CN105123566A - 一种哲罗鲑精子激活液及制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种哲罗鲑精子激活液及制备方法，涉及哲罗鲑品种的精子技术领域。哲罗鲑精子激活液，包含如下原料：葡萄糖40.64-81.27mmol/L，氯化钠10.12-20.24mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：142.41kpa-284.81kpa。方法：称量纯葡萄糖放入烧杯中；称量出该质量的分析纯氯化钠与所称量的葡萄糖放入同一烧杯中；在烧杯中加入二分之一的激活液体积的去离子水或蒸馏水并搅拌，将溶解后的溶解移入与所配激活液体积相同的容量瓶中，将洗涤后溶液并也一同倒入容量瓶中，最后用去离子水或蒸馏水定容至刻度线处，晃匀。解决了如何延长哲罗鲑精子的运动时间，提高受精率的问题。
Description
技术领域
本发明涉及哲罗鲑品种的精子技术领域，具体涉及哲罗鲑精子激活液，同时还涉及一种哲罗鲑精子激活液的制备方法。
背景技术
哲罗鲑(Huchotaimen)又称大红鱼，为鲑形目，鲑科，哲罗鱼属，是我国著名的大型凶猛食肉类冷水性淡水鱼，营养价值高，生长速度快，有较高的经济价值。因生存环境破坏及大量滥捕，目前我国仅存少量分布于新疆喀纳斯湖和乌苏里江上游及黑龙江呼玛河段，现为国家二级保护动物，名列《中国濒危动物红皮书》。
为了保护哲罗鲑的种质资源，需要对哲罗鲑开展人工驯化繁殖。然而，在人工繁殖过程中发现哲罗鲑普遍存在雄鱼精液量少，受精率低的问题，直接导致了出苗率低，人繁效率低下，不利于其种质保护。在鱼类受精过程中，精液从雄鱼性腺排出进入水体中时，即激活获得运动能力，并游向卵与之结合完成受精；在正常水体中精子激活后运动时间仅为60s左右，然而在对哲罗鲑精液检测中发现其精子运动时间仅为22s左右。大量研究表明淡水鱼类精子运动主要由其线粒体呼吸作用产生能量提供，但产生的能量只有少部分用在鞭毛运动中，大部分能量消耗于精子对外界渗透压的调节当中，不难发现在精子本身原质极少的情况下，如何减少其在渗透压调节消耗的能量，为精子鞭毛运动提供充足的能量，延长哲罗鲑精子的运动时间，将大大提高其精子与卵的结合机会，从而提高受精率。
发明内容
本发明提供一种哲罗鲑精子激活液及制备方法，本发明解决了如何减少其在渗透压调节消耗的能量，为精子鞭毛运动提供充足的能量，延长哲罗鲑精子的运动时间，大大提高其精子与卵的结合机会，提高受精率的问题。
对于这一问题，本发明的解决的方法是使用具有一定渗透压的溶液代替原水体对哲罗鲑精子进行激活，以减少精子内外渗透压差异所带来的能量损耗，延长精子的运动时间，提升其受精率。
为解决上述问题，本发明采用如下技术方案：一种哲罗鲑精子激活液，包含如下原料：葡萄糖40.64-81.27mmol/L，氯化钠10.12-20.24mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：142.41kpa-284.81kpa。
优选的是：哲罗鲑精子激活液，包含如下原料：葡萄糖46.1-75.85mmol/L，氯化钠11.51-18.96mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：161.5kpa-265.82kpa。
更优选的是：哲罗鲑精子激活液，包含如下原料：葡萄糖54.18-70.43mmol/L，氯化钠13.54-17.60mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：189.87kpa-246.82kpa。
最优的是：哲罗鲑精子激活液，包含如下原料：葡萄糖67.72mmol/L，氯化钠16.93mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：237.31kpa。
一种哲罗鲑精子激活液的制备方法，该激活液应随配随用，配制方法如下：
激活液为如下原料：葡萄糖40.64-81.27mmol/L，氯化钠10.12-20.24mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：142.41kpa-284.81kpa；配制激活液的溶剂为去离子水或蒸馏水；
溶质质量计算公式：溶质质量＝溶质量浓度×激活液体积×溶质分子量÷1000；
配制步骤：
(1)根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的葡萄糖质量，称量出该质量的分析纯葡萄糖放入烧杯中；
(2)根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的葡萄糖质量，称量出该质量的分析纯氯化钠与所称量的葡萄糖放入同一烧杯中；
(3)在烧杯中加入二分之一的激活液体积的去离子水或蒸馏水并搅拌，使烧杯中的葡萄糖和氯化钠充分溶解，将溶解后的溶解移入与所配激活液体积相同的容量瓶中，需用少量去离子水或蒸馏水洗涤烧杯两次至三次，将洗涤后溶液并也一同倒入容量瓶中，最后用去离子水或蒸馏水定容至刻度线处，晃匀。
本发明在该激活液中，除了能减少渗透压差带来能量损耗外，还能起到提高精子活力的作用。因为激活液中含有的大分子与离子物质对精子活力有着一定作用。例如：有报道表明葡萄糖可以参与精子的三羧酸循环，为精子提供能量同时也起到调节渗透压的作用；Na+主要对精子的运动有着促进作用。哲罗鲑激活液由葡萄糖、氯化钠组成，这两种物质使精子生物学特性产生了变化，在对哲罗鲑精液进行镜检中发现，不使用激活液激活的精液，其精子快速运动激活比例为80％，精子快速运动时间持续22s左右；使用激活液激活的精液，其精子快速运动激活比例为95％以上，快速运动持续时间最高达到45s。因此，哲罗鲑精子激活液对提高哲罗鲑精子运动时间有显著的效果。
具体实施方式
下面用最佳的实施例对本发明做详细的说明。
实施例一
一种哲罗鲑精子激活液的制备方法，该激活液应随配随用，配制方法如下：
激活液为如下原料：葡萄糖40.64-81.27mmol/L，氯化钠10.12-20.24mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：142.41kpa-284.81kpa；配制激活液的溶剂为去离子水或蒸馏水；
溶质质量计算公式：溶质质量＝溶质量浓度×激活液体积×溶质分子量÷1000；
配制步骤：
(1)根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的葡萄糖质量，使用精度0.01g的电子天平精确称量出该质量的分析纯葡萄糖放入烧杯中；
(2)根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的葡萄糖质量，使用精度0.01g的电子天平精确称量出该质量的分析纯氯化钠与所称量的葡萄糖放入同一烧杯中；
(3)在烧杯中加入大致二分之一的激活液体积的去离子水或蒸馏水并搅拌，使烧杯中的葡萄糖和氯化钠充分溶解，将溶解后的溶解移入与所配激活液体积相同的容量瓶中，需用少量去离子水或蒸馏水洗涤烧杯两次至三次，将洗涤后溶液并也一同倒入容量瓶中，最后用去离子水或蒸馏水定容至刻度线处，晃匀。
实施例二：
1、亲鱼选择
本次试验所选用的亲鱼共3条，平均体重为5.5kg，年龄均为6+以上。亲鱼体质健壮，无外伤，性腺发育成熟，轻压腹部精液可自动流出。
2、激活液配制
2.1、激活液原料
分析纯葡萄糖、分析纯氯化钠、蒸馏水。葡萄糖分子量为180.16g/mol；氯化钠分子量为58.44g/mol。
根据计算公式(重量份计算公式：重量份＝溶质量浓度X激活液体积(L)X溶质分子量÷1000)，计算出配制50ml激活液所需的葡萄糖及氯化钠的重量，葡萄糖为0.61g，氯化钠为0.05g，使用电子天平分别精确称量出两种原料，一同放入烧杯中；随后在烧杯中加入20ml蒸馏水并搅拌，待其充分溶解后，倒入50ml的容量瓶中，需用少量蒸馏水对烧杯润洗几次，洗液也一同倒入容量瓶中，最后用蒸馏水定容至刻度线处。
3、精液采集
使用亲鱼夹或两人各抓住亲鱼头尾，保定亲鱼后，一人先用毛巾轻轻抹去亲鱼生殖孔周围的体表水分，然后沿鱼腹两侧轻微压迫，使精液流入量杯中。
4、精子活力观察及检测方法
观察时，先于载玻片上加一滴试剂，用洁净牙签尖端挑取少许精液与其混合，即刻移至10×40倍显微镜下，依次完成同一条鱼精液在池塘水与激活液中的寿命观测。观察以一个视野为准。当精液与试剂相混时，立即用秒表开始计时。当有95％以上的精子停止颤动(停止摇动)时，立即掐表，即为寿命时间。至此，一次精子活力观察结束。每条鱼在池水与激活液中分别观测3次，以3次的平均时间作为每条鱼在两种液体中精子寿命时间。
5、结果
表一.哲罗鲑精子在池水与激活液中寿命对比试验结果单位：s
试验结果如表一所示，在A组池塘水中哲罗鲑的精子寿命时间为22±6s；B组激活液中的精子寿命时间为46±8s，试验表明采用配制激活液激活哲罗鲑精子可获得较高的精子寿命时间，意味着精子与卵的结合机会更高。
最后应说明的是：显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。
Claims (5)
1.一种哲罗鲑精子激活液，其特征在于，包含如下原料：葡萄糖40.64-81.27mmol/L，氯化钠10.12-20.24mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：142.41kpa-284.81kpa。
2.如权利要求1所述一种哲罗鲑精子激活液，其特征在于，包含如下原料：葡萄糖46.1-75.85mmol/L，氯化钠11.51-18.96mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：161.5kpa-265.82kpa。
3.如权利要求1所述一种哲罗鲑精子激活液，其特征在于，包含如下原料：葡萄糖54.18-70.43mmol/L，氯化钠13.54-17.60mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：189.87kpa-246.82kpa。
4.如权利要求1所述一种哲罗鲑精子激活液，其特征在于，包含如下原料：葡萄糖67.72mmol/L，氯化钠16.93mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：237.31kpa。
5.一种哲罗鲑精子激活液的制备方法，其特征在于，该激活液应随配随用，配制方法如下：
激活液为如下原料：葡萄糖40.64-81.27mmol/L，氯化钠10.12-20.24mmol/L，其中水温：8-11℃，渗透压：142.41kpa-284.81kpa；配制激活液的溶剂为去离子水或蒸馏水；
溶质质量计算公式：溶质质量＝溶质量浓度×激活液体积×溶质分子量÷1000；
配制步骤：
(1)根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的葡萄糖质量，称量出该质量的分析纯葡萄糖放入烧杯中；
(2)根据溶质质量计算公式计算出所配激活液体积所需的葡萄糖质量，称量出该质量的分析纯氯化钠与所称量的葡萄糖放入同一烧杯中；
(3)在烧杯中加入二分之一的激活液体积的去离子水或蒸馏水并搅拌，使烧杯中的葡萄糖和氯化钠充分溶解，将溶解后的溶解移入与所配激活液体积相同的容量瓶中，需用少量去离子水或蒸馏水洗涤烧杯两次至三次，将洗涤后溶液并也一同倒入容量瓶中，最后用去离子水或蒸馏水定容至刻度线处，晃匀。
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