CN105136930A - 一种注射用胸腺肽的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种注射用胸腺肽的检测方法，包括：a)将注射用胸腺肽待测样品与流动相混合后，进行液相色谱检测，得到注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为(0.01～0.5)：20：80；b)根据标准样品溶液液相色谱图的保留时间与所述标准样品的分子量关系，建立标准曲线；根据所述注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图与所述标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量。与现有技术相比，本发明提供的检测方法能够保证理论板数和分离度均达到法定标准要求，使检测结果真实可靠。
Description
技术领域
本发明涉及药品检测技术领域，更具体地说，是涉及一种注射用胸腺肽的检测方法。
背景技术
注射用胸腺肽是由动物脏器提取的多组分混合物，用于治疗各种原发性或继发性T细胞缺陷病、某些自身免疫性疾病、各种细胞免疫功能低下的疾病及肿瘤的辅助治疗。在注射用胸腺肽中，不仅含有分子量为3108的胸腺肽α1，还含有的分子量大于10000的高分子质量蛋白以及其他复杂成分。其中，胸腺肽α1是注射用胸腺肽的主要活性成分，是一种针对T细胞的免疫增强剂；而高分子质量蛋白会引起过敏等安全隐患。因此，为保证药品的质量、确保临床用药的安全性，对注射用胸腺肽进行检测至关重要。
目前，《国家药品标准》第十六册收载的检测胸腺肽溶液质量标准采用高效液相色谱法，以核糖核酸酶A(分子量为13700)、胰岛素(分子量为5808)、胸腺肽α1(分子量为3108)和生长激素释放抑制因子(分子量为1521)作为对照品进行检测。在检测过程中，为了保证所配置的色谱条件和设定的参数的适用性以及确定分析使用的色谱条件的有效性，需要对理论板数与分离度进行考察。其中，理论板数是以被分析物主峰或规定的色谱峰计算柱效，用来确定色谱峰的尖锐程度，特别在测定微量成分时尤为重要，由于核糖核酸酶A分子量大于10000且在注射用胸腺肽中的含量不超过5％，因此理论板数按核糖核酸酶A计算；而分离度是指注射用胸腺肽中各组分在高效液相色谱法中分离的程度，由于胸腺肽α1是一种小分子多肽，化学合成的多肽中含有的部分杂质分子结构和化学性质与目标物十分相似，给其分离纯化带来很大困难，因此必须保证被测成分峰与其他色谱峰完全分离。
但是，按照现行《国家药品标准》WS1-XG-044-2000(以下简称法定标准)中色谱条件进行检测，得到的理论板数与分离度均达不到法定标准的要求，从而影响到产品的正常检测。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种注射用胸腺肽的检测方法，本发明提供的检测方法能够保证理论板数和分离度均达到法定标准要求，使检测结果真实可靠。
本发明提供了一种注射用胸腺肽的检测方法，包括：
a)将注射用胸腺肽待测样品与流动相混合后，进行液相色谱检测，得到注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图；
所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为(0.01～0.5)：20：80；
b)根据标准样品溶液液相色谱图的保留时间与所述标准样品的分子量关系，建立标准曲线；
根据所述注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图与所述标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量。
优选的，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.05：20：80。
优选的，步骤a)中所述注射用胸腺肽待测样品与流动相的用量比为(0.5mg～1.5mg)：1mL。
优选的，步骤a)中所述液相色谱检测的色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱。
优选的，步骤a)中所述液相色谱检测的流动相流速为0.5mL/min～1.0mL/min。
优选的，步骤a)中所述液相色谱检测的波长为200nm～220nm。
优选的，步骤a)中所述液相色谱检测的柱温为25℃～35℃。
优选的，步骤a)中所述液相色谱检测的进样量为15μL～25μL。
优选的，步骤b)中所述标准溶液的浓度为0.5mg/mL～1.5mg/mL。
本发明提供了一种注射用胸腺肽的检测方法，包括：a)将注射用胸腺肽待测样品与流动相混合后，进行液相色谱检测，得到注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为(0.01～0.5)：20：80；b)根据标准样品溶液液相色谱图的保留时间与所述标准样品的分子量关系，建立标准曲线；根据所述注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图与所述标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量。与现有技术相比，本发明提供的检测方法能够保证理论板数和分离度均达到法定标准要求，使检测结果真实可靠。实验结果表明，本发明提供的检测方法的理论板数能够达到8574，远高于法定标准的5000，分离度为7.5～22.3，远高于法定标准要求的3.0。
附图说明
图1为实施例1提供的核糖核酸酶A标准样品溶液的高效液相色谱图；
图2为实施例1提供的胰岛素标准样品溶液的高效液相色谱图；
图3为实施例1提供的胸腺肽α1标准样品溶液的高效液相色谱图；
图4为实施例1提供的生长激素释放抑制因子标准样品溶液的高效液相色谱图；
图5为实施例1得到的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图；
图6为实施例2得到的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图；
图7为实施例3得到的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图；
图8为对比例1得到的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图；
图9为对比例2得到的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图；
图10为对比例3得到的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图；
图11为对比例4得到的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种注射用胸腺肽的检测方法，包括：
a)将注射用胸腺肽待测样品与流动相混合后，进行液相色谱检测，得到注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图；
所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为(0.01～0.5)：20：80；
b)根据标准样品溶液液相色谱图的保留时间与所述标准样品的分子量关系，建立标准曲线；
根据所述注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图与所述标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量。
在本发明中，将注射用胸腺肽待测样品与流动相混合后，进行液相色谱检测，得到注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图。本发明对所述注射用胸腺肽的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。在本发明中，所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物。本发明采用三元流动相，目的是将注射用胸腺肽中有效成分和杂质进行分离，在此基础上为提高注射用胸腺肽检测的准确性，需要对流动相中各组分的比例进行控制，以提高理论板数和分离度，从而提高检测结果的准确性和可靠性。在本发明中，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为(0.01～0.5)：20：80，优选为为(0.02～0.1)：20：80，更优选为为0.05：20：80。
在本发明中，将注射用胸腺肽待测样品与流动相混合，得到待测溶液。在本发明中，所述注射用胸腺肽待测样品与流动相的用量比优选为(0.5mg～1.5mg)：1mL，更优选为1mg：1mL。本发明对所述混合的方式没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的人工搅拌或机械搅拌即可，目的是将注射用胸腺肽待测样品溶解在所述流动相中得到待测溶液。
得到所述待测溶液后，本发明将所述待测溶液进行液相色谱检测，得到注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图。在本发明中，所述液相色谱检测优选为高效液相色谱检测；本发明对所述高效液相色谱检测的仪器没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的高效液相色谱仪即可。
在本发明中，所述液相色谱检测的色谱柱优选为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱。在本发明中，所述TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱的尺寸为：长×宽＝300mm×7.8mm，内径＝5μm。本发明对所述色谱柱的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的上述TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱的市售商品即可。在本发明中，所述色谱柱对实现待测溶液中各成分的分离有重要作用，色谱柱与流动相的相互作用，对注射用胸腺肽检测的准确性有重要影响。
在本发明中，所述液相色谱检测的进样量优选为15μL～25μL，更优选为20μL。在本发明中，选择适合的进样量能够避免压力突然上升而造成的色谱柱破坏，从而提高色谱柱的使用寿命。
在本发明中，所述液相色谱检测的柱温优选为25℃～35℃，更优选为30℃。在本发明中，选择合适的柱温对色谱柱与流动相的相互作用起到积极效果。
在本发明中，所述液相色谱检测的流动相流速优选为0.5mL/min～1.0mL/min，更优选为0.7mL/min。在本发明中，选择合适的流动相流速能够避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大对色谱柱和仪器系统的损坏。
在本发明中，所述液相色谱检测优选采用紫外检测器进行检测本发明对此没有特殊限制。在本发明中，所述液相色谱检测的波长优选为200nm～220nm，更优选为214nm。
本发明采用适合组分比例的三氟醋酸、乙腈和水的混合物为流动相，对注射用胸腺肽进行液相色谱检测，在上述流动相的作用下，所述注射用胸腺肽中有效成分能够很好的与杂质分离，再通过液相色谱检测各参数条件的共同作用，提高了注射用胸腺肽检测的理论板数和分离度，从而实现了对注射用胸腺肽的准确检测。
在本发明中，根据标准样品溶液液相色谱图的保留时间与所述标准样品的分子量关系，建立标准曲线；根据所述注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图与所述标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量。
在本发明中，所述标准样品分别为核糖核酸酶A、胰岛素、胸腺肽α1和生长激素释放抑制因子；其中，核糖核酸酶A的分子量为13700，胰岛素的分子量为5808，胸腺肽α1的分子量为3108，生长激素释放抑制因子的分子量为1521。本发明对所述标准样品的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的上述核糖核酸酶A、胰岛素、胸腺肽α1和生长激素释放抑制因子的市售商品即可。本发明将上述标准样品分别与流动相混合，配制成标准样品溶液。在本发明中，所述流动相与上述技术方案中的相同，在此不再赘述。在本发明中，所述标准溶液的浓度优选为0.5mg/mL～1.5mg/mL，更优选为1.0mg/mL。
在本发明中，将所述标准样品溶液进行液相色谱检测，分别得到标准样品溶液的液相色谱图。在本发明中，所述进行液相色谱检测的方法与上述技术方案相同，在此不再赘述。本发明通过标准样品溶液液相色谱图的保留时间与所述标准样品的分子量关系，建立标准曲线。在本发明中，所述标准曲线以标准样品溶液液相色谱图的保留时间为横坐标，标准样品的分子量对数为纵坐标，进行线性回归，得到线性回归方程。
本发明根据所述注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图与所述标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量。在本发明中，采用本领域技术人员熟知的面积归一法，计算注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量，本发明对此没有特殊限制。在本发明中，所述注射用胸腺肽待测样品中有效成分为胸腺肽α1，通过色谱图中相应峰可以计算得到；所述注射用胸腺肽待测样品中有害物质为分子量大于10000的杂质，通过线性回归方程可以得到分子量大于10000的杂质对应的各峰，从而计算得到。
本发明提供了一种注射用胸腺肽的检测方法，包括：a)将注射用胸腺肽待测样品与流动相混合后，进行液相色谱检测，得到注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为(0.01～0.5)：20：80；b)根据标准样品溶液液相色谱图的保留时间与所述标准样品的分子量关系，建立标准曲线；根据所述注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图与所述标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量。与现有技术相比，本发明提供的检测方法能够保证理论板数和分离度均达到法定标准要求，使检测结果真实可靠。实验结果表明，本发明提供的检测方法的理论板数能够达到8574，远高于法定标准的5000，分离度为7.5～22.3，远高于法定标准要求的3.0。
为了进一步说明本发明，下面通过以下实施例进行详细说明。本发明以下实施例所用的注射用胸腺肽待测样品由湖南科伦制药有限公司提供，所述注射用胸腺肽待测样品中胸腺肽α1的实际含量为2.415％，分子量大于10000的杂质的实际含量为0.052％；所用核糖核酸酶A、胰岛素、胸腺肽α1和生长激素释放抑制因子均由中国药品生物制品检定所提供；所用三氟醋酸由国药集团化学试剂有限公司提供，色谱纯；所用乙腈由TEDIA提供，色谱纯。
实施例1
(1)建立标准曲线：
将核糖核酸酶A、胰岛素、胸腺肽α1和生长激素释放抑制因子分别加流动相稀释到1mg/mL，分别得到核糖核酸酶A标准样品溶液、胰岛素标准样品溶液、胸腺肽α1标准样品溶液和生长激素释放抑制因子标准样品溶液；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.05：20：80。
采用岛津10Avp型高效液相色谱仪分别对上述标准样品溶液进行高效液相色谱检测，色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱，进样量为20μL，柱温为30℃，流动相流速为0.7mL/min，检测波长为214nm，分别得到核糖核酸酶A标准样品溶液的高效液相色谱图，如图1所示；胰岛素标准样品溶液的高效液相色谱图，如图2所示；胸腺肽α1标准样品溶液的高效液相色谱图，如图3所示；生长激素释放抑制因子标准样品溶液的高效液相色谱图，如图4所示。
以上述标准样品溶液高效液相色谱图的保留时间为横坐标，标准样品的分子量对数为纵坐标，进行线性回归，得到线性回归方程为：lgMw＝6.5087-0.2423t，r＝0.995。
(2)注射用胸腺肽待测样品检测：
将注射用胸腺肽待测样品加流动相稀释到1mg/mL，得到待测溶液；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.05：20：80。
采用岛津10Avp型高效液相色谱仪对所述待测溶液进行高效液相色谱检测，色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱，进样量为20μL，柱温为30℃，流动相流速为0.7mL/min，检测波长为214nm，得到注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图，如图5所示，其中1为核糖核酸酶A的色谱峰，2为胰岛素的色谱峰，3为胸腺肽α1的色谱峰，4为生长激素释放抑制因子的色谱峰。
根据图5所示的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图与步骤(1)得到的标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中胸腺肽α1的含量为2.323％；分子量大于10000的杂质的含量为0.054％。
由图5可知，色谱图的分离度按相邻峰高与峰谷之比计算为104.7、10.5、5.2、145.7，均达到法定标准要求的3.0；色谱图的理论板数按核糖核酸酶A计算为9359，远高于法定标准要求的5000。
实施例2
(1)建立标准曲线：
按照实施例1步骤(1)提供的方法建立标准曲线，区别在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.01：20：80，得到线性回归方程为：lgMw＝6.67-0.3014t，r＝0.993。
(2)注射用胸腺肽待测样品检测：
将注射用胸腺肽待测样品加流动相稀释到1mg/mL，得到待测溶液；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.01：20：80。
采用岛津10Avp型高效液相色谱仪对所述待测溶液进行高效液相色谱检测，色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱，进样量为20μL，柱温为30℃，流动相流速为0.7mL/min，检测波长为214nm，得到注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图，如图6所示，其中1为核糖核酸酶A的色谱峰，2为胰岛素的色谱峰，3为胸腺肽α1的色谱峰，4为生长激素释放抑制因子的色谱峰。
根据图6所示的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图与步骤(1)得到的标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中胸腺肽α1的含量为2.059％；分子量大于10000的杂质的含量为0.306％。
由图6可知，色谱图的分离度按相邻峰高与峰谷之比计算为42.3、9.0、4.2、112.9，均达到法定标准要求的3.0；色谱图的理论板数按核糖核酸酶A计算为8939，远高于法定标准要求的5000。
实施例3
(1)建立标准曲线：
按照实施例1步骤(1)提供的方法建立标准曲线，区别在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.5：20：80，得到线性回归方程为：lgMw＝6.6427-0.2953t，r＝0.994。
(2)注射用胸腺肽待测样品检测：
将注射用胸腺肽待测样品加流动相稀释到1mg/mL，得到待测溶液；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.5：20：80。
采用岛津10Avp型高效液相色谱仪对所述待测溶液进行高效液相色谱检测，色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱，进样量为20μL，柱温为30℃，流动相流速为0.7mL/min，检测波长为214nm，得到注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图，如图7所示，其中1为核糖核酸酶A的色谱峰，2为胰岛素的色谱峰，3为胸腺肽α1的色谱峰，4为生长激素释放抑制因子的色谱峰。
根据图7所示的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图与步骤(1)得到的标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中胸腺肽α1的含量为1.584％；分子量大于10000的杂质的含量为0.441％。
由图7可知，色谱图的分离度按相邻峰高与峰谷之比计算为124.3、8.7、3.8、76.3，均达到法定标准要求的3.0；色谱图的理论板数按核糖核酸酶A计算为6467，达到法定标准要求的5000。
对比例1
(1)建立标准曲线：
按照实施例1步骤(1)提供的方法建立标准曲线，区别在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.05：10：90，得到线性回归方程为：lgMw＝7.0584-0.3123t，r＝0.996。
(2)注射用胸腺肽待测样品检测：
将注射用胸腺肽待测样品加流动相稀释到1mg/mL，得到待测溶液；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.05：10：90。
采用岛津10Avp型高效液相色谱仪对所述待测溶液进行高效液相色谱检测，色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱，进样量为20μL，柱温为30℃，流动相流速为0.7mL/min，检测波长为214nm，得到注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图，如图8所示，其中1为核糖核酸酶A的色谱峰，2为胰岛素的色谱峰，3为胸腺肽α1的色谱峰，4为生长激素释放抑制因子的色谱峰。
根据图8所示的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图与步骤(1)得到的标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中胸腺肽α1的含量为1.012％；分子量大于10000的杂质的含量为0.210％。
由图8可知，色谱图的分离度按相邻峰高与峰谷之比计算为10.0、5.0、1.7、22.0，未全部达到法定标准要求的3.0；色谱图的理论板数按核糖核酸酶A计算为2869，低于法定标准要求的5000。
对比例2
(1)建立标准曲线：
按照实施例1步骤(1)提供的方法建立标准曲线，区别在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为1.0：10：90，得到线性回归方程为：lgMw＝6.9207-0.3147t，r＝0.996。
(2)注射用胸腺肽待测样品检测：
将注射用胸腺肽待测样品加流动相稀释到1mg/mL，得到待测溶液；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为1.0：10：90。
采用岛津10Avp型高效液相色谱仪对所述待测溶液进行高效液相色谱检测，色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱，进样量为20μL，柱温为30℃，流动相流速为0.7mL/min，检测波长为214nm，得到注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图，如图9所示，其中1为核糖核酸酶A的色谱峰，2为胰岛素的色谱峰，3为胸腺肽α1的色谱峰，4为生长激素释放抑制因子的色谱峰。
根据图9所示的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图与步骤(1)得到的标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中胸腺肽α1的含量为2.010％；分子量大于10000的杂质的含量为0.224％。
由图9可知，色谱图的分离度按相邻峰高与峰谷之比计算为6.0、6.5、6.2、5.9，均达到法定标准要求的3.0；色谱图的理论板数按核糖核酸酶A计算为4506，低于法定标准要求的5000。
对比例3
(1)建立标准曲线：
按照实施例1步骤(1)提供的方法建立标准曲线，区别在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为1.0：20：80，得到线性回归方程为：lgMw＝7.7493-0.3533t，r＝0.996。
(2)注射用胸腺肽待测样品检测：
将注射用胸腺肽待测样品加流动相稀释到1mg/mL，得到待测溶液；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为1.0：20：80。
采用岛津10Avp型高效液相色谱仪对所述待测溶液进行高效液相色谱检测，色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱，进样量为20μL，柱温为30℃，流动相流速为0.7mL/min，检测波长为214nm，得到注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图，如图10所示，其中1为核糖核酸酶A的色谱峰，2为胰岛素的色谱峰，3为胸腺肽α1的色谱峰，4为生长激素释放抑制因子的色谱峰。
根据图10所示的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图与步骤(1)得到的标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中胸腺肽α1的含量为1.105％；分子量大于10000的杂质的含量为0.386％。
由图10可知，色谱图的分离度按相邻峰高与峰谷之比计算为3.2、5.2、5.1、3.1，均达到法定标准要求的3.0；色谱图的理论板数按核糖核酸酶A计算为3207，低于法定标准要求的5000，且峰型较差。
对比例4
(1)建立标准曲线：
按照实施例1步骤(1)提供的方法建立标准曲线，区别在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.05：15：85，得到线性回归方程为：lgMw＝6.5862-0.2742t，r＝0.99。
(2)注射用胸腺肽待测样品检测：
将注射用胸腺肽待测样品加流动相稀释到1mg/mL，得到待测溶液；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.05：15：85。
采用岛津10Avp型高效液相色谱仪对所述待测溶液进行高效液相色谱检测，色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱，进样量为20μL，柱温为30℃，流动相流速为0.7mL/min，检测波长为214nm，得到注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图，如图11所示，其中1为核糖核酸酶A的色谱峰，2为胰岛素的色谱峰，3为胸腺肽α1的色谱峰，4为生长激素释放抑制因子的色谱峰。
根据图11所示的注射用胸腺肽待测样品的高效液相色谱图与步骤(1)得到的标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中胸腺肽α1的含量为1.025％；分子量大于10000的杂质的含量为0.235％。
由图11可知，色谱图的分离度按相邻峰高与峰谷之比计算为4.1、6.0、1.5、10.5，未全部达到法定标准要求的3.0；色谱图的理论板数按核糖核酸酶A计算为2780，低于法定标准要求的5000。
所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (9)
1.一种注射用胸腺肽的检测方法，其特征在于，包括：
a)将注射用胸腺肽待测样品与流动相混合后，进行液相色谱检测，得到注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图；
所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为(0.01～0.5)：20：80；
b)根据标准样品溶液液相色谱图的保留时间与所述标准样品的分子量关系，建立标准曲线；
根据所述注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图与所述标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.05：20：80。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a)中所述注射用胸腺肽待测样品与流动相的用量比为(0.5mg～1.5mg)：1mL。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a)中所述液相色谱检测的色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a)中所述液相色谱检测的流动相流速为0.5mL/min～1.0mL/min。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a)中所述液相色谱检测的波长为200nm～220nm。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a)中所述液相色谱检测的柱温为25℃～35℃。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a)中所述液相色谱检测的进样量为15μL～25μL。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤b)中所述标准溶液的浓度为0.5mg/mL～1.5mg/mL。
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