CN105147996A - 一种补肾益髓生血方及其膏剂和颗粒的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种补肾益髓生血方及其膏剂和颗粒的制备方法，药料包括黄精、生地黄、补骨脂、女贞子、墨旱莲、枸杞、何首乌、菟丝子、淫羊藿、巴戟天、黄芪、西洋参、当归、白术、茯苓、山茱萸、地骨皮、鹿角胶、龟板胶、阿胶以及蜂蜜；制备方法包括煎煮、取上清液、浓缩和收膏。本发明的有益效果：本发明更加方便患者服用，提高了临床应用性，能促进造血干细胞的恢复，刺激骨髓增生，改善骨髓造血功能，减轻患者感染、出血发生、减轻输血依赖及西药毒副作用、减少西药用量、延缓疾病恶性克隆演化等方面作用；并且能够提高端粒酶活性，抑制端粒缩短。

Description

一种补肾益髓生血方及其膏剂和颗粒的制备方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体来说，涉及一种补肾益髓生血方及其膏剂和颗粒的制备方法。

背景技术

再生障碍性贫血（简称“再障”）是血液系统常见疾病。中医或中西医结合治疗的疗效已逐渐为医学界肯定。慢性再障的治疗多以中医中药、雄激素、环孢菌素A（CsA）为主。雄激素与免疫抑制剂联合应用可明显提高疗效。邵宗鸿等报道用长效丙酸睾丸酮与CsA联合治疗慢性再障45例，有效率83.3%，高于单用长效丙酸睾丸酮组（66.5%）。但西药副作用大，长期应用对再障患者向克隆性疾病的演化有一定影响。我国自20世纪50年代起开始研究再障的中医及中西医结合治疗，治疗已从补益气血发展到补肾益髓为主。现代药理研究亦表明，补肾方药能促进造血干细胞恢复，改善骨髓造血功能，并且能够延缓细胞衰老，提高端粒酶活性或抑制端粒缩短。补肾中药的疗程应在半年以上，有效后需巩固治疗。本法的优点为疗效持久，无明显不良反应。根据近10年的统计，中药为主、中西医结合治疗再障的有效率达80％左右。

目前有观点认为端粒、端粒酶代谢有关的酶基因缺陷以及端粒相关蛋白异常可能是导致再障发病的重要因素之一，它们对再障的发生、发展、治疗及转化都有一定的影响。有研究发现，大约1/3的获得性再障患者有白细胞端粒缩短。白细胞端粒长度是再障恶性克隆发展的重要预测指标，且与其复发及死亡率有关；成人端粒较短的再障患者转化为骨髓增生异常和白血病的可能性最高，再障端粒的缩短可能反映了造血干细胞造血功能的缺陷。

端粒是保护真核细胞染色体末端的“帽子”，端粒长度的调控与细胞凋亡、衰老、永生化、癌变等密切相关，而端粒酶的存在能补充已缩短的端粒从而延长细胞寿命甚至使其得到永生。端粒结合蛋白对端粒的结构形成和功能维持起着重要作用，对细胞的凋亡、癌变、永生化、衰老起重要作用。主要包括端粒酶相关蛋白dyskerin、端粒保护蛋白shelterin(TRF1、TRF2、RAP1、TIN2、POT1和TPP1)等。

有研究发现，肾虚、端粒长度、端粒酶活性与细胞凋亡、衰老有密切的关系，肾中精气的重要生理功能是促进机体的生长、发育和生殖。肾虚是引起细胞凋亡、衰老的重要原因。肾虚则封藏失职，机体能量失守。补肾可以保持端粒时间的稳定，从而保持细胞、机体能量的稳定。近年研究发现，补肾中药具有保护染色体DNA，增强端粒酶活性，稳定端粒，延缓端粒缩短的作用以及增强机体免疫功能的作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种补肾益髓生血方及其膏剂和颗粒的制备方法，能够促进造血干细胞的恢复，刺激骨髓增生，改善骨髓造血功能，减轻患者感染、出血发生、减轻输血依赖及西药毒副作用、减少西药用量、延缓疾病恶性克隆演化等方面作用；并且能够提高端粒酶活性，抑制端粒缩短。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种补肾益髓生血方，其特征在于，包括以下重量组分的药料：

黄精3份、生地黄3份、补骨脂4份、女贞子3份、墨旱莲3份、枸杞3份、何首乌3份、菟丝子3份、淫羊藿3份、巴戟天3份、黄芪6份、西洋参2份、当归2份、白术3份、茯苓3份、山茱萸3份、地骨皮2份、鹿角胶2份、龟板胶2份、阿胶2份以及蜂蜜3份。

一种如权利要求1所述的补肾益髓生血方的膏剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）煎煮：称取若干所述补肾益髓生血方，将不含阿胶、鹿角胶、龟板胶和蜂蜜的所述补肾益髓生血方称为组方一，将所述组方一先泡制30分钟，然后加水煎煮直至沸腾，保持沸腾煎煮2小时后提取药液，药渣再重复上述过程两次，将三次煎煮的药液合并；

2）取上清液：将上述合并的药液过滤并静置若干时间，取上清液；

3）浓缩：将上述上清液放入蒸发锅中，先以武火加热至沸腾，捞出浮沫，待上清液变浓时，改用文火，保持微沸，并不断搅拌，浓缩过程直至上清液变稠膏状时沾取少许滴于滤纸上检视，以无渗润水迹为止，此时得到清膏；

4）收膏：将阿胶、鹿角胶、龟板胶和蜂蜜烊化后加入上述清膏中，边加入边搅拌混匀，直至用棒挑起膏应呈薄片状流下或趁热蘸取膏滴入桑皮纸上，以膏滴周围不现水迹为止，取出，冷后装入清洁干燥灭菌后的广口瓶内，密封，备用。

进一步的，步骤1）中，煎煮所述组方一时加入的水的总量为组方一重量的12倍。

一种如权利要求1所述的补肾益髓生血方的颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）煎煮：称取若干所述补肾益髓生血方，将不含鹿角胶、阿胶、龟板胶和西洋参的补肾益髓生血方称为组方二，将所述组方二先泡制30分钟，然后加水煎煮直至沸腾，保持沸腾煎煮2小时后提取药液，药渣再重复上述过程两次，将三次煎煮的药液合并；

2）浓缩：将合并的药液倒入煎煮锅中浓缩，直至得到药液与水的相对密度为1.15的浓缩液为止，然后加入事先单独加热融化的鹿角胶、阿胶和龟板胶，最后再加入单独粉碎成细粉的西洋参；

3）干燥：将浓缩液喷雾干燥制成细粉；

4）制成颗粒：将上述细粉倒入挤压造粒机制成颗粒，然后放入干燥箱中，在60~80℃下干燥20-30分钟，然后整粒；

5）包装：辐射灭菌，收集颗粒并包装。

进一步的，步骤1）中煎煮所述组方二时加入的水的总量为组方二的重量的12倍或8倍。

进一步的，步骤2）中所述西洋参粉碎成的细粉能过100目筛。

进一步的，步骤3）中使用喷雾干燥机对步骤2）中的浓缩液进行干燥，所述喷雾干燥机的进风温度和出风温度分别为175℃和95℃，所述喷雾干燥机的泵的转速为20转/分钟。

本发明的有益效果：本发明更加方便患者服用，提高了临床应用性，能促进造血干细胞的恢复，刺激骨髓增生，改善骨髓造血功能，减轻患者感染、出血发生、减轻输血依赖及西药毒副作用、减少西药用量、延缓疾病恶性克隆演化等方面作用；并且能够提高端粒酶活性，抑制端粒缩短。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是根据本发明实施例所述的补肾益髓生血方的研究路线图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

如图1所示，根据本发明的实施例所述的一种补肾益髓生血方，包括以下重量组分的药料：

黄精3份、生地黄3份、补骨脂4份、女贞子3份、墨旱莲3份、枸杞3份、何首乌3份、菟丝子3份、淫羊藿3份、巴戟天3份、黄芪6份、西洋参2份、当归2份、白术3份、茯苓3份、山茱萸3份、地骨皮2份、鹿角胶2份、龟板胶2份、阿胶2份以及蜂蜜3份。

在一个具体的实施例中，选取如下重量组分的药料：

黄精15g、生地黄15g、补骨脂20g、女贞子15g、墨旱莲15g、枸杞15g、何首乌15g、菟丝子15g、淫羊藿15g、巴戟天15g、黄芪30g、西洋参10g、当归10g、白术15g、茯苓15g、山茱萸15g、地骨皮10g、鹿角胶10g、龟板胶10g、阿胶10g以及蜂蜜15g。

一种补肾益髓生血方的膏剂的制备方法，包括以下步骤：

1）煎煮：称取若干所述补肾益髓生血方，将不含阿胶、鹿角胶、龟板胶和蜂蜜的所述补肾益髓生血方称为组方一，将所述组方一先泡制30分钟，然后加水煎煮直至沸腾，保持沸腾煎煮2小时后提取药液，药渣再重复上述过程两次，将三次煎煮的药液合并；

2）取上清液：将上述合并的药液过滤并静置若干时间，取上清液；

3）浓缩：将上述上清液放入蒸发锅中，先以武火加热至沸腾，捞出浮沫，待上清液变浓时，改用文火，保持微沸，并不断搅拌，浓缩过程直至上清液变稠膏状时沾取少许滴于滤纸上检视，以无渗润水迹为止，此时得到清膏；

4）收膏：将阿胶、鹿角胶、龟板胶和蜂蜜烊化后加入上述清膏中，边加入边搅拌混匀，直至用棒挑起膏应呈薄片状流下或趁热蘸取膏滴入桑皮纸上，以膏滴周围不现水迹为止，取出，冷后装入清洁干燥灭菌后的广口瓶内，密封，备用。

优选的，煎煮所述组方一时加入的水的总量为组方一重量的12倍。

一种补肾益髓生血方的颗粒的制备方法，包括以下步骤：

1）煎煮：称取若干所述补肾益髓生血方，将不含鹿角胶、阿胶、龟板胶和西洋参的补肾益髓生血方称为组方二，将所述组方二先泡制30分钟，然后加水煎煮直至沸腾，保持沸腾煎煮2小时后提取药液，药渣再重复上述过程两次，将三次煎煮的药液合并；

2）浓缩：将合并的药液倒入煎煮锅中浓缩，直至得到药液与水的相对密度为1.15的浓缩液为止，然后加入事先单独加热融化的鹿角胶、阿胶和龟板胶，最后再加入单独粉碎成细粉的西洋参；

3）干燥：将浓缩液喷雾干燥制成细粉；

4）制成颗粒：将上述细粉倒入挤压造粒机制成颗粒，然后放入干燥箱中，在60~80℃下干燥20-30分钟，然后整粒；

5）包装：辐射灭菌，收集颗粒并包装。

优选的，步骤1）中煎煮所述组方二时加入的水的总量为组方二的重量的12倍或8倍。

优选的，步骤2）中所述西洋参粉碎成的细粉能过100目筛。

优选的，步骤3）中使用喷雾干燥机对步骤2）中的浓缩液进行干燥，所述喷雾干燥机的进风温度和出风温度分别为175℃和95℃，所述喷雾干燥机的泵的转速为20转/分钟。

对补肾益髓生血方的疗效进行实验性研究，具体研究如下：

1.研究对象：本课题以慢性再生障碍性贫血患者为研究对象，其中医证候为肾虚髓枯。收集慢性再生障碍性贫血患者60例，随机分为治疗组30例，对照组30例。

1.1诊断标准：参照张之南主编《血液病诊断及疗效标准》(第三版)。

1.2纳入标准：

符合慢性再障的诊断标准。

符合慢性再障中医肾虚证候标准者。

根据各期临床试验目的以及本病特点，确定受试年龄范围，一般为18～65岁。

签署知情同意书。

能随访，依从性好。

1.3排除标准：

①妊娠期或哺乳期妇女。

②曾有可能引起继发性疾病史或药物史。

③严重不可控制的出血。

④严重不可控制的感染。

⑤主要器官功能衰竭，如失常的心肺功能衰竭。

⑥同时合并有未治愈的第二种血液病或其他恶性疾病。

2、病例分组及具体治疗方案：

2.1按照治疗方案不同，分2组，如下：

对照组：

雄激素＋环孢A：康力龙0.1mg/kg/d，分3次口服；环孢A3mg/kg/d，分2次口服，用药3周后检测血药浓度，在病情出现变化时也需检测，一般血药浓度应维持浓度200-400mg/L。

治疗组：

雄激素+环孢素A+补肾益髓生血颗粒：补肾益髓生血颗粒3g/包，2包/次，分三次口服。

上述方案以三个月为1个疗程，共治疗2个疗程，每个疗程后进行临床指标、中医证候评分、生活质量评分等疗效评价。

2.2对症支持治疗：常规积极对症支持治疗，处理并发症。

①止血治疗；

②抗感染治疗；

③成份输血：血红蛋白低于60g/L，临床贫血症状明显者，给予间断输血；出血严重者给予输注浓集血小板。

2.3细胞因子的运用：

rh-EPO，rh-TPO，rh-IL-11等细胞因子，不作为治疗用药的常规选择。粒细胞缺乏，反复感染难以有效控制时，作为补救措施可以考虑应用rhG-CSF或rhGM-CSF帮助控制感染。

3、主要观察指标：

3.1一般性指标:

血常规+网织红细胞：1次/4周；

血清铁、铁蛋白、叶酸、维生素B12、骨髓常规+活检+染色体检查：治疗前后各检查1次；

环孢素血药浓度：1次/3月。

3.2安全性指标（治疗前及每个疗程末）

血、尿、大便常规加OB

B超（肝、胆、脾）、心电图

心、肝、肾功能

血糖检测，特殊病例可加强监测。

3.3生活质量评分

生活质量评价（SF-36问卷）如下表所示：

3.4中医证候评分

慢性再生障碍性贫血症状分级量化表：

舌脉：具体描述，不计分。

3.5中医证候疗效判定标准：

参照《中药新药临床研究指导原则》（中国医药科技出版社，2002，第1版）及《中药临床药理学》（人民卫生出版社，2002，第1版）。分为临床痊愈、显效、有效、无效。

临床痊愈：中医临床症状、体征消失或基本消失，证候积分减少≥95％。

显效：中医临床症状、体征明显改善，证候积分减少≥70％。

有效：中医临床症状、体征均有好转，证候积分减少≥30％。

无效：中医临床症状、体征均无明显改善，甚或加重，证候积分减少＜30％。

注：计算公式（尼莫地平法）：［（治疗前积分-治疗后积分）÷治疗前积分］×100％。

3.6治疗前后检测再障患者骨髓单个核细胞的端粒长度，端粒酶逆转录酶TERT，端粒酶相关蛋白dyskerin，端粒保护蛋白shelterin(TRF1、TRF2、RAP1、TIN2、POT1和TPP1)基因的表达水平，具体检测方法如下：

3.6.1提取骨髓单个核细胞：采集新鲜骨髓5ml，EDTA抗凝。经骨髓单个核细胞分离液梯度离心分离骨髓单个核细胞，1800r/min，20min；PBS液洗涤两次，1200r/min，10min；弃上清，留取沉淀准备提取DNA与RNA。

3.6.2DNA、RNA的提取：按照试剂盒说明进行DNA、RNA的提取。

3.6.3逆转录操作步骤——cDNA第一链合成将RNA逆转录为cDNA。

3.6.4荧光定量PCR反应。检测治疗前后再障患者骨髓单个核细胞的端粒长度，TERT，dyskerin，shelterin(TRF1、TRF2、RAP1、TIN2、POT1和TPP1)基因的表达水平。

4、统计分析采用统计软件SPSS18.0处理所得数据。先以Explore对数据进行探索性分析。组间比较采用单因素方差分析及t检验。数据均以（均数±标准差）表示。基因间相关分析采用Spearman相关性分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。

5、结论：补肾益髓生血方能明显改善再生障碍性贫血患者的生活质量，对再生障碍性贫血患者具有很好的疗效。

综上所述，借助于本发明的上述技术方案，本发明更加方便患者服用，提高了临床应用性，能促进造血干细胞的恢复，刺激骨髓增生，改善骨髓造血功能，减轻患者感染、出血发生、减轻输血依赖及西药毒副作用、减少西药用量、延缓疾病恶性克隆演化等方面作用；并且能够提高端粒酶活性，抑制端粒缩短。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种补肾益髓生血方，其特征在于，包括以下重量组分的药料：

黄精3份、生地黄3份、补骨脂4份、女贞子3份、墨旱莲3份、枸杞3份、何首乌3份、菟丝子3份、淫羊藿3份、巴戟天3份、黄芪6份、西洋参2份、当归2份、白术3份、茯苓3份、山茱萸3份、地骨皮2份、鹿角胶2份、龟板胶2份、阿胶2份以及蜂蜜3份。

2.一种如权利要求1所述的补肾益髓生血方的膏剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）煎煮：称取若干所述补肾益髓生血方，将不含阿胶、鹿角胶、龟板胶和蜂蜜的所述补肾益髓生血方称为组方一，将所述组方一先泡制30分钟，然后加水煎煮直至沸腾，保持沸腾煎煮2小时后提取药液，药渣再重复上述过程两次，将三次煎煮的药液合并；

2）取上清液：将上述合并的药液过滤并静置若干时间，取上清液；

3）浓缩：将上述上清液放入蒸发锅中，先以武火加热至沸腾，捞出浮沫，待上清液变浓时，改用文火，保持微沸，并不断搅拌，浓缩过程直至上清液变稠膏状时沾取少许滴于滤纸上检视，以无渗润水迹为止，此时得到清膏；

4）收膏：将阿胶、鹿角胶、龟板胶和蜂蜜烊化后加入上述清膏中，边加入边搅拌混匀，直至用棒挑起膏应呈薄片状流下或趁热蘸取膏滴入桑皮纸上，以膏滴周围不现水迹为止，取出，冷后装入清洁干燥灭菌后的广口瓶内，密封，备用。

3.根据权利要求2所述的补肾益髓生血方的膏剂的制备方法，其特征在于，步骤1）中，煎煮所述组方一时加入的水的总量为组方一重量的12倍。

4.一种如权利要求1所述的补肾益髓生血方的颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）煎煮：称取若干所述补肾益髓生血方，将不含鹿角胶、阿胶、龟板胶和西洋参的补肾益髓生血方称为组方二，将所述组方二先泡制30分钟，然后加水煎煮直至沸腾，保持沸腾煎煮2小时后提取药液，药渣再重复上述过程两次，将三次煎煮的药液合并；

2）浓缩：将合并的药液倒入煎煮锅中浓缩，直至得到药液与水的相对密度为1.15的浓缩液为止，然后加入事先单独加热融化的鹿角胶、阿胶和龟板胶，最后再加入单独粉碎成细粉的西洋参；

3）干燥：将浓缩液喷雾干燥制成细粉；

4）制成颗粒：将上述细粉倒入挤压造粒机制成颗粒，然后放入干燥箱中，在60~80℃下干燥20-30分钟，然后整粒；

5）包装：辐射灭菌，收集颗粒并包装。

5.根据权利要求4所述的补肾益髓生血方的颗粒的制备方法，其特征在于，步骤1）中煎煮所述组方二时加入的水的总量为组方二的重量的12倍或8倍。

6.根据权利要求3所述的补肾益髓生血方的颗粒的制备方法，其特征在于，步骤2）中所述西洋参粉碎成的细粉能过100目筛。

7.根据权利要求3所述的补肾益髓生血方的颗粒的制备方法，其特征在于，步骤3）中使用喷雾干燥机对步骤2）中的浓缩液进行干燥，所述喷雾干燥机的进风温度和出风温度分别为175℃和95℃，所述喷雾干燥机的泵的转速为20转/分钟。