CN105030739A - 3,4,5-三甲氧基苯酚在制备防治糖尿病肾病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及3,4,5-三甲氧基苯酚在制备防治糖尿病肾病药物中的应用。3,4,5-三甲氧基苯酚具有治疗糖尿病肾病的新医药用途，可以抑制AGEs所致内皮细胞凋亡，降低AGEs所致系膜细胞氧应激水平，抑制AGEs所致巨噬细胞趋化增加，并可改善STZ所致糖尿病肾病模型大鼠尿微白蛋白、血压、血糖异常。3,4,5-三甲氧基苯酚可以和药物载体制备成药物组合物，进而制备成各种口服剂型，如颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂等，使用方便，安全可靠。

Description

3,4,5-三甲氧基苯酚在制备防治糖尿病肾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及化学医药技术领域，特别是涉及3,4,5-三甲氧基苯酚在制备防治糖尿病肾病药物中的应用。

背景技术

糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)是糖尿病最主要的微血管并发症之一，是目前引起终末期肾病(ESRD)的首要原因。临床上，糖尿病肾病主要表现为蛋白尿、高血压、进行性肾功能损害，其标志物为尿微白蛋白的出现。肾小球毛细血管氧化应激增加进而凋亡，以及轻微炎症的反复发作，是该病发展过程中的一个重要病理改变。同时，越来越多的研究表明，晚期糖基化终末产物(AGEs)参与了糖尿病及其并发症的整个发病过程，是极其重要的致病因素。AGEs参与多个发病进程，启动并诱发一系列促炎、氧化应激反应，最终造成血管病变。

国外研究资料显示，20年以上病程的糖尿病肾病患者发展为ESRD的发生率为40.8/1000人年，需要进行透析或移植等肾脏替代治疗。我国糖尿病肾病的患病率亦呈快速增长趋势，2009至2012年我国2型糖尿病患者的糖尿病肾病患病率在社区患者中为30％-50％，在住院患者中为40％左右。糖尿病肾病起病隐匿，一旦进入大量蛋白尿期后，进展至ESRD的速度大约为其他肾脏病变的14倍，因此早期诊断、预防与延缓糖尿病肾病的发生发展对提高糖尿病患者存活率、改善其生活质量具有重要意义。然而，目前糖尿病肾病的治疗主要通过控制病人血糖、血压、调节脂质代谢，都不曾达到理想的治疗效果，到病情发展至肾功能衰竭阶段时，只能采取透析治疗维持生命。

而3,4,5-三甲氧基苯酚(3,4,5-Trimethoxyphenol)是一种重要的医药中间体，被广泛应用于消炎、抗癌药物的合成，同时其本身也是黄酮类中药的主要合成原料，但其在糖尿病肾病药物中的应用，尚未见有报道。其分子式为C₉H₁₂O₄，CAS号为642-71-7，可以从桑白皮中分离得到，化学结构式为：

发明内容

基于此，本发明的目的之一在于提供3,4,5-三甲氧基苯酚在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。

具体技术方案如下。

3,4,5-三甲氧基苯酚在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种防治糖尿病肾病的药物组合物。

具体技术方案如下。

一种防治糖尿病肾病的药物组合物，所述药物组合物由作为活性成分的3,4,5-三甲氧基苯酚与载体制备而成，所述药物组合物中3,4,5-三甲氧基苯酚的含量为0.1-99.5wt％。

在其中一个实施例中，所述药物组合物中3,4,5-三甲氧基苯酚的含量为10.0-90.0wt％。

在其中一个实施例中，所述药物组合物的剂型包括口服剂、片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、胶囊剂、悬浮剂、酏剂。

本发明3,4,5-三甲氧基苯酚在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用具有以下优点和有益效果：

发明人通过大量实验和研究发现，3,4,5-三甲氧基苯酚具有防治糖尿病肾病的新医药用途，为糖尿病肾病患者提供了新的治疗候选药物。

发明人经过大量实验发现，3,4,5-三甲氧基苯酚可以抑制AGEs所致内皮细胞凋亡，降低AGEs所致系膜细胞氧应激水平，抑制AGEs所致巨噬细胞趋化增加，并可改善STZ所致糖尿病肾病模型大鼠尿微白蛋白、血压、血糖异常，从而也证实了3,4,5-三甲氧基苯酚对糖尿病肾病具有防治作用。

3,4,5-三甲氧基苯酚为从桑白皮中分离得到的天然活性成分，可以和药物载体制备成药物组合物，进而制备成各种口服剂型，如颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂等，使用方便，安全可靠。

附图说明

图1为实施例6中3,4,5-三甲氧基苯酚对HUVEC细胞凋亡AO-EB染色的荧光显微镜摄片图(×200)；

图2为实施例6中3,4,5-三甲氧基苯酚对HUVEC细胞凋亡百分率的影响实验结果图(与AGEs组相比：**p<0.01)；

图3为实施例7中3,4,5-三甲氧基苯酚对HBZY-1细胞DHE染色的荧光显微镜摄片图(×200)；

图4为实施例7中3,4,5-三甲氧基苯酚对HBZY-1细胞相对氧化应激系数的影响实验结果图(设正常组氧化应激系数为1，与AGEs组相比**p<0.01)；

图5为实施例8中3,4,5-三甲氧基苯酚对巨噬细胞趋化的影响实验结果图(与AGEs组相比**p<0.01)，A：趋化过膜细胞染色后洗脱读数；B：趋化过膜细胞计数；

图中，Low、Middle、High分别表示3,4,5-三甲氧基苯酚的浓度为5μmol/L、50μmol/L、500μmol/L。

具体实施方式

本实施方式提供了3,4,5-三甲氧基苯酚在制备治疗糖尿病肾病的药物中的应用。

本实施方式还提供了一种防治糖尿病肾病的药物组合物，所述药物组合物由作为活性成分的3,4,5-三甲氧基苯酚与药学上可接受的载体制备而成。

所述载体为稀释剂、赋形剂，如水；填充剂，如淀粉、蔗糖；粘合剂，如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂，如甘油；崩解剂，如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂，如季铵化合物；表面活性剂，如十六烷醇；吸附载体，如高岭土和皂粘土；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙和镁、和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂，如香味剂、甜味剂等。

所述药物组合物可以通过常规制剂方法制备成常规的剂型，主要为口服制剂，固体制剂如片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、胶囊剂等，液体制剂水或油悬浮剂或其它液体制剂如酏剂等。

所述药物组合物的使用剂量可随特定的给药方式、病症的严重程度等而相应调整。一般情况下，3,4,5-三甲氧基苯酚的临床口服用量根据动物(大鼠)体内实验的治疗最低起效量0.1mg/kg体重/日，按照体表面积换算得到人体的用药剂量为20-200μg/kg体重/日。

以下通过具体实施例对本发明做进一步的阐述。

实施例13,4,5-三甲氧基苯酚的制备

按照常规制备方法，从桑白皮中，提取分离纯化制得3,4,5-三甲氧基苯酚：

称取桑白皮10kg，切碎磨成粗粉，加100L水煎煮提取三次，每次1h，合并提取液，减压浓缩至适量体积，加至D101大孔树脂中，先用水洗脱，再用95％乙醇溶液洗脱，收集95％乙醇部分溶液洗脱液，减压浓缩得浸膏150g，取130g浸膏以硅胶层析柱分离，以石油醚-乙酸乙酯洗脱，经正相硅胶和SephadexLH-20反复纯化得50mg无色片状结晶，经鉴定为3,4,5-三甲氧基苯酚，HPLC检测其纯度>98％。

理化及波谱数据如下：mp.141-142℃，ESI-MSm/z：185[M+H]⁺；1HNMR(CD₃OD，400MHz)δ:6.09(2H,s,2,6-H)，3.76(6H,s,2x-OCH₃)，3.66(3H,s,-OCH₃)；¹³CNMR((CD₃)₂CO,100MHz)δ:155.4(C-1),155.0(C-3),132.3(C-4),94.0(C-2),61.3(4-OCH₃),56.4(3,5-OCH₃)。

化合物结构式为：

实施例2防治糖尿病肾病的药物组合物颗粒剂

本实施例提供一种防治糖尿病肾病的药物组合物颗粒剂，每包颗粒剂包括以下质量数的组分：

3,4,5-三甲氧基苯酚5.0mg

淀粉2497.5mg

微晶纤维素2497.5mg

所述药物组合物颗粒剂的制备方法包括以下步骤：

将3,4,5-三甲氧基苯酚过80目筛，再与淀粉、微晶纤维素混合均匀后，用适量水制成软材，制粒、干燥、整粒、分装即得。

实施例3防治糖尿病肾病的药物组合物片剂

本实施例提供一种防治糖尿病肾病的药物组合物片剂，每片片剂包括以下质量数的组分：

所述药物组合物片剂的制备方法包括以下步骤：

将3,4,5-三甲氧基苯酚过80目筛，与乳糖和玉米淀粉混合均匀，加入适量的水并将粉末制粒，干燥后，将此颗粒过筛并与其余赋形剂混合，压片即得。

实施例4防治糖尿病肾病的药物组合物胶囊剂

本实施例提供一种防治糖尿病肾病的药物组合物胶囊剂，每粒胶囊剂包括以下质量数的组分：

3,4,5-三甲氧基苯酚199.0mg

糊精1.0mg

3％羟丙甲纤维素适量

所述药物组合物胶囊剂的制备方法包括以下步骤：

将3,4,5-三甲氧基苯酚过80目筛，与糊精按等量倍增法混合均匀，加入预先配好的羟丙甲纤维素溶液(浓度为：3g羟丙甲纤维素/100ml乙醇)制成软材，制粒，干燥，整粒，装胶囊即得。

实施例5防治糖尿病肾病的药物组合物滴丸

本实施例提供一种防治糖尿病肾病的药物组合物滴丸，每粒滴丸包括以下质量数的组分：

3,4,5-三甲氧基苯酚15.0g

聚乙二醇400015.0g

所述药物组合物滴丸的制备方法包括以下步骤：

称取3,4,5-三甲氧基苯酚15.0g，经超微粉碎过200目筛后得细粉，加入至熔融的15.0g聚乙二醇4000基质中，搅匀，以二甲苯硅油为冷却剂，滴制法制丸，干燥，制得防治糖尿病肾病的药物组合物滴丸。

实施例6-9将通过3,4,5-三甲氧基苯酚的药理药效实验证实其对糖尿病肾病的治疗作用。

实施例63,4,5-三甲氧基苯酚对内皮细胞凋亡的影响实验

本实施例利用AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡模型，维生素E(VitE)为阳性药，观察3,4,5-三甲氧基苯酚对其影响，考察其抗内皮细胞凋亡的效果。

实验内容如下：

1、材料、试剂与仪器

DMEM培养基(GIBCO)，LifeTechnologies公司；

胎牛血清(FBS)，浙江天杭生物科技股份有限公司；

多聚赖氨酸、VitE均为Sigma产品；

吖啶橙(AO)、溴化乙锭(EB)染料均为碧云天产品；

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，美国ATCC产品；

3,4,5-三甲氧基苯酚由康臣肾病药物研究中心化学分析室分离纯化制得，经高效液相色谱仪(HPLC)检测其纯度>98％；

BS-224S型电子分析天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；

LDZ5-2型医用离心机，北京京立医用离心机厂；

CO₂培养箱，长沙长锦科技有限公司；

奥林巴斯IX71、BX51显微镜，日本奥林巴斯公司；

超净工作台，苏州百神科技网络系统有限公司，苏州市洁净技术研究所；

SPECTRAmax190酶标仪，美国MD公司。

2、实验方法

2.1细胞培养

取对数生长期细胞，以含10％FBS的DMEM制成单细胞悬液，以1mL/孔接种于放入预先用多聚赖氨酸包被的盖玻片的24孔板，细胞数1×10⁵/孔，37℃、5％CO₂培养24h后，加入无血清的DMEM，再孵育12h，使细胞同步化；

吸弃细胞上清液，同一水平3孔并列，加入含10％FBS的DMEM900μL/孔和各药物100μL/孔。正常对照组加入等体积磷酸盐缓冲液(PBS)，AGEs模型对照组加入AGEs(终浓度为0.1g/L)；VitE阳性对照组分别加入AGEs(终浓度为0.1g/L)和VitE(终浓度为100μmol/L)；3,4,5-三甲氧基苯酚低、中、高剂量实验组分别加入AGEs(终浓度为0.1g/L)和3,4,5-三甲氧基苯酚(终浓度分别为5μmol/L、50μmol/L、500μmol/L)。

2.2细胞凋亡的染色及观察

AO-EB染液的配制：称取AO、EB各0.20g，以超纯水2.0mL溶解完全，装入2mL棕色EP管中，4℃冷藏保存备用。

染色及观察：取出细胞爬片，PBS洗涤2次，甩干；在载玻片上滴加15μLAO-EB染液，盖上细胞爬片，细胞面向下；静止30秒，置荧光显微镜下，观察并摄片。摄片时每张爬片均取中心位置。

2.3数据分析及统计

以IPP图像分析软件，分析各图片(橙色+红色部分细胞面积)和细胞总面积，以下列公式计算各样本凋亡百分率：

凋亡百分率(％)＝(橙色+红色部分细胞面积)/细胞总面积×100

所有实验数据均采用成组设计的方差分析，用SPSS软件进行处理，结果均以(均值±方差)表示。

3、实验结果

从图1、图2可以看出，3,4,5-三甲氧基苯酚各实验组细胞凋亡百分率与AGEs模型对照组相比明显降低(p<0.05，p<0.01)，而且具有明显量效关系，说明3,4,5-三甲氧基苯酚能有效抑制AGEs诱导的内皮细胞凋亡。

实施例73,4,5-三甲氧基苯酚对肾小球系膜细胞氧化应激的影响实验

系膜细胞氧化应激增加，是糖尿病肾病重要病机之一。本实施例利用AGEs诱导大鼠肾小球系膜细胞氧化应激增加，VitE为阳性药，观察3,4,5-三甲氧基苯酚对其影响，考察抗系膜细胞氧化应激效果。

实验内容如下：

1、材料、试剂与仪器

超氧化物阴离子荧光探针(DHE)，碧云天产品；

大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1，美国ATCC产品；

其它试剂与仪器同实施例6。

2、实验方法

2.1细胞培养

取对数生长期HBZY-1细胞，以含10％FBS的DMEM制成单细胞悬液，以1mL/孔接种于放入预先用多聚赖氨酸包被的盖玻片的24孔板，细胞数1×10⁵/孔，37℃、5％CO₂培养24h后，加入无血清的DMEM，再孵育12h使细胞同步化；

吸弃细胞上清液，同一水平3孔并列，加入含10％FBS的DMEM900μL/孔和各药物100μL/孔。正常对照组加入等体积PBS，模型对照组加入AGEs(终浓度为0.1g/L)；VitE阳性对照组分别加入AGEs(终浓度为0.1g/L)和VitE(终浓度为100μmol/L)；3,4,5-三甲氧基苯酚低、中、高剂量实验组分别加入AGEs(终浓度为0.1g/L)和3,4,5-三甲氧基苯酚(终浓度分别为5μmol/L、50μmol/L、500μmol/L)。

2.2染色及观察

DHE染液母液的配制：称取DHE，以二甲基亚砜(DMSO)配制成1mmol/L的母液，分装，-20℃避光干燥保存备用。

染色及观察：取出DHE染液母液，200倍PBS稀释成5μmol/L的工作液使用。取出24孔板，吸弃培养上清液，PBS洗涤2次，每孔加入DHE工作液50μL，37℃孵育30分钟，取出细胞爬片，置荧光显微镜下，观察并摄片。摄片时每张爬片均取中心位置。

2.3数据分析及统计

以IPP图像分析软件，分析各图片红色区域积分光密度值，以下列公式计算各组氧化应激系数：

相对氧化应激系数＝各组图片红色区域积分光密度值/正常对照组红色区域平均积分光密度值

所有实验数据均采用成组设计的方差分析，用SPSS软件进行处理，结果均以(均值±方差)表示。

3、实验结果

从图3、图4可以看出，3,4,5-三甲氧基苯酚各实验组的相对氧化应激系数与AGEs模型对照组相比明显降低(p<0.05，p<0.01)，而且具有明显量效关系，说明3,4,5-三甲氧基苯酚能有效抑制AGEs诱导的系膜细胞氧化应激增加。

实验例83,4,5-三甲氧基苯酚对小鼠腹腔巨噬细胞趋化的影响实验

慢性炎症反复发作是糖尿病肾病的重要病因病机，巨噬细胞趋化实验能较好地复制炎症早期机体的反应特点，在治疗糖尿病肾病药物开发中具有显著意义。本实施例通过考察3,4,5-三甲氧基苯酚对AGEs所致巨噬细胞趋化增加的影响，评价其对糖尿病肾病早期炎症的的细胞药理学效应。

实验内容如下：

1、材料、试剂与仪器

肾小球系膜细胞株HBZY-1，美国ATCC产品；

Transwell，康宁公司产品；

其它试剂与仪器同实施例6。

2实验方法

2.1细胞培养

取对数生长期HBZY-1细胞，以含10％FBS的DMEM制成单细胞悬液，以1ml/孔接种于24孔板，细胞数1×10⁵/孔，37℃、5％CO₂培养24h后，加入无血清的DMEM，再孵育12h使细胞生长同步进入休止期。

吸弃细胞上清液，同一水平3孔并列，加入含10％FBS的DMEM900μL/孔和各药物100μL/孔。正常对照组加入等体积PBS，模型对照组加入AGEs(终浓度为0.1g/L)；CsA阳性对照组加入AGEs(终浓度为0.1g/L)和CsA(终浓度为50μmol/L)；3,4,5-三甲氧基苯酚低、中、高剂量实验组分别加入AGEs(终浓度为0.1g/L)和3,4,5-三甲氧基苯酚(终浓度分别为5μmol/L、50μmol/L、500μmol/L)；37℃、5％CO₂培养24h后，进行巨噬细胞趋化实验。

2.2巨噬细胞取材

取SPF级昆明种小鼠，脱臼处死，腹腔注射5mL、4℃PBS，75％酒精浸泡3分钟，轻揉小鼠腹部1分钟，剪开腹部外层皮肤，在内层肌肉上剪一小口，滴管吸取腹腔内液，1000rpm离心5分钟，即得。若有红细胞沉积，则以0.83％NH₄Cl溶液洗涤至无红细胞。

2.3巨噬细胞趋化与检测

将培养有给予药物后24hHBZY-1的24孔板取出，放入transwell小室。以含10％FBS的DMEM将离心所得小鼠腹腔制成单细胞悬液，加入transwell小室内，每室300μL，细胞数为3×10⁵/well。37℃、5％CO₂培养24h后，取出well，PBS洗涤2次，湿棉签擦去well小室内细胞，1％结晶紫染色5分钟，PBS洗涤3次，湿棉签再次擦去well小室可能残留的细胞，每well加入5％醋酸250μL，静置10分钟，待well内醋酸都进入24孔板后，吸取醋酸，加入酶标板，每孔200μL，测定450nm处OD值。将well以PBS洗涤2次后，再次以1％结晶紫染色5分钟，PBS洗涤3次，滤纸吸干，以手术刀片小心切下well半透膜，置预先滴有30μL中性树胶的载玻片上，盖上盖玻片，自然晾干。置显微镜下明场观察并摄片，每次摄片均取well半透膜中心位置。

2.4图像分析及统计

以IPP图像分析软件，对各图片进行细胞计数。所有实验数据均采用成组设计的方差分析，用SPSS软件进行处理，结果均以(均值±方差)表示。

3、实验结果

从表1、图5可以看出，3,4,5-三甲氧基苯酚各实验组的巨噬细胞趋化过膜细胞酶标仪读数OD值与AGEs模型对照组相比明显降低(p<0.01)，而且具有明显量效关系；趋化过膜细胞计数也具有同样的结果。说明3,4,5-三甲氧基苯酚能有效抑制AGEs诱导的巨噬细胞趋化增加，具有抗炎作用。

表13,4,5-三甲氧基苯酚对巨噬细胞趋化的影响()

##p<0.01vs正常组；*p<0.05vs模型组。

实验例93,4,5-三甲氧基苯酚对STZ-CFA所致糖尿病肾病模型大鼠的影响实验

本实施例利用灌胃给予STZ-CFA(链脲佐菌素-弗氏完全佐剂)所致糖尿病肾病模型大鼠3,4,5-三甲氧基苯酚11周后，检测其体重、尿量、尿微白蛋白、血压、血糖水平，考察3,4,5-三甲氧基苯酚对整体动物的药理作用。

实验内容如下：

1、材料与试剂

SPF级Wistar大鼠90只，体重200±20g，购自南方医科大学实验动物中心，合格证号：SCKX(粤)2011-0015；

STZ(Streptozotocin)，Sigma公司；

CFA(CompleteFreund'sadjuvant)，Chondrex公司；

葡萄糖检测试剂盒、尿液总蛋白检测试剂盒、肌酐检测试剂盒，均为德国罗氏诊断公司；

枸橼酸，枸橼酸钠等常用试剂为市售国产分析纯；

罗氏血糖仪及试纸，罗氏诊断中国公司；

电子分析天平(BS-224S)，北京赛多利斯仪器系统有限公司；

医用离心机(LDZ5-2)，北京医用离心机厂；

CODA无创血压仪，美国Kent公司。

2、实验方法

2.1STZ-CFA糖尿病模型大鼠的建立

0.1mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液配制：精密称取1.1976g枸橼酸，1.2646g枸橼酸钠，以灭菌注射用水配成100mL溶液，备用；

STZ配制：取1gStreptozotocin，以0.1mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液配制成44mg/mL溶液，0.22μm滤膜过滤除菌，现配现用；

模型建立：动物自由饮水、进食。大鼠90只，随机分为两组，正常对照组10只，造模组80只。造模组按30mg/kg腹腔注射STZ，第二天腹腔注射CFA，0.1mL/只，每周一次；对照组注射相应体积的柠檬酸缓冲液。连续3周重复上述步骤，注射部位用酒精棉球消毒。造模组饲以高脂饲料，正常组常规饲养。动物饲养环境保持明：暗时间为12：12小时。

2.2分组与给药

造模动物第3周结束后测定血糖，以血糖值在16～30mmol/L者为合格动物，合格动物按照血糖分组，每组15只，使血糖值组间无显著差异，分组情况为：模型组，厄贝沙坦组(剂量为13.5mg/kg)，3,4,5-三甲氧基苯酚低、中、高剂量组(剂量分别为0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg)。正常对照组大鼠10只，保持不变。

给药组分别给予相应药物，体积为0.5ml/220g，均采用灌胃给药的方法；正常对照组、模型组给予同体积生理盐水。每周给药6天，连续11周。

2.3指标检测

给药期间每周称1次体重，每2周测1次血糖、尿量、尿微白蛋白。第5、8、11周，测定血压。

2.4数据统计

所有实验数据均采用成组设计的方差分析，用SPSS软件进行处理，结果均以(均值±方差)表示。

3.实验结果

3.1对STZ-CFA联合诱导的糖尿病肾病模型大鼠体重的影响

由表2可看出，模型组体重明显降低，而0.2mg/kg的3,4,5-三甲氧基苯酚可以缓解模型动物的体重减轻。

表23,4,5-三甲氧基苯酚对STZ-CFA联合诱导的糖尿病肾病模型大鼠体重的影响()

vs正常:##p<0.01。

3.2对STZ-CFA联合诱导的糖尿病肾病模型大鼠血压、血糖的影响

由表3可看出，模型组血糖显著升高(p<0.01)，3,4,5-三甲氧基苯酚0.2、0.4mg/kg可以明显改善这一情况(p<0.05)。

由表4可看出，模型组血压明显升高(p<0.05，p<0.01)，厄贝沙坦、0.05、0.1、0.2mg/kg的3,4,5-三甲氧基苯酚在不同时期可明显改善这一情况(p<0.05，p<0.01)。

表33,4,5-三甲氧基苯酚对STZ-CFA联合诱导的糖尿病肾病模型大鼠血糖的影响()

vs正常：##p<0.01；vs模型：*p<0.05。0～9周采用血糖仪检测餐后血糖，超过33.3者按33.3计；11周为禁食24h摘眼球取血，分离血清后以罗氏P800生化仪检测血清中葡萄糖浓度。

表43,4,5-三甲氧基苯酚对STZ-CFA联合诱导的糖尿病肾病模型大鼠血压的影响()

vs正常:#p<0.05,##p<0.01；vs模型:*p<0.05,**p<0.01。

3.3对STZ-CFA联合诱导的糖尿病肾病模型大鼠尿量、尿微白蛋白的影响

由表5可看出，模型组24h尿量明显升高(p<0.01)，0.2、0.4mg/kg的3,4,5-三甲氧基苯酚在不同时期可明显改善这一情况(p<0.05，p<0.01)。

由表6可看出，模型组24h尿微白蛋白增加，0.1、0.2mg/kg的3,4,5-三甲氧基苯酚可明显改善或逆转这一情况(p<0.05，p<0.01)。

表53,4,5-三甲氧基苯酚对STZ-CFA联合诱导的糖尿病肾病模型大鼠24h尿量的影响()

vs正常:#p<0.05,##p<0.01；vs模型:*p<0.05,**p<0.01。

表63,4,5-三甲氧基苯酚对STZ-CFA联合诱导的糖尿病肾病模型大鼠尿24h微白蛋白的影响()

vs正常:#p<0.05,##p<0.01；vs模型:*p<0.05,**p<0.01。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (4)

1.3,4,5-三甲氧基苯酚在制备防治糖尿病肾病的药物中的应用。

2.一种防治糖尿病肾病的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物由作为活性成分的3,4,5-三甲氧基苯酚与载体制备而成，所述药物组合物中3,4,5-三甲氧基苯酚的含量为0.1-99.5wt％。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中3,4,5-三甲氧基苯酚的含量为10.0-90.0wt％。

4.根据权利要求2-3任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型包括口服剂、片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、胶囊剂、悬浮剂、酏剂。