CN105012239B - 一种甘草多糖脂质体的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种甘草多糖脂质体的制备方法，采用逆向蒸发法，建立的工艺条件为:大豆磷脂和胆固醇的质量比为2:1‑10:1，大豆磷脂与甘草多糖的质量比为5:1‑25:1，吐温80和大豆磷脂的质量1:1‑1:20，水浴温度在25℃‑65℃，超声时间在5min‑25min。本发明首次将甘草多糖制备成脂质体，通过响应面优化，能够最大可能地节约原材料，同时获得较高的药物包封率(达79.12％)，并且结合超声作用，使制备的脂质体更均一更具有稳定性，其平均粒径为136.4±0.151nm。

Description

一种甘草多糖脂质体的制备方法

技术领域

本发明属于药物制备技术领域，具体涉及一种甘草多糖脂质体的制备方法。

背景技术

甘草在我国有悠久的药用历史，是一种补益中草药。甘草多糖(glycyrrhizapolysaccharide，GP)是甘草的主要活性成分之一，是从甘草中提取出的一类α-D-吡喃多糖，多糖组分由鼠李糖、葡聚糖、阿拉伯糖和半乳糖组成，并以葡聚糖为主链。该多糖类物质，其基本结构为α-(1，4)键连接的单一葡聚糖具有抗炎、增强机体免疫力等功能，甘草多糖分子的形貌结构为螺旋结构图像。

脂质体(liposomes)是人工合成的双分子层的单层磷脂或多层可溶性物质隔开的呈同心圆的微环体脂质小囊，可包裹各种物质及疫苗，进入机体后主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能。它既是抗原也是免疫佐剂，由于其膜结构致密，抗原不易漏出，能长久地将抗原传递给适免疫细胞，促进抗原对抗原提呈细胞的定向作用，从而显著增强机体对抗原的免疫应答，产生保护性抗体和细胞免疫应答。通过各种给药途径，它还可以使包裹的药物具有靶向作用，准确的命中病变部位、组织和细胞，从而增强药物的疗效，并具有较大的发展前景。

脂质体作为新型药物载体，在中药制剂中获得广泛的应用以来，可以防止药物快速降解、延缓药物释放而延长药物在体内的作用时间，提高药物的溶出度和稳定性，增加药物对靶区的指向性，降低对正常细胞的毒性，提高药物的生物利用度。以脂质体作药物包埋，不但能提高药物的靶向定位作用，还能减少药物的用量及降低毒副作用。

当前甘草多糖主要被制备成胶囊剂型，然而甘草多糖直接用于临床，存在着多糖在体内代谢快、作用时间短、作用范围不集中、临床用量大等缺点。现有技术中没有甘草多糖脂质体的制备，研究者没有任何参考，同时由于各种方法中参数之间的相互影响，无法通过有限次的实验确定合适的方法参数，所以在如何制备甘草多糖脂质体时存在技术难题。

虽然现有技术中有关其他脂质体制备方法的介绍，例如CN201310456446.0公开了一种地黄多糖脂质体逆相蒸发法的制备方法，先取大豆磷脂、胆固醇和吐温80，溶于溶剂旋转蒸发中，超声溶解；30～70℃减压蒸发除去有机溶剂，旋转蒸发加入乙醚溶解；将地黄多糖的PBS溶液导入反应旋转蒸发容器，形成两相体系，冰水浴超声，至形成稳定的旋转蒸发W/O型乳剂；30～70℃减压蒸发形成胶态后加入旋转蒸发PBS，继续旋蒸除去有机溶剂；置于超声细胞粉碎机进行超声处理，使地黄多糖融合到脂质体中，得旋转蒸发到地黄多糖脂质体混悬液；再将混悬液分别挤压旋转蒸发过微孔滤膜，得地黄多糖脂质体。

但是由于多糖的结构具有各自的特点，例如单糖的种类、连接位点、单糖和糖苷键的构型以及重复单元的数量等都会因提取多糖的种类不同而不同，上述专利中公开的一种地黄多糖脂质体的制备方法，是针对玄参科植物特别是地黄这中多糖的特点而形成的，所以即使现有技术中有其他脂质体的制备方法，但是对甘草多糖脂质体的制备没有过多的指导价值。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述问题，提供一种甘草多糖脂质体的制备方法，包括以下步骤:

(1)准确称取分析纯的大豆磷脂、胆固醇和吐温80，溶于氯仿和乙醚(体积比0.5-1.5:2-3；优选1:2，在氯仿与乙醚以1:2的比例，在保证最佳溶解效果的同时，减慢溶剂的挥发。)中，超声使其充分溶解；其中大豆磷脂和胆固醇的质量比为2:1-10:1，吐温80和大豆磷脂的质量，1:1-1:20；

(2)将含甘草多糖的PBS溶液(磷酸盐缓冲溶液，pH＝7.4)缓慢导入反应容器，形成两相体系，冰水浴超声，至形成稳定的W/O型乳剂；其中大豆磷脂与甘草多糖的质量比为5:1-25:1；

(3)25～65℃减压蒸发，形成胶态后加入PBS溶液，继续旋转蒸发，除去有机溶剂；

(4)置于超声细胞粉碎机进行超声处理，得到甘草多糖脂质体混悬液；

(5)再将混悬液分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜3次，得甘草多糖脂质体，置于4℃保存。

所述步骤(2)中，大豆磷脂与甘草多糖的质量比为20:1，如图4和5，当脂药比20:1时，包封率达最大值，而载药量随着脂药比的增加而增加，当15:1以后不再增加。

所述步骤(1)中，大豆磷脂与胆固醇的质量比为8:1，如图6和7，当大豆磷脂与胆固醇的比率为8:1时，包封率和载药量均达到最大值。

所述步骤(1)中，吐温80与大豆磷脂的质量比为1:8，如图10和11，包封率和载药量随着吐温80量的增加先增加后降低，当吐温80与磷脂比为1:8时，包封率达最大值，而吐温80与磷脂比为1:16时，载药量达最大值。

所述步骤(3)中，减压蒸发与旋转蒸发的温度均为45℃，如图8和9，当旋转蒸发温度为45℃时，包封率和载药量达到最大值。

所述步骤(4)中，超声时间为15min，(强度40％，2.5s开，2.5s停)，如图2和3，当超声时间在15min时，包封率和载药量均为最大值。

所述步骤(2)中，大豆磷脂与甘草多糖的质量比为24.24:1；所述步骤(3)中，旋转蒸发温度为46.45℃，所述步骤(4)中，超声时间为16.11min，在此条件下包封率和载药量达到最大值。

所述步骤(2)中，大豆磷脂与甘草多糖的质量比为24:1；所述步骤(3)中，旋转蒸发温度为46℃，所述步骤(4)中，超声时间为16min，在此条件下包封率和载药量达到最大值。

本发明的有益效果：

本发明首次将甘草多糖包封于脂质体中，制备出甘草多糖脂质体，利用脂质体的缓释作用和靶向作用维持甘草多糖在机体内的有效浓度，提高其生物利用度。

本发明采用逆相蒸发法，通过响应面优化，能够最大可能地节约原材料同时获得较高的药物包封率；结合超声作用，使制备的脂质体更均一更具稳定性。其中，最佳制备工艺为:大豆磷脂与甘草多糖的质量比为24，旋转蒸发温度为46℃，超声时间为16min，包封率平均值约为79％，其平均粒径为136.4±0.151nm，见图15。

本发明选用有机溶剂氯仿和乙醚，并且选用1:2的用量，配合合适的旋蒸时间与以及旋蒸温度避免了逆向蒸发中常用溶剂甲醇的不易溶解，同时解决了现有技术中旋转蒸发时的贴壁现象。

超声的时间与处方有关，同时若加入胆固醇后更加的不易超声，本发明选用了合适的超声时间搭配其他的参数，避免超声出现的无法成乳的现象。

附图说明

图1是葡萄糖标准曲线图；

图2是超声时间对GUPL包封率的影响结果图；

图3是超声时间对GUPL载药量的影响结果图；

图4是脂药比对GUPL包封率的影响结果图；

图5是脂药比对GUPL的载药量影响结果图；

图6是膜材比对GUPL包封率的影响结果图；

图7是膜材比对GUPL载药量的影响结果图；

图8是旋转蒸发温度对GUPL包封率的影响结果图；

图9是旋转蒸发温度对GUPL载药量的影响结果图；

图10是吐温80与磷脂比对GUPL包封率的影响结果图；

图11是吐温80与磷脂比对GUPL载药量的影响结果图；

图12是脂药比和旋转蒸发温度对脂质体包封率影响的的等高线和响应面图；

图13是脂药比和超声时间对脂质体包封率影响的的等高线和响应面图；

图14是旋转蒸发温度和超声时间对脂质体包封率影响的的等高线和响应面图；

图15是本发明方法制备的甘草多糖脂质体的粒度分布图。

具体实施方式

下面结合附图与实施例对本发明作进一步说明。以下实施例中所使用的主要药物、试剂、设备和计算方法具体如下:

试验药物:生甘草(安徽省祥和药业有限公司生产批号:140402)。

主要试剂:大豆磷脂(上海太伟药业有限公司，生产批号20120904)，胆固醇(天津市博迪化学有限公司，批号20121008)，无水D-葡萄糖(分析纯，110833-200904，中国药品生物制品检定所)，氯化钠、磷酸氢二钠(分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司)，氯化钾(分析纯，南京化学试剂厂)，磷酸二氢钾(分析纯，汕头市西陇化工厂)，硫酸(分析纯，南京化学试剂有限公司)，精制苯酚(分析纯，南京化学试剂有限公司)。主要仪器设备:超声处理器JAC-500，济宁奥波超声电气有限公司；JY92-ⅡDN型超声细胞粉碎机，宁波新芝生物科技有限公司；FA1104N型电子天平，上海精密科学仪器有限生产公司生产；旋转蒸发仪RE-52A，上海亚荣生化仪器厂；SHZ-Ⅲ型循环水真空泵，上海亚荣仪器厂；754紫外分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；离心机湘仪L-550，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司，Zetasizer Nano系列纳米粒度和Zeta电位仪,产品型号Zetasizer Nano系列，英国马尔文仪器有限公司。

GUPL包封率的测定:G-50微柱离心法结合苯酚-浓硫酸法测定。GUPL分离及包封率和载药量的测定:G-50微柱离心法。G-50放入0.9％的生理盐中过夜，使其充分溶胀，后将其缓慢填入已经弃去活塞并已装入适量棉花的2mL注射器内，离心1500rpm，5min，除去多余的水分。缓慢悬空加入400ul的LP30脂质体溶液，离心1500rpm，5min，收集离心液，即包封LP30的脂质体。包封率及载药量的计算。精密称取微柱离心后的脂质体400ul，加入400ul体积分数为10％TritonX-100溶解，以同样处理的空白脂质体作为空白对照，按照苯酚-浓硫酸法法测定样品吸光值A490，将吸光值带入回归方程，计算。

包封率(EE)％＝CL/CT×100％

式中CL为包封LP30的浓度；CT为总浓度，即包封的LP30与游离LP30之和。

载药量％＝WL/WP×100％

式中WL为包封的质量；WP为大豆磷脂和胆固醇的质量之和。

本发明用到的甘草多糖的提取方法或纯化方法。

甘草干品粉碎后过30目筛100g，经石油醚(60～90℃)500mL回流脱脂2次，每次1h，再用质量分数为80％乙醇回流提取2次，每次2h，以除去单糖、低聚糖及其它脂溶性杂质；将药渣加500mL水于90℃水浴浸提2次，每次2h，合并2次滤液，在旋转蒸发仪上减压浓缩至200mL，用15％的三氯乙酸在4℃条件下搅拌脱蛋白；溶液经离心去沉淀，清液经1mol/LNaOH调至中性，然后加无水乙醇依次将清液调至30％、50％、80％并静止过夜，依次离心收集沉淀，经无水乙醇和无水丙酮依次洗涤三次，冷冻干燥得粗多糖；经体外淋巴细胞增值试验，30％和50％醇沉多糖效果最好，本发明主要用30％醇沉多糖。

实施例1乙醇注入法制备GUPL

精确称取大豆磷脂0.4g，胆固醇0.05g和吐温800.1g溶于10mL无水乙醇中，超声使其充分溶解；在45℃水浴摇床的振荡下，将20mL的含2mg·mL^-1甘草多糖的PBS(pH 7.4)溶液缓慢导入前者，保持45℃继续振荡30min；置于250mL圆底烧瓶中，50℃减压蒸发除去乙醇，随后置于超声细胞粉碎机进行超声处理(强度40％，2.5s开，2.5s停，作用15min)，使甘草多糖充分均匀地融合到脂质体中，同时也使得甘草多糖脂质体的粒径更均一，从而得到甘草多糖脂质体混悬液；再将其分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜，各重复三次，即得甘草多糖脂质体溶液。置于4℃保存。

经计算该方法制备的GUPL包封率为35.41％。

实施例2薄膜分散法制备GUPL

精确称取大豆磷脂0.4g，胆固醇0.05g和吐温800.1g溶于10mL氯仿和甲醇(1:1)溶液中，超声使其充分溶解；置于250mL圆底烧瓶中，50℃减压蒸发除去有机溶剂，当烧瓶壁上形成一层均匀的薄膜后，导入20mL的含2mg·mL^-1甘草多糖的PBS(pH 7.0)溶液，50℃减压蒸发，使瓶壁薄膜洗脱；25℃水化0.5h；随后置于超声细胞粉碎机进行超声处理(强度40％，2.5s开，2.5s停，作用15min)，使甘草多糖充分均匀地融合到脂质体中，同时也使得甘草多糖脂质体的粒径更均一，从而得到甘草多糖脂质体混悬液；再将其分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜，各重复三次，即得甘草多糖脂质体溶液。置于4℃保存。

经计算该方法制备的GUPL包封率为30.39％。

实施例3硫酸铵梯度法制备GUPL

精确称取大豆磷脂0.4g，胆固醇0.05g和吐温800.1g溶于10mL无水乙醇中，超声使其充分溶解；在50℃水浴摇床的振荡下，将前者导入10mL 10％硫酸铵溶液中，进而置于250mL圆底烧瓶中，50℃减压蒸发除去有机溶剂；置于PBS(pH 7.0)中透析24h；在50℃水浴摇床的振荡下，将20mL的含2mg·mL^-1甘草多糖的PBS(pH 7.0)溶液缓慢导入前者，保持50℃继续振荡30min；随后置于超声细胞粉碎机进行超声处理(强度40％，2.5s开，2.5s停，作用20min)，使甘草多糖充分均匀地融合到脂质体中，同时也使得甘草多糖脂质体的粒径更均一，从而得到甘草多糖脂质体混悬液；再将其分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜，各重复三次，即得甘草多糖脂质体溶液。置于4℃保存。

经计算该方法制备的GUPL包封率为31.04％。

实施例4逆相蒸发法

精确称取大豆磷脂0.4g，胆固醇0.05g和吐温800.1g溶于12mL氯仿和乙醚(1:2)溶液中，超声使其充分溶解；将4mL的含2mg·mL^-1甘草多糖的PBS(pH 7.0)溶液缓慢导入前者，形成两相体系，冰水浴超声，至形成稳定的W/O型乳剂，60℃减压蒸发，形成胶态后加入一定量PBS，继续旋蒸10min，除去有机溶剂，随后置于超声细胞粉碎机进行超声处理(强度40％，2.5s开，2.5s停，作用20min)，使甘草多糖充分均匀地融合到脂质体中，同时也使得甘草多糖脂质体的粒径更均一，从而得到甘草多糖脂质体混悬液；再将其分别挤压过孔径为0.45μm、0.22μm的微孔滤膜，各重复三次，即得甘草多糖脂质体溶液。置于4℃保存。

经计算该方法制备的GUPL包封率为39.94％。高于以上3种制备方法，所以逆向蒸发法为最佳制备方法。

实施例5空白脂质体的制备

空白脂质体的制备方法分别同实施例1至实施例4，将其中多糖溶液换成等量的PBS溶液。

实施例6标准曲线的制作

精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品100mg，定容至100mL，得1mg·mL^-1的储备液，吸取10mL储备液定容至100mL，得0.1mg·mL^-1的标准液。精密吸取标准液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL至试管中，加蒸馏水补足至2mL，以空白脂质体的透析液做为空白对照，吸取2mL至试管中，各加入5％精制苯酚1mL，浓硫酸5mL，混匀后热水浴加热10min，冷却后在分光光度计上测定490nm处的吸光度值，以吸光度为纵坐标，葡萄糖标准品溶液浓度为横坐标，绘制成标准曲线。

如图1所示，经计算得回归方程为Y＝16.754X+0.0105，R²＝0.9991(n＝5)。表明葡萄糖在0.01～0.05mg·mL^-1范围内线性关系良好。

实施例7

GUPL制备方法同实施例4，其中，超声时间分别为5、10、15、20、25min，观察不同超声时间对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响。

不同超声时间对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响如图2和3。当超声时间在15min时，包封率和载药量均为最大值。

GUPL制备方法同实施例4，其中，大豆磷脂与甘草多糖的质量比(w/w)比分别为5:1、10:1、15:1、20:1、25:1，观察大豆磷脂与甘草多糖的质量比对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响。

大豆磷脂与甘草多糖的质量比对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响如图4和5。当脂药比20:1时，包封率达最大值，而载药量随着脂药比的增加而增加，当15:1以后不再增加。

GUPL制备方法同实施例4，其中，大豆磷脂和胆固醇的质量比(w/w)分别为10:1、8:1、5:1、4:1、2:1，观察不同膜材比对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响。

不同膜材比对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响如图6和7。当大豆磷脂与胆固醇的比率为8:1时，包封率和载药量均达到最大值。

GUPL制备方法同实施例4，其中，旋转蒸发温度分别为25、35、45、55、65℃，观察不同旋转蒸发温度对甘草多糖脂质体包封率和载药量影响。

不同旋转蒸发温度对甘草多糖脂质体包封率和载药量影响如图8和9。当旋转蒸发温度为45℃时，包封率和载药量达到最大值。

GUPL制备方法同实施例4，其中，吐温80和大豆磷脂的质量比(w/w)分别为1:1、1:4、1:8、1:10、1:16、1:20，观察不同含量的吐温80对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响。

不同含量的吐温80对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响如图10和11。包封率和载药量随着吐温80量的增加先增加后降低，当吐温80与磷脂比为1:8时，包封率达最大值，而吐温80与磷脂比为1:16时，载药量达最大值。

实施例8

在实施例7的基础上，选出对脂质体影响较大的3个因素:脂药比(X₁)、水浴温度(X₂)和超声时间(X₃)。各自变量水平见表1。以脂质体的包封率为响应值，脂药比、水浴温度和超声时间三个因子为自变量，采用Design-Expert 8.0软件设计响应面试验见表1。选用BBD模型，以脂质体的包封率为响应值，做3因素3水平共17个试验点(5个中心点)二次回归正交组合试验。

表1试验各因素与水平

设该模型通过最小二乘法拟合的二次多项方程为:

Y＝C₀+C₁X₁+C₂X₂+C₃X₃+C₁₂X₁x₂+C₁₃X₁X₃+C₂₃X₂X₃+C₁₁X₁ ²+C₂₂X₂ ²+C₃₃X₃ ²

式中:Y为预测响应值，C₀为常数项，C₁、C₂、C₃分别为线性系数，C₁₂、C₁₃、C₂₃为交互项系数，C₁₁、C₂₂、C₃₃为二次项系数。

试验设计及结果见表2。

Y＝-266.57854+10.92531X₁+8.54345X₂+4.76856X₃+0.020044X₁X₂+0.04641X₁X₃+0.030589X₂X₃-0.29945X₁ ²-0.10250X₂ ²-0.22568X₃ ²

表2试验设计及结果

从该模型的方差分析表3可知，本试验所选用的二次多项模型具有高度的显著性(P model<0.0001)，失拟项的P＝0.6123，不显著；模型中的X₁X₂(脂药比和水浴温度交互作用)、X₁X₃(脂药比和超声时间交互作用)、X₂X₃(水浴温度和超声时间交互作用)、X₂ ²(水浴温度和水浴温度的交互作用)的“P”值均小于0.05，说明其对脂质体包封率有显著影响；相关性R²＝0.9984，校正决定系数R_Adj ²＝0.9964，仅有约1％的脂质体包封率总变异不能由此模型进行解释。综上表明，此模型拟合度好。

表3响应面模型方差分析表

响应面的3D图和等高线如图12到图14为各因素交互作用的响应面的3D图和等高线图，分别表示以脂药比、水浴温度和超声时间3个因素其中1个因素取零水平时，其余2个因素对脂质体包封率的影响。从图12可知，包封率随着脂药比的增大先增大后减小，随着旋转蒸发温度的升高，先增加后减少，且曲线表现平滑，表明这两个因素的交互作用对包封率的影响不明显。据图像可知，包封率的最优值应该出现在脂药比介于19:1到25:1，旋转蒸发温度介于40℃到50℃的范围内。

如图13所示，脂药比和超声时间交互作用的相应曲面坡度较大，说明这两个因素相互作用对包封率影响显著，从等高线图可以看出最大包封率出现在脂药比19:1到25:1，超声时间在12到18min之间。

图14所示，超声时间和旋转蒸发温度交互作用时，坡度较大，说明这两个因素对包封率的影响较大，从等高线图可以看出最大包封率出现在旋转蒸发温度在40℃到50℃的范围内，超声时间在14到18min之间。

对脂药比、旋转蒸发温度和超声时间3个因素单独作用以及两两交互作用对脂质体包封率的影响进行研究后，由Design-Expert 8.0软件对制备条件做进一步优化，得出最佳制备条件以及根据实际情况作出调整后的组合见表4。根据最佳制备条件组合进行验证性试验，得到的脂质体包封率为78.33±0.25％，与预测值的相对误差仅为1.0％。

表4响应面优化后的最佳制备条件组合

上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。

Claims (6)

1.一种甘草多糖脂质体的制备方法，其特征是，包括以下步骤:

（1）取大豆磷脂、胆固醇和吐温 80，溶于溶剂中，所述大豆磷脂和胆固醇的质量比为2:1-10:1，所述吐温 80 和大豆磷脂的质量比为 1:1-1:20，所述溶剂为氯仿和乙醚的混合溶液，氯仿与乙醚的体积比为 1:2；

（2）将步骤（1）中的混合液导入容器后，加入含甘草多糖的 PBS 溶液，冰水浴超声形成W/O 型乳剂，所述大豆磷脂与甘草多糖的质量比为 5:1-25:1；

（3）将步骤（2）得到的乳剂，45℃下减压蒸发，形成胶态后加入 PBS 溶液，继续 45℃下旋转蒸发，除去有机溶剂；

（4）将步骤（3）得到的物质，进行超声处理 15min，得到甘草多糖脂质体混悬液；

（5）将步骤（4）得到的混悬液分别挤压过微孔滤膜，得甘草多糖脂质体。

2.如权利要求 1 所述的制备方法，其特征是，所述步骤（1）中，大豆磷脂与胆固醇的质量比为 8:1。

3.如权利要求 1 所述的制备方法，其特征是，所述步骤（1）中，吐温 80 与大豆磷脂的质量比为 1:8。

4.如权利要求 1 所述的制备方法，其特征是，所述步骤（2）中，大豆磷脂与甘草多糖的质量比为 20:1。

5.一种甘草多糖脂质体的制备方法，其特征是，包括以下步骤:

（1）取大豆磷脂、胆固醇和吐温 80，溶于溶剂中，所述大豆磷脂和胆固醇的质量比为2:1-10:1，所述吐温 80 和大豆磷脂的质量比为 1:1-1:20，所述溶剂为氯仿和乙醚的混合溶液，氯仿与乙醚的体积比为 1:2；

（2）将步骤（1）中的混合液导入容器后，加入含甘草多糖的 PBS 溶液，冰水浴超声形成W/O 型乳剂，所述大豆磷脂与甘草多糖的质量比为24.24:1；

（3）将步骤（2）得到的乳剂，45℃下减压蒸发，形成胶态后加入 PBS 溶液，继续 46.45℃下旋转蒸发，除去有机溶剂；

（4）将步骤（3）得到的物质，进行超声处理16.11min，得到甘草多糖脂质体混悬液；

（5）将步骤（4）得到的混悬液分别挤压过微孔滤膜，得甘草多糖脂质体。

6.一种甘草多糖脂质体的制备方法，其特征是，包括以下步骤:

（1）取大豆磷脂、胆固醇和吐温 80，溶于溶剂中，所述大豆磷脂和胆固醇的质量比为2:1-10:1，所述吐温 80 和大豆磷脂的质量比为 1:1-1:20，所述溶剂为氯仿和乙醚的混合溶液，氯仿与乙醚的体积比为 1:2；

（2）将步骤（1）中的混合液导入容器后，加入含甘草多糖的 PBS 溶液，冰水浴超声形成W/O 型乳剂，所述大豆磷脂与甘草多糖的质量比为24:1；

（3）将步骤（2）得到的乳剂，45℃下减压蒸发，形成胶态后加入 PBS 溶液，继续46℃下旋转蒸发，除去有机溶剂；

（4）将步骤（3）得到的物质，进行超声处理16min，得到甘草多糖脂质体混悬液；

（5）将步骤（4）得到的混悬液分别挤压过微孔滤膜，得甘草多糖脂质体。