CN105131078B - 一种皂苷类化合物的分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于天然药物提取的技术领域，具体涉及一种皂苷类化合物的分离方法。该方法以蒟蒻薯科(拉丁学名：TACCACEAE)植物为原料，通过粉碎、乙醇提取、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取、D101大孔树脂洗脱，硅胶柱与凝胶柱洗脱，最终得到纯度达90%以上的皂苷单体。本发明皂苷类化合物的分离方法操作简单、分离效率高、纯化度高、工艺稳定、成本低、材料经济且可回收利用，为该皂苷化合物的开发利用打下基础。
Description
技术领域
本发明属于天然药物提取的技术领域，具体涉及一种皂苷类化合物的分离方法。
背景技术
蒟蒻薯科(拉丁学名：TACCACEAE)植物为多年生草本，具圆柱形或球形的根状茎或块茎。叶全部基生，有柄，直立，基部有鞘；叶片全缘或各式分裂。花两性，辐射对称，排成伞形花序，生在长的花葶上；本科的模式属：蒟蒻薯属 Tacca J. R. Forster et J. G. A.Forster，蒟蒻薯科有2属，10余种，分布于热带地区。我国产2 属6种，分布于东南至西南部。蒟蒻薯科植物成分复杂，目前大部分成分已成功分离，发现蒟蒻薯科植物中富含皂苷类与箭根酮类物质，该类物质均具有良好的生物活性，其中箭根酮类被发现具有抗肿瘤作用，并且能够调控肿瘤细胞的微管形成。皂苷类化合物被发现具有良好的抗肿瘤活性。皂苷类化合物（CAS：290809-72-2）为日本人Akihito Yokosuka首次分离(Akihito Yokosuka,Yoshihiro Mimaki, Yutaka Sashida.Spirostanol saponins from the rhizomes ofTacca chantrieri and their cytotoxic activity[J].Phytochemistry 61(2002):73-78)，该分离方法成本较高产率较低，并非针对性的对该皂苷单体进行提取分离，且仅适用于实验室研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种皂苷类化合物的分离方法，具体而言是对蒟蒻薯科植物所含有的一种皂苷类化合物（CAS：290809-72-2）建立分离方法，该方法所用的材料经济且可回收利用，为皂苷化合物的开发利用打下基础。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
皂苷类化合物的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、蒟蒻薯科植物晾干后进行粉粹，然后按重量加入9-12倍量、体积浓度为50%-100%的乙醇，加热回流提取3次，每次提取2-2.5h，过滤，合并提取液，旋转蒸发回收溶剂，得粗提取物；
B、按照粗提取物：纯化水重量比为1：10的比例在粗提取物中加入纯化水，得到悬浮混合物，然后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，旋转蒸发回收溶剂，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四个部位萃取物；
C、正丁醇部位过D101大孔吸附树脂柱，样品用体积浓度为10%-50%的乙醇溶解上样，然后依次用体积浓度为50%-60%，70%-100%乙醇进行洗脱，得到50%-60%组段与70%-100%组段；
D 、70%-100%组段进行硅胶柱色谱分离，填料用硅胶H，用300-400目柱层析硅胶拌样，然后用二氯甲烷-甲醇溶液梯度洗脱，得到目标单体混合物，单体混合物经过SephadexLH-20凝胶柱色谱分离，氯仿-甲醇溶液洗脱分离进一步纯化；
E、重复步骤D，得到皂苷单体。
上述的步骤D中二氯甲烷-甲醇溶液的的配比为：二氯甲烷：甲醇的体积比为1:5-5:1，每100ml二氯甲烷-甲醇混合溶剂加1ml水；氯仿-甲醇溶液的的配比为：氯仿:甲醇的体积比为1:3-3:1。
本发明一种皂苷类化合物的分离方法，分离得到的皂苷单体为无定形白色粉末，纯度达90%以上。
本发明突出的实质性特点和显著的进步是：
1、本发明首次建立了分离皂苷单体化合物的方法，该方法以蒟蒻薯科(拉丁学名：TACCACEAE)植物为原料，通过粉碎、乙醇提取、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取、D101大孔树脂洗脱，硅胶柱与凝胶柱洗脱，最终得到纯度达90%以上的皂苷单体。
2、本发明对蒟蒻薯科植物所含有的一种皂苷类化合物（CAS：290809-72-2）建立分离方法，该方法操作简单、分离效率高、纯化度高、工艺稳定、成本低、材料经济且可回收利用，为该皂苷化合物的开发利用打下基础。
具体实施方式
实施例1
一种皂苷类化合物的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、蒟蒻薯科植物裂果薯(拉丁学名：Tacca plantaginea(Hance)Drenth)晾干后进行粉粹，然后按重量加入9倍量、体积浓度为100%的乙醇，加热回流提取3次，每次提取2h，过滤，合并提取液，旋转蒸发回收溶剂，得裂果薯粗提取物；
B、按照粗提取物：纯化水重量比为1:10的比例在粗提取物中加入纯化水，得到悬浮混合物，然后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，旋转蒸发回收溶剂，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四个部位萃取物；
C、正丁醇部位过D101大孔吸附树脂柱，样品用体积浓度为50%的乙醇溶解上样，然后依次用体积浓度为50%-60%，70%-100%乙醇进行洗脱，得到50%-60%组段与70%-100%组段；
D 、70%-100%组段进行硅胶柱色谱分离，填料用硅胶H，用300-400目柱层析硅胶拌样，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（每100ml二氯甲烷-甲醇混合溶剂加1ml水，二氯甲烷：甲醇的体积比为1:5），得到目标单体混合物；目标单体混合物经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇(氯仿:甲醇的体积比为1:3)洗脱分离进一步纯化；
E、重复步骤D（再经硅胶柱色谱分离、二氯甲烷-甲醇梯度洗脱、经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，氯仿-甲醇洗脱）得裂果薯皂苷单体，为无定形白色粉末，纯度可达90%。
实施例2
一种皂苷类化合物的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、蒟蒻薯科植物裂果薯(拉丁学名：Tacca plantaginea(Hance)Drenth)晾干后进行粉粹，然后按重量加入10倍量、体积浓度为80%的乙醇，加热回流提取3次，每次提取2.2h，过滤，合并提取液，旋转蒸发回收溶剂，得箭根薯粗提取物；
B、按照粗提取物：纯化水重量比为1：10的比例在粗提取物中加入纯化水，得到悬浮混合物，然后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，旋转蒸发回收溶剂，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四个部位萃取物；
C、正丁醇部位过D101大孔吸附树脂柱，样品用体积浓度为10%的乙醇溶解上样，然后依次用体积浓度为50%-60%，70%-100%乙醇进行洗脱，得到50%-60%组段与70%-100%组段；
D 、70%-100%组段进行硅胶柱色谱分离，填料用硅胶H，用300-400目柱层析硅胶拌样，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（每100ml二氯甲烷-甲醇混合溶剂加1ml水，二氯甲烷：甲醇的体积比为1：1），得到目标单体混合物；目标单体混合物经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇(氯仿:甲醇的体积比为1:1)洗脱分离进一步纯化；
E、重复步骤D（再经硅胶柱色谱分离、二氯甲烷-甲醇梯度洗脱、经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，氯仿-甲醇洗脱）得箭根薯皂苷单体，为无定形白色粉末，纯度可达92%。
实施例3
一种皂苷类化合物的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、蒟蒻薯科植物箭根薯(拉丁学名：Tacca chantrieri Andre.)晾干后进行粉粹，然后按重量加入11倍量、体积浓度为70%%的乙醇，加热回流提取3次，每次提取2.3h，过滤，合并提取液，旋转蒸发回收溶剂，得裂果薯粗提取物；
B、按照粗提取物：纯化水重量比为1：10的比例在粗提取物中加入纯化水，得到悬浮混合物，然后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，旋转蒸发回收溶剂，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四个部位萃取物；
C、正丁醇部位过D101大孔吸附树脂柱，样品用体积浓度为10%-50%的乙醇溶解上样，然后依次用体积浓度为50%-60%，70%-100%乙醇进行洗脱，得到50%-60%组段与70%-100%组段；
D 、70%-100%组段进行硅胶柱色谱分离，填料用硅胶H，用300-400目柱层析硅胶拌样，然后用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（每100ml二氯甲烷-甲醇混合溶剂加1ml水，二氯甲烷：甲醇的体积比为3:1），得到目标单体混合物，单体混合物经过Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，氯仿-甲醇(氯仿:甲醇的体积比为2:1)洗脱分离进一步纯化；
E、重复步骤D（再经硅胶柱色谱分离、二氯甲烷-甲醇梯度洗脱、经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，氯仿-甲醇洗脱）得裂果薯皂苷单体，为无定形白色粉末，纯度可达91%。
实施例4
一种皂苷类化合物的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、蒟蒻薯科植物箭根薯(拉丁学名：Tacca chantrieri Andre.)晾干后进行粉粹，然后按重量加入12倍量、体积浓度为50%的乙醇，加热回流提取3次，每次提取2.5h，过滤，合并提取液，旋转蒸发回收溶剂，得箭根薯粗提取物；
B、按照粗提取物：纯化水重量比为1:10的比例在粗提取物中加入纯化水，得到悬浮混合物，然后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，旋转蒸发回收溶剂，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四个部位萃取物；
C、正丁醇部位过D101大孔吸附树脂柱，样品用体积浓度为10%的乙醇溶解上样，然后依次用体积浓度为50%-60%，70%-100%乙醇进行洗脱，得到50%-60%组段与70%-100%组段；
D 、70%-100%组段进行硅胶柱色谱分离，填料用硅胶H，用300-400目柱层析硅胶拌样，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（每100ml二氯甲烷-甲醇混合溶剂加1ml水，二氯甲烷：甲醇的体积比为5:1），得到目标单体混合物；目标单体混合物经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇(氯仿:甲醇的体积比为3:1)洗脱分离进一步纯化；
E、重复步骤D（再经硅胶柱色谱分离、二氯甲烷-甲醇梯度洗脱、经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，氯仿-甲醇洗脱）得箭根薯皂苷单体，为无定形白色粉末，纯度可达91.3%。
Claims (1)
1.一种皂苷类化合物的分离方法，其特征在于，步骤如下：
A、蒟蒻薯科植物晾干后进行粉粹，然后按重量加入9-12倍量、体积浓度为50%-100%的
乙醇，加热回流提取 3 次，每次提取 2-2.5h，过滤，合并提取液，旋转蒸发回收溶剂，得粗提取物；
B、按照粗提取物：纯化水重量比为 1:10 的比例在粗提取物中加入纯化水，得到悬浮混
合物，然后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，旋转蒸发回收溶剂，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四个部位萃取物；
C、正丁醇部位过 D101 大孔吸附树脂柱，样品用体积浓度为 10%-50% 的乙醇溶解上样，
然后依次用体积浓度为 50%-60%，70%-100% 乙醇进行洗脱，得到 50%-60% 组段与70%-100%组段；
D、70%-100% 组段进行硅胶柱色谱分离，填料用硅胶 H，用 300-400 目柱层析硅胶拌样，
然后用二氯甲烷-甲醇溶液梯度洗脱，得到目标单体混合物，单体混合物经过Sephadex
LH-20 凝胶柱色谱分离，氯仿-甲醇溶液洗脱分离进一步纯化；
E、重复步骤 D，得到皂苷单体；
所述的步骤D中二氯甲烷-甲醇溶液的的配比为：二氯甲烷:甲醇的体积比为1:5-5:1，每 100ml 二氯甲烷-甲醇混合溶剂加 1ml水；氯仿-甲醇溶液的的配比为：氯仿:甲醇的体积比为1:3-3:1；
所述的皂苷类化合物的分离方法，分离得到的皂苷单体为无定形白色粉末，纯度达90% 以上。
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