CN105055514B - 一种中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药保健品技术领域，公开了一种中药组合物及其制备方法和应用。本发明所述中药组合物由三七二醇皂苷、丹参提取物和葛根提取物组成，所述丹参提取物和葛根提取物分别由丹参和葛根经乙醇回流提取获得。本发明选择三七、丹参和葛根为中药复方，通过现代提取技术获得一种新型中药组合物，以较少组分发挥降低酒精性肝损伤的辅助保护功能，具体为显著降低由酒精性肝损伤引发的甘油三酯和极低密度脂蛋白升高的含量，能够用于保肝护肝药物和保健品的制备中。

Description

一种中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中药保健品领域，具体的说是涉及一种中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

当前，我国是肝病发生率较高的国家之一，寻找和研究治疗肝病的有效药物，一直是广大科研工作者的心愿，越来越得到重视，因此对具有保肝作用的保健品也越来越受到人们的重视。

中药保健品以其副作用小为优点深受广大消费者青睐。市面上现有较多的有助于降低化学性肝损伤(酒精性肝损伤)的中药保健品，如表1记载的多种市售产品：

表1

虽然市面上存在多种中药保肝的保健品，但是这些产品所采用的中药种类过多，虽然中药副作用小，但是多种中药组分依然对消费者的健康安全造成风险，另外对于生产者而言，过多的中药组分也会加大生产成本和工艺复杂程度，因此，如何能够以较少的中药组分来实现对酒精性肝损伤有辅助保护功能是一个具有前景性的研究方向。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种中药组合物及其制备方法和应用，使得所述中药组合物以较少组份实现对酒精性肝损伤有辅助保护功能，体现在降低酒精性肝损伤中甘油三酯和极低密度脂蛋白的含量方面具有显著效果，并可以应用于护肝保健品的制备中。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种中药组合物，由三七二醇皂苷、丹参提取物和葛根提取物组成，所述丹参提取物和葛根提取物分别由丹参和葛根经乙醇回流提取获得。

其中，作为优选，所述中药组合物由100～200重量份三七二醇皂苷、5～15重量份丹参提取物和20～30份葛根提取物组成。更优选地，所述中药组合物由150重量份三七二醇皂苷、10重量份丹参提取物和25份葛根提取物组成。

作为优选，所述三七二醇皂苷由三七经乙醇渗漉、大孔吸附树脂层析获得。

作为优选，所述大孔吸附树脂为D101型大孔吸附树脂。

以本发明所述中药组合物为测试对象，SD大鼠和昆明小鼠经口染毒后未出现明显中毒症状。在两周观察期内无动物死亡，剖杀存活动物，未见内脏有明显异常改变。结果显示本发明所述中药组合物对雌雄性SD大鼠以及昆明小鼠的急性经口最大耐受剂量(MTD)均大于10/kg，属实际无毒类。

同时，连续30天经口灌胃给予动物后，动物生长正常。在酒精性肝损伤模型建立的基础上，动物血清中极低密度脂蛋白(VLVD)和甘油三酯(TG)含量降低(P<0.05，P<0.01)，且肝细胞脂肪变性显著轻于模型对照组(P<0.01，P<0.05)。按评价标准，本发明所述中药组合物对动物急性酒精性肝损伤具有辅助保护功能。

基于此，本发明提供了所述中药组合物在制备降低酒精性肝损伤药物和保健品中的应用。

作为优选，所述降低酒精性肝损伤为降低酒精性肝损伤导致的甘油三酯和极低密度脂蛋白的含量升高的损伤。

作为优选，所述药物和保健品为胶囊、片剂、粉剂、口服液或颗粒剂。

此外，本发明还提供了所述中药组合物的制备方法，包括：

将三七清洗、干燥后粉碎，以乙醇浸泡，然后开始渗漉并收集三七渗漉液，浓缩成浸膏，然后采用大孔吸附树脂层析，收集三七二醇皂苷洗脱液浓缩、干燥，获得三七二醇皂苷；

将葛根清洗、干燥后切段，乙醇回流提取，提取液浓缩后干燥获得葛根提取物；

将丹参清洗、干燥后切段，乙醇回流提取，提取液浓缩后干燥获得丹参提取物；

混合三七二醇皂苷、葛根提取物以及丹参提取物获得所述中药组合物。

作为优选，所述制备方法包括：

将三七清洗、干燥后粉碎，以60％乙醇浸泡≥24h，然后装筒开始渗漉，控制流速为5-8ml/min·千克药材，收集三七渗漉液，将三七渗漉液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，然后加水搅拌成三七水溶液采用大孔吸附树脂层析，收集三七二醇皂苷洗脱液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，将浸膏干燥，获得三七二醇皂苷；

将葛根清洗、干燥后切段，10倍量75％乙醇85℃提取2小时，过80目筛，滤渣再加8倍量75％乙醇提取2小时，合并2次提取液，提取液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，将浸膏干燥，获得葛根提取物；

将丹参清洗、干燥后切段，用6倍量95％乙醇浸泡24h，水浴回流提取2次，每次1h，回流温度85-90℃，合并2次提取液，提取液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，将浸膏干燥，获得丹参提取物；

混合三七二醇皂苷、葛根提取物以及丹参提取物获得所述中药组合物。

进一步优选地，所述采用大孔吸附树脂层析具体为：

三七水溶液上柱流速≤600L/h，上柱后，先用水以800L/h洗半小时，再用水以1200L/h洗半小时，最后用水以2000L/h洗1.5小时；水洗后，再用4000L 60％乙醇洗脱，流速为≤800L/h；

三七二醇皂苷洗脱液以乙醇浓度为10％时开始收集，当60％乙醇加完时，停止收集三七二醇皂苷洗脱液。

根据本发明提供的应用，本发明还提供一种护肝保健品，包括本发明所述中药组合物和药学上可接受的辅料。

其中，作为优选，所述护肝保健品为胶囊、片剂、粉剂、口服液或颗粒剂。

作为优选，所述辅料包括微晶纤维素、预胶化淀粉、糊精、淀粉和硬脂酸镁。

更优选地，所述护肝保健品为片剂，所述辅料为微晶纤维素、预胶化淀粉、糊精、淀粉和硬脂酸镁，用量如下：

三七提取物：150重量份；丹参酮提取物：10重量份；葛根提取物：25重量份；预胶化淀粉：120重量份；糊精：120重量份；微晶纤维素：60重量份；淀粉：16重量份；硬脂酸镁：2.5重量份。

由以上技术方案可知，本发明选择三七、丹参和葛根为中药复方，通过现代提取技术获得一种新型中药组合物，以较少组分发挥降低酒精性肝损伤的辅助保护功能，具体为显著降低由酒精性肝损伤引发的甘油三酯和极低密度脂蛋白升高的含量，能够用于保肝护肝药物和保健品的制备中。

具体实施方式

本发明实施例公开了一种中药组合物及其制备方法和应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品及方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种中药组合物及其制备方法和应用进行详细说明。

实施例1：本发明所述中药组合物的制备

1、三七二醇皂苷的制备

将三七(头子)清洗干净，温度控制在55-60℃，干燥至手摸无水分后粉碎成粉，以60％乙醇浸泡≥24h，然后装筒开始渗漉，控制流速为5-8ml/min·千克药材，收集三七渗漉液，将三七渗漉液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，然后加水搅拌成三七水溶液采用大孔吸附树脂层析；

三七水溶液上柱流速≤600L/h，上柱后，先用水以800L/h洗半小时，再用水以1200L/h洗半小时，最后用水以2000L/h洗1.5小时；水洗后，再用4000L 60％乙醇洗脱，流速为≤800L/h；

三七二醇皂苷洗脱液以乙醇浓度为10％时开始收集，当60％乙醇加完时，停止收集三七二醇皂苷洗脱液。

收集三七二醇皂苷洗脱液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，将浸膏喷雾干燥，获得三七二醇皂苷；

2、葛根提取物的制备

将葛根清洗干净，温度控制在55-60℃，干燥约6小时，切成0.5-1cm小段，用10倍量75％乙醇85℃提取2小时，过80目筛，滤渣再加8倍量75％乙醇提取2小时，合并2次提取液，提取液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，将浸膏放入箱式微波真空干燥机内，控制温度65-70℃，真空度0.08-0.09MPa，功率20-25Kw，干燥80分钟，获得葛根提取物；

3、丹参提取物的制备

将丹参清洗干净，温度控制在55-60℃，干燥约6小时，切成0.5-1cm小段，用6倍量95％乙醇浸泡24h，水浴回流提取2次，每次1h，回流温度85-90℃，合并2次提取液，提取液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，将浸膏放入箱式微波真空干燥机内，控制温度65-70℃，真空度0.08-0.09MPa，功率20-25Kw，干燥80分钟，获得丹参提取物；

4、中药组合物的制备

中药组合物1：将25份葛根提取物、10份丹参提取物粉碎成细粉，与150份三七二醇皂苷混合均匀，获得中药组合物；

中药组合物2：将20份葛根提取物、5份丹参提取物粉碎成细粉，与100份三七二醇皂苷混合均匀，获得中药组合物；

中药组合物3：将30份葛根提取物、15份丹参提取物粉碎成细粉，与200份三七二醇皂苷混合均匀，获得中药组合物；

实施例2：护肝片的制备

将25份葛根提取物、10份丹参提取物、150份三七二醇皂苷、60份微晶纤维素、120份预胶化淀粉、120份糊精用三维混合机混合10分钟；然后用16份淀粉煮浆法制备14％淀粉浆；将淀粉浆与上述混合物混匀，用摇摆式震荡筛进行湿法制粒；颗粒用热风循环烘箱在60℃条件下干燥3小时，取出；用快速水分测定仪检查颗粒水分(小于10％)；再加2.5重量份硬脂酸镁总混后压片；然后进行薄膜包衣即得。

实施例3：安全性检测

1、试验动物：SPF级SD大鼠20只，雌雄各半，体重180g～220g；SPF级昆明小鼠20只，雌雄各半，体重18g～22g，均由成都达硕生物科技有限公司提供，合格证号：SCXK(川)2008－24号。试验前检疫一周，整个试验过程中，动物自由摄食饮水，室温21℃～24℃，相对湿度50％～65％。

2、试验方法

大鼠急性经口毒性试验：以本发明中药组合物1为检测对象，采用最大耐受剂量法进行，试验设10g/kg一个剂量组。每组雌雄SD大鼠各10只。样品配制：准确称取样品50g，蒸馏水溶解后配制到200ml，以2.0ml/100g.bw于动物空腹下两次经口灌胃，间隔4h。灌胃后观察其中毒症状、体征等，连续观察二周，判定毒性分类。

小鼠急性经口毒性试验：以本发明中药组合物1为检测对象，采用最大耐受剂量法进行，试验设10g/kg一个剂量组。每组雌雄昆明小鼠各10只。样品配制：准确称取样10g，蒸馏水溶解后配制到40ml，以2.0ml/100g.bw于动物空腹下两次经口灌胃，间隔4h。灌胃后观察其中毒症状、体征等，连续观察二周，判定毒性分类。

3、试验结果

由表2和表3结果可知，本发明所述中药组合物1对雌、雄性SD大鼠和昆明小鼠的急性经口最大耐受剂量(MTD)均大于10g/kg，属实际无毒类。按照本实施例方法以本发明中药组合物2和3为检测对象进行试验，检测结果也属于实际无毒。

表2本发明所述中药组合物对SD大鼠急性经口毒性试验结果

表3本发明所述中药组合物对昆明小鼠急性经口毒性试验结果

实施例4：本发明中药组合物对酒精肝损伤(即化学性肝损伤)有辅助保护的功能评价

1、检测原理

机体大量摄入乙醇后，在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化，使三羧酸循环和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢。乙醇通过增加甘油三酯合成，减少脂肪氧化，降低肝脏运出脂肪的功能，增加脂肪组织的脂肪动员，引起早期酒精性脂肪肝和高脂血症。

2、实验动物：SPF级雌性SD大鼠，体重为180-220g，由成都达硕生物科技有限公司提供，合格证号：SCXK(川)2008-24号。适应性喂养后进行试验，整个实验过程中，动物饲养于屏障级动物房(许可证号：SYXK(川)2011-043号)。动物自由摄食和饮水，动物房温度21℃～24℃，相对湿度50％～65％。

3、实验方法

50只SD大鼠分五组，每组10只，以本发明中药组合物1为受试药物，试验设50mg/kg.bw、100mg/kg.bw和200mg/kg.bw三个剂量组，另设阴性对照组和乙醇模型对照组。

分别称取0.5g、1.0g和2.0g本发明所述中药组合物1加蒸馏水至100ml，充分混匀备用。各剂量组分别按10ml/kg.bw每天一次经口灌胃，阴性对照组给予纯净水，连续给予30天，每周称两次体重，以此调整给受试样量。试验第31天将乙醇模型对照组和三个剂量组一次灌胃给予50％乙醇(用分析纯无水乙醇以蒸馏水稀释)造成肝损伤模型，灌胃量14ml/kg.bw(折合乙醇的剂量5600mg/kg.bw)，禁食16h后处死动物。动物腹腔注射60mg/kg BW的戊巴比妥钠溶液麻醉后腹主动脉采血，并取肝组织，进行各项指标的检测及病理组织学检查。

4、检测指标

检测护肝功效指标：血清中甘油三酯(TG)、极低密度脂蛋白(VLDL)、肝组织病理学检查(肝细胞脂肪变性)。采用酶法(GPO-PAP法)测定TG。ELISA法测定血清中极低密度脂蛋白(VLDL)测定。结果判定：乙醇模型对照组与阴性对照组比较，TG含量和VLDL含量升高有统计学意义(P＜0.05)，表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品组两项指标含量与乙醇模型对照组比较降低，差异有显著性(P＜0.05)，判定该指标结果阳性。

肝脏病理组织学变化、诊断标准和结果判定：从小鼠肝左叶中部做横切面取材，冰冻切片，苏丹Ⅲ染色。同时将肝组织固定，制作HE切片。镜检方法：从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用5倍物镜连续观察整张组织切片。主要观察脂滴在肝脏的分布范围和面积。评分标准如下表：

表4

肝细胞内脂滴无或稀少	0分
		含脂滴的肝细胞不超过1/4	1分
含脂滴的肝细胞不超过1/2	2分

含脂滴的肝细胞不超过3/4	3分
		肝组织几乎被脂滴代替	4分

判定标准：模型对照组与阴性对照组比较脂肪变性程度加重有统计学意义(P＜0.05)，表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品任何一个剂量组与乙醇模型对照组比较，脂肪变性程度减轻，有统计学意义(P＜0.05)，可判断为阳性结果。

5、实验结果

5.1、对大鼠体重的影响

由表5可见，各剂量组SD大鼠的初始体重与阴性对照组及乙醇模型对照组比较，经方差分析差异无显著性(P>0.05)，表明各组动物体重均衡。给样期间，各组动物体重及终重均无显著性差异(P>0.05)，在试验期间，动物生长良好，体重持续增长，未见动物出现中毒症状及死亡。

按照本实施例方法以本发明中药组合物2和3为检测对象，试验结果显示，在试验期间，动物生长良好，体重持续增长，未见动物出现中毒症状及死亡。

表5对SD大鼠体重的影响

5.2、对血清保肝生化指标的影响

由表6可见，乙醇模型对照组观察指标与阴性对照组比较，TG和VLDL含量升高，差异有显著性意义(P<0.05)，表明模型成功。低、中两个剂量组的TG和VLDL含量较模型对照降低(P<0.01)。

按照本实施例方法以本发明中药组合物2和3为检测对象，试验结果显示，低、中两个剂量组的TG和VLDL含量较模型对照降低(P<0.01)。

表6对血清保肝生化指标的影响(n＝10，)

注：与阴性对照组比较^△P<0.01，^△△P<0.01；与模型对照组比较*P<0.05,**P<0.01

5.3、肝脏组织病理学检查结果

由表7可知，乙醇模型对照组肝湿重及脏器系数均较阴性对照组高(P<0.05，P<0.01)，三个剂量组肝湿重及脏器系数均较乙醇模型组降低(P<0.05)。

按照本实施例方法以本发明中药组合物2和3为检测对象，试验结果显示，三个剂量组肝湿重及脏器系数均较乙醇模型组降低(P<0.05)。

表7对SD大鼠脏器的影响

由表8可知，乙醇模型对照组肝细胞脂变评分与阴性对照组比较，升高有显著性差异(P<0.01)，表明该模型建立成功。低、中剂量组肝细胞脂变评分明显降低，与模型组比较有显著性差异(P<0.01，P<0.05)。

按照本实施例方法以本发明中药组合物2和3为检测对象，试验结果显示，低、中剂量组肝细胞脂变评分明显降低，与模型组比较有显著性差异(P<0.01，P<0.05)。

表8对SD大鼠肝脏组织病理学检查结果(脂肪变性积分)

注：与阴性对照组比较^△P<0.01，^△△P<0.01，与模型对照组比较*P<0.05

综合上述所有实验结果，本发明所述中药组合物在酒精性肝损伤模型建立的基础上，能显著降低动物血清TG和VLDL含量，明显改善肝细胞脂肪变性，经统计学方差分析，差异均有显著性意义(P<0.01，P<0.05)，表明对动物酒精性肝损伤具有辅助保护功能。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (9)

1.一种具有降低酒精性肝损伤作用的中药组合物，其特征在于，由100~200重量份三七二醇皂苷、5~15重量份丹参提取物和20~30份葛根提取物组成，所述丹参提取物和葛根提取物分别由丹参和葛根经乙醇回流提取获得。

2.根据权利要求1所述中药组合物，其特征在于，所述三七二醇皂苷由三七经乙醇渗漉、大孔吸附树脂层析获得。

3.根据权利要求2所述中药组合物，其特征在于，所述大孔吸附树脂为D101型大孔吸附树脂。

4.权利要求1-3任意一项所述中药组合物在制备降低酒精性肝损伤药物和保健品中的应用。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述降低酒精性肝损伤为降低酒精性肝损伤导致的甘油三酯和极低密度脂蛋白的含量升高的损伤。

6.权利要求1-3任意一项所述中药组合物的制备方法，其特征在于，包括：

将三七清洗、干燥后粉碎，以乙醇浸泡，然后开始渗漉并收集三七渗漉液，浓缩成浸膏，然后采用大孔吸附树脂层析，收集三七二醇皂苷洗脱液浓缩、干燥，获得三七二醇皂苷；

将葛根清洗、干燥后切段，乙醇回流提取，提取液浓缩后干燥获得葛根提取物；

将丹参清洗、干燥后切段，乙醇回流提取，提取液浓缩后干燥获得丹参提取物；

混合三七二醇皂苷、葛根提取物以及丹参提取物获得所述中药组合物。

7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，包括：

将三七清洗、干燥后粉碎，以60%乙醇浸泡≥24h，然后装筒开始渗漉，控制流速为5-8ml/min·千克药材，收集三七渗漉液，将三七渗漉液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，然后加水搅拌成三七水溶液采用大孔吸附树脂层析，收集三七二醇皂苷洗脱液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，将浸膏干燥，获得三七二醇皂苷；

将葛根清洗、干燥后切段，10倍量75%乙醇85℃提取2小时，过80目筛，滤渣再加8倍量75%乙醇提取2小时，合并2次提取液，提取液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，将浸膏干燥，获得葛根提取物；

将丹参清洗、干燥后切段，用6倍量95%乙醇浸泡24h，水浴回流提取2次，每次1h，回流温度85-90℃，合并2次提取液，提取液浓缩到比重为1.08～1.12时收膏，浓缩温度≤70℃，将浸膏干燥，获得丹参提取物；

混合三七二醇皂苷、葛根提取物以及丹参提取物获得所述中药组合物。

8.根据权利要求6或7所述制备方法，其特征在于，所述采用大孔吸附树脂层析具体为：

三七水溶液上柱流速≤600 L/h，上柱后，先用水以800 L/h洗半小时，再用水以1200L/h洗半小时，最后用水以2000 L/h洗1.5小时；水洗后，再用4000L 60%乙醇洗脱，流速为≤800L/h；

三七二醇皂苷洗脱液以乙醇浓度为10%时开始收集，当60%乙醇加完时，停止收集三七二醇皂苷洗脱液。

9.一种护肝保健品，其特征在于，包括权利要求1-3任意一项所述中药组合物和药学上可接受辅料。