CN105076246A

CN105076246A - 一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用

Info

Publication number: CN105076246A
Application number: CN201510540235.4A
Authority: CN
Inventors: 邓文娟; 刘光荣
Original assignee: 无限极（中国）有限公司
Priority date: 2015-08-28
Filing date: 2015-08-28
Publication date: 2015-11-25
Also published as: JP2018520985A; WO2017036240A1; EP3281527B1; EP3281527A4; EP3281527A1; JP6626902B2; US20180116228A1; US10321689B2

Abstract

本发明提供了一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用，所述抗菌中药组合物由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。本发明通过中药间合理的配伍应用及协同作用，使得提取的组合物具有广谱抗菌的作用，适合作为天然防腐剂使用。实验表明，针对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和黑曲霉菌的每个菌单独来看，本发明配伍后的组合物的抑菌效果优于单味植物的抗菌效果，实现了1+1大于2的结果，体现了植物之间抗菌效果上的协同作用。此外，本发明提供的组合物具有气味小、颜色浅、温和、溶解性好、经济、用量小、稳定及适合工业化生产等特点。

Description

一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用

技术领域

[0001] 本发明涉及中药技术领域，特别涉及一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用。

背景技术

[0002] -般来说，抗菌的概念可包括灭菌、杀菌、抑菌、防霉和防腐等。抗菌剂或者说防腐剂，就是指可以阻止微生物生长的物质。在日常生活中，化妆品受到微生物污染易引起变质，一般情况下，在外观就能够反映出来。比如，霉菌和酵母菌经常在产品的包装边沿等地方出现霉点；受微生物污染的产品会出现混浊、沉淀、颜色变化、pH值改变、发泡、变味，如果是乳化体则可能出现破乳、成块等。在化妆品中添加防腐剂，其作用是保护产品，使之免受微生物污染。如果防腐剂添加的量不够，则可能出现微生物适应周围的生长环境，产生抗药性，从而导致防腐失效。

[0003] 目前，化妆品中常用的防腐剂有乙内酰脲（DMDMH)、卡松系列、布罗波尔、碘代丙炔基氨基甲酸丁酯（IPBC)、尼泊金酯类、三氯新等。然而，这些防腐剂均存在一定缺陷：如 DMDMH在使用过程中易释放甲醇存在安全隐患；卡松系列因其含氯，使用过程中会对某些肤质产生一定的刺激性；使用布罗波尔，易形成致癌物质亚硝胺；IPBC可能会导致使用者对碘的过量摄入；尼泊金酯类易在脂肪组织中产生累积，此外，对羟基苯甲酸类防腐剂在特定的测试系统中已经证实能显示某种模拟女性激素雌激素的能力，对人体安全和生理系统带来不良影响；三氯新已被证实会对环境产生负面影响。因此，市场上亟需出现一种低毒、高效、无污染的天然防腐剂。

[0004] 随着近年来在回归自然、享受绿色与健康的热潮冲击下，化妆品中加入纯天然的防腐剂已成为国内外提倡和开发的热点，从天然产物提取分离出抗菌性强而广、安全无毒的天然抗菌剂已成为今后开发的重要方向。

发明内容

[0005] 有鉴于此，本发明提供了一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用，本发明提供的抗菌中药组合物具有广谱抗菌作用，且天然、温和。

[0006] 本发明提供一种抗菌中药组合物，由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。

[0007] 优选地，以重量份计，所述原料包括60~80份的紫苏子、10~20份的广藿香和A 份的松萝，〇 <AS20。

[0008] 优选地，以重量份计，所述原料包括60份的紫苏子、20份的广藿香和20份的松萝。

[0009] 优选地，以重量份计，所述原料包括80份的紫苏子、10份的广藿香和10份的松萝。 [0010] 优选地，以重量份计，所述原料包括70份的紫苏子、15份的广藿香和15份的松萝。

[0011] 本发明还提供上述技术方案所述的抗菌中药组合物的制备方法，包括以下步骤：

[0012] 将紫苏子、广藿香和松萝混合后，采用乙醇渗漉法提取，得到抗菌中药组合物。

[0013] 优选地，在混合后进行提取前，还包括：

[0014] 采用脂肪酶进行酶解。

[0015] 进一步优选地，采用脂肪酶至酶活性为5U/g~10U/g，在40°C~60°C的温度下，酶解lh~2h。

[0016] 优选地，所述混合具体为：

[0017] 将紫苏子、广藿香和松萝混合，加水碾磨至60~200目，调节pH值为4~7。

[0018] 优选地，所述提取的时间为24h~30h;

[0019] 在提取后还包括：

[0020] 过滤，取滤液；

[0021] 将所述滤液依次进行浓缩、定容和陈化，得到抗菌中药组合物。

[0022] 与现有技术相比，本发明提供的抗菌中药组合物由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。本发明通过中药间合理的配伍应用及协同作用，使得提取的组合物具有广谱抗菌的作用，适合作为天然防腐剂使用。实验表明，针对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和黑曲霉菌的每个菌单独来看，本发明配伍后的组合物的抑菌效果优于单味植物的抗菌效果，实现了 1+1大于2的结果，体现了植物之间抗菌效果上的协同作用。

[0023] 本发明提供上述技术方案所述的抗菌中药组合物作为药物、化妆品或食品中防腐剂的用途。

[0024] 本发明实施例将上述抗菌中药组合物应用到化妆品，进行防腐挑战实验。结果表明，所述化妆品样品对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠球菌及黑曲霉菌的防腐挑战优秀。

具体实施方式

[0025] 本发明公开了一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

[0026] 本发明提供了一种抗菌中药组合物，由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。

[0027] 在本发明中，所述原料包括紫苏子。紫苏子的临床用名有紫苏子、炒紫苏子、蜜炙紫苏子、紫苏子霜，别称有苏子、黑苏子、赤苏、白苏、香苏等。《中国药典》记载，紫苏子的性味辛、温，归肺经，能降气消痰、平喘、润肠。

[0028] 在本发明中，所述原料包括广藿香。《中国药典》记载，广藿香为唇形科植物广藿香 Pogostemoncablin(Blanco)Benth.的干燥地上部分。根据《中华本草》的记载，在药理作用方面，广藿香酮体久对白色含珠菌、新型隐球菌、黑根霉等真菌有明显的抑制作用，对甲型溶血性链球菌等细菌也有一定的抑制作用；广藿香叶鲜汁对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌及枯草杆菌的生长也有一定的抑制作用；广藿香酮能抑制青霉菌等霉菌的长，可用于口服液的防腐。

[0029] 在本发明中，所述原料包括松萝。松萝（学名：UsneadiffractaVain.)又名：女萝、松落、龙须草、金钱草、关公须、天蓬草、树挂、松毛、海风藤、金丝藤、云雾草、老君须、过山龙等，属地衣门，为松萝科植物，生于深山的老树枝干或高山岩石上，呈悬垂条丝状。《中华本草》记载，松萝属等许多地衣类都含有抗菌物质，其中松萝酸之抗菌作用尤为突出。在试管中松萝酸对肺炎球菌、溶血性链球菌、白喉杆菌、结核杆菌都有很强的抑菌作用；松萝酸对金黄色葡萄球菌之抑制较上述细菌稍弱，但强于对革兰氏阴性细菌之作用。

[0030] 本发明主要以紫苏子、广藿香和松萝为原料配方，具有广谱的抗菌功效，其抑菌效果好于单味药的效果，克服了单味药对某些菌株的局限性，抑菌功效显著。

[0031] 在本发明的优选实施例中，以重量份计，所述原料包括60~80份的紫苏子、10~ 20份的广藿香和A份的松萝，0<AS20。本发明的三种中药的优选比例，可以最大限度地抑制细菌的增长。

[0032] 在本发明的一个实施例中，以重量份计，所述原料包括60份的紫苏子、20份的广藿香和20份的松萝。在本发明的另一个实施例中，以重量份计，所述原料包括80份的紫苏子、10份的广藿香和10份的松萝。在本发明的另一个实施例中，以重量份计，所述原料包括 70份的紫苏子、15份的广藿香和15份的松萝。

[0033] 本发明提供了上述技术方案所述的抗菌中药组合物的制备方法，包括以下步骤：

[0034] 将紫苏子、广藿香和松萝混合后，采用乙醇渗漉法提取，得到抗菌中药组合物。

[0035] 采用本发明实施例的技术方案，能克服传统制备工艺制备的中药提取液气味重、有效成分保留少、杂质多、抗菌谱窄和刺激性强等问题。

[0036] 本发明实施例将一定量的紫苏子、广藿香和松萝混合均匀，然后采用乙醇渗漉法进行提取，得到抗菌中药组合物。

[0037] 在本发明中，所述紫苏子、广藿香和松萝的内容与上文所述的内容一致，在此不再赘述。本发明实施例优选将所述紫苏子、广藿香和松萝分别粉碎，然后将得到的紫苏子粉、广藿香粉和松萝粉混合。作为优选，所述混合具体为：将紫苏子、广藿香和松萝混合，加水碾磨至60~200目，调节pH值为4~7。在本发明中，所述粉碎和碾磨等均为本领域技术人员熟知的技术手段。在本发明的一个实施例中，碾磨后物料的pH值可调节为5~6、优选为 5〇

[0038] 本发明实施例可调节好pH值后，采用乙醇渗漉法进行提取，得到抗菌中药组合物。本发明在进行乙醇渗漉法提取前，优选加入脂肪酶进行酶解。本发明通过脂肪酶的酶解过程，可明显降低刺激性。

[0039] 作为优选，在混合后进行提取前，本发明实施例还包括：采用脂肪酶，至酶活性为 5U/g~10U/g，在40°C~60°C的温度下，酶解lh~2h。在本发明中，所述酶解所用的脂肪酶采用市售产品即可；酶活性优选为5U/g~10U/g。所述酶解采用本领域常用的即可：酶解的温度优选为45°C~55°C。

[0040] 酶解结束后，本发明实施例加入乙醇，通过乙醇渗漉法提取，得到抗菌中药组合物。在本发明中，所述乙醇渗漉法是以乙醇为溶剂，将适度粉碎的药材置于渗漉筒中，由上部不断地添加溶剂，在溶剂渗过药材层向下流动的过程中浸出药材成分的方法。本发明采用渗漉的方法，可减少挥发性物质的损失。

[0041] 在本发明的实施例中，可采用80wt%~95wt%的乙醇溶液为提取的溶剂。在本发明的一个实施例中，所述乙醇溶液的浓度为80wt%~95wt%;所述乙醇溶液与上述（药材）原料的质量比优选为（2000~3000) : 100。所述提取的时间优选为24h~30h;在本发明的一个实施例中，渗漉提取24h。

[0042] 完成提取后，本发明优选还包括：过滤，取滤液；将所述滤液依次进行浓缩、定容和陈化，得到抗菌中药组合物。

[0043] 本发明对所述过滤没有特殊限制，采用本领域常用的过滤方式即可。本发明实施例将过滤得到的滤液进行浓缩如低温减压浓缩，以除去溶剂；然后置换成二丙二醇或辛酸癸酸甘油酯或其它油脂、多元醇，定容。其中，所述低温减压浓缩为本领域技术人员熟知的技术手段，其温度优选在100°c以下，更优选小于等于50°C;减压是指抽真空，在负压的环境下浓缩，负压通常小于〇Pa，例如-0. 02MPa。在本发明的实施例中，可定容至上述药材（原料）质量的1~5倍。

[0044] 定容至一定质量后，本发明实施例进行陈化，分层后过滤，取上清液，即得天然防腐剂提取物，也就是本发明所述抗菌中药组合物。其中，所述陈化的温度优选为-5°C~-10°C;所述陈化的时间优选为10h~20h，更优选为12h~15h。本发明用渗漉的方法使得挥发性物质的损失降低，通过陈化除去部分杂质，从而更好地保留小分子物质，获得抗菌中药组合物。

[0045] 得到抗菌中药组合物后，本发明进行抑菌试验。结果表明，本发明提供的工艺方案保证了抗菌中药组合物的广谱抑菌功效，并大幅减弱了组合物产品的颜色，产品稳定，适合添加到化妆品等产品中作为防腐剂使用。

[0046] 本发明还提供上述技术方案所述的抗菌中药组合物作为药物、化妆品或食品中防腐剂的用途。

[0047] 在药物、化妆品或食品中，上述抗菌中药组合物作为天然的防腐剂，具有防腐、抗菌的作用。其中，所述菌的种类为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和黑曲霉中的一种或多种。本发明应用的药物通常为外用皮肤药物，应用的化妆品如日用化妆品，但是，本发明所制备的抗菌中药组合物的应用并不局限于此。

[0048] 本发明实施例提供了一种化妆品，包括上述抗菌中药组合物。本发明在化妆品中添加上述抗菌中药组合物，可以有效抑制化妆品中微生物的生长，延长化妆品的货架寿命，同时有利于保障产品的安全性，防止消费者因使用受微生物污染的产品而引起可能的感染。

[0049] 在本发明的实施例中，所述化妆品包括：水性组分、油性组分、上述抗菌中药组合物和功能组分。其中，所述水性组分优选包括水、甘油、络合剂和水溶性乳化剂；所述油性组分优选包括植物油、C16~18醇和水包油型乳化剂。在本发明中，所述功能组分包括但不限于抗皱组分、保湿组分和美白组分。在本发明的一个实施例中，所述功能组分包括胶原蛋白和燕麦葡聚糖。

[0050] 在本发明的优选实施例中，所述化妆品包括：水、甘油、络合剂、水溶性乳化剂、植物油、C16~18醇、水包油型乳化剂、上述抗菌中药组合物和功能组分。

[0051] 其中，以质量分数计，所述化妆品优选包括4%~10%的甘油，更优选包括5%的甘油。所述化妆品优选包括〇. 01%~〇. 05%的络合剂；所述络合剂如乙二胺四乙酸二钠。所述化妆品优选包括〇. 1%~〇. 5%的水溶性乳化剂；所述水溶性乳化剂如丙烯酰二甲基牛磺酸胺/乙烯基吡咯烷酮（VP)共聚物，可简称为AVC。

[0052] 以质量分数计，所述化妆品优选包括5%~10%的植物油，更优选包括8%的植物油。在本发明的一个实施例中，所述植物油为山茶籽油。所述化妆品优选包括1%~5%的 C16~18醇，更优选包括2%~4%的C16~18醇。所述化妆品优选包括1 %~2%的水包油型乳化剂；所述水包油型乳化剂可为A-165乳化剂。

[0053] 在本发明中，以质量分数计，所述化妆品优选包括0. 5%~1%的上述抗菌中药组合物。所述化妆品优选包括5%~10%的功能组分；在本发明的一个实施例中，所述化妆品包括2%的胶原蛋白和5%的燕麦葡聚糖，可起到抗皱等作用。在本发明实施例中，所述水的用量使化妆品的质量分数为100%即可。

[0054] 本发明对所述化妆品的制备方法没有特殊限制，优选按照以下方法进行：

[0055] 将水、甘油和络合剂混合，加热，然后加入水溶性乳化剂，得到水相；

[0056] 将水包油型乳化剂、C16~18醇和植物油混合，加热，得到油相；

[0057] 将所述油相加入水相，均质，然后加入上述抗菌中药组合物、胶原蛋白和燕麦葡聚糖，即得。

[0058] 在上述方法中，制备水相时，所述加热优选至温度为80°C~90°C;制备水相优选在搅拌的条件下进行，搅拌的速度可为300rpm/min。制备油相时，所述加热优选至温度为 80°C~90°C;制备油相优选在搅拌的条件下进行，搅拌的速度可为300rpm/min。

[0059] 在本发明中，所述均质为本领域技术人员熟知的技术手段；所述均质的速度优选为500rpm/min，时间优选为5min。本发明实施例完成均质后，优选搅拌并降温至40°C~ 50°C。本发明实施例加入上述抗菌中药组合物和功能组分，优选在搅拌的条件下进行；所述搅拌的速度可为500rpm/min，然后降至室温，制备得到化妆品。

[0060] 得到化妆品后，本发明将其进行防腐挑战实验。结果表明，所述化妆品对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠球菌及黑曲霉菌的防腐挑战优秀。

[0061] 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的抗菌中药组合物及其制备方法、应用进行具体地描述。

[0062] 以下实施例中，所用的脂肪酶为食品级、购自郑州瑞佳食品添加剂有限公司；山茶籽油的供应商为韩国BI0SPECTRUM，原料名称为：Dongbaek(Tsubaki)Oil;C16~18醇为科宁化工（中国）有限公司提供的型号为LanetteMY的产品；胶原蛋白购自武汉贝尔卡生物医药有限公司；燕麦葡聚糖为Oat-0-Glucan(北京华夏众芳生物科技有限公司）。

[0063] 实施例1

[0064] 将60g紫苏子、20g广藿香和20g松萝分别粉碎并混合均匀，加100g的水碾磨至 60~200目，调节pH值为5 ;

[0065] 加入脂肪酶，至酶活性为10U/g，在40°C的温度下，酶解2h;

[0066] 加入2000g 80wt%的乙醇溶液，进行渗漉法提取；

[0067] 渗漉提取24h，过滤，取滤液；

[0068] 低温减压浓缩除去溶剂，置换成辛酸癸酸甘油酯，定容至200g;

[0069]在-10°C下陈化12h，分层后过滤，取上清液，即得天然防腐剂提取物（抗菌中药组合物）。

[0070] 实施例2

[0071] 将80g紫苏子，10g广藿香，10g松萝分别粉碎并混合均勾，加100g的水碾磨至 60~200目，调节pH值为5 ;

[0072] 加入脂肪酶，至酶活性为5U/g，在60°C的温度下，酶解lh;

[0073] 加入3000g 95wt%的乙醇溶液，进行渗漉法提取；

[0074] 渗漉提取24h，过滤，取滤液；

[0075] 低温减压浓缩除去溶剂，置换成辛酸癸酸甘油，定容至200g;

[0076] 在-10°C下陈化12h，分层后过滤，取上清液，即得天然防腐剂提取物。

[0077] 实施例3

[0078] 将70g紫苏子，15g广藿香，15g松萝分别粉碎并混合均勾，加100g的水碾磨至 60~200目，调节pH值为5;

[0079] 加入脂肪酶，至酶活性为5U/g，在60°C的温度下，酶解lh;

[0080] 加入3000g 95wt%的乙醇溶液，进行渗漉法提取；

[0081] 渗漉提取24h，过滤，取滤液；

[0082] 低温减压浓缩除去溶剂，置换成辛酸癸酸甘油，定容至200g;

[0083] 在-10°C下陈化12h，分层后过滤，取上清液，即得天然防腐剂提取物。

[0084] 对比例1

[0085] (1)将100g紫苏子粉碎，加入3000g95wt%的乙醇溶液，进行渗漉法提取；

[0086] (2)渗漉提取24h，过滤，取滤液；

[0087] (3)低温减压浓缩除去溶剂，置换成辛酸癸酸甘油酯，定容至200g;

[0088] (4)在-10°C陈化12h，分层后过滤，取上清液，即得紫苏子提取物。

[0089] 对比例2

[0090] (1)将100g广藿香粉碎，加入3000g95wt%的乙醇溶液，进行渗漉法提取；

[0091] (2)渗漉提取24h，过滤，取滤液；

[0092] (3)低温减压浓缩除去溶剂，置换成辛酸癸酸甘油酯，定容至200g;

[0093] (4)-10°C陈化12h，分层后过滤，取上清液，即得广藿香提取物。

[0094] 对比例3

[0095] (1)将100g松萝粉碎，加入3000g95wt%的乙醇溶液，进行渗漉法提取；

[0096] (2)渗漉提取24h，过滤，取滤液；

[0097] (3)低温减压浓缩除去溶剂，置换成辛酸癸酸甘油酯，定容至200g;

[0098] (4)在-10°C陈化12h，分层后过滤，取上清液，即得松萝提取物。

[0099] 实施例4

[0100] (1)将80g紫苏子、10g广藿香和10g松萝分别粉碎并混合均匀，加入3000g 95wt%的乙醇溶液，进行渗漉法提取；

[0101] (2)渗漉提取24h，过滤，取滤液；

[0102] (3)低温减压浓缩除去溶剂，置换成辛酸癸酸甘油酯，定容至200g;

[0103] (4)在-10°C陈化12h，分层后过滤，取上清液，即得天然防腐剂提取物（抗菌中药组合物）。

[0104] 实施例5抑菌试验

[0105]1试验菌株

[0106] 金黄色葡萄球菌（ATCC8739)，大肠杆菌（ATCC6538)，绿脓杆菌（ATCC9027)，白色念珠球菌（ATCC10231)，黑曲霉菌（ATCC16404)。

[0107] 2培养基

[0108]TSB固体培养基：蛋白胨10g/L，NaCl10g/L，K2HP04 2. 5g/L，酵母提取物3g/L，琼脂15g/L，采用蒸馏水溶解，调节pH值为7. 2±0. 2,在115°C高压灭菌20min;TSB液体培养基：蛋白胨l〇g/L，NaCl10g/L，K2HP04 2. 5g/L，酵母提取物3g/L，采用蒸馏水溶解，调节pH 值为7. 2±0. 2,在115°C高压灭菌20min;

[0109] SDB固体培养基：蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，K2HP04 3g/L，酵母提取物5g/L，琼脂15g/L，采用蒸馏水溶解，在115°C高压灭菌20min;SDB液体培养基：蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，K2HP04 3g/L，酵母提取物5g/L，采用蒸馏水溶解，在115°C高压灭菌20min。

[0110] 3菌悬液制备及接种

[0111] 取甘油保藏的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌1〇〇yL涂布于TSB固体培养基上，在37°C培养2d，用生理盐水重悬，得到菌悬液，并用平板培养法计数，将测试菌浓度调整为 105~10 6CFU/mL。

[0112] 取白色念珠球菌和黑曲霉菌100yL涂布于SDB固体培养基上，在30°C培养2d，用生理盐水重悬，得到菌悬液，并用平板培养法计数，将测试菌浓度调整为1〇5~10 6CFU/mL。

[0113] 4样品抑菌作用的测定

[0114] 4.1杯碟法

[0115] 在培养皿中倒入TSB或SDB固体培养基，待凝固后，在此培养基上均匀涂布测试菌 100yL。在培养基上等距离放2个无菌牛津杯[内径（6. 0±0.l)mm，外径（8. 0±0.l)mm，高（10. 0±0.l)mm]，在杯内分别注入200yL待测样品，用生理盐水或含50yLDMS0(二甲基亚砜）的生理盐水作为对照。在37°C或30°C恒温箱中培养2d后，用直尺测量各种药品的抑菌圈直径，取其平均值。

[0116] 4. 2微孔板法

[0117] 在微孔中加入100yL待测样品（初始浓度），再加入含测试菌浓度为1X105CFU/ mL的2XTSB或2XSDB液体培养基100yL，混匀，即待测样品的测试浓度为初始浓度的 50wt%。在30°C或37°C恒温箱中培养2d后，观察有无菌生长。结果判断的前提是生长对照良好，空白对照无菌生长清晰。

[0118] 5最低抑菌浓度（MIC值）的测定

[0119] ①最低抑制金黄色葡萄球菌浓度（MIC)、最低抑制大肠杆菌浓度（MIC)、最低抑制绿脓杆菌浓度（MIC)、最低抑制白色念珠球菌浓度（MIC)的测定方法如下：

[0120] (1)药液制备将待测样品用生理盐水稀释成实验浓度。

[0121] (2)菌液制备用2XTSB或2XSDB液体培养基稀释菌悬液，使其最终菌浓度为 105CFU/mL〇

[0122] (3)培养及结果判读在微孔中加入菌液100yL和药液100yL，同时设不加菌的阴性对照和不加药液的正常生长对照，每种药做3个平行，取平均值。置于37°C或30°C湿盒孵育，48h后观察结果，采用直接法读取数据。结果判断的前提是生长对照良好，空白对照无菌生长清晰，其它孔随药物浓度梯度升高而菌的生长受到抑制。

[0123] ②最低抑制黑曲霉浓度（MIC)测定

[0124] 采用杯碟法，在培养皿中倒入SDB固体培养基，待凝固后，在此培养基上加入黑曲霉菌（105CFU/mL)100yL，均匀涂布。在培养基上等距离放3个无菌牛津杯[内径 (6. 0±0. 1)_，外径（8. 0±0. 1)_，高（10. 0±0.l)mm]，在杯内分别注入200yL不同浓度的样品（用生理盐水稀释）。同时设不加测试样品的正常生长对照和生理盐水对照。结果判断的前提是生长对照和生理盐水对照生长良好，其它随药物浓度梯度升高而菌的生长受到抑制。

[0125] 本发明与单味中药相比，产品抑菌结果如表1所示，表1为实施例1~4和对比例 1~3的MIC值。

[0126] 表1实施例1~4和对比例1~3的MIC值

[0127]

[0128] 由表1可知，在100yL/mL以内，紫苏子对白色念珠菌无抗菌效果，对绿脓杆菌抗菌效果较弱，对金黄色葡萄球菌抗菌效果一般；在100yL/mL以内，广藿香对大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌无抗菌效果；在100yL/mL以内，松萝对大肠杆菌、绿脓杆菌和黑曲霉无抗菌效果，对金黄色葡萄球菌抗菌效果一般，对白色念珠菌抗菌效果较弱。

[0129] 由此可见，一、本发明通过植物之间的合理配伍，起到广谱抗菌的效果；二、针对每个菌单独来看，配伍后的组合物的抑菌效果优于单味植物的抗菌效果，实现了 1+1大于2的结果，体现了植物之间抗菌效果上的协同作用。

[0130] 本发明的组合物配方抑菌功效显著，具有广谱的抗菌功效，其抑菌效果要好于单味药的效果，克服了单味药对某些菌株的局限性，适合作为天然防腐剂使用。同时，本发明的三种中药的比例可以最大限度的抑制细菌的增长。另外，本发明的工艺方案保持了组合物的广谱抑菌功效，并大幅减弱了产品的颜色，产品稳定，适合添加到化妆品中作为防腐剂使用。

[0131] 实施例6

[0132] 1 配方

[0133]

[0134] 2制备工艺

[0135] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85 °C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。

[0136] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。

[0137] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。

[0138] (4)取实施例1所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤（3)降温后的体系中，搅拌（速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。

[0139] 实施例7

[0140] 1 配方

[0141]

[0142] 2制备工艺

[0143] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。

[0144] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。

[0145] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。

[0146] (4)取实施例2所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤（3)降温后的体系中，搅拌（速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。

[0147] 实施例8

[0148] 1配方

[0151] 2制备工艺

[0152] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。

[0153] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。

[0154] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。

[0155] (4)取实施例1所得天然抗菌剂、1，2-辛二醇、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤 (3)降温后的体系中，搅拌（速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。

[0156] 对比例4

[0157]

[0158] 2制备工艺

[0159] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。

[0160] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。

[0161] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。

[0162] (4)取对比例1所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤（3)降温后的体系中，搅拌（速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。

[0163] 对比例5

[0164]

[0165] 2制备工艺

[0166] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85 °C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。

[0167] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。

[0168] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。

[0169] (4)取1，2-辛二醇、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤（3)降温后的体系中，搅拌 (速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。

[0170] 实施例9

[0173] 2制备工艺

[0174] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌 300rpm/min，慢慢加入AVC，得水相。

[0175] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中，加热至温度为85°C，搅拌为 300rpm/min，即得油相。

[0176] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相，均质（速度为500rpm/ min) 5min，搅拌、降温至45°C。

[0177] (4)取实施例4所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤（3)降温后的体系中，搅拌（速度为500rpm/min)，降至室温，得到化妆品。

[0178] 实施例10防腐挑战试验

[0179] 1.防腐挑战接种的方式和数量

[0180] 采用混合菌接种。待测样品中接入金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌至接种数量为1〇 5~10 6CFU/g或105~10 6CFU/mL;白色念珠球菌和黑曲霉菌接种数量为104CFU/ g或104CFU/mL，各三个平行，以生理盐水作为空白对照。

[0181] 2.防腐挑战分离检测

[0182] 接种后的样品在特定时间分离检测：0小时、48小时、7天、14天、21天和28天。取样后，根据实验需要，用生理盐水稀释后取100yL涂布于TSB和SDB培养基平板，在 28°C± 1 °C或36°C± 1 °C培养后菌落计数。

[0183] 3•评判标准

[0184] 要求在第7天时，细菌降低99. 9 %，黑曲霉菌和白色念珠球菌各降低90 %，并且在 28天内持续下降，则通过防腐挑战试验。

[0185] 如果混合菌接种的三个平行试验中任何一个微生物数量的平均值，在第7天时下降到 100CFU/g(CFU/mL)以下，在 28 天内全部降至 0CFU/g(CFU/mL)或< 10CFU/g(CFU/mL)，那么视为防腐效果优秀。防腐挑战结果参见表2~7,表2~7依次为0小时、48小时、7 天、14天、21天和28天防腐挑战结果。

[0186] 在4个应用的实施例（实施例6~9)及应用的对比例（对比例4和5)样品的防腐挑战实验中，4个应用的实施例对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和黑曲霉在第7天时，菌浓度均小于10CFU/g，在第28天时菌浓度仍小于10CFU/g，表明该4 种样品对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠球菌及黑曲霉菌的防腐挑战优秀。

[0187] 表2 0小时防腐挑战结果

[0188]

[0189] 表3 48小时防腐挑战结果

[0190]

[0194] 表5 14天防腐挑战结果

[0195]

[0197] 表6 21天防腐挑战结果

[0198]

[0199] 表7 28天防腐挑战结果

[0200]

[0201]

[0202] 实施例11多次皮肤刺激性试验

[0203] 1.染毒方法：取普通级新西兰兔16只，分成4组，每组4只，雌雄各半。试验前将实验动物背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围左、右各约3cmX3cm。取受试物约0. 5g涂抹在动物左侧皮肤上，涂抹面积约2. 5cmX2. 5cm，每天涂抹1次，连续涂抹14天，另一侧作空白对照。从第二天开始，每次涂抹前剪毛，用纯净水清除残留受试物，对照区作同样处理。一小时后观察结果。

[0204] 2.观察操作：在自然光下观察皮肤反应，按表8(皮肤刺激反应评分标准）给出的评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分，连续观察14天。

[0205] 3.结果判定：按下列公式计算每天每只动物平均积分，进行刺激强度评价。

[0206] 每天每只动物平均积分=(E红斑和水肿/受试动物）/14。

[0207] 表8皮肤刺激反应评分标准

[0208]

[0209]

[0210] 4.每组样品的试验结果分别见表9~12。

[0211] 表9实施例6对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果

[0212]

[0213]

[0214] 表10实施例7对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果

[0215]

[0216]

[0217] 表11实施例8对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果

[0218]

[0219] 表12实施例9对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果

[0220]

[0221]

[0222] 从应用的4个实施例（实施例6~

9)的比较中，可以看出，酶解工艺下制取的天然抗菌剂，其刺激性远远低于不酶解条件下制取的抗菌剂；说明酶解能够很好地降低抗菌剂的刺激性。

[0223] 实施例12人体皮肤斑贴试验

[0224] 1.斑试方法：选用合格的斑试器，以封闭式斑贴试验方法，将受试物约0. 020g~ 0.025g涂于斑试器内，外用专用胶带贴敷于受试者前臂曲侧，24小时后去除受试物，于去除受试物斑试器后30min，待压痕消失后观察皮肤反应，按《化妆品卫生规范》（2007年版）中皮肤反应分组标准记录其结果。

[0225] 2.结果评价：按表13 (皮肤不良反应分组标准）给出的分组标准记录反应结果，结果参见表14,表14为实施例6~9样品对人体皮肤斑贴试验结果。

[0226] 表13皮肤不良反应分组标准

[0227]

[0228] 表14实施例6~9样品对人体皮肤斑贴试验结果

[0229]

[0230] 表14各组的人体皮肤斑贴试验结果显示：在实施例6~8中30例受试者皮肤全部呈阴性反应，而实施例9有5例为可疑反应，仅有微弱红斑（评分等级：0级）。依据《化妆品卫生规范》(2007年版）人体皮肤斑贴试验判断标准，实施例6~8所得样品对人体无皮肤不良反应，而实施例9所得样品为可疑反应，进一步说明本发明中酶解的意义。

Claims

1. 一种抗菌中药组合物，由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。

2. 根据权利要求1所述的抗菌中药组合物，其特征在于，以重量份计，所述原料包括 60~80份的紫苏子、10~20份的广藿香和A份的松萝，O < A < 20。

3. 根据权利要求2所述的抗菌中药组合物，其特征在于，以重量份计，所述原料包括60 份的紫苏子、20份的广藿香和20份的松萝。

4. 根据权利要求2所述的抗菌中药组合物，其特征在于，以重量份计，所述原料包括80 份的紫苏子、10份的广藿香和10份的松萝。

5. 根据权利要求2所述的抗菌中药组合物，其特征在于，以重量份计，所述原料包括70 份的紫苏子、15份的广藿香和15份的松萝。

6. 权利要求1~5任一项所述的抗菌中药组合物的制备方法，包括以下步骤：将紫苏子、广藿香和松萝混合后，采用乙醇渗漉法提取，得到抗菌中药组合物。

7. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在混合后进行提取前，还包括：采用脂肪酶进行酶解。

8. 根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述混合具体为：将紫苏子、广藿香和松萝混合，加水碾磨至60~200目，调节pH值为4~7。

9. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述提取的时间为24h~30h ; 在提取后还包括：过滤，取滤液；将所述滤液依次进行浓缩、定容和陈化，得到抗菌中药组合物。

10. 权利要求1~5任一项所述的抗菌中药组合物或权利要求6~9任一项所述的制备方法制得的抗菌中药组合物作为药物、化妆品或食品中防腐剂的用途。