CN105079000A - 一种组合物及其应用、制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及动物养殖领域，特别涉及一种组合物及其应用、制剂。该组合物包括头孢喹肟或其盐以及辅料；所述辅料包括稳定剂、助悬剂、增效剂、抗氧化剂、溶剂中的一种或两者以上的混合物与助流剂的组合。安全性试验结果表明，本发明提供的制剂对奶牛没有出现不良反应。局部刺激性与过敏性试验结果表明，本发明提供的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)无刺激性反应。疗效试验结果表明，本发明提供的受试药物硫酸头孢喹肟乳房注入剂对治疗乳区的病原菌有清除作用，改善奶牛乳房炎临床症状，降低乳汁的体细胞数，提高牛奶质量，对奶牛临床型乳房炎均有较好的治疗效果，治愈率达80％～85％。

Description

一种组合物及其应用、制剂

技术领域

本发明涉及动物养殖领域，特别涉及一种组合物及其应用、制剂。

背景技术

奶牛乳房炎(cowmastitis)是奶牛最常见多发的三大疾病(乳房炎、子宫内膜炎、蹄叶炎)之一，不仅严重影响奶牛的产奶量、乳品质、生殖机能和利用年限，而且还对食品卫生和人体健康产生危害。奶牛乳房炎主要由致病菌侵袭乳头管、淋巴管或血管致病，是威胁奶牛养殖业最常见的疾病之一。目前，全世界约有50％左右的奶牛患有各种类型的乳房炎，严重影响奶牛业的健康发展。

在美国30％-70％的母牛至少有一个乳区被感染，Schutz报道美国每头母牛每年因乳房炎的花费为182美元，Lund等报道在丹麦由乳房炎引起的经济损失估计为每头母牛225美元，其中大约60％的损失是由产奶量下降引起的。我国奶牛乳房炎的发生率更高，袁永隆等调查结果表明，临床型乳房炎发病率平均为33.41％，隐性乳房炎平均阳性率为73.91％，乳室患病率为44.74％。奶牛乳房炎一方面造成奶牛产奶量降低，另一方面影响了奶质，乳房炎病牛乳汁中含有大量病原微生物及其产生的毒素，可直接危害人类健康。因此，乳房炎造成治疗费用增加、奶产量下降、母牛过早淘汰等损失巨大。

此外，奶牛乳房炎不仅因降低产乳量和影响乳品质量而造成巨大损失，还由于治疗不及时或治疗不当易转成慢性乳房炎，导致乳腺组织纤维化与萎缩，奶牛被过早淘汰。对于急性乳房炎的治疗一般采用抗菌药物，主要包括青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、林可胺类以及氟喹诺酮类药物，但随着抗菌药长期的广泛使用，使病原体对药物产生了抗药性，而降低了疗效，且使奶中抗生素的残留增加，对人体健康造成危害。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种组合物及其应用、制剂。该制剂具有速效靶向功能和亲脂性良好的作用，配方稳定，疗效显著。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种组合物，包括头孢喹肟或其盐以及辅料；

所述辅料包括稳定剂、助悬剂、增效剂、抗氧化剂、溶剂中的一种或两者以上的混合物与助流剂的组合。

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的组合物中所述辅料由助流剂、稳定剂、抗氧化剂和溶剂组成；或

所述辅料由助流剂、稳定剂、增效剂、抗氧化剂和溶剂组成；或

所述辅料由助流剂、助悬剂、抗氧化剂和溶剂组成；或

所述辅料由助流剂、助悬剂、增效剂、抗氧化剂和溶剂组成；或

所述辅料由助流剂、稳定剂、助悬剂、增效剂、抗氧化剂和溶剂组成。

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的组合物中所述头孢喹肟或其盐与所述辅料的质量比为(0.045～0.095)：(5～10)。

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的组合物中所述助流剂为精制豚脂；所述稳定剂为硬脂酸；所述助悬剂为硬脂醇、所述增效剂为肉豆蔻异丙酯；所述抗氧化剂为没食子酸丙脂；所述溶剂为注射用大豆油、药用花生油或药用棉籽油中的一种或两者以上的混合物。

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的组合物中所述辅料由如下组分组成：

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的组合物中所述辅料由如下组分组成：

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的组合物中所述辅料由如下组分组成：

或

或

或

或

本发明还提供了所述组合物用于制备治疗奶牛乳房炎药物的应用。

具体的，本发明还提供了所述组合物用于治疗泌乳期由大肠杆菌、葡萄球菌及链球菌等引起的奶牛的临床型乳房炎。

本发明还提供了一种奶牛乳房炎制剂，包括所述组合物。

在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的奶牛乳房炎制剂的剂型为注入剂。

在本发明的一些具体实施方案中，制剂的制备工艺为：将处方量的辅料混合均匀后，搅拌加热至70-100℃，液体呈澄清溶液状态后，持续保温搅拌5-20min，停止加热，冷却至15-25℃，加入硫酸头孢喹肟，搅拌均匀，经过胶体磨研磨20-50min，即得。

在本发明的一些具体实施方案中，制剂的制备工艺具体为：将处方量的辅料混合均匀后，搅拌加热至80℃，液体呈澄清溶液状态后，持续保温搅拌15min，停止加热，冷却至25℃，加入硫酸头孢喹肟，搅拌均匀，经过胶体磨研磨30min，即得。

本发明提供了一种组合物，包括头孢喹肟或其盐以及辅料；所述辅料包括稳定剂、助悬剂、增效剂、抗氧化剂、溶剂中的一种或两者以上的混合物与助流剂的组合。

本发明提供的组合物，辅料采用亲脂性物质，加上以油为载体，不溶于水，而奶牛乳房组织也是以脂肪为主，所用整个配方没有使用亲水性或者可溶于水的成分，亲脂性很强：

A、药物很好的分散于基质中，制剂载体乳化后药物粒径90％小于10μm，更有利于在乳房分布；

B、精致豚脂能增加基质可塑性，药物流动性好，便于给药；

C、肉豆蔻异丙酯亲脂性良好，可促进药物带乳房组织中分布；

D、此基质润滑均一，无臭、无味、稳定；长期保存不酸败、黏性不变。

安全性试验结果表明，奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)1支(含75mg头孢喹肟)，连续给药3次，每次间隔12小时，在试验各个阶段，奶牛乳区均未出现红、肿、热、痛等症状，产奶量没有受到影响，体细胞计数在个别奶牛的乳区数值较大，但随后又恢复正常，这可能与分离到的一些细菌有关。硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)在临床使用中按“每12小时给药1次，连续使用3次，每次1支(含75mg头孢喹肟)”的用法与用量，即使4个乳区同时给药，对奶牛也没有出现不良反应。

局部刺激性与过敏性试验结果表明，本发明提供的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)对家兔的皮肤无刺激性反应；对家兔的阴道黏膜无刺激性；对豚鼠不产生明显的皮肤过敏性反应。提示本品的应用安全性良好，临床使用安全，符合注射给药要求，值得临床上进一步推广应用。

疗效试验结果表明，本发明提供的受试药物硫酸头孢喹肟乳房注入剂和对照药物氨苄西林钠-氯唑西林钠乳房注入剂对治疗乳区的病原菌均有清除作用，改善奶牛乳房炎临床症状，降低乳汁的体细胞数，提高牛奶质量，对奶牛临床型乳房炎均有较好的治疗效果，治愈率达80％～85％。硫酸头孢喹肟乳房注入剂高、中剂量和对照药物氨苄西林西林钠-氯唑西林钠乳房注入剂，对奶牛临床型乳房炎的治疗效果相当，三者没有统计学意义的差异(P>0.05)。

硫酸头孢喹肟乳房注入剂可用于治疗泌乳期由大肠杆菌、葡萄球菌及链球菌等引起的奶牛的临床型乳房炎。每个感染乳区使用硫酸头孢喹肟乳房注入剂高剂量与中剂量相比，由于它们的病原清除作用，症状改善效果基本相当，有效率和治愈率也无显著差异，故推荐硫酸头孢喹肟乳房注入剂的临床用药方案为：l支(8g：75mg头孢喹肟)/(乳区.次)，间隔12小时给药1次，连用3次。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)对新西兰兔阴道黏膜刺激性的病理组织图；其中，A示子宫颈前段：黏膜上皮排列紧密呈高柱状，胞浆丰富，核浆比为1:2～1:3左右；(H.E.染色×200)；B示子宫颈中段，变化同上，(H.E.染色×200)；C示子宫颈后段，变化同上，(H.E.染色×200)；

图2示生理盐水对照组新西兰兔阴道黏膜刺激性的病理组织图；其中，A示子宫颈前段无异常变化，(H.E.染色×200)；B示子宫颈中段无异常变化，(H.E.染色×200)；C示子宫颈后段无异常变化，(H.E.染色×200)；

图3示组合物中药物粒径图。

具体实施方式

本发明公开了一种组合物及其应用、制剂，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供的组合物及其应用、制剂中所用原料及试剂均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

配方：以100kg计算

工艺：

在配料罐中将处方量的配料混合均匀后，搅拌加热至80℃，液体呈澄清溶液状态后，持续保温搅拌15min，停止加热，冷却至15℃，加入硫酸头孢喹肟(硫酸头孢喹肟与配料的质量比为0.045：10)，搅拌均匀，经过胶体磨研磨30min即得。

实施例2

配方：以100kg计算

工艺：

在配料罐中将处方量的配料混合均匀后，搅拌加热至70℃，液体呈澄清溶液状态后，持续保温搅拌16min，停止加热，冷却至15℃，加入硫酸头孢喹肟(硫酸头孢喹肟与配料的质量比为0.095：5)，搅拌均匀，经过胶体磨研磨40min即得。

实施例3

配方：以100kg计算

工艺：

在配料罐中将处方量的配料混合均匀后，搅拌加热至100℃，液体呈澄清溶液状态后，持续保温搅拌12min，停止加热，冷却至25℃，加入硫酸头孢喹肟(硫酸头孢喹肟与配料的质量比为0.075：7.5)，搅拌均匀，经过胶体磨研磨45min即得。

实施例4

配方：以100kg计算

工艺：

在配料罐中将处方量的配料混合均匀后，搅拌加热至90℃，液体呈澄清溶液状态后，持续保温搅拌8min，停止加热，冷却至20℃，加入硫酸头孢喹肟(硫酸头孢喹肟与配料的质量比为0.045：5)，搅拌均匀，经过胶体磨研磨35min即得。

实施例5

配方：以100kg计算

工艺：

在配料罐中将处方量的配料混合均匀后，搅拌加热至85℃，液体呈澄清溶液状态后，持续保温搅拌10min，停止加热，冷却至17℃，加入硫酸头孢喹肟(硫酸头孢喹肟与配料的质量比为0.095：10)，搅拌均匀，经过胶体磨研磨40min即得。

实施例6

配方：以100kg计算

工艺：

在配料罐中将处方量的配料混合均匀后，搅拌加热至75℃，液体呈澄清溶液状态后，持续保温搅拌20min，停止加热，冷却至22℃，加入硫酸头孢喹肟(硫酸头孢喹肟与配料的质量比为0.07：8)，搅拌均匀，经过胶体磨研磨20min即得。

实施例7

配方：以100kg计算

工艺：

在配料罐中将处方量的配料混合均匀后，搅拌加热至95℃，液体呈澄清溶液状态后，持续保温搅拌5min，停止加热，冷却至20℃，加入硫酸头孢喹肟(硫酸头孢喹肟与配料的质量比为0.08：6)，搅拌均匀，经过胶体磨研磨50min即得。

实施例8体外抑菌试验

1材料与方法

1.1供试药物

氨苄西林0.075g+氯唑西林0.2g，称取配比浓度样品，用无菌水稀释定容，配成1024μg/mL储备液，过滤除菌，现配现用；

硫酸头孢喹肟：取原料，用无菌水稀释定容，配成1024μg/mL储备液，过滤除菌，现配现用；

盐酸林可霉素：取原料，用无菌水稀释定容，配成1024μg/mL储备液，过滤除菌，现配现用；

复方阿莫西林，阿莫西林0.2g+舒巴坦钠0.05g+泼尼松龙0.01g取原料，用无菌水稀释定容，按照阿莫西林计算配成1024μg/mL储备液，过滤除菌，现配现用；

头孢噻呋钠，取原料，直接用无菌水稀释配制，配成1024μg/mL储备液，过滤除菌，现配现用。

1.2实验方法

1.2.1增菌培养

大肠杆菌参照GB/T4789.3-2010标准，分别取编号为467、2131、4703、979、4401、G416、G646、G2106的奶样1ml于肉汤中，营养肉汤，37℃培养16-18h；编号为1-8号菌。

金黄色葡萄球菌参照GB/T4789.10-2010标准，分别取编号为467、2131、4703、979、4401、G416、G646、G2106的奶样1ml于肉汤中，7.5％NaCl肉汤，37℃培养培养18-24h；编号为9-16号菌。

链球菌参照GB/T4789.11-2003标准，葡萄糖肉浸液肉汤，37℃培养24-48h；编号为17-24号菌。

1.2.2分离鉴定

用接种环挑取上述对应的菌液，划线于下列培养基中，培养一定时间后，观察菌落形态，对可疑菌种进行镜检，然后进行生化鉴定，最后确定菌株种类。

1.2.2.1大肠杆菌分离分别取编号1-8号菌划线于伊红美蓝培养基上，37℃培养18-20h。挑取可疑菌落进行镜检和生化鉴定。

1.2.2.2金黄色葡萄球菌分离分别取编号9-16号菌划线于BP培养基上，37℃培养18-24h。挑取可疑菌落进行镜检和生化鉴定。

1.2.2.3链球菌分离分别取编号17-24号菌划线于血琼脂培养基上，37℃培养24-48h。挑取可疑菌落进行镜检和生化鉴定。

1.2.3药敏试验

对分离纯化得到的致病菌分别进行药敏试验，试验参照微量倍比稀释法进行。

1.3判定标准

1.3.1大肠杆菌判定特征

可疑菌落为黑色、带金属光泽；革兰氏染色阴性，杆状。

1.3.2金黄色葡萄球菌判定特征

可疑菌落为灰色到黑色、周围有一混浊带、外层有一透明圈；革兰氏染色阳性，葡萄串状的原形或卵圆形球菌。

1.3.3链球菌判定特征

可疑菌落为圆形、微凸、表面光滑、湿润、边缘整齐、半透明细小菌落；革兰氏染色阳性，短链、长链或成对排列的圆形或卵圆形球菌

2实验结果

2.1菌株分离鉴定结果见表1。

表1菌株分离鉴定结果

注明：“-”为不长菌，“+”为长菌。

8个临床奶样经过分离纯化，染色镜检和生化鉴定，共分离出11株致病菌，大肠杆菌3株，金黄色葡萄球菌4株，链球菌3株。其中从467号分离出链球菌，2131号分离出大肠杆菌，4703和919号同时分离出金黄色葡萄球菌和链球菌，4401号分离出金黄色葡萄球菌，G646和G2106号同时分离出大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，G416暂时没有分离出致病菌。

2.2药敏试验结果见表2。

表2药敏试验结果

从药敏试验结果可以表明，分离得到的大肠杆菌对硫酸头孢喹肟最敏感，抑菌浓度最低，浓度为0.03125～0.0625ug/ml，其次为头孢噻呋钠；复方氨苄西林和复方阿莫西林对分离得到的金黄色葡萄球菌同样敏感，抑菌浓度为0.25～1ug/ml，其次是硫酸头孢喹肟；链球菌对硫酸头孢喹肟较其他药物敏感，最小抑菌浓度仅为0.125～0.250ug/ml，其次是复方阿莫西林。

复方氨苄西林和复方阿莫西林2个复方同样对革兰氏阳性菌敏感，如金黄色葡萄球菌和链球菌，对革兰氏阴性菌敏感性较差，而复方阿莫西林的药敏效果优于复方氨苄西林。硫酸头孢喹肟和头孢噻呋钠主要针对革兰氏阴性菌，对革兰氏阳性菌的最小抑菌浓度比革兰氏阴性菌的高，两者对大肠杆菌的抑菌浓度远低于其他常用的抗生素，硫酸头孢喹肟对3中致病菌的抑菌效果明显好于头孢噻呋钠。盐酸林可霉素对分离得到的致病菌的抑菌浓度则高于其他药物。

3讨论

奶牛乳房炎是乳腺受到物理、化学、微生物等刺激所发生的一种炎症变化，是一种多因素疾病。除了易感牛、病原微生物与环境3者之间相互影响外，其复杂性还表现在病原的多样性，由多种非特定的病原微生物引起，如细菌、霉形体、真菌、病毒等。较常见的有23种，其中细菌14种，霉形体2种，真菌、病毒7种。内蒙古大黑河奶牛场隐性乳房炎致病菌的总检出率为92.31％，其中主要病原菌为金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌，分别占总检出率的41.66％、20.83％和16.67％(双金等，2001)。深圳地区奶牛临床型乳房炎病原菌的检出率为82.7％(陈坤永等，1999)，其中链球菌占49％；葡萄球菌占18.7％；大肠埃希氏菌等占16.6％。乳房炎的发病多为混合感染，局报道，多种致病菌合并感染的案例占了乳房炎发病率60％以上的比例。致病菌分离鉴定结果可见，8个奶样中有3个奶样是单独感染，4个奶样是混合感染，与资料报道的奶牛乳房炎临床发病的致病规律一致。个别奶样没有分离得到致病菌有可能是乳房炎致病因为并非致病菌所致，或者是奶样在保存过程中不当而造成的。

从药物性质可以看出，复方氨苄西林和复方阿莫西林是主要针对革兰氏阳性菌的治疗，头孢类的抗生素是针对革兰氏阳性菌的治疗，药敏试验结果符合药物本身的性质。硫酸头孢喹肟作为唯一一个动物专用的第四代头孢，其抑菌效果保留了对革兰氏阴性菌的效果外，同时大大提高了对革兰氏阳性菌的抑菌效果，其对金黄色葡萄球菌和链球菌的抑菌浓度均低于头孢噻呋钠，头孢噻呋钠对链球菌的抑菌浓度是硫酸头孢喹肟的128倍。在受试药物中，硫酸头孢喹肟对大肠杆菌和链球菌的最小抑菌浓度最低，对金黄色葡萄球菌的抑菌浓度比复方氨苄西林和复方阿莫西林高一个浓度级，综合抑菌效果是最好的。

实施例9安全性评价试验

为了客观地、科学地评价硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)在奶牛乳腺炎临床上应用的安全性，本试验以皮肤刺激反应和阴道黏膜刺激反应为指标，分别进行家兔皮肤刺激性试验和阴道黏膜刺激性试验，对其进行临床前安全性评价，预测临床用药的安全性，为进一步的临床试验提供参考。

1材料与方法

1.1供试药品

实施例1制备的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)，规格：8.0g︰75mg(以头孢喹肟计)。

阳性对照药：2,4-二硝基氯苯，规格：25g，批号20110726，由天津市光复精细化工研究所提供。

阴性对照药：0.9％氯化钠注射液，规格：500mL︰4.5g，批号A10082202，由贵州天地药业有限责任公司生产。

1.2试验动物

新西兰兔，普通级，体重2kg左右，雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供[SCXK(粤)2008-0002]。动物购回后环境适应饲养3天，采用自然光照，试验期间饲喂全价兔料，饮水充足、不受限制，室温控制在26℃，相对湿度为40％～70％。

1.3试验方法

1.3.1皮肤刺激性试验

将8只家兔随机分成完整皮肤组(Ⅰ组)及破损皮肤组(Ⅱ组)，每组4只，雌雄各半。Ⅰ组试验开始前24h将动物脊椎两侧对称部位用电动剃毛刀各睇出面积为3cm×3cm的无毛区，皮肤脱毛后检查去毛区是否因去毛而受伤，受伤的皮肤不宜作完好皮肤的刺激性试验。Ⅱ组破损皮肤的制作采用一次性消毒7号针头将去毛消毒皮肤按“#”字形(间隔1cm)划破皮肤表皮层，以渗血为度，左右两侧皮肤的破损程度应基本一致。左侧为硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)用药区，取0.5mL直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，然后用二层纱布(2.5cm×2.5cm)和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定，右侧为生理盐水对照区，贴敷时间至少4小时，贴敷结束后，除去受试物并用温水或无刺激性溶剂清洁给药部位，连续给药3d。在每次去除药物后1小时和再次贴敷前，观察、记录红斑及水肿、涂敷部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄情况及其发生时间与消退时间，并参照皮肤刺激性反应评分标准进行评分(表1)，采用同体左右侧自身对比。末次涂敷后，在去除药物后30～60分钟，24、48和72小时肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。对评分较高或可疑的受试动物处死1只，进行病理组织学检查，并根据皮肤刺激性强度评价标准和病理学检查判定结果。多次给药皮肤刺激性试验，首先计算每一观察时间点各组积分均值，然后计算观察期限内每天每只动物积分均值，按表2进行刺激强度评价。

1.3.2阴道黏膜刺激性试验

雌性新西兰兔8只，分为染毒组和对照组，每组4只。染毒组阴道灌注硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)2mL，对照组动物用生理盐水做同样处理。染毒后24h，采用空气栓塞法安乐处死动物，剖腹取出完整的阴道，纵向剖开，肉眼观察是否有充血、水肿等表现，有充血、水肿等表现的阴道放入10％福尔马林溶液中固定24h以上，选取阴道的两端和中央3个部位的组织制片，HE染色后，进行组织病理学检查。按黏膜刺激反应评分标准进行评分(表3)，将每一个观察时间每一动物的黏膜刺激反应分值相加得总积分，将一组的积分总和除以动物数，即得最后分值。按黏膜刺激强度分级标准进行刺激强度分级(表4)判断其刺激程度。

表3皮肤刺激反应评分标准

表4皮肤刺激强度评价标准

表5阴道黏膜刺激反应评分标准

表6阴道黏膜刺激强度评价标准

2结果

2.1皮肤刺激性试验

新西兰兔3d给药期及给药结束后3d内，每日观察皮肤给药部位。结果显示，完整皮肤组和破损皮肤组的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)给药部位皮肤(左侧)和生理盐水对照部位(右侧)均未发现有红斑和水肿形成，按规定评分标准为0分；亦未发现色素沉着，药源性出血及皮肤粗糙等异常反应。受试动物的活动、采食、饮水、排粪、排尿、体重及外观等亦未出现异常。按照国家有关皮肤刺激性试验皮肤反应评分及反应强度评价标准，硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)对新西兰兔完整皮肤和破损皮肤，均无刺激性反应，结果见表7。

表7硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)对新西兰兔皮肤刺激性的评价

2.2阴道黏膜刺激性试验

用药期间，染毒组和对照组家兔全身状况均未见异常，阴道口也未见明显充血、红肿及异常分泌物流出。肉眼观察取出的阴道组织，各组均未见阴道黏膜充血、水肿及出血点，阴道黏膜刺激平均分为0，按照国家有关阴道黏膜刺激反应评分及反应强度评价标准，硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)对家兔一次性阴道黏膜刺激强度为无刺激性。结果见表8。组织病理学检查见图1和图2。

表8硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)对新西兰兔阴道黏膜肉眼观察刺激反应强度

取实施例2至实施例7制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)按照上述试验方法进行试验，结果与实施例1制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)的试验效果相同或相近，没有显著差异(P＞0.05)。

3讨论

化学药物刺激性、过敏性和溶血性是兽药临床前安全评价的重要组成部分。刺激性是指非口服给药制剂给药后对给药部位产生的可逆性炎症反应，刺激性试验是观察动物的血管、肌肉、皮肤、粘膜等部位接触受试物后是否引起红肿、充血、渗出、变性或坏死等局部反应^[4]。本试验以临床推荐剂量进行皮肤刺激性试验和阴道黏膜刺激性试验，结果表明，硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)对皮肤无刺激性，对阴道黏膜无刺激性。

实施例10治疗实例

本试验以临床症状、用药前后致病菌的分离情况和体细胞数的变化为主要指标，考察硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)对奶牛临床型乳房炎的治疗效果，为以后临床用药提供用药依据。

1材料与方法

1.1试验药物

1.1.1受试药物实施例1制备的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)，规格：8.0g︰75mg(以头孢喹肟计)。

1.1.2对照药物氨苄西林钠-氯唑西林钠乳房注入剂(泌乳期)，批号20110602，含量规格5.0g︰氨苄西林0.075g+氯唑西林0.2g)，由佛山市南海东方澳龙制药有限公司提供。

1.2试验动物选择

试验选取临床上疑似病例经确诊后选为试验奶牛(每头奶牛至少有1个乳区出现典型临床型乳房炎症状)共59头，随机分成3组。按常规饲养管理，所用饲喂奶牛料中未添加任何抗菌药物。临床型乳房炎奶牛的分组及处理见表9。

表9临床型乳房炎奶牛的分组及处理

1.3试验方法

首先挑选临床型乳房炎患牛，可见乳房的红、肿、热、痛症状明显，体温升高，乳汁变化明显。查阅牛场兽医对奶牛发病的记录，包括时间、病程、症状等。确定所选动物为疑似患乳房炎的奶牛。初步记录和统计患乳房炎奶牛头数及乳区数。

1.3.1临床症状观察

主要观察奶牛是否出现乳区肿胀、发热，坚硬呈捏粉样。早期奶汁为水样，可见细小颗粒或呈絮状物。经过几天病程后乳汁逐渐变为棕黄色液体。本试验综合考察患病奶牛的整体状况与感染乳区的局部症状来观察，主要观察指标见表2。

1.3.2感染乳区病原菌检测

给药前及最后一次给药后第7天，分别采集各治疗乳区的奶样进行细菌学检查。

采样方法：先用清洁的水冲洗奶牛乳房，用干净毛巾擦净乳房，用0.1％的新洁尔灭或者75％酒精对乳头及周围进行消毒处理，待酒精挥发后，收集第3把后的奶。采集的奶样挤入灭菌试管中，贴好标签，保存在放有冰块的泡沫箱中，24h内送实验室进行细菌分离检测。

细菌分离培养：将各乳样接种至选择性培养基分离各种病原菌。分离菌株经过纯化培养后，主要依据菌落形态、革兰氏染色特性、生长特性、生化特性做出鉴定。主要分离菌包括金黄色葡萄球菌、链球菌(无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌、化脓链球菌等)、大肠杆菌等。

表10临床乳房炎症状观察指标

1.3.3感染乳区牛奶体细胞计数(SCC)测定(CMT和体细胞直接计数法)

用药前和最后一次给药后第7日，在采集各治疗乳区奶样进行细菌学检查的同时，也采集奶样测定SCC。采样时先挤掉前3把奶，随后挤取约30mL作为检测奶样(置于50mL离心管)，由广州市奶牛研究所检测中心进行SCC的检测。

1.4治疗效果判定

最后一次给药7日后，综合各方面检查结果，按下列标准判定药物疗效。

1.4.1治愈率治疗后患病牛精神和食欲正常，乳中的凝块、絮状物消失，乳色和产奶量恢复正常，乳区的红、肿、热、痛消失，无复发现象。乳汁SCC＜50万/mL；主要病原菌完全消除。根据治愈数计算治愈率。

治愈率＝(组内治愈乳区数/组内用药乳区数)×100％

1.4.2有效率治疗后患病牛精神和食欲基本恢复正常，乳中的凝块、絮状物消失，乳色和产奶量基本恢复正常，乳区的红、肿、热、痛消失。乳汁SCC为50～100万个/mL；主要病原菌大部分消除(70％以上)。根据治疗有效数量计算有效率。

有效率＝(组内有效乳区数/组内用药乳区数)×100％

1.4.3无效率治疗后病牛临床症状如乳区的红、肿、热、痛没有减轻或消失，甚至出现病情继续恶化现象，均确定为无效。乳汁SCC＞100万个/mL；主要病原菌未见消除。根据治疗无效数量计算无效率。

无效率＝(组内无效乳区数/组内用药乳区数)×100％

1.5数据统计与分析

使用SPSS13.0软件统计分析组内用药后乳汁体细胞数(SCC)的差异显著性。使用卡方(X²)检验对各试验组的无效率、治愈率和有效率等进行差异显著性比较。

2结果

2.1奶牛感染乳区用药前后病原菌检测结果

用药前，59个病例(60个感染乳区)共分离出79株细菌，主要为大肠杆菌(34株，43.0％)、葡萄球菌(26株，32.9％)和链球菌(19株，24.1％)。单一感染乳区占76.7％(46/60)，混合感染乳区占23.3％(14/60)。

试验期结束时，阴性对照组的20个感染乳区的大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌的分离率与试验前变化不大。

最后一次给药7日后，硫酸头孢喹肟试验组和氨苄西林-氯唑西林对照组的39个病例(40个治疗乳区)中的35个病例(37个治疗乳区)未分离出主要病原菌，4个病例(4个治疗乳区)分离出4株菌，主要为大肠杆菌(1株，25％)、葡萄球菌(2株，50％)和链球菌(1株，25％)。

各组病牛感染乳区用药前后病原菌的分离鉴定结果见表11。

表11各组乳房炎病牛感染乳区用药前后病原菌的分离鉴定结果

注：1)链球菌主要包括无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌、牛链球菌等，其中无乳链球菌为优势菌；2)葡萄球菌包括凝固酶阳性葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌，其中，凝固酶阴性葡萄球菌为优势菌。

从表3可以看出，最后一次给药7日后，硫酸头孢喹肟乳房注入剂试验组乳区残存1株病原菌；氨苄西林钠-氯唑西林钠乳房注入剂对照组仍残存3株病原菌。

2.2奶牛感染乳区治疗前后乳汁体细胞计数检测结果

最后一次给药后第7日，采集各治疗乳区奶样进行体细胞计数(SCC)，结果见表12。

表12病牛感染乳区用药前后乳汁体细胞数

注：*有不同的字母，组间有显著性差异(P<0.05)；有相同的字母，组间没有显著性差异(P>0.05)

从上述结果中可见，用药前，所有感染乳区的乳汁体细胞数均>100万个/mL，用CMT法检测时，均在++以上。给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂和氨苄西林钠-氯唑西林钠乳房注入剂治疗后，所有治疗乳区的SCC均显著下降，治愈乳区的SCC均<50万个/mL；硫酸头孢喹肟试验组组与氨苄西林钠-氯唑西林钠对对照组之间的SCC无显著差异(P>0.05)，但与阴性对照组比较，SCC均有显著性下降(P<0.05)。

2.3硫酸头孢喹肟乳房注入剂对奶牛临床乳房炎的治疗效果

最后一次给药后第7日，综合各方面指标以及检测结果，判定受试药物硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)和对照药物氨苄西林钠-氯唑西林钠乳房注入剂的疗效，统计其有效率和治愈率，结果见表13。

表13受试药物和对照药物对奶牛临床型乳房炎的有效率和治愈率

注：*有不同的字母，组间有显著性差异(P<0.05)；有相同的字母，组间没有显著性差异(P>0.05)

表13显示，硫酸头孢喹肟乳房注入剂的有效率和治愈率分别为90％和85％。氨苄西林钠-氯唑西林钠对照组的有效率为85％，治愈率为80％。比较各组间的有效率和治愈率，硫酸头孢喹肟试验组和氨苄西林钠-氯唑西林钠对照组的有效率和治愈率均显著高于阴性对照组(P<0.05)；硫酸头孢喹肟试验组和氨苄西林钠-氯唑西林钠对照组的有效率、无效率和治愈率，两组间差异均不显著(P>0.05)。

取实施例2至实施例7制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)按照上述试验方法进行试验，结果与实施例1制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)的试验效果相同或相近，没有显著差异(P＞0.05)。

3结论

临床疗效试验结果表明，受试药物硫酸头孢喹肟乳房注入剂和对照药物氨苄西林钠-氯唑西林钠乳房注入剂对治疗乳区的病原菌均有清除作用，改善奶牛乳房炎临床症状，降低乳汁的体细胞数，提高牛奶质量，对奶牛临床型乳房炎均有较好的治疗效果，治愈率达80％～85％。硫酸头孢喹肟乳房注入剂和对照药物氨苄西林西林钠-氯唑西林钠乳房注入剂，对奶牛临床型乳房炎的治疗效果相当，两者没有统计学意义的差异(P>0.05)。硫酸头孢喹肟乳房注入剂可用于治疗泌乳期由大肠杆菌、葡萄球菌及链球菌等引起的奶牛的临床型乳房炎。

实施例11治疗实例

1、辽宁客户

情况：原本用复方阿莫西林乳房注入剂和复方氨苄西林乳房注入剂治疗乳房炎，效果都不是很理想，从2013年9月份开始使用本发明提供的制剂，对很多乳房炎发病后使用，治疗效果比较理想，一般连用3天左右就可以，没有出现过敏情况，弃奶期很短，1天就已经检测不出有奶抗。

2、宁夏客户1

产品：澳乃康

情况：原试用其他国内厂家的产品，作为初次试用，治疗效果明显优于原试用产品，特别是对红肿热痛比较明显的乳房炎，反应消肿效果比较好。

3、宁夏客户2

情况：用于治疗场内顽固性乳房炎，曾用过很多药物都治不好或者治愈后反复发作的病例，试用本制剂都治好了，而且没有再复发，效果很受肯定。

实施例12对比试验

广东某牛场(本发明提供的硫酸头孢喹肟注入剂产品与同类产品做临床对比试验)

1材料与方法

1.1试验药物

本发明实施例1头孢喹肟乳房注入剂(LC)，规格：8g：75mg(以头孢喹肟计)，由佛山市南海东方澳龙制药有限公司研制。

1.2对照药物

药物A(LC)，规格：8g：75mg(以头孢喹肟计)，由某公司研制。

1.3动物分组与处理

选择临床乳房炎的病例，随机分成试验组和对照组。试验组33个乳区，挤奶后每个乳区注入一支头孢喹肟乳房注入剂(LC)，没12小时注入一次，连用3天；对照组27个乳区，挤奶后每个乳区注入一支药物A，每12小时注入一次，连用3天。各组按正常泌乳期程序进行饲养管理。

不设空白对照组。

1.4观察指标

1.4.1泌乳期间奶牛乳房炎的判定标准红、肿、热、痛等一系列炎症反应，乳汁稀薄、水状、啤酒状、絮片、脓块、血状、米粒状脓块、触诊软硬不一，体温升高，食欲减退，泌乳量下降。乳汁pH值的变化：正常奶为6.5-6.7，而发生乳腺炎的则接近7.4左右。

1.4.2乳房炎治愈的判定标准用药后乳房的红肿热痛消失，乳汁恢复正常，体温、食欲和泌乳量恢复正常，一周内无复发，判为治愈。

2结果

试验组用药后有3个乳区治疗无效，4个乳区治疗后好转，其余全部治愈，症状消失，治愈率为78.8％，有效率为90％；对照组有6个乳区无效，4个乳区治疗后好转，其余全部治愈，治愈率为63.0％，有效率为77.8％。详见表14。

表14头孢喹肟乳房注入剂(LC)与药物A对奶牛泌乳期乳房炎的对比效果

分析讨论：

头孢喹肟乳房注入剂(LC)和药物A的临床实验结果显示，头孢喹肟乳房注入剂(LC)对奶牛泌乳期乳房炎的治愈率和有效率均高于药物A，且差异显著，说明药物浓度相同的情况下，头孢喹肟乳房注入剂(LC)的治疗效果优于药物A。

取实施例2至实施例7制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)按照上述试验方法进行试验，结果与实施例1制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)的试验效果相同或相近，没有显著差异(P＞0.05)。

实施例13稳定性试验

(1)光照试验

按照《中华人民共和国兽药典》一部(2005版)附录中光照试验的有关规定，将本发明实施例1头孢喹肟乳房注入剂置稳定性试验箱中，调节照度至符合要求。结果见表15。

表15光照试验结果

取实施例2至实施例7制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)按照上述试验方法进行试验，结果与实施例1制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)的试验效果相同或相近，没有显著差异(P＞0.05)。

(2)加速试验

按照《中华人民共和国兽药典》一部(2005版)附录中加速试验的有关规定，将本发明实施例1头孢喹肟乳房注入剂置稳定性考察箱中，调节温度、湿度至符合要求。结果见表16。

表16加速试验

取实施例2至实施例7制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)按照上述试验方法进行试验，结果与实施例1制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)的试验效果相同或相近，没有显著差异(P＞0.05)。

(3)长期试验

条件：温度25±2℃，时间0～24个月。

按照《中华人民共和国兽药典》一部(2005版)附录中长期试验的有关规定，将本发明实施例1头孢喹肟乳房注入剂泌乳期样品置留样观察室中。结果见表17。

表17长期试验

取实施例2至实施例7制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)按照上述试验方法进行试验，结果与实施例1制备的奶牛乳房内给予硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)的试验效果相同或相近，没有显著差异(P＞0.05)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于，包括头孢喹肟或其盐以及辅料；

所述辅料包括稳定剂、助悬剂、增效剂、抗氧化剂、溶剂中的一种或两者以上的混合物与助流剂的组合。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述辅料由助流剂、稳定剂、抗氧化剂和溶剂组成；或

所述辅料由助流剂、稳定剂、增效剂、抗氧化剂和溶剂组成；或

所述辅料由助流剂、助悬剂、抗氧化剂和溶剂组成；或

所述辅料由助流剂、助悬剂、增效剂、抗氧化剂和溶剂组成；或

所述辅料由助流剂、稳定剂、助悬剂、增效剂、抗氧化剂和溶剂组成。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述头孢喹肟或其盐与所述辅料的质量比为(0.045～0.095)：(5～10)。

4.根据权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，所述助流剂为精制豚脂；所述稳定剂为硬脂酸；所述助悬剂为硬脂醇、所述增效剂为肉豆蔻异丙酯；所述抗氧化剂为没食子酸丙脂；所述溶剂为注射用大豆油、药用花生油或药用棉籽油中的一种或两者以上的混合物。

5.根据权利要求1至4任一项所述的组合物，其特征在于，所述辅料由如下组分组成：

6.根据权利要求1至5任一项所述的组合物，其特征在于，所述辅料由如下组分组成：

7.根据权利要求1至6任一项所述的组合物，其特征在于，所述辅料由如下组分组成：

或

或

或

或

8.根据权利要求1至7任一项所述的组合物用于制备治疗奶牛乳房炎药物的应用。

9.一种奶牛乳房炎制剂，其特征在于，包括如权利要求1～7任一项所述的组合物。

10.根据权利要求9所述的奶牛乳房炎制剂，其特征在于，其剂型为注入剂。