CN103479574A - 一种用于防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及新型兽药，特别是涉及一种用于防治奶牛干奶期、产后隐性和亚临床型乳房炎的乳房注入剂及其制备方法。所述注入剂含有以下组分：头孢洛宁、二硬脂酸铝及液体石蜡。与现有技术相比，本发明涉及的乳房注入剂具有长效、稳定、广谱、效果显著、无毒副作用、价格低廉、不影响正常妊娠和牛奶质量安全的优点。

Description

一种用于防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及新型兽药，特别是涉及一种用于防治奶牛干奶期、产后隐性和亚临床型乳房炎的乳房注入剂。

背景技术

乳房炎是奶牛的一种常见疾病，全世界约有50%的奶牛患有各种类型的乳腺炎。乳房炎是奶牛疾病中花费最大的疾病之一。给奶牛养殖行业带来巨大的经济损失，美国每年因奶牛乳房炎造成的直接经济损失达20亿美元，我国每年因隐性乳房炎造成的损失约1.35亿人民币。

奶牛乳房炎分为临床型乳房炎(也称显型乳房炎)和隐性乳房炎两种。乳房炎主要是由多种非特定的病原微生物引起的，有细菌、真菌、病毒等。 其中金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和各种革兰氏阴性菌是5种最常见的病原类型。临床型乳房炎具有临床表现，易于发现，便于治疗。隐性乳房炎一般没有临床表现，乳房和乳汁从外观上常无明显变化，很难被发现， 常常不被人们所重视。隐性乳房炎发病率较高，很容易转变成急性或慢性乳房炎，乳房炎的经济损失70%是由隐性乳房炎造成的。

隐性乳房炎的发病原因主要有两个：一是微生物感染，二是乳腺组织的炎性损伤，如长期泌乳、微生物毒素、物理化学刺激等。因此，预防奶牛隐性乳房炎的关键一是要防止干奶期奶牛感染，二是要防止乳腺组织的炎性反应。干奶期对牛进行干奶治疗，因牛已停止产奶，乳腺组织处于修复阶段，即利于治疗效果，又避免了对牛奶品质的影响。

目前国内用于防治细菌性奶牛乳房炎的药物均为单一抗生素类药物。如青霉素、链霉素、阿莫西林等，这些药物作用时间短，只对革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌有效，不具有广谱性，治疗效果不理想。国外虽然已有多种复方乳房注入剂，如英国NORBROOK公司开发的氨苄西林-苄星氯唑西林乳房灌入剂、美国辉瑞公司研发的复方阿莫西林乳房灌注剂等，这些产品仅对特异性的细菌性感染有一定的预防作用，且大多价格昂贵。

发明内容

本发明目的之一在于提供一种长效、稳定、广谱并且价格较为低廉的，用于预防干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂。

本发明目的之二在于提供上述注入剂的一种制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

首先提供一种头孢洛宁在治疗干奶期奶牛乳房炎的药物中的应用。

所述的治疗干奶期奶牛乳房炎是通过对干奶期奶牛乳房组织的修复实现的。

所述的干奶期奶牛乳房组织的修复是指减少产后牛奶体细胞数。

本发明提供了一种用于防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂，其中含有以下组分：头孢洛宁、二硬脂酸铝及液体石蜡。

优选地，每3g配方量的上述乳房注入剂中含有：头孢洛宁： 150mg-300mg；二硬脂酸铝：15mg-90mg；液体石蜡：2.610g-2.835g。最优为，每3g配方量的上述注入剂中含有：头孢洛宁： 250mg；二硬脂酸铝：60mg；液体石蜡：2.690g。

作为本发明的一种改进方式，根据所含烷烃碳链长度分类，所述注入剂中使用的液体石蜡型号为5#、15#、26#或36#。其中，最优为5#。

基质中液体石蜡根据碳链长度分为5#、15#、26#、36#，构成成分中碳链越长，其运动粘度越大，所得混悬液沉降体积比（是指沉降物的容积与沉降前混悬液的容积之比）越大，通针性越差（即每分钟抽取的混悬液体积越小）。 

本发明还提供了一种上述注入剂的制备方法，具体包括以下步骤：

（1）取配方量的二硬脂酸铝倒入分散乳化机中，加入少于配方量的液体石蜡，启动乳化机；

（2）待（1）中乳剂混合均匀后，加入配方量的头孢洛宁，并添加液体石蜡至配方量，循环研磨；

（3）研磨至粒径均小于30 μm，粒径>15 μm的颗粒不超过10%时，停止研磨，即得所述防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂；

（4）灌装，无菌密封保存。

 用法与用量：本发明需要在奶牛最后一次手工挤净牛奶后（即干奶时）使用。具体使用方式如下：用75%酒精或碘酒严格消毒奶牛乳头末端，干燥后，用专用注射器和灌注管向乳腺内灌注药物，每个乳室灌注3g，给药后用金霉素软膏（或石蜡）封闭乳头口。

适应范围：在奶牛干乳期防治革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌引起的奶牛乳房炎。

使用注意事项：

（1）专用于干乳期防治奶牛乳房炎，每个乳室灌注3g，产犊前54日使用，弃奶期为产犊后96小时。

（2）灌注多个乳区时，必须对奶牛每个乳头严格消毒，处理人员亦必须严格执行卫生程序。

按照本发明所述的乳房注入剂，对在干奶期预防和治疗奶牛乳房炎、修复乳房组织具有显著效果，使产后奶牛乳汁中体细胞数显著降低、临床乳房炎发生率明显降低。具有长效、稳定、广谱、效果显著、无毒副作用、价格低廉、不影响正常妊娠和牛奶质量安全的优点。

本发明具有显著的抑菌效果。抑菌试验证明，对导致奶牛乳房炎的多种微生物，包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有强大的抗菌作用，其中对大肠杆菌的MIC≤0.0625μg/mL，对金黄色葡萄球菌、化脓链球菌和牛无乳链球菌的MIC≤0. 5μg/mL。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明，本发明采用的试剂、设备和方法为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。

实施例1

    按3g配方量计算，取二硬脂酸铝15mg、液体石蜡2.835g、头孢洛宁150mg，按以下步骤制作注入剂：

（1）将二硬脂酸铝倒入分散乳化机（德国IKA公司 magic LAB型）中，加入少于配方量的液体石蜡，启动乳化机；

（2）待（1）中乳剂混合均匀后，加入头孢洛宁，并添加液体石蜡至配方量，循环研磨；

（3）检查颗粒细度，符合要求（粒径均小于30 μm，粒径>15 μm的颗粒不超过10%），停止研磨，即得所述防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂，按每支3g灌装，密封保存，制得注入剂成品a。

实施例2

按3g配方量计算，取二硬脂酸铝30mg、液体石蜡2.770g、头孢洛宁200mg，按与实施例1相同的步骤制得注入剂成品b。

实施例3

按3g配方量计算，取二硬脂酸铝60mg、液体石蜡2.690g、头孢洛宁250mg，按与实施例1相同的步骤制得注入剂成品c。

实施例4

按3g配方量计算，取二硬脂酸铝60mg、液体石蜡2.610g、头孢洛宁300mg，按与实施例1相同的步骤制得注入剂成品d。

实施例5

体外抑菌试验

1．试验菌株  

大肠杆菌 （ATCC25922，833）、金黄色葡萄球菌（ATCC29213），化脓链球菌CVCC593，牛无乳链球菌（CVCC586，76LF）购自中国兽医药品监察所。

2.  菌液制备

将甘油或冻干保存的菌种复苏后，在MH琼脂平板（如营养要求较高的链球菌属可加入5-10%的脱纤维羊血）上挑取单个菌落接种于2mLMH肉汤管（营养要求较高的细菌如链球菌属可加入5-10%的血清）中，37℃振荡培养12h，用生理盐水稀释菌液，使稀释菌液达到0.5麦氏比浊管浊度，再用MH肉汤按1：100稀释菌液至含菌量约为1×10⁶CFU/ mL。

3.  最小抑菌浓度（MIC）的测定

（1）在96孔板其中中六行的每个孔加入空白肉汤100μl（第一列除外）。

（2）根据设计的试验浓度，在每块96微孔板上的第一列加入197.5 μl空白肉汤和2.5 μl药液，充分上下吹打五次以上，将混合后的、第一列各孔中的溶液吸100 μl至第二列相应孔中，充分混匀后吸100 μl至第三列相应孔，重复前述操作，直到第十二列，孔中溶液混匀后吸出100 μl弃去，使每个药物每列上的孔对应的浓度分别为8、4、2、1、0.5、0.25，0.125、0.0625、0.03125、0.015、0.008、0.004μg/ml。

（3）96孔板的每行对应一种细菌，在各行各孔中加100 μl稀释好的相应菌液， 37 ℃培养24 h后肉眼观察结果，以明显不浑浊且含药液最少的微孔内所含药物的浓度定位为最小抑菌浓度(M IC) 。

试验结果（见表1），本发明对革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌、链球菌，革兰氏阴性菌如大肠杆菌均表现出良好的抗菌活性，尤其是对金黄色葡萄球菌（MIC为0.125μg/mL）和大肠杆菌（MIC≤0.0625μg/mL）的抗菌活性极好。

表1不同浓度的干奶牛乳房注入剂对6株细菌的体外最小抑菌浓度

 注: + 有菌生长, - 无菌生长

  试验结果显示成品c体外抑菌效果最优，为本发明的最优方案。

实施例6

成品药效试验

    本实施例以实施例3中成品c作为试验样品。

1、抗生素残留检测试验

抗生素残留检测按TTC法操作程序进行。TTC法的原理是，牛奶中有抗生素存在时，接种了嗜热链球菌(Streptococcusther-mophilus)后，细菌的生长被抑制，牛奶不能凝固；若牛奶中无抗生素存在，则细菌增殖，使得牛奶凝固。

具体操作方法如下：奶牛产犊前54日，用专用注射器和灌注管向乳腺内灌注药物，每个乳室灌注3g，给药后用金霉素软膏（或石蜡）封闭乳头口。分别在奶牛产犊后24，36，48，72，96h，120h采集奶样，各份奶样吸取10 mL放到已灭菌的试管中，然后将试管放在电炉上水浴加热，达到100 ℃后继续水浴6 min后取出试管放在冷水中冷却至42 ℃，向每1个试管中加入嗜热链球菌菌种2.5 mL，混匀后放在42 ℃的烘箱中2.5 h，取出观察并记录。

试验结果（见表2），产犊后72h检测的奶样中有50%无残留，产犊后96h以后检测的奶样均无药物残留。因此在产犊后96h后牛奶中无药物残留，可以继续用奶，即弃奶期为产犊后96h。

表2药物残留检测结果

2、药物疗效试验

由于牛奶中的体细胞数反应乳房的组织状况，因此此处通过测定牛奶中体细胞数评价药效。具体原理如下：当乳房出现乳房炎时，牛奶中体细胞数相应增加，且体细胞数随炎症的严重性而提高。

具体方法如下：在广州、惠州、清远三地区5个奶牛场进行了试用验证，从奶牛场奶牛中随机抽取200头，分为对照组和试验组。产犊前54日，对试验组的奶牛乳房灌注所述的注入剂，对照组不作处理。在产犊后10天、15天、20天和25天每天第一次对对照组及试验组的牛奶挤奶，采集奶样5mL，测定其中体细胞数的变化（FIL-IDF148 电子体细胞自动测定仪由广州华农大食品科技有限公司提供）。

结果表明：试验组与对照组比较，前者牛奶中的体细胞数比后者低26.5%，临床乳房炎发生率低71%。说明所述奶牛乳房注入剂可以显著减少牛奶体细胞数，对降低产后奶牛乳房炎发生率有明显的作用（见表3）。

表3体细胞和临床乳房炎发生率检查结果

实施例6

成品稳定性试验

将上述成品a、b、c、d在室温下保存1个月、3个月、6个月、1年、1年以上，之后分别进行乳剂的含量、pH值、乳化效果稳定性测定。结果表明本发明的pH值和乳化效果在1年内保持稳定，无絮凝和沉淀物出现；高效液相色谱法测定本发明主要成分在一年内含量稳定，活性成分几乎无降解。

Claims (10)

1. 一种头孢洛宁在治疗干奶期奶牛乳房炎的药物中的应用。

2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的治疗干奶期奶牛乳房炎是通过对干奶期奶牛乳房组织的修复实现的。

3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的干奶期奶牛乳房组织的修复是指减少产后牛奶体细胞数。

4.  一种用于防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂，其特征在于含有以下组分：

    头孢洛宁；

    二硬脂酸铝；

    液体石蜡。

5.  如权利要求1所述的用于防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂，其特征在于每3g配方量中含有：

       头孢洛宁： 150mg-300mg；

       二硬脂酸铝：15mg-90mg；

       液体石蜡：2.610g-2.835g。

6.  如权利要求1所述的用于防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂，其特征在于每3g配方量中含有：

       头孢洛宁： 250mg；

       二硬脂酸铝：60mg；

液体石蜡：2.690g。

7.  如权利要求4-5中任一项所述的用于防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂，其特征在于所述液体石蜡型号为5#、15#、26#或36#。

8.  如权利要求7所述的用于防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂，其特征在于所述液体石蜡型号为5#。

9.  权利要求1所述的用于防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取配方量的二硬脂酸铝倒入分散乳化机中，加入少于配方量的液体石蜡，启动乳化机；

（2）待（1）中乳剂混合均匀后，加入配方量的头孢洛宁，并添加液体石蜡至配方量，循环研磨；

（3）研磨至粒径均小于30 μm，粒径>15 μm的颗粒不超过10%时，停止研磨，即得所述防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂；

（4）灌装，无菌密封保存。

10.  权利要求书6所述的用于防治干奶期奶牛乳房炎的乳房注入剂的制备方法，其特征在于灌装时以每支药品3g的规格灌装。