CN105076246A - 一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用 - Google Patents

一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用,所述抗菌中药组合物由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。本发明通过中药间合理的配伍应用及协同作用,使得提取的组合物具有广谱抗菌的作用,适合作为天然防腐剂使用。实验表明,针对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和黑曲霉菌的每个菌单独来看,本发明配伍后的组合物的抑菌效果优于单味植物的抗菌效果,实现了1+1大于2的结果,体现了植物之间抗菌效果上的协同作用。此外,本发明提供的组合物具有气味小、颜色浅、温和、溶解性好、经济、用量小、稳定及适合工业化生产等特点。

Description

一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用

技术领域

[0001] 本发明涉及中药技术领域,特别涉及一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用。

背景技术

[0002] -般来说,抗菌的概念可包括灭菌、杀菌、抑菌、防霉和防腐等。抗菌剂或者说防腐 剂,就是指可以阻止微生物生长的物质。在日常生活中,化妆品受到微生物污染易引起变 质,一般情况下,在外观就能够反映出来。比如,霉菌和酵母菌经常在产品的包装边沿等地 方出现霉点;受微生物污染的产品会出现混浊、沉淀、颜色变化、pH值改变、发泡、变味,如 果是乳化体则可能出现破乳、成块等。在化妆品中添加防腐剂,其作用是保护产品,使之免 受微生物污染。如果防腐剂添加的量不够,则可能出现微生物适应周围的生长环境,产生抗 药性,从而导致防腐失效。

[0003] 目前,化妆品中常用的防腐剂有乙内酰脲(DMDMH)、卡松系列、布罗波尔、碘代丙 炔基氨基甲酸丁酯(IPBC)、尼泊金酯类、三氯新等。然而,这些防腐剂均存在一定缺陷:如 DMDMH在使用过程中易释放甲醇存在安全隐患;卡松系列因其含氯,使用过程中会对某些 肤质产生一定的刺激性;使用布罗波尔,易形成致癌物质亚硝胺;IPBC可能会导致使用者 对碘的过量摄入;尼泊金酯类易在脂肪组织中产生累积,此外,对羟基苯甲酸类防腐剂在特 定的测试系统中已经证实能显示某种模拟女性激素雌激素的能力,对人体安全和生理系统 带来不良影响;三氯新已被证实会对环境产生负面影响。因此,市场上亟需出现一种低毒、 高效、无污染的天然防腐剂。

[0004] 随着近年来在回归自然、享受绿色与健康的热潮冲击下,化妆品中加入纯天然的 防腐剂已成为国内外提倡和开发的热点,从天然产物提取分离出抗菌性强而广、安全无毒 的天然抗菌剂已成为今后开发的重要方向。

发明内容

[0005] 有鉴于此,本发明提供了一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用,本发明提供的 抗菌中药组合物具有广谱抗菌作用,且天然、温和。

[0006] 本发明提供一种抗菌中药组合物,由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。

[0007] 优选地,以重量份计,所述原料包括60~80份的紫苏子、10~20份的广藿香和A 份的松萝,〇 <AS20。

[0008] 优选地,以重量份计,所述原料包括60份的紫苏子、20份的广藿香和20份的松萝。

[0009] 优选地,以重量份计,所述原料包括80份的紫苏子、10份的广藿香和10份的松萝。 [0010] 优选地,以重量份计,所述原料包括70份的紫苏子、15份的广藿香和15份的松萝。

[0011] 本发明还提供上述技术方案所述的抗菌中药组合物的制备方法,包括以下步骤:

[0012] 将紫苏子、广藿香和松萝混合后,采用乙醇渗漉法提取,得到抗菌中药组合物。

[0013] 优选地,在混合后进行提取前,还包括:

[0014] 采用脂肪酶进行酶解。

[0015] 进一步优选地,采用脂肪酶至酶活性为5U/g~10U/g,在40°C~60°C的温度下,酶 解lh~2h。

[0016] 优选地,所述混合具体为:

[0017] 将紫苏子、广藿香和松萝混合,加水碾磨至60~200目,调节pH值为4~7。

[0018] 优选地,所述提取的时间为24h~30h;

[0019] 在提取后还包括:

[0020] 过滤,取滤液;

[0021] 将所述滤液依次进行浓缩、定容和陈化,得到抗菌中药组合物。

[0022] 与现有技术相比,本发明提供的抗菌中药组合物由包括紫苏子、广藿香和松萝的 原料制得。本发明通过中药间合理的配伍应用及协同作用,使得提取的组合物具有广谱抗 菌的作用,适合作为天然防腐剂使用。实验表明,针对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆 菌、白色念珠菌和黑曲霉菌的每个菌单独来看,本发明配伍后的组合物的抑菌效果优于单 味植物的抗菌效果,实现了 1+1大于2的结果,体现了植物之间抗菌效果上的协同作用。

[0023] 本发明提供上述技术方案所述的抗菌中药组合物作为药物、化妆品或食品中防腐 剂的用途。

[0024] 本发明实施例将上述抗菌中药组合物应用到化妆品,进行防腐挑战实验。结果表 明,所述化妆品样品对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠球菌及黑曲霉菌 的防腐挑战优秀。

具体实施方式

[0025] 本发明公开了一种抗菌中药组合物及其制备方法、应用,本领域技术人员可以借 鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域 技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过 较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述 的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。

[0026] 本发明提供了一种抗菌中药组合物,由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。

[0027] 在本发明中,所述原料包括紫苏子。紫苏子的临床用名有紫苏子、炒紫苏子、蜜炙 紫苏子、紫苏子霜,别称有苏子、黑苏子、赤苏、白苏、香苏等。《中国药典》记载,紫苏子的性 味辛、温,归肺经,能降气消痰、平喘、润肠。

[0028] 在本发明中,所述原料包括广藿香。《中国药典》记载,广藿香为唇形科植物广藿香 Pogostemoncablin(Blanco)Benth.的干燥地上部分。根据《中华本草》的记载,在药理作 用方面,广藿香酮体久对白色含珠菌、新型隐球菌、黑根霉等真菌有明显的抑制作用,对甲 型溶血性链球菌等细菌也有一定的抑制作用;广藿香叶鲜汁对金黄色葡萄球菌、白色葡萄 球菌及枯草杆菌的生长也有一定的抑制作用;广藿香酮能抑制青霉菌等霉菌的长,可用于 口服液的防腐。

[0029] 在本发明中,所述原料包括松萝。松萝(学名:UsneadiffractaVain.)又名:女 萝、松落、龙须草、金钱草、关公须、天蓬草、树挂、松毛、海风藤、金丝藤、云雾草、老君须、过 山龙等,属地衣门,为松萝科植物,生于深山的老树枝干或高山岩石上,呈悬垂条丝状。《中 华本草》记载,松萝属等许多地衣类都含有抗菌物质,其中松萝酸之抗菌作用尤为突出。在 试管中松萝酸对肺炎球菌、溶血性链球菌、白喉杆菌、结核杆菌都有很强的抑菌作用;松萝 酸对金黄色葡萄球菌之抑制较上述细菌稍弱,但强于对革兰氏阴性细菌之作用。

[0030] 本发明主要以紫苏子、广藿香和松萝为原料配方,具有广谱的抗菌功效,其抑菌效 果好于单味药的效果,克服了单味药对某些菌株的局限性,抑菌功效显著。

[0031] 在本发明的优选实施例中,以重量份计,所述原料包括60~80份的紫苏子、10~ 20份的广藿香和A份的松萝,0<AS20。本发明的三种中药的优选比例,可以最大限度地 抑制细菌的增长。

[0032] 在本发明的一个实施例中,以重量份计,所述原料包括60份的紫苏子、20份的广 藿香和20份的松萝。在本发明的另一个实施例中,以重量份计,所述原料包括80份的紫苏 子、10份的广藿香和10份的松萝。在本发明的另一个实施例中,以重量份计,所述原料包括 70份的紫苏子、15份的广藿香和15份的松萝。

[0033] 本发明提供了上述技术方案所述的抗菌中药组合物的制备方法,包括以下步骤:

[0034] 将紫苏子、广藿香和松萝混合后,采用乙醇渗漉法提取,得到抗菌中药组合物。

[0035] 采用本发明实施例的技术方案,能克服传统制备工艺制备的中药提取液气味重、 有效成分保留少、杂质多、抗菌谱窄和刺激性强等问题。

[0036] 本发明实施例将一定量的紫苏子、广藿香和松萝混合均匀,然后采用乙醇渗漉法 进行提取,得到抗菌中药组合物。

[0037] 在本发明中,所述紫苏子、广藿香和松萝的内容与上文所述的内容一致,在此不再 赘述。本发明实施例优选将所述紫苏子、广藿香和松萝分别粉碎,然后将得到的紫苏子粉、 广藿香粉和松萝粉混合。作为优选,所述混合具体为:将紫苏子、广藿香和松萝混合,加水碾 磨至60~200目,调节pH值为4~7。在本发明中,所述粉碎和碾磨等均为本领域技术人 员熟知的技术手段。在本发明的一个实施例中,碾磨后物料的pH值可调节为5~6、优选为 5〇

[0038] 本发明实施例可调节好pH值后,采用乙醇渗漉法进行提取,得到抗菌中药组合 物。本发明在进行乙醇渗漉法提取前,优选加入脂肪酶进行酶解。本发明通过脂肪酶的酶 解过程,可明显降低刺激性。

[0039] 作为优选,在混合后进行提取前,本发明实施例还包括:采用脂肪酶,至酶活性为 5U/g~10U/g,在40°C~60°C的温度下,酶解lh~2h。在本发明中,所述酶解所用的脂肪 酶采用市售产品即可;酶活性优选为5U/g~10U/g。所述酶解采用本领域常用的即可:酶 解的温度优选为45°C~55°C。

[0040] 酶解结束后,本发明实施例加入乙醇,通过乙醇渗漉法提取,得到抗菌中药组合 物。在本发明中,所述乙醇渗漉法是以乙醇为溶剂,将适度粉碎的药材置于渗漉筒中,由上 部不断地添加溶剂,在溶剂渗过药材层向下流动的过程中浸出药材成分的方法。本发明采 用渗漉的方法,可减少挥发性物质的损失。

[0041] 在本发明的实施例中,可采用80wt%~95wt%的乙醇溶液为提取的溶剂。在本发 明的一个实施例中,所述乙醇溶液的浓度为80wt%~95wt%;所述乙醇溶液与上述(药材) 原料的质量比优选为(2000~3000) : 100。所述提取的时间优选为24h~30h;在本发明的 一个实施例中,渗漉提取24h。

[0042] 完成提取后,本发明优选还包括:过滤,取滤液;将所述滤液依次进行浓缩、定容 和陈化,得到抗菌中药组合物。

[0043] 本发明对所述过滤没有特殊限制,采用本领域常用的过滤方式即可。本发明实施 例将过滤得到的滤液进行浓缩如低温减压浓缩,以除去溶剂;然后置换成二丙二醇或辛酸 癸酸甘油酯或其它油脂、多元醇,定容。其中,所述低温减压浓缩为本领域技术人员熟知的 技术手段,其温度优选在100°c以下,更优选小于等于50°C;减压是指抽真空,在负压的环境 下浓缩,负压通常小于〇Pa,例如-0. 02MPa。在本发明的实施例中,可定容至上述药材(原 料)质量的1~5倍。

[0044] 定容至一定质量后,本发明实施例进行陈化,分层后过滤,取上清液,即得天 然防腐剂提取物,也就是本发明所述抗菌中药组合物。其中,所述陈化的温度优选 为-5°C~-10°C;所述陈化的时间优选为10h~20h,更优选为12h~15h。本发明用渗漉 的方法使得挥发性物质的损失降低,通过陈化除去部分杂质,从而更好地保留小分子物质, 获得抗菌中药组合物。

[0045] 得到抗菌中药组合物后,本发明进行抑菌试验。结果表明,本发明提供的工艺方案 保证了抗菌中药组合物的广谱抑菌功效,并大幅减弱了组合物产品的颜色,产品稳定,适合 添加到化妆品等产品中作为防腐剂使用。

[0046] 本发明还提供上述技术方案所述的抗菌中药组合物作为药物、化妆品或食品中防 腐剂的用途。

[0047] 在药物、化妆品或食品中,上述抗菌中药组合物作为天然的防腐剂,具有防腐、抗 菌的作用。其中,所述菌的种类为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和黑曲 霉中的一种或多种。本发明应用的药物通常为外用皮肤药物,应用的化妆品如日用化妆品, 但是,本发明所制备的抗菌中药组合物的应用并不局限于此。

[0048] 本发明实施例提供了一种化妆品,包括上述抗菌中药组合物。本发明在化妆品中 添加上述抗菌中药组合物,可以有效抑制化妆品中微生物的生长,延长化妆品的货架寿命, 同时有利于保障产品的安全性,防止消费者因使用受微生物污染的产品而引起可能的感 染。

[0049] 在本发明的实施例中,所述化妆品包括:水性组分、油性组分、上述抗菌中药组合 物和功能组分。其中,所述水性组分优选包括水、甘油、络合剂和水溶性乳化剂;所述油性组 分优选包括植物油、C16~18醇和水包油型乳化剂。在本发明中,所述功能组分包括但不 限于抗皱组分、保湿组分和美白组分。在本发明的一个实施例中,所述功能组分包括胶原蛋 白和燕麦葡聚糖。

[0050] 在本发明的优选实施例中,所述化妆品包括:水、甘油、络合剂、水溶性乳化剂、植 物油、C16~18醇、水包油型乳化剂、上述抗菌中药组合物和功能组分。

[0051] 其中,以质量分数计,所述化妆品优选包括4%~10%的甘油,更优选包括5%的 甘油。所述化妆品优选包括〇. 01%~〇. 05%的络合剂;所述络合剂如乙二胺四乙酸二钠。 所述化妆品优选包括〇. 1%~〇. 5%的水溶性乳化剂;所述水溶性乳化剂如丙烯酰二甲基 牛磺酸胺/乙烯基吡咯烷酮(VP)共聚物,可简称为AVC。

[0052] 以质量分数计,所述化妆品优选包括5%~10%的植物油,更优选包括8%的植物 油。在本发明的一个实施例中,所述植物油为山茶籽油。所述化妆品优选包括1%~5%的 C16~18醇,更优选包括2%~4%的C16~18醇。所述化妆品优选包括1 %~2%的水包 油型乳化剂;所述水包油型乳化剂可为A-165乳化剂。

[0053] 在本发明中,以质量分数计,所述化妆品优选包括0. 5%~1%的上述抗菌中药组 合物。所述化妆品优选包括5%~10%的功能组分;在本发明的一个实施例中,所述化妆品 包括2%的胶原蛋白和5%的燕麦葡聚糖,可起到抗皱等作用。在本发明实施例中,所述水 的用量使化妆品的质量分数为100%即可。

[0054] 本发明对所述化妆品的制备方法没有特殊限制,优选按照以下方法进行:

[0055] 将水、甘油和络合剂混合,加热,然后加入水溶性乳化剂,得到水相;

[0056] 将水包油型乳化剂、C16~18醇和植物油混合,加热,得到油相;

[0057] 将所述油相加入水相,均质,然后加入上述抗菌中药组合物、胶原蛋白和燕麦葡聚 糖,即得。

[0058] 在上述方法中,制备水相时,所述加热优选至温度为80°C~90°C;制备水相优选 在搅拌的条件下进行,搅拌的速度可为300rpm/min。制备油相时,所述加热优选至温度为 80°C~90°C;制备油相优选在搅拌的条件下进行,搅拌的速度可为300rpm/min。

[0059] 在本发明中,所述均质为本领域技术人员熟知的技术手段;所述均质的速度优选 为500rpm/min,时间优选为5min。本发明实施例完成均质后,优选搅拌并降温至40°C~ 50°C。本发明实施例加入上述抗菌中药组合物和功能组分,优选在搅拌的条件下进行;所述 搅拌的速度可为500rpm/min,然后降至室温,制备得到化妆品。

[0060] 得到化妆品后,本发明将其进行防腐挑战实验。结果表明,所述化妆品对于金黄色 葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠球菌及黑曲霉菌的防腐挑战优秀。

[0061] 为了进一步理解本发明,下面结合实施例对本发明提供的抗菌中药组合物及其制 备方法、应用进行具体地描述。

[0062] 以下实施例中,所用的脂肪酶为食品级、购自郑州瑞佳食品添加剂有限公司;山茶 籽油的供应商为韩国BI0SPECTRUM,原料名称为:Dongbaek(Tsubaki)Oil;C16~18醇为科 宁化工(中国)有限公司提供的型号为LanetteMY的产品;胶原蛋白购自武汉贝尔卡生物 医药有限公司;燕麦葡聚糖为Oat-0-Glucan(北京华夏众芳生物科技有限公司)。

[0063] 实施例1

[0064] 将60g紫苏子、20g广藿香和20g松萝分别粉碎并混合均匀,加100g的水碾磨至 60~200目,调节pH值为5 ;

[0065] 加入脂肪酶,至酶活性为10U/g,在40°C的温度下,酶解2h;

[0066] 加入2000g 80wt%的乙醇溶液,进行渗漉法提取;

[0067] 渗漉提取24h,过滤,取滤液;

[0068] 低温减压浓缩除去溶剂,置换成辛酸癸酸甘油酯,定容至200g;

[0069]在-10°C下陈化12h,分层后过滤,取上清液,即得天然防腐剂提取物(抗菌中药组 合物)。

[0070] 实施例2

[0071] 将80g紫苏子,10g广藿香,10g松萝分别粉碎并混合均勾,加100g的水碾磨至 60~200目,调节pH值为5 ;

[0072] 加入脂肪酶,至酶活性为5U/g,在60°C的温度下,酶解lh;

[0073] 加入3000g 95wt%的乙醇溶液,进行渗漉法提取;

[0074] 渗漉提取24h,过滤,取滤液;

[0075] 低温减压浓缩除去溶剂,置换成辛酸癸酸甘油,定容至200g;

[0076] 在-10°C下陈化12h,分层后过滤,取上清液,即得天然防腐剂提取物。

[0077] 实施例3

[0078] 将70g紫苏子,15g广藿香,15g松萝分别粉碎并混合均勾,加100g的水碾磨至 60~200目,调节pH值为5;

[0079] 加入脂肪酶,至酶活性为5U/g,在60°C的温度下,酶解lh;

[0080] 加入3000g 95wt%的乙醇溶液,进行渗漉法提取;

[0081] 渗漉提取24h,过滤,取滤液;

[0082] 低温减压浓缩除去溶剂,置换成辛酸癸酸甘油,定容至200g;

[0083] 在-10°C下陈化12h,分层后过滤,取上清液,即得天然防腐剂提取物。

[0084] 对比例1

[0085] (1)将100g紫苏子粉碎,加入3000g95wt%的乙醇溶液,进行渗漉法提取;

[0086] (2)渗漉提取24h,过滤,取滤液;

[0087] (3)低温减压浓缩除去溶剂,置换成辛酸癸酸甘油酯,定容至200g;

[0088] (4)在-10°C陈化12h,分层后过滤,取上清液,即得紫苏子提取物。

[0089] 对比例2

[0090] (1)将100g广藿香粉碎,加入3000g95wt%的乙醇溶液,进行渗漉法提取;

[0091] (2)渗漉提取24h,过滤,取滤液;

[0092] (3)低温减压浓缩除去溶剂,置换成辛酸癸酸甘油酯,定容至200g;

[0093] (4)-10°C陈化12h,分层后过滤,取上清液,即得广藿香提取物。

[0094] 对比例3

[0095] (1)将100g松萝粉碎,加入3000g95wt%的乙醇溶液,进行渗漉法提取;

[0096] (2)渗漉提取24h,过滤,取滤液;

[0097] (3)低温减压浓缩除去溶剂,置换成辛酸癸酸甘油酯,定容至200g;

[0098] (4)在-10°C陈化12h,分层后过滤,取上清液,即得松萝提取物。

[0099] 实施例4

[0100] (1)将80g紫苏子、10g广藿香和10g松萝分别粉碎并混合均匀,加入3000g 95wt%的乙醇溶液,进行渗漉法提取;

[0101] (2)渗漉提取24h,过滤,取滤液;

[0102] (3)低温减压浓缩除去溶剂,置换成辛酸癸酸甘油酯,定容至200g;

[0103] (4)在-10°C陈化12h,分层后过滤,取上清液,即得天然防腐剂提取物(抗菌中药 组合物)。

[0104] 实施例5抑菌试验

[0105]1试验菌株

[0106] 金黄色葡萄球菌(ATCC8739),大肠杆菌(ATCC6538),绿脓杆菌(ATCC9027),白 色念珠球菌(ATCC10231),黑曲霉菌(ATCC16404)。

[0107] 2培养基

[0108]TSB固体培养基:蛋白胨10g/L,NaCl10g/L,K2HP04 2. 5g/L,酵母提取物3g/L,琼 脂15g/L,采用蒸馏水溶解,调节pH值为7. 2±0. 2,在115°C高压灭菌20min;TSB液体培养 基:蛋白胨l〇g/L,NaCl10g/L,K2HP04 2. 5g/L,酵母提取物3g/L,采用蒸馏水溶解,调节pH 值为7. 2±0. 2,在115°C高压灭菌20min;

[0109] SDB固体培养基:蛋白胨10g/L,葡萄糖20g/L,K2HP04 3g/L,酵母提取物5g/L,琼 脂15g/L,采用蒸馏水溶解,在115°C高压灭菌20min;SDB液体培养基:蛋白胨10g/L,葡萄 糖20g/L,K2HP04 3g/L,酵母提取物5g/L,采用蒸馏水溶解,在115°C高压灭菌20min。

[0110] 3菌悬液制备及接种

[0111] 取甘油保藏的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌1〇〇yL涂布于TSB固体培养 基上,在37°C培养2d,用生理盐水重悬,得到菌悬液,并用平板培养法计数,将测试菌浓度 调整为 105~10 6CFU/mL。

[0112] 取白色念珠球菌和黑曲霉菌100yL涂布于SDB固体培养基上,在30°C培养2d,用 生理盐水重悬,得到菌悬液,并用平板培养法计数,将测试菌浓度调整为1〇5~10 6CFU/mL。

[0113] 4样品抑菌作用的测定

[0114] 4.1杯碟法

[0115] 在培养皿中倒入TSB或SDB固体培养基,待凝固后,在此培养基上均匀涂布测试菌 100yL。在培养基上等距离放2个无菌牛津杯[内径(6. 0±0.l)mm,外径(8. 0±0.l)mm, 高(10. 0±0.l)mm],在杯内分别注入200yL待测样品,用生理盐水或含50yLDMS0(二甲 基亚砜)的生理盐水作为对照。在37°C或30°C恒温箱中培养2d后,用直尺测量各种药品 的抑菌圈直径,取其平均值。

[0116] 4. 2微孔板法

[0117] 在微孔中加入100yL待测样品(初始浓度),再加入含测试菌浓度为1X105CFU/ mL的2XTSB或2XSDB液体培养基100yL,混匀,即待测样品的测试浓度为初始浓度的 50wt%。在30°C或37°C恒温箱中培养2d后,观察有无菌生长。结果判断的前提是生长对 照良好,空白对照无菌生长清晰。

[0118] 5最低抑菌浓度(MIC值)的测定

[0119] ①最低抑制金黄色葡萄球菌浓度(MIC)、最低抑制大肠杆菌浓度(MIC)、最低抑制 绿脓杆菌浓度(MIC)、最低抑制白色念珠球菌浓度(MIC)的测定方法如下:

[0120] (1)药液制备将待测样品用生理盐水稀释成实验浓度。

[0121] (2)菌液制备用2XTSB或2XSDB液体培养基稀释菌悬液,使其最终菌浓度为 105CFU/mL〇

[0122] (3)培养及结果判读在微孔中加入菌液100yL和药液100yL,同时设不加菌的阴 性对照和不加药液的正常生长对照,每种药做3个平行,取平均值。置于37°C或30°C湿盒 孵育,48h后观察结果,采用直接法读取数据。结果判断的前提是生长对照良好,空白对照无 菌生长清晰,其它孔随药物浓度梯度升高而菌的生长受到抑制。

[0123] ②最低抑制黑曲霉浓度(MIC)测定

[0124] 采用杯碟法,在培养皿中倒入SDB固体培养基,待凝固后,在此培养基上加入 黑曲霉菌(105CFU/mL)100yL,均匀涂布。在培养基上等距离放3个无菌牛津杯[内径 (6. 0±0. 1)_,外径(8. 0±0. 1)_,高(10. 0±0.l)mm],在杯内分别注入200yL不同浓度 的样品(用生理盐水稀释)。同时设不加测试样品的正常生长对照和生理盐水对照。结果 判断的前提是生长对照和生理盐水对照生长良好,其它随药物浓度梯度升高而菌的生长受 到抑制。

[0125] 本发明与单味中药相比,产品抑菌结果如表1所示,表1为实施例1~4和对比例 1~3的MIC值。

[0126] 表1实施例1~4和对比例1~3的MIC值

[0127]

Figure CN105076246AD00101

[0128] 由表1可知,在100yL/mL以内,紫苏子对白色念珠菌无抗菌效果,对绿脓杆菌抗 菌效果较弱,对金黄色葡萄球菌抗菌效果一般;在100yL/mL以内,广藿香对大肠杆菌、绿 脓杆菌和白色念珠菌无抗菌效果;在100yL/mL以内,松萝对大肠杆菌、绿脓杆菌和黑曲霉 无抗菌效果,对金黄色葡萄球菌抗菌效果一般,对白色念珠菌抗菌效果较弱。

[0129] 由此可见,一、本发明通过植物之间的合理配伍,起到广谱抗菌的效果;二、针对每 个菌单独来看,配伍后的组合物的抑菌效果优于单味植物的抗菌效果,实现了 1+1大于2的 结果,体现了植物之间抗菌效果上的协同作用。

[0130] 本发明的组合物配方抑菌功效显著,具有广谱的抗菌功效,其抑菌效果要好于单 味药的效果,克服了单味药对某些菌株的局限性,适合作为天然防腐剂使用。同时,本发明 的三种中药的比例可以最大限度的抑制细菌的增长。另外,本发明的工艺方案保持了组合 物的广谱抑菌功效,并大幅减弱了产品的颜色,产品稳定,适合添加到化妆品中作为防腐剂 使用。

[0131] 实施例6

[0132] 1 配方

[0133]

Figure CN105076246AD00111

[0134] 2制备工艺

[0135] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中,加热至温度为85 °C,搅拌 300rpm/min,慢慢加入AVC,得水相。

[0136] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中,加热至温度为85°C,搅拌为 300rpm/min,即得油相。

[0137] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相,均质(速度为500rpm/ min) 5min,搅拌、降温至45°C。

[0138] (4)取实施例1所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤(3)降温后的体 系中,搅拌(速度为500rpm/min),降至室温,得到化妆品。

[0139] 实施例7

[0140] 1 配方

[0141]

Figure CN105076246AD00112

[0142] 2制备工艺

[0143] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中,加热至温度为85°C,搅拌 300rpm/min,慢慢加入AVC,得水相。

[0144] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中,加热至温度为85°C,搅拌为 300rpm/min,即得油相。

[0145] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相,均质(速度为500rpm/ min) 5min,搅拌、降温至45°C。

[0146] (4)取实施例2所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤(3)降温后的体 系中,搅拌(速度为500rpm/min),降至室温,得到化妆品。

[0147] 实施例8

[0148] 1配方

Figure CN105076246AD00121

[0151] 2制备工艺

[0152] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中,加热至温度为85°C,搅拌 300rpm/min,慢慢加入AVC,得水相。

[0153] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中,加热至温度为85°C,搅拌为 300rpm/min,即得油相。

[0154] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相,均质(速度为500rpm/ min) 5min,搅拌、降温至45°C。

[0155] (4)取实施例1所得天然抗菌剂、1,2-辛二醇、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤 (3)降温后的体系中,搅拌(速度为500rpm/min),降至室温,得到化妆品。

[0156] 对比例4

[0157]

Figure CN105076246AD00131

[0158] 2制备工艺

[0159] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中,加热至温度为85°C,搅拌 300rpm/min,慢慢加入AVC,得水相。

[0160] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中,加热至温度为85°C,搅拌为 300rpm/min,即得油相。

[0161] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相,均质(速度为500rpm/ min) 5min,搅拌、降温至45°C。

[0162] (4)取对比例1所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤(3)降温后的体 系中,搅拌(速度为500rpm/min),降至室温,得到化妆品。

[0163] 对比例5

[0164]

Figure CN105076246AD00132

[0165] 2制备工艺

[0166] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中,加热至温度为85 °C,搅拌 300rpm/min,慢慢加入AVC,得水相。

[0167] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中,加热至温度为85°C,搅拌为 300rpm/min,即得油相。

[0168] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相,均质(速度为500rpm/ min) 5min,搅拌、降温至45°C。

[0169] (4)取1,2-辛二醇、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤(3)降温后的体系中,搅拌 (速度为500rpm/min),降至室温,得到化妆品。

[0170] 实施例9

Figure CN105076246AD00141

[0173] 2制备工艺

[0174] (1)取水、甘油和乙二胺四乙酸二钠加入反应釜中,加热至温度为85°C,搅拌 300rpm/min,慢慢加入AVC,得水相。

[0175] (2)取A-165、C16~18醇、山茶籽油放至反应釜中,加热至温度为85°C,搅拌为 300rpm/min,即得油相。

[0176] (3)将步骤⑵得到的油相加入步骤⑴得到的水相,均质(速度为500rpm/ min) 5min,搅拌、降温至45°C。

[0177] (4)取实施例4所得天然抗菌剂、胶原蛋白和燕麦葡聚糖加至步骤(3)降温后的体 系中,搅拌(速度为500rpm/min),降至室温,得到化妆品。

[0178] 实施例10防腐挑战试验

[0179] 1.防腐挑战接种的方式和数量

[0180] 采用混合菌接种。待测样品中接入金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌至接种 数量为1〇 5~10 6CFU/g或105~10 6CFU/mL;白色念珠球菌和黑曲霉菌接种数量为104CFU/ g或104CFU/mL,各三个平行,以生理盐水作为空白对照。

[0181] 2.防腐挑战分离检测

[0182] 接种后的样品在特定时间分离检测:0小时、48小时、7天、14天、21天和28天。 取样后,根据实验需要,用生理盐水稀释后取100yL涂布于TSB和SDB培养基平板,在 28°C± 1 °C或36°C± 1 °C培养后菌落计数。

[0183] 3•评判标准

[0184] 要求在第7天时,细菌降低99. 9 %,黑曲霉菌和白色念珠球菌各降低90 %,并且在 28天内持续下降,则通过防腐挑战试验。

[0185] 如果混合菌接种的三个平行试验中任何一个微生物数量的平均值,在第7天时下 降到 100CFU/g(CFU/mL)以下,在 28 天内全部降至 0CFU/g(CFU/mL)或< 10CFU/g(CFU/mL), 那么视为防腐效果优秀。防腐挑战结果参见表2~7,表2~7依次为0小时、48小时、7 天、14天、21天和28天防腐挑战结果。

[0186] 在4个应用的实施例(实施例6~9)及应用的对比例(对比例4和5)样品的防 腐挑战实验中,4个应用的实施例对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和 黑曲霉在第7天时,菌浓度均小于10CFU/g,在第28天时菌浓度仍小于10CFU/g,表明该4 种样品对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠球菌及黑曲霉菌的防腐挑战优 秀。

[0187] 表2 0小时防腐挑战结果

[0188]

Figure CN105076246AD00151

[0189] 表3 48小时防腐挑战结果

[0190]

Figure CN105076246AD00161

[0194] 表5 14天防腐挑战结果

[0195]

Figure CN105076246AD00171

[0197] 表6 21天防腐挑战结果

[0198]

Figure CN105076246AD00181

[0199] 表7 28天防腐挑战结果

[0200]

Figure CN105076246AD00182

[0201]

Figure CN105076246AD00191

[0202] 实施例11多次皮肤刺激性试验

[0203] 1.染毒方法:取普通级新西兰兔16只,分成4组,每组4只,雌雄各半。试验前将 实验动物背部脊柱两侧被毛剪掉,去毛范围左、右各约3cmX3cm。取受试物约0. 5g涂抹在 动物左侧皮肤上,涂抹面积约2. 5cmX2. 5cm,每天涂抹1次,连续涂抹14天,另一侧作空白 对照。从第二天开始,每次涂抹前剪毛,用纯净水清除残留受试物,对照区作同样处理。一 小时后观察结果。

[0204] 2.观察操作:在自然光下观察皮肤反应,按表8(皮肤刺激反应评分标准)给出的 评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分,连续观察14天。

[0205] 3.结果判定:按下列公式计算每天每只动物平均积分,进行刺激强度评价。

[0206] 每天每只动物平均积分=(E红斑和水肿/受试动物)/14。

[0207] 表8皮肤刺激反应评分标准

[0208]

Figure CN105076246AD00192

[0209]

Figure CN105076246AD00201

[0210] 4.每组样品的试验结果分别见表9~12。

[0211] 表9实施例6对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果

[0212]

Figure CN105076246AD00202

[0213]

Figure CN105076246AD00211

[0214] 表10实施例7对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果

[0215]

Figure CN105076246AD00212

[0216]

Figure CN105076246AD00221

[0217] 表11实施例8对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果

[0218]

Figure CN105076246AD00222

[0219] 表12实施例9对新西兰兔多次皮肤刺激性试验结果

[0220]

Figure CN105076246AD00223

[0221]

[0222] 从应用的4个实施例(实施例6~

Figure CN105076246AD00231

9)的比较中,可以看出,酶解工艺下制取的天 然抗菌剂,其刺激性远远低于不酶解条件下制取的抗菌剂;说明酶解能够很好地降低抗菌 剂的刺激性。

[0223] 实施例12人体皮肤斑贴试验

[0224] 1.斑试方法:选用合格的斑试器,以封闭式斑贴试验方法,将受试物约0. 020g~ 0.025g涂于斑试器内,外用专用胶带贴敷于受试者前臂曲侧,24小时后去除受试物,于去 除受试物斑试器后30min,待压痕消失后观察皮肤反应,按《化妆品卫生规范》(2007年版) 中皮肤反应分组标准记录其结果。

[0225] 2.结果评价:按表13 (皮肤不良反应分组标准)给出的分组标准记录反应结果, 结果参见表14,表14为实施例6~9样品对人体皮肤斑贴试验结果。

[0226] 表13皮肤不良反应分组标准

[0227]

Figure CN105076246AD00241

[0228] 表14实施例6~9样品对人体皮肤斑贴试验结果

[0229]

Figure CN105076246AD00242

[0230] 表14各组的人体皮肤斑贴试验结果显示:在实施例6~8中30例受试者皮肤全 部呈阴性反应,而实施例9有5例为可疑反应,仅有微弱红斑(评分等级:0级)。依据《化 妆品卫生规范》(2007年版)人体皮肤斑贴试验判断标准,实施例6~8所得样品对人体无 皮肤不良反应,而实施例9所得样品为可疑反应,进一步说明本发明中酶解的意义。

Claims (10)

1. 一种抗菌中药组合物,由包括紫苏子、广藿香和松萝的原料制得。
2. 根据权利要求1所述的抗菌中药组合物,其特征在于,以重量份计,所述原料包括 60~80份的紫苏子、10~20份的广藿香和A份的松萝,O < A < 20。
3. 根据权利要求2所述的抗菌中药组合物,其特征在于,以重量份计,所述原料包括60 份的紫苏子、20份的广藿香和20份的松萝。
4. 根据权利要求2所述的抗菌中药组合物,其特征在于,以重量份计,所述原料包括80 份的紫苏子、10份的广藿香和10份的松萝。
5. 根据权利要求2所述的抗菌中药组合物,其特征在于,以重量份计,所述原料包括70 份的紫苏子、15份的广藿香和15份的松萝。
6. 权利要求1~5任一项所述的抗菌中药组合物的制备方法,包括以下步骤: 将紫苏子、广藿香和松萝混合后,采用乙醇渗漉法提取,得到抗菌中药组合物。
7. 根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,在混合后进行提取前,还包括: 采用脂肪酶进行酶解。
8. 根据权利要求6或7所述的制备方法,其特征在于,所述混合具体为: 将紫苏子、广藿香和松萝混合,加水碾磨至60~200目,调节pH值为4~7。
9. 根据权利要求8所述的制备方法,其特征在于,所述提取的时间为24h~30h ; 在提取后还包括: 过滤,取滤液; 将所述滤液依次进行浓缩、定容和陈化,得到抗菌中药组合物。
10. 权利要求1~5任一项所述的抗菌中药组合物或权利要求6~9任一项所述的制 备方法制得的抗菌中药组合物作为药物、化妆品或食品中防腐剂的用途。
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