CN105124172A - 一种猪用复合酶制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种猪用复合酶制剂及其制备方法，属于饲料酶制剂领域。所述猪用复合酶制剂由以下重量份数的组分组成：木聚糖酶60-100份，纤维素酶35-45份，β-葡聚糖酶60-100份，蛋白酶100-150份，中温α-淀粉酶30-40份，甘露聚糖酶10-20份，果胶酶10-20份，复合维生素3-8份，复合微量元素10-20份，抗菌肽10-20份，红酵母培养物30-40份。其中红酵母具体为海洋红酵母WYN1(Rhodotorula？sp.WYN1)，保藏编号CCTCC？No：M？2014592。所述复合酶制剂富含胡萝卜素和螯合铜，能显著提高饲料的利用率，以及酶制剂的热稳定性及保存活性。

Description

一种猪用复合酶制剂及其制备方法

技术领域：

本发明属于酶制剂技术领域，具体涉及一种热稳定性好的复合酶及其制备方法。

背景技术：

在畜牧业中，乳猪饲养是所有阶段猪中最复杂的。营养供给不合理的后果是猪生长缓慢，腹泻率高，死亡率高，进而使中大猪阶段生长缓慢，延长出栏时间。

但是，为了切断母源疾病的垂直传播途径，同时缩短母猪繁殖周期，延长种用年限，人们将早期断奶技术广泛的应用于猪的大规模养殖工业中。然而由于新生仔猪缺乏先天免疫、消化系统发育尚不完善，消化酶分泌能力弱，直接供给以玉米等为主的饲料很容易引起猪仔对饲料的消化率低、采食量低、生长速度缓慢、腹泻率高等问题。

为了克服乳猪在断奶后所出现的种种问题，多数企业从断奶前补饲、诱食、日粮酸化、使用适口性好且易消化吸收的饲料原料、添加外源酶、降低日粮的抗原性、降低日粮的粗蛋白含量以及使用促进剂等多个方面进行了改善和优化，但实际效果参差不齐。

考虑到仔猪在断奶时，其自身的蛋白酶、淀粉酶等酶活应激而大幅下降到断奶时的三分之一，而这些酶类对于仔猪获取营养和能量起着至关重要的作用。同时，饲料用酶在畜禽生产中具有不俗的效果，比如前苏联科学家在早期断奶仔猪日粮中添加淀粉糊精酶，使得日增重提高14.6％，碳水化合物消化率提高77.2％。据美国有关资料报道，Collier在早期断奶仔猪日粮中补充酶制剂(含蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶)，结果实验组比对照组日增重提高了25％，饲料转化率提高了15.5％。

添加酶制剂能补充蛋白酶和淀粉酶，是辅助分解日粮中的蛋白和淀粉，降解日粮中的抗营养因子，并能有效分解玉米/豆粕型日粮中的植物细胞壁，使细胞内的营养物质如淀粉、蛋白质等释放出来。同时分解可溶性纤维，降低植物纤维物质的吸水能力和肠道内容物的粘度。

此外，在动物饲料领域中，多以硫酸铜等无机铜作为铜元素的来源，但是无机铜存在吸收率低，与其他营养物质存在拮抗作用等问题，而螯合铜则可以很好的解决上述问题，它能够减轻与其他营养物质的拮抗，促进铜和其他矿物质元素的利用，促进动物的生长发育，提高饲料利用率，改善胴体品质，提高繁殖性能，同时还具有抗生物氧化和免疫以及良好的稳定性等一系列功能，能够带来较佳的经济效益。

类胡萝卜素是一类呈黄色、橙色或红色的多烯类化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素，广泛存在于许多动植物中。类胡萝卜素作为一种优良的添加剂和改善营养的营养增补剂，它的优良品质和效果，很久以来就被世界各国所公认，被誉为最有希望的抗氧化剂。目前，类胡萝卜素被广泛应用于饲料添加剂行业中，由于其良好的应用前景及卓越的功能，长久以来倍受人们青睐。如何有效开发以天然植物以及真菌获得绿色饲料添加剂产品对饲料添加剂行业发展具有重要意义。

因此，我们经过多次饲喂实验，研制出了一种复合酶，其能有效地提高饲料的稳定性、利用率、降低腹泻率、促进动物生长，针对性强，效果好，经济效益显著。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种稳定性好、利用率高的复合酶及其制备方法。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

一种复合酶制剂，由以下重量份数的组分组成：木聚糖酶60-100份，纤维素酶35-45份，β-葡聚糖酶60-100份，蛋白酶100-150份，中温α-淀粉酶30-40份，甘露聚糖酶10-20份，果胶酶10-20份，复合维生素3-8份，复合微量元素10-20份，抗菌肽10-20份，红酵母培养物30-40份；

本发明所使用的红酵母，为一株高产类胡萝卜素的富铜海洋红酵母WYN1，所述菌株已于2014年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国.武汉.武汉大学，邮编430072)，保藏编号为：CCTCCNo：M2014592，分类命名：海洋红酵母WYN1(Rhodotorulasp.WYN1)。

所述木聚糖酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、蛋白酶、中温α-淀粉酶、甘露聚糖酶、果胶酶和抗菌肽均为市售产品；

所述复合微量元素每公斤包含碘1000mg，钾180mg，铁1800mg，硒80mg,钴200mg，镁145mg，锰1400mg，铬20mg,锌1100mg，铜800mg；其余量为载体，所述载体为木屑；

所述木屑的制备方法包括如下步骤：将无发霉、无病虫锯木末或废木屑除去杂物，置于超声波清洗机中于200W、30KHz清洗10min，冲洗、沥干，放入蒸汽釜中于0.3-0.4MPa蒸煮20-30min,然后置微波干燥机于2000W、120℃进行间歇式干燥3min，使之水分达到8-10％，最后2.0筛片粉碎、密封包装即得木屑；

所述超声波清洗机中清洗液为质量百分比浓度0.5％的碳酸氢钠溶液；

所述间歇式干燥工艺为：微波辐射10s,停留20s,如此重复，循环干燥。

所述复合维生素每公斤包含维生素A2800mg，维生素B13000mg，维生素C2000mg，核黄素1600mg，泛酸1900mg，维生素B61800mg，维生素B121200mg，肌醇5000mg，维生素E600mg，维生素D35500mg，维生素K34000mg；其余量为载体，所述载体为上述制备的木屑。

所述红酵母培养物制备方法如下：

种子培养按酵母常规培养方法进行培养；

发酵培养：初始pH为8，将种子培养液按接种量3-8％接种于发酵培养基，摇床转速为50-80r/min，24-28℃培养10-15小时后调整温度为16-20℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为3-5，保持2-4小时；之后阶梯形升温到24-30℃，pH调整为4.6-5.5，按照2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉；摇床转速为50-100r/min，继续发酵10-15h。

发酵结束后，发酵液经孔径10-1000μm粗滤，然后与10-20℃循环超滤浓缩去除水分得固形物含量20-40％浓缩液，浓缩液经真空冷冻干燥、超微粉碎得红酵母培养物。

发酵培养基质量体积比组成为：葡萄糖1％，酶解玉米粉1-3％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量150-200mg/L，氯化钠20％，其余为水；

所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉置于配料罐中，以V:m为2:1加入纯净水，调节pH值3-7，加入中温淀粉酶，酶活为30u/g玉米粉，与酶活为30u/g玉米粉的蛋白酶，边搅拌边升温至45-55℃保温15-30min，然后缓慢升温至60-65℃保温15-30min，冷冻干燥备用。

所述复合酶适用于饲料加工厂和养殖场自配饲料，使用时应与饲料中的其它原料混合均匀，可事先将本发明与少量饲料混合均匀，再混合到大批饲料中，直接饲喂。建议每吨全价料添加量为80-120g。

有益效果：

1、本发明利用从海洋环境中分离获得一株高产胡萝卜素的富铜海洋红酵母WYN1，通过静止培养方法有效的提高了酵母中胡萝卜素和铜产量。采用上述方法发酵培养海洋红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别为27g/L以上、35-40mg/L和7240-8000μg/g干菌。研发中，发明人意外发现低温静止培养可以有效提高胡萝卜和铜含量，是本发明的重要成果。

2、由于本发明所使用的红酵母能够高产胡萝卜素，并且将培养基中的无机铜转化为螯合铜进行富集，更好的促进了动物的生长发育，提高饲料利用率，断奶仔猪日增重提高48.91％，料肉比提高14.1％，腹泻率减少10％，死淘率降低3.7％。

3、由于螯合铜具有良好的热稳定性，红酵母的添加使得本发明所提供的复合酶具有较好的保存活性和热稳定性，保存活性提高25-30％，热稳定性提高35％以上。

4、本发明根据猪消化生理特点，并经过动物实验筛选复合配方，设置复合酶酶谱，有效补充消化道蛋白酶、淀粉酶等内源酶的不足，有效提高对饲料的消化利用率，防止营养性腹泻的产生。

具体实施方式：

实施例1：海洋红酵母菌WYN1的获得及耐铜能力驯化

(1)将从黄海海边采集新鲜的海虾、海星、海藻等生物样本，置于无菌的YEPD培养基中，挑取红色或粉红色圆形菌落，进一步纯化培养。根据各菌种类胡萝卜素的积累量，筛选类胡萝卜素产量高的菌种。其中类胡萝卜素产量较高的海洋红酵母WYN1，细胞为卵圆形，没有假菌丝；在海水配置的YEPD培养基上形成红色菌落，表面光滑，边缘整齐；在产孢培养基上不产子囊孢子，多边芽殖，无掷孢子；不发酵糖，不形成类淀粉化合物，不同化肌醇。根据上述特点，初步确定属于红酵母属(Rhodotorula)。斜面保存于冰箱中。

(2)海洋红酵母WYN1的发酵培养

将菌种转接到斜面培养基上活化，28℃培养24h后，接种于YPD液体种子培养基中，28℃振荡培养36h得种子液，按10％接种量接入装有60mL发酵培养基的250mL三角瓶中，28℃，振荡培养48h(摇床转速为180r/min)。发酵培养基组成为葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母膏1％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，盐度20。28℃摇床培养48h，转速为180r/min。

(3)耐铜能力驯化

将海洋红酵母菌WYN1接种于铜离子含量为50mg/L(硫酸铜配置)培养基中，置于28℃，180r/min恒温摇床上震荡培养24h。然后从该培养物中取3ml发酵物接种到不含铜的麦芽汁培养基中，培养24h。反复培养几代，使酵母在含铜的培养基中生长稳定，且数量不再增多时，再逐步提高培养基的铜浓度。如此反复便可使得酵母菌能够适应铜离子含量为300mg/l的环境，获得了耐铜的特性。本发明经过对海洋红酵母进行耐铜能力驯化后，能有效地提高细胞生物量、类胡萝卜素的产量及酵母的富铜能力。

(4)细胞生物量的测定

将发酵液3000r/min离心10min，弃上清液，菌体经无菌水洗2～3次后再次离心，所得菌体置于60℃烘箱中干燥至恒重，准确称重。

(5)类胡萝卜素的提取：

将1g干菌体放入100mL三角瓶中，加入5mL3mol/L的盐酸室温浸泡1h，沸水浴4min，迅速冷却，3000r/min离心15min沉淀为细胞残渣，用丙酮定容至20mL萃取，得类胡萝卜素浸提液。

(6)类胡萝卜素的测定

将提取液适当稀释后，用722型分光光度计在475nm条件下测定光吸收值。按下式计算类胡萝卜素含量：

式中：Aλ_max为475nm波长处的吸光度；D为测定试样时的稀释倍数；V为丙酮用量(mL)；0.16为类胡萝卜素的克分子消光系数；W为红酵母菌体干重(g)。

(7)酵母含铜量测定

用原子吸收法测定。

(8)菌种保藏

将上述经过驯化的富铜海洋红酵母WYN1保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNo：M2014592。

胡萝卜素产量及胞内螯合铜含量分别为27.52g/L、25.12mg/L和6240μg/g干菌。

实施例2一种红酵母培养物的制备方法

将海洋红酵母WYN1斜面菌种接种于YPD液体种子培养基中，28℃振荡培养36h得种子液；

发酵培养：初始pH为8，将种子培养液按接种量5％接种于发酵培养基，摇床转速为65r/min，26℃培养12小时后调整温度为18℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为4，保持3小时；之后每小时升温2℃至26℃，pH调整为5，按照发酵液重量体积比2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉；摇床转速为80r/min，继续发酵12h；

发酵结束后，发酵液经孔径500μm粗滤，然后与15℃循环超滤浓缩去除水分得固形物含量30％浓缩液，浓缩液经真空冷冻干燥、超微粉碎得红酵母培养物。

发酵培养基质量体积比组成为：葡萄糖1％，酶解玉米粉2％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量180mg/L，氯化钠20％，其余为水；

所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉配料罐中，以V:m为2:1加入纯净水，调节pH值5，加入中温淀粉酶，酶活为30u/g玉米粉，与酶活为30u/g玉米粉的蛋白酶，边搅拌边升温至50℃保温25min，然后缓慢升温至62℃保温25min，冷冻干燥备用。

采用上述方法发酵培养海洋红酵母WYN1，发酵液中生物量、类胡萝卜素产量及胞内螯合铜含量分别为32.52g/L、40mg/L和8000μg/g干菌。

实施例3一种猪用复合酶制剂及其制备方法

一种猪用复合酶制剂，由以下重量份数的组分组成：

木聚糖酶80份，纤维素酶40份，β-葡聚糖酶80份，蛋白酶120份，中温α-淀粉酶35份，甘露聚糖酶15份，果胶酶15份，复合维生素5份，复合微量元素15份，抗菌肽15份，红酵母培养物35份；

所述复合微量元素每公斤包含碘1000mg，钾180mg，铁1800mg，硒80mg,钴200mg，镁145mg，锰1400mg，铬20mg,锌1100mg，铜800mg；其余量为载体，所述载体为木屑；

所述木屑的制备方法包括如下步骤：将无发霉、无病虫锯木末或废木屑除去杂物，置于超声波清洗机中于200W、30KHz清洗10min，冲洗、沥干，放入蒸汽釜中于0.3MPa蒸煮25min,然后置微波干燥机于2000W、120℃进行间歇式干燥3min，使之水分达到10％，最后2.0筛片粉碎、密封包装即得木屑；

所述超声波清洗机中清洗液为质量百分比浓度0.5％的碳酸氢钠溶液；

所述间歇式干燥工艺为：微波辐射10s,停留20s,如此重复，循环干燥。

所述复合维生素每公斤包含维生素A2800mg，维生素B13000mg，维生素C2000mg，核黄素1600mg，泛酸1900mg，维生素B61800mg，维生素B121200mg，肌醇5000mg，维生素E600mg，维生素D35500mg，维生素K34000mg；其余量为载体，所述载体为上述制备的木屑。

按上述重量份数取市售的木聚糖酶，纤维素酶，β-葡聚糖酶，中温α-淀粉酶，蛋白酶，甘露聚糖酶、果胶酶、抗菌肽，以及上述复合微量元素和复合维生素，和实施例2所得的红酵母培养物，于25℃条件下在混合机中搅拌均匀，搅拌时间为5分钟。搅拌均匀装箱后于常温或冷室中保存。

实施例4一种猪用复合酶制剂及其制备方法

一种猪用复合酶，由以下重量份数的组分组成：

木聚糖酶60份，纤维素酶35份，β-葡聚糖酶60份，蛋白酶100份，中温α-淀粉酶30份，甘露聚糖酶10份，果胶酶10份，复合维生素3份，复合微量元素10份，抗菌肽20份，红酵母培养物40份；

所述复合微量元素同实施例3；

所述复合维生素同实施例3；

按上述重量份数取市售的木聚糖酶，纤维素酶，β-葡聚糖酶，中温α-淀粉酶，蛋白酶，甘露聚糖酶、果胶酶、抗菌肽，复合微量元素和复合维生素，以及实施例2所得的红酵母培养物，于25℃条件下在混合机中搅拌均匀，搅拌时间为5分钟。搅拌均匀装箱后于常温或冷室中保存。

实施例5一种猪用复合酶制剂及其制备方法

一种猪用复合酶，由以下重量份数的组分组成：

木聚糖酶100份，纤维素酶45份，β-葡聚糖酶100份，蛋白酶150份，中温α-淀粉酶40份，甘露聚糖酶20份，果胶酶20份，复合维生素8份，复合微量元素20份，抗菌肽10份，红酵母培养物30份

所述复合微量元素同实施例3；

所述复合维生素同实施例3；

按上述重量份数取市售的木聚糖酶，纤维素酶，β-葡聚糖酶，中温α-淀粉酶，蛋白酶，甘露聚糖酶、果胶酶、抗菌肽，复合微量元素和复合维生素，以及实施例2所得的红酵母培养物，于25℃条件下在混合机中搅拌均匀，搅拌时间为5分钟。搅拌均匀装箱后于常温或冷室中保存。

实施例6实施例3所得复合酶在断奶仔猪中的使用效果试验

试验方法：

选取120头断奶仔猪，按体重、血统及性别无差异分为实验组和对照组，每组3个重复，每个重复20头猪。实验期为28天，实验组每吨饲料添加实施例3所述复合酶120g，对照组添加的复合酶同实施例3所述复合酶，仅将红酵母替换为市售饲料酵母，于试验期的始末日早晨空腹称重，计算饲料转化率、日增重、料肉比、腹泻率和死淘率。实验结果如下表所示：

	日增重	料肉比	腹泻率	死淘率
					对照组	226.31g	1.49	15％	5％
实验组	337.16g	1.28	5％	1.7％

由实验结果可知，添加有本发明所述复合酶的饲料可使断奶仔猪日增重提高48.91％，料肉比提高14.1％，腹泻率减少10％，死淘率降低3.7％。

实施例7红酵母对复合酶制剂保存活性的影响

以实施例3中所述的制备方法获得的复合酶为样品1，将实施例3中的红酵母替换为市售的饲料酵母，比较两种样品的保存活性。在室温下保存上述样品6个月，之后重复实施例6的实验，通过料肉比的变化表征复合酶活性的变化，结果表明：样品1的残余活性在85％以上，样品2的残余活性保持在60％左右。同样重复上述实验，4℃保存12个月样品1相较样品2酶活损失减小30％。

实施例8红酵母对复合酶热稳定性的影响

以实施例3中所述的制备方法获得的复合酶为样品1，将实施例3中的红酵母替换为市售的饲料酵母，比较两种样品的热稳定性。在45℃下保存上述样品24h，之后重复实施例6的实验，通过料肉比的变化表征复合酶活性的变化，结果表明：样品1的残余活性在75％以上，样品2的残余活性保持在40％左右。

Claims (7)

1.一种猪用复合酶制剂，其特征在于，由以下重量份数的组分组成：木聚糖酶60-100份，纤维素酶35-45份，β-葡聚糖酶60-100份，蛋白酶100-150份，中温α-淀粉酶30-40份，甘露聚糖酶10-20份，果胶酶10-20份，复合维生素3-8份，复合微量元素10-20份，抗菌肽10-20份，红酵母培养物30-40份；

所述红酵母具体为海洋红酵母WYN1(Rhodotorulasp.WYN1)，保藏编号CCTCCNo：M2014592。

2.如权利要求1所述的一种猪用复合酶制剂，其特征在于，所述复合维生素的制备方法如下：所述复合微量元素每公斤包含碘1000mg，钾180mg，铁1800mg，硒80mg,钴200mg，镁145mg，锰1400mg，铬20mg,锌1100mg，铜800mg；其余量为载体，所述载体为木屑；

所述木屑的制备方法包括如下步骤：将无发霉、无病虫锯木末或废木屑除去杂物，置于超声波清洗机中于200W、30KHz清洗10min，冲洗、沥干，放入蒸汽釜中于0.3-0.4MPa蒸煮20-30min,然后置微波干燥机于2000W、120℃进行间歇式干燥3min，使之水分达到8-10％，最后2.0筛片粉碎、密封包装即得木屑；

所述超声波清洗机中清洗液为质量百分比浓度0.5％的碳酸氢钠溶液；

所述间歇式干燥工艺为：微波辐射10s,停留20s,如此重复，循环干燥；

所述复合维生素每公斤包含维生素A2800mg，维生素B13000mg，维生素C2000mg，核黄素1600mg，泛酸1900mg，维生素B61800mg，维生素B121200mg，肌醇5000mg，维生素E600mg，维生素D35500mg，维生素K34000mg；其余量为载体，所述载体为上述制备的木屑。

3.如权利要求1所述的一种猪用复合酶制剂，其特征在于，所述红酵母培养物的制备方法如下：

种子培养按酵母常规培养方法进行培养；

发酵培养：初始pH为8，将种子培养液按接种量3-8％接种于发酵培养基，摇床转速为50-80r/min，24-28℃培养10-15小时后调整温度为16-20℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为3-5，保持2-4小时；之后阶梯形升温到24-30℃，pH调整为4.6-5.5，按照2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉；摇床转速为50-100r/min，继续发酵10-15h；

发酵结束后，发酵液经孔径10-1000μm粗滤，然后与10-20℃循环超滤浓缩去除水分得固形物含量20-40％浓缩液，浓缩液经真空冷冻干燥、超微粉碎得红酵母培养物。

4.如权利要求3所述的一种猪用复合酶制剂，其特征在于，所述发酵培养基质量体积比组成为：葡萄糖1％，酶解玉米粉1-3％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量150-200mg/L，氯化钠20％，其余为水；

所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉置于配料罐中，以V:m为2:1加入纯净水，调节pH值3-7，加入中温淀粉酶，酶活为30u/g玉米粉，与酶活为30u/g玉米粉的蛋白酶，边搅拌边升温至45-55℃保温15-30min，然后缓慢升温至60-65℃保温15-30min，冷冻干燥备用。

5.一种制备权利要求1-4任意一项猪用复合酶制剂的方法，包括如下步骤：

按照原料组成将木聚糖酶，纤维素酶，β-葡聚糖酶，蛋白酶，中温α-淀粉酶，甘露聚糖酶、果胶酶、复合维生素，复合微量元素，抗菌肽，红酵母培养物混合均匀即可；

所述木聚糖酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、蛋白酶、中温α-淀粉酶、甘露聚糖酶、果胶酶、和抗菌肽均为市售产品；

所述复合微量元素每公斤包含碘1000mg，钾180mg，铁1800mg，硒80mg,钴200mg，镁145mg，锰1400mg，铬20mg,锌1100mg，铜800mg；其余量为载体，所述载体为木屑；

所述木屑的制备方法包括如下步骤：将无发霉、无病虫锯木末或废木屑除去杂物，置于超声波清洗机中于200W、30KHz清洗10min，冲洗、沥干，放入蒸汽釜中于0.3-0.4MPa蒸煮20-30min,然后置微波干燥机于2000W、120℃进行间歇式干燥3min，使之水分达到8-10％，最后2.0筛片粉碎、密封包装即得木屑；

所述超声波清洗机中清洗液为质量百分比浓度0.5％的碳酸氢钠溶液；

所述间歇式干燥工艺为：微波辐射10s,停留20s,如此重复，循环干燥；

所述复合维生素每公斤包含维生素A2800mg，维生素B13000mg，维生素C2000mg，核黄素1600mg，泛酸1900mg，维生素B61800mg，维生素B121200mg，肌醇5000mg，维生素E600mg，维生素D35500mg，维生素K34000mg；其余量为载体，所述载体为上述制备的木屑；

所述红酵母培养物制备方法如下：

种子培养按酵母常规培养方法进行培养；

发酵培养：初始pH为8，将种子培养液按接种量3-8％接种于发酵培养基，摇床转速为50-80r/min，24-28℃培养10-15小时后调整温度为16-20℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为3-5，保持2-4小时；之后阶梯形升温到24-30℃，pH调整为4.6-5.5，按照2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉；摇床转速为50-100r/min，继续发酵10-15h；

发酵结束后，发酵液经孔径10-1000μm粗滤，然后与10-20℃循环超滤浓缩去除水分得固形物含量20-40％浓缩液，浓缩液经真空冷冻干燥、超微粉碎得红酵母培养物；

发酵培养基质量体积比组成为：葡萄糖1％，酶解玉米粉1-3％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量150-200mg/L，氯化钠20％，其余为水；

所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉置于配料罐中，以V:m为2:1加入纯净水，调节pH值3-7，加入中温淀粉酶，酶活为30u/g玉米粉，与酶活为30u/g玉米粉的蛋白酶，边搅拌边升温至45-55℃保温15-30min，然后缓慢升温至60-65℃保温15-30min，冷冻干燥备用。

6.如权利要求1所述的一种猪用复合酶制剂，其特征在于：由以下重量份数的组分组成：木聚糖酶80份，纤维素酶40份，β-葡聚糖酶80份，蛋白酶120份，中温α-淀粉酶35份，甘露聚糖酶15份，果胶酶15份，复合维生素5份，复合微量元素15份，抗菌肽15份，红酵母培养物35份。

7.如权利要求1所述的一种猪用复合酶制剂在畜禽饲养中的应用。