CN105061552A - 一种提高蛋白质结晶率的装置 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种提高蛋白质结晶率的装置，属于蛋白质结晶领域。将蛋白质溶液置于处理池中，同时打开水龙头出水，使水流速度增大至0.6L/S，流速大，将抽滤瓶中的空气通过通气管抽出，产生负压，对布氏漏斗中的半透膜施压，从而使得蛋白质溶液中的小分子透过半透膜滴落于抽滤瓶，而蛋白质溶液中的大分子通过出口进入结晶池，蛋白质溶液中的大分子从隔离板底部透过，而小分子被隔离板阻挡在隔离板左侧，接枝玻璃上负载蛋白质吸引大分子静置于接枝玻璃即可。本发明的有益效果在于：使得未饱和状态和过饱和状态中的生物大分子结晶，提高了蛋白质结晶率；操作简单，所需成本低。
Description
技术领域
本发明涉及一种提高蛋白质结晶率的装置，属于蛋白质结晶领域。
背景技术
根据结构基因组计划的统计数据，从纯度很高的生物大分子到生长出衍射质量的生物大分子晶体，其成功率不足20％.获得生物大分子晶体的过程是从表达开始到获得结构的一系列流程中，成功率最低的环节之一。因此，生长高质量生物大分子晶体仍是结构生物学领域的瓶颈问题之一。
生物大分子结晶的方法主要有气相扩散法、配液结晶法、液-液阔散发和平衡透析法，其中气相扩散法是在一个封闭系统内使得生物大分子液滴逐渐达到饱和，从而形成晶体，如果生物大分子未达到饱和状态或达到过饱和度，即使所使用的筛选试剂能在更高浓度下获得晶体，但在实际筛选时却得不到晶体。
发明内容
本发明主要解决的技术问题：针对生物大分子在未饱和状态和过饱和状态，很难形成晶体，提供了一种提高蛋白质结晶率的装置，该方法首先通过层层筛选，筛选出蛋白质大分子，再在接枝玻璃的作用下，提供一种安静的，适宜大分子结晶的环境，该方法使得未饱和状态和过饱和状态中的生物大分子结晶，提高了结晶率，操作简单，成本低。为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案：
一种提高蛋白质结晶率的装置，包括处理池、半透膜、抽滤瓶、出口、隔离板、结晶池、接枝玻璃、通气管、水龙头，其特征在于：将蛋白质溶液置于处理池中，同时打开水龙头出水，使水流速度增大至0.6L/S，流速大，将抽滤瓶中的空气通过通气管抽出，产生负压，对布氏漏斗中的半透膜施压，从而使得蛋白质溶液中的小分子透过半透膜滴落于抽滤瓶，而蛋白质溶液中的大分子通过出口进入结晶池，结晶池的隔离板与距离结晶池底部60～70mm，蛋白质溶液中的大分子从隔离板底部透过，而小分子被隔离板阻挡在隔离板左侧，接枝玻璃上负载蛋白质吸引大分子静置于接枝玻璃，待放置4～1200h，取出接枝玻璃，在显微镜下观察，统计出现蛋白质晶体的条件数目，所述的处理池与结晶池按容积的比为2:1，而隔离板置于结晶池左侧的1/3之处。
所述的接枝玻璃具体制备步骤为：
（1）将用酒精超声处理的玻璃片置于质量分数40%氢氟酸中，浸泡2～4h，取出，再用去离子水清洗玻璃表面，自然风干，备用；
（2）将蛋白质溶液加入质量分数为1%的NaCl溶液，直至溶液中出现乳白混浊色，将其通过离心分离机分离，取上清液，放置5～10天，得蛋白质晶种；
（3）将明胶涂抹于步骤（1）预处理的玻璃片上，厚度为10～15mm后，将蛋白质晶种滴入玻璃片上，即可得到负载蛋白质的接枝玻璃。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）使得未饱和状态和过饱和状态中的生物大分子结晶，提高了蛋白质结晶率；
（2）操作简单，所需成本低。
附图说明
图1为本发明“一种提高蛋白质结晶率的装置”的正面图。
其中，1、处理池；2、半透膜；3、抽滤瓶；4、出口；5、隔离板；6、结晶池；7、接枝玻璃；8、通气管；9、水龙头。
具体实施方式
一种提高蛋白质结晶率的装置，包括处理池、半透膜、抽滤瓶、出口、隔离板、结晶池、接枝玻璃、通气管、水龙头，其特征在于：将蛋白质溶液置于处理池中，同时打开水龙头出水，使水流速度增大至0.6L/S，流速大，将抽滤瓶中的空气通过通气管抽出，产生负压，对布氏漏斗中的半透膜施压，从而使得蛋白质溶液中的小分子透过半透膜滴落于抽滤瓶，而蛋白质溶液中的大分子通过出口进入结晶池，结晶池的隔离板与距离结晶池底部60～70mm，蛋白质溶液中的大分子从隔离板底部透过，而小分子被隔离板阻挡在隔离板左侧，接枝玻璃上负载蛋白质吸引大分子静置于接枝玻璃，待放置4～1200h，取出接枝玻璃，在显微镜下观察，统计出现蛋白质晶体的条件数目，所述的处理池与结晶池按容积的比为2:1，而隔离板置于结晶池左侧的1/3之处。其中接枝玻璃具体制备步骤为：首先将用酒精超声处理的玻璃片置于质量分数40%氢氟酸中，浸泡2～4h，取出，再用去离子水清洗玻璃表面，自然风干，备用；将蛋白质溶液加入质量分数为1%的NaCl溶液，直至溶液中出现乳白混浊色，将其通过离心分离机分离，取上清液，放置5～10天，得蛋白质晶种；将明胶涂抹于步骤（1）预处理的玻璃片上，厚度为10～15mm后，将蛋白质晶种滴入玻璃片上，即可得到负载蛋白质的接枝玻璃。
实例1
一种提高蛋白质结晶率的装置，包括处理池、半透膜、抽滤瓶、出口、隔离板、结晶池、接枝玻璃、通气管、水龙头，其特征在于：将蛋白质溶液置于处理池中，同时打开水龙头出水，使水流速度增大至0.6L/S，流速大，将抽滤瓶中的空气通过通气管抽出，产生负压，对布氏漏斗中的半透膜施压，从而使得蛋白质溶液中的小分子透过半透膜滴落于抽滤瓶，而蛋白质溶液中的大分子通过出口进入结晶池，结晶池的隔离板与距离结晶池底部70mm，蛋白质溶液中的大分子从隔离板底部透过，而小分子被隔离板阻挡在隔离板左侧，接枝玻璃上负载蛋白质吸引大分子静置于接枝玻璃，待放置1200h，取出接枝玻璃，在显微镜下观察，统计出现蛋白质晶体的条件数目，所述的处理池与结晶池按容积的比为2:1，而隔离板置于结晶池左侧的1/3之处。其中接枝玻璃具体制备步骤为：首先将用酒精超声处理的玻璃片置于质量分数40%氢氟酸中，浸泡4h，取出，再用去离子水清洗玻璃表面，自然风干，备用；将蛋白质溶液加入质量分数为1%的NaCl溶液，直至溶液中出现乳白混浊色，将其通过离心分离机分离，取上清液，放置5～10天，得蛋白质晶种；将明胶涂抹于预处理的玻璃片上，厚度为15mm后，将蛋白质晶种滴入玻璃片上，即可得到负载蛋白质的接枝玻璃。在显微镜下观察，会发现蛋白质结晶率达到了99％以上。
实例2
一种提高蛋白质结晶率的装置，包括处理池、半透膜、抽滤瓶、出口、隔离板、结晶池、接枝玻璃、通气管、水龙头，其特征在于：将蛋白质溶液置于处理池中，同时打开水龙头出水，使水流速度增大至0.6L/S，流速大，将抽滤瓶中的空气通过通气管抽出，产生负压，对布氏漏斗中的半透膜施压，从而使得蛋白质溶液中的小分子透过半透膜滴落于抽滤瓶，而蛋白质溶液中的大分子通过出口进入结晶池，结晶池的隔离板与距离结晶池底部70mm，蛋白质溶液中的大分子从隔离板底部透过，而小分子被隔离板阻挡在隔离板左侧，接枝玻璃上负载蛋白质吸引大分子静置于接枝玻璃，待放置15h，取出接枝玻璃，在显微镜下观察，统计出现蛋白质晶体的条件数目，所述的处理池与结晶池按容积的比为2:1，而隔离板置于结晶池左侧的1/3之处。其中接枝玻璃具体制备步骤为：首先将用酒精超声处理的玻璃片置于质量分数40%氢氟酸中，浸泡2h，取出，再用去离子水清洗玻璃表面，自然风干，备用；将蛋白质溶液加入质量分数为1%的NaCl溶液，直至溶液中出现乳白混浊色，将其通过离心分离机分离，取上清液，放置5天，得蛋白质晶种；将明胶涂抹于预处理的玻璃片上，厚度为10mm后，将蛋白质晶种滴入玻璃片上，即可得到负载蛋白质的接枝玻璃。在显微镜下观察，会发现蛋白质结晶率达到了99.1％以上。
实例3
一种提高蛋白质结晶率的装置，包括处理池、半透膜、抽滤瓶、出口、隔离板、结晶池、接枝玻璃、通气管、水龙头，其特征在于：将蛋白质溶液置于处理池中，同时打开水龙头出水，使水流速度增大至0.6L/S，流速大，将抽滤瓶中的空气通过通气管抽出，产生负压，对布氏漏斗中的半透膜施压，从而使得蛋白质溶液中的小分子透过半透膜滴落于抽滤瓶，而蛋白质溶液中的大分子通过出口进入结晶池，结晶池的隔离板与距离结晶池底部65mm，蛋白质溶液中的大分子从隔离板底部透过，而小分子被隔离板阻挡在隔离板左侧，接枝玻璃上负载蛋白质吸引大分子静置于接枝玻璃，待放置50h，取出接枝玻璃，在显微镜下观察，统计出现蛋白质晶体的条件数目，所述的处理池与结晶池按容积的比为2:1，而隔离板置于结晶池左侧的1/3之处。其中接枝玻璃具体制备步骤为：首先将用酒精超声处理的玻璃片置于质量分数40%氢氟酸中，浸泡3h，取出，再用去离子水清洗玻璃表面，自然风干，备用；将蛋白质溶液加入质量分数为1%的NaCl溶液，直至溶液中出现乳白混浊色，将其通过离心分离机分离，取上清液，放置5天，得蛋白质晶种；将明胶涂抹于预处理的玻璃片上，厚度为12mm后，将蛋白质晶种滴入玻璃片上，即可得到负载蛋白质的接枝玻璃。在显微镜下观察，会发现蛋白质结晶率达到了99.2％以上。
Claims (2)
1.一种提高蛋白质结晶率的装置，包括处理池（1）、半透膜（2）、抽滤瓶（3）、出口（4）、隔离板（5）、结晶池（6）、接枝玻璃（7）、通气管（8）、水龙头（9），其特征在于：将蛋白质溶液置于处理池（1）中，同时打开水龙头（9）出水，使水流速度增大至0.6L/S，流速大，将抽滤瓶（3）中的空气通过通气管（8）抽出，产生负压，对布氏漏斗中的半透膜（2）施压，从而使得蛋白质溶液中的小分子透过半透膜（2）滴落于抽滤瓶（3），而蛋白质溶液中的大分子通过出口（4）进入结晶池（6），结晶池（6）的隔离板（5）与距离结晶池底部60～70mm，蛋白质溶液中的大分子从隔离板（5）底部透过，而小分子被隔离板（5)阻挡在隔离板（5)左侧，接枝玻璃（7）上负载蛋白质吸引大分子静置于接枝玻璃（7），待放置4～1200h，取出接枝玻璃（8），在显微镜下观察，统计出现蛋白质晶体的条件数目，所述的处理池（1）与结晶池（6）按容积的比为2:1，而隔离板（5）置于结晶池左侧的1/3之处。
2.根据权利要求1所述的一种提高蛋白质结晶率的装置，其特征在于：所述的接枝玻璃（8）具体制备步骤为：
（1）将用酒精超声处理的玻璃片置于质量分数40%氢氟酸中，浸泡2～4h，取出，再用去离子水清洗玻璃表面，自然风干，备用；
（2）将蛋白质溶液加入质量分数为1%的NaCl溶液，直至溶液中出现乳白混浊色，将其通过离心分离机分离，取上清液，放置5～10天，得蛋白质晶种；
（3）将明胶涂抹于步骤（1）预处理的玻璃片上，厚度为10～15mm后，将蛋白质晶种滴入玻璃片上，即可得到负载蛋白质的接枝玻璃。
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Publications (1)
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Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105061552A (zh) |
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2015
- 2015-09-02 CN CN201510554215.2A patent/CN105061552A/zh active Pending
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