酶解金枪鱼美容抗自由基片剂，其特征是：所述步骤2）中，所述的脱盐的过程为将得到的酶解物制成浓度为15mg/mL-20mg/mL溶液，加入到大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用质量浓度45-55%乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉。

8.酶解金枪鱼美容抗自由基片剂的制备方法，其特征是：包含如下步骤：

3）将所述的金枪鱼血酶解物加入一定量的淀粉、糊精、酒石酸硬脂酸镁并以乙醇混溶，按照湿法压片的流程制成片剂。

9.根据权利要求8所述的酶解金枪鱼美容抗自由基片剂的制备方法，其特征是：所述的步骤3）的主要组分按重量份数含有：

金枪鱼血酶解物干粉15-20份；

淀粉4-8份；

糊精5-12份；

酒石酸0.1-0.4份；

硬脂酸镁0.2-0.4份。