CN105106476B - 藏红花在缓解果蝇肠道炎症损伤中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明是藏红花提取物在缓解果蝇肠道炎症损伤中的应用。采用水提法得到藏红花提取物，对藏红花提取物进行果蝇肠道炎症损伤模型修复实验，结果表明藏红花提取物具有较好的抗炎作用，可用于制备抗炎药物,尤其是抗肠道炎症损伤的药物。

Description

藏红花在缓解果蝇肠道炎症损伤中的应用
技术领域
本发明涉及藏红花提取物在缓解果蝇肠道炎症损伤方面的应用，涉及果蝇天然免疫技术领域。
背景技术
与哺乳动物肠道相比，果蝇的肠道结构及细胞组成相对简单，而且调节肠道功能的相关信号途径都与哺乳动物相似。果蝇通过肠道干细胞通过增殖与分化来补充凋亡细胞以维持自身肠道的完整性和内稳态。在果蝇中，一个肠道干细胞(Intestinal stem cell,ISC)进行不对称分裂通常可产生两个细胞，其中一个细胞保持干细胞特性，另一个为短暂不分裂的成肠细胞(Enteroblast,EB)。正常情况下，肠粘膜屏障中的正常菌群与宿主之间具有一定的平衡。不良的外界环境，感染等条件下均会引起肠道内稳态失调，进而诱导机体产生全身或局部炎症反应。病原体通过肠道进入机体后，诱导肠道表皮细胞激活一系列免疫应答反应，最终通过产生抗菌肽和活性氧将病原体杀死。由于果蝇只有天然免疫系统，因而果蝇肠道已成为研究天然免疫的重要模型。利用模式生物果蝇研究肠道免疫，可以为揭示人类肠道相关疾病的发生机制提供重要理论依据。
藏红花(Crocus sativus L.)是鸢尾科番红花属球根类草本植物，原产自希腊、西班牙和伊朗等国，在我国被列为珍稀名贵中药材。藏红花具有很强的活血化瘀的功效，一直被用于临床。最新研究发现藏红花具有良好的抗癌活性，而且几乎无毒副作用。然而，目前尚无对藏红花提取物用于缓解肠道炎症损伤的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于揭示出藏红花提取物可应用于缓解肠道炎症损伤。
上述目的是通过以下方案予以实现的：
首先给果蝇喂食有毒试剂(SDS和DSS)来建立果蝇肠道炎症损伤模型，将藏红花提取物进行果蝇生存率、肠道上皮死亡细胞数量、肠道形态学观察等实验，结果发现藏红花提取物具有较好的抗炎活性，可用于制备抗炎药物，尤其是治疗肠道炎症的药物。
附图说明
图1为藏红花提取物对SDS和DSS处理后果蝇生存率的影响；
图2为高效液相色谱法检测藏红花水提物中有效成分含量；
图3为藏红花提取物对SDS处理后果蝇肠道细胞染色结果的影响；
图4为藏红花提取物对SDS处理后果蝇肠道形态的影响；
具体实施方式
下面结合实例对本发明作进一步说明：
实验动物：野生型W1118品系黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)为实验室保存，esgGal4 UAS-GFP由北京大学袭荣文教授提供。果蝇培养温度为25℃，相对湿度60％。
果蝇培养基的配制：对照组培养基配方为玉米粉14.2g、琼脂1.1g、酵母粉3.3g、大豆粉1.9g、白糖17g、丙酸0.94mL、去离子水200mL。实验组中加入与对照组去离子水等体积的藏红花提取液，实验组中藏红花提取物的浓度为1％。
本实施例涉及的各实验试剂均为市售分析纯：SDS和DSS等。
实施例1藏红花水提取液的制备
称取藏红花粉末2g，加入300mL去离子水隔夜浸泡12h，中火熬制3h，过滤，滤渣后加入200mL去离子水用同样的方法提取1次，合并2次滤液浓缩至50mL，即得到质量浓度为40mg/mL(4％)的中草药水提取液。4℃密封储存备用。
实施例2高效液相色谱法检测藏红花水提取物中有效成分含量
以藏红花主要成分—西红花苷Ι为标准品，对标准品(图1A)和藏红花水提取物进行高效液相色谱(图1B)检测。经检测藏红花水提取物中西红花苷Ι的含量为0.181％。
实施例3藏红花提取物对SDS和DSS处理后果蝇生存率的影响
以普通培养基中培养的果蝇作为对照组，藏红花培养基中培养的果蝇作为实验组。分别随机收集对照组和实验组羽化了3～5天的果蝇，每组中雌雄果蝇各15只。各组果蝇饥饿处理2h后转移到放有5层滤纸的果蝇管中，向滤纸中分别加入5％蔗糖溶液包含0.6％SDS、4％DSS等致炎因子使滤纸充分润湿，每24h更换一次滤纸并记录果蝇死亡数。
结果显示：SDS处理果蝇6天后，对照组生存率降到3.3％，而喂食藏红花的实验组生存率为35.6％(***P<0.001)，与对照组相比提高了32.3％(图2A)。另外，DSS处理果蝇7天后，对照组的生存率仅为13.3％，而喂食藏红花的实验组生存率分别为67.8％(***P<0.001)，比对照组提高了54.5％(图2B)。上述结果说明，藏红花提取物可缓解SDS和DSS诱导的肠道炎症损伤，显著地提高了果蝇的生存率。
实施例4藏红花提取物对SDS处理后果蝇肠道细胞免疫染色结果的影响
随机收集对照组和实验组羽化3～4天的雌果蝇喂食含5％蔗糖的SDS(0.6％)溶液96h，显微镜下提取10～15条果蝇肠道于PBS中，7-AAD室温染色30min，多聚甲醛固定10min，DAPI染色10min，甘油封片后荧光显微镜下观察并拍照。
结果显示：对照组的肠道上皮细胞均出现大量死亡，而喂食藏红花的实验组中肠道上皮细胞的死亡数量明显减少，结果见图3。
实施例5藏红花对SDS处理后果蝇肠道形态的影响
收集羽化了3～4天的雌果蝇，SDS处理后，显微镜下提取10～15条果蝇肠道于PBS中，自然光下观察肠道形态变化。
结果显示：SDS处理的对照组由于肠道上皮细胞大量死亡，长度明显缩短，而且在中后肠位置出现了明显的黑色素瘤。当喂食藏红花时，与对照组相比肠道长度明显增加，而且没有出现黑色素瘤，结果见图4。
综上所述，通过对果蝇生存率、肠道细胞染色及肠道形态的分析，我们认为藏红花提取物可缓解果蝇肠道炎症损伤。

Claims (1)

1.藏红花提取物在缓解果蝇肠道炎症损伤中的制药用途，其特征在于:
藏红花提取物的制备是，称取藏红花粉末2g，加入300mL去离子水浸泡12h，中火熬制3h，过滤，滤渣后加入200mL去离子水用同样的方法提取1次，合并2次滤液浓缩至50mL，即得到质量浓度为40mg/mL的中草药水提取液；该藏红花提取物能提高果蝇喂食SDS或DSS后的生存率，同时缓解SDS引起的肠上皮细胞的凋亡及肠道黑色素瘤的产生。
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