CN105004726A - 一种桑黄的鉴定方法 - Google Patents
一种桑黄的鉴定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105004726A CN105004726A CN201510472262.2A CN201510472262A CN105004726A CN 105004726 A CN105004726 A CN 105004726A CN 201510472262 A CN201510472262 A CN 201510472262A CN 105004726 A CN105004726 A CN 105004726A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phellinus
- authentication method
- judged
- sample
- powder
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 50
- 241000123113 Phellinus igniarius Species 0.000 title abstract description 8
- 241000123107 Phellinus Species 0.000 claims abstract description 102
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 12
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 21
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 21
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 18
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 17
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 16
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 8
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 7
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical class OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 4
- 241001411320 Eriogonum inflatum Species 0.000 claims description 3
- 238000001354 calcination Methods 0.000 claims description 3
- 238000010000 carbonizing Methods 0.000 claims description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000005498 polishing Methods 0.000 claims description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 3
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 3
- 235000019890 Amylum Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 claims description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 abstract description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 abstract 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 abstract 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 abstract 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 abstract 1
- 239000013081 microcrystal Substances 0.000 abstract 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 abstract 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 abstract 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 abstract 1
- HFFLGKNGCAIQMO-UHFFFAOYSA-N trichloroacetaldehyde Chemical compound ClC(Cl)(Cl)C=O HFFLGKNGCAIQMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 description 7
- 240000000249 Morus alba Species 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 241000001748 Sanghuangporus sanghuang Species 0.000 description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 3
- 239000001117 sulphuric acid Substances 0.000 description 3
- FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitro-1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C2=C1 FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241001269238 Data Species 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 229940089206 anhydrous dextrose Drugs 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000011496 digital image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 1
- -1 flavone compound Chemical class 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000879 optical micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种桑黄的鉴定方法，具体步骤如下：首先将桑黄研磨为粉末，过200目筛，取适量粉末于载玻片中央，滴1-2滴水合氯醛，搅匀；将玻片放置酒精灯外焰，边加热边搅拌，沸即离火，勿烧干，烧焦，视玻片情况可重复2-5次；稍冷后，加1-2滴甘油，搅匀，盖上盖玻片，吸走多余甘油，显微镜下观察：如果菌丝可见，且呈黄色或棕黄色，菌丝多分枝，直径1.9~4.2μm，可见菌丝横隔，无锁状联合，桑黄孢子呈卵圆形，淡黄色，直径在2.2μm-4.0μm之间，分散在菌丝团中，视野中无淀粉粒，微晶等结构即可判断为桑黄。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种桑黄的鉴定方法。
背景技术
桑黄(Inonotus Sang Huang)，又名桑耳，桑臣，以寄生于桑树上面而得名。桑黄作为一种珍贵的药用真菌，具有提高机体免疫力，抗肿瘤，抵抗细胞突变，抗菌，抑制肝纤维化，止血活血降血糖、抑菌消炎，治疗癌症、肝炎等作用。大量科学研究发现桑黄有抑制癌细胞生长作用，抗癌率高达96.7％，为目前国际公认的生物抗癌领域中药效最好的药用真菌。桑黄因其极高的保健功效，被誉为“森林黄金”。
然而目前市场上桑黄种类繁多，很多商家以次充好，甚至鱼目混珠，急需制定一种鉴别桑黄的方法。桑黄在已经被大家熟知的抗癌菌类中作用是最明显的，人们慢慢了解到桑黄的抗癌原理，深层栽培的技术逐渐成熟，应用前景非常乐观。韩国桑黄的子实体的售价已达到2300美元，相当于非常珍贵的药材的价格了，根据经济学的定价理论，珍贵药材桑黄的药用前景十分明朗，因此桑黄的鉴别对于桑黄的应用有十分重大的意义。在桑黄使用的过程中如果出现了不同种的桑黄错误使用，滥用，这会损害到接下来的研发食品。
发明内容
发明目的：本发明要解决的是市场流通与销售的桑黄品种优劣难于分真伪的技术问题。本发明的目的是提供一种准确鉴定桑黄的方法。本发明以如何鉴别桑黄为实验材料，对桑黄的外观鉴定，从桑黄的颜色，形态，气味等方面鉴别。显微鉴定包括对桑黄的菌丝，孢子，微孔等方面进行鉴定。桑黄的成分鉴定有桑黄的水分，灰分，水浸提取物以及多糖含量的鉴定。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种桑黄的鉴定方法，具体步骤如下：
1)首先将桑黄研磨为粉末，过200目筛，取适量粉末于载玻片中央，滴1-2滴水合氯醛，搅匀；
2)将玻片放置酒精灯外焰，边加热边搅拌，沸即离火，勿烧干，烧焦，视玻片情况可重复2-5次；
3)稍冷后，加1-2滴甘油，搅匀，盖上盖玻片，吸走多余甘油，显微镜下观察，如果菌丝可见，且呈黄色或棕黄色，菌丝多分枝，直径1.9～4.2μm，可见菌丝横隔，无锁状联合，桑黄孢子呈卵圆形，淡黄色，直径在2.2μm-4.0μm之间，分散在菌丝团中，视野中无淀粉粒，微晶等结构即可判断为桑黄。
其中，上述水合氯醛质量百分浓度为20％。
其中，该鉴定方法还包括成分鉴定方法。
其中，本发明的外观鉴定：如菌盖腹面具有孔状结构、表面呈金黄色或棕黄色；菌孔椭圆形或多角形，菌肉黄色、棕色或具光泽的木色，近菌盖表面颜色趋深。子实体横切面可见菌孔，粉末呈黄色或棕黄色，菌丝可见，孢子呈卵圆形，分散在菌丝团中，微酸气味，微苦。即可判断为桑黄(Inonotus SangHuang)。
其中，上述成分鉴定方法包括水分测定、灰分测定、水浸出物测定以及多糖测定。
其中，上述水分测定方法步骤如下：取桑黄样品2-5g，平躺铺在扁形称量瓶里，平铺的高度要小于或等于5cm，疏松的样品要小于或等于1cm，进行精确地测定，将瓶盖拧开在100～105℃烘干，5h以后，重新将瓶盖拧紧，放置在干燥器中，30min之后，进行准确地称定，然后在100～105℃的温度下烘干1h，放冷后再进行称取，最后两次称取的重量范围差异在5mg以内，从损失的重量中测算出供试品的水量多少，如水分限度定的结果是小于或等于13.0％，即可判断为桑黄。
其中，上述灰分测定方法步骤如下：将桑黄样品进行磨碎，使之能通过二号筛，混合得均匀，称取桑黄样品2-3g放置到坩埚中灼烧直到最后的重量不发生变化，到完全炭化时将温度提高到500～600℃，完全炭化至重量不变，从炭化的残渣的重量测算初总灰分的大小，总灰分限度定为小于或等于6.0％，即可判断为桑黄。
其中，上述水浸出物测定方法步骤如下：在称量天平上精确称取4g的桑黄样品，放置在容量为250-300mL的锥形瓶里，慢慢加水50-100mL，密闭瓶塞，冷浸，振摇6h，在18h之内再静置，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，水浸出物限度定为小于或等于18.0％，即可判断为桑黄。
其中，上述多糖测定方法采用苯酚硫酸法进行测定，糖含量超过2.5％，即可判断为桑黄。
其中，上述苯酚硫酸法具体步骤如下：分别准确量取0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL的对照品溶液，放置10mL具塞玻璃试管中，不足0.5mL的用蒸馏水补齐，然后向试液中加入0.5mL5％的苯酚溶液，再快速加入2.5mL浓硫酸，均匀混合后静置20分钟，用分光光度计在490nm下测吸光度，以蒸馏水代替葡萄糖溶液为空白，纵坐标为吸光度，横坐标为葡萄糖浓度，制作标准曲线，桑黄多糖含量高于2.5％，即可判断为桑黄。
有益效果：本发明具有以下优点：本发明提供一种准确鉴别桑黄(InonotusSang Huang)的方法。本发明中采用20％的水合氯醛的作用是可以使细胞膨胀，便于观察组织，细胞及其内含物，另外可以除去细胞表面或者内部杂质，增强透明性。
附图说明
图1是桑黄原药A子实体外观；
图2桑黄原药B子实体外观；
图3为显微镜下的桑黄菌丝体；
图4为桑黄粉末显微镜下形态分布；
图5为桑黄粉末中担孢子的分布情况(箭头部位)；
图6为不同来源桑黄菌孔形态分布比较；
图7为仿生桑黄子实体内部形态图；
图8苯酚-硫酸法测得葡萄糖标准曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术方案，以下结合实例进一步说明本发明，但这些实例并不用来限制本发明。
本发明的实验方法及参数：
1.主要材料：桑黄(浙江千岛湖桑都食用菌合作社人工袋料栽培桑黄已获得成功，共收集10批样品进行实验研究)；朽木、泥沙或培养基质；冰箱；
2.主要试剂：无水乙醇，甲醇，石蜡,乙酸乙酯，硅胶G薄层板，甲苯-乙酸乙酯-甲酸，蒸馏水，硫酸，苯酚，90％乙醇溶液，葡萄糖等；
3.主要仪器：红外光谱检测仪；高温烘箱；计算机图像分析系统；紫外分光光度计；显微镜；电子天平。
实施例1桑黄外观鉴定
将采收后的桑黄去掉杂质，减掉依附在子实体基部的糟木，泥土或者培养基质，清洗干净后或者将桑黄切成一小块一小块的，自然放干或者是放在40～50℃的烘箱里面烘干。取原药，除去杂质，洗净后，切成小块，阴干或在40～50℃烘干。或取小块，除去杂质。如菌盖腹面具有孔状结构、表面呈金黄色或棕黄色；菌孔椭圆形或多角形，菌肉黄色、棕色或具光泽的木色，近菌盖表面颜色趋深。子实体横切面可见菌孔，粉末呈黄色或棕黄色，菌丝可见，孢子呈卵圆形，分散在菌丝团中，h微酸气味，微苦。即可判断为桑黄(Inonotus SangHuang)。参见图1和图2。
实施例2桑黄显微鉴定
桑黄菌丝显微鉴别：取出桑黄菌丝体，放在光学显微镜下观察，拍照，记录实验结果
桑黄粉显微观察：将桑黄研磨为粉末，过200目筛，取适量粉末于载玻片中央，滴1-2滴水合氯醛，搅匀；将玻片放置酒精灯外焰，边加热边搅拌，沸即离火，勿烧干，烧焦，视玻片情况可重复2-5次，稍冷后，加1-2滴甘油，搅匀，盖上盖玻片，吸走多余甘油，于光学显微镜下观察，然后拍照，记录数据。水合氯醛的作用是可以使细胞膨胀，便于观察组织，细胞及其内含物，另外可以除去细胞表面或者内部杂质，增强透明性。参见图3、图4、图5、图6。
桑黄子实体石蜡切片鉴别：取有特征性桑黄子实体部位，浸泡于石蜡中过夜，切成1-2μm厚度，显微镜下观察，拍照，记录数据。参见图7。
实施例3桑黄的成份鉴定
水分测定：取桑黄样品2-5g,平躺铺在扁形称量瓶里，平铺的高度要小于或等于5cm。疏松的样品要小于或等于1cm，进行精确地测定。将瓶盖拧开在100～105℃烘干，5h以后，重新将瓶盖拧紧，放置在干燥器中，30min之后。进行准确地称定，然后在在100～105℃的温度下烘干1h，放冷后再进行称取，知道最后两次称取的重量范围差异在5mg以内就行，从损失的重量中测算出供试品的水量多少。如水分限度定的结果参见表1。
灰分测定：将桑黄样品进行磨碎，使之能通过二号筛，混合得均匀，称取桑黄样品2-3g放置到坩埚中灼烧直到最后的重量不发生变化。特别要注意的是在实验中要避免燃烧，到完全炭化时将温度提高到500～600℃，完全炭化至重量不变。从炭化的残渣的重量测算初总灰分的大小。总灰分的结果参见表1。
水浸出物测定：在称量天平上精确称取约4g的桑黄样品，放置在容量为250-300mL的锥形瓶里，慢慢加水50-100mL,密闭瓶塞，冷浸，振摇6h，在18h之内再静置，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量。水浸出物测定结果参见表1。
表1常规检查结果表
| 样品编号 | 样品来源/批号 | 水分％ | 总灰含量％ | 浸出物％ |
| 1 | 桑黄20130530 | 11.85 | 5.81 | 22.4 |
| 2 | 桑黄20130615 | 12.25 | 5.88 | 22.0 |
| 3 | 桑黄20131010 | 11.95 | 5.74 | 20.1 |
| 4 | 桑黄20131025 | 11.82 | 5.88 | 20.9 |
| 5 | 桑黄20131110 | 12.35 | 5.45 | 20.9 |
| 6 | 桑黄20140425 | 12.21 | 5.76 | 22.8 |
| 7 | 桑黄20140510 | 12.04 | 5.73 | 22.8 |
| 8 | 桑黄20140525 | 11.89 | 5.65 | 20.3 |
| 9 | 桑黄20140610 | 11.57 | 5.84 | 21.4 |
| 10 | 桑黄20140625 | 12.66 | 5.31 | 21.9 |
多糖测定：现代临床研究表明，桑黄中的多糖物质、黄酮类化合物对提高免疫，抗肿瘤，抗突变，抗菌，抑制肝纤维化，止血活血降血糖、抑菌消炎，治疗癌症、肝炎，利尿、养颜等发挥重要作用。故现对桑黄药材中总多糖进行测定，并以葡萄糖对照品为对照，采用分光光度法测定多糖含量。
苯酚硫酸法测定多糖方法学考察
本品含有有效成分是主要是多糖，采用分光光度法，以葡萄糖为对照品，对本品中粗多糖含量进行测定。根据文献，进行了苯酚硫酸测定多糖方法学的考察。苯酚硫酸法对照品溶液及供试品溶液制备。对照品溶液为浓度0.2mg/mL葡萄糖溶液，供试品溶液的制备:取本品桑黄粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90ml，电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取10ml，加入乙醇150ml，摇匀，4℃放置12小时，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，转移至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
分别考察了苯酚硫酸测定多糖葡萄糖线性关系考察、显色重现性、稳定性、重复性、回收率试验等。
苯酚硫酸法线性关系考察(多糖葡萄糖线性关系考察)：分别准确量取0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL的对照品溶液(葡萄糖溶液，葡萄糖溶液的浓度为0.2mg/mL)，放置10mL具塞玻璃试管中，不足0.5mL的用蒸馏水补齐，然后向试液中加入0.5mL苯酚溶液(5％)，再快速加入2.5mL浓硫酸(加入时注意与液面垂直，千万接触到试管壁，这样能使之与反应液充分混合)，均匀混合后静置20分钟，用分光光度计在490nm下测吸光度，以蒸馏水代替葡萄糖溶液为空白，纵坐标为吸光度，横坐标为葡萄糖浓度，制作标准曲线。样品测定：按上述方法测定10批桑黄样品，结果见表7，根据10批数据，桑都仿生桑黄多糖含量都超过5％，故将限度订为按干燥品计，含多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计，不得少于2.50％。标准曲线参见图8。
表2苯酚硫酸法测多糖葡萄糖线性关系考察结果
计算得回归方程：y＝9.6814x-0.0012，R2＝0.9991，结果显示取样量在0～0.1mg范围内有良好的线性关系。
显色重现性：取供试品溶液，按正文方法，重复显色3次，测定吸收度，结果RSD为2.38％(n＝3)，见表3。
表3苯酚硫酸法测多糖显色重现性试验结果
稳定性：取同一批样品液，分别于0,2,4,6,12,24h按以上多糖的方法测定，24h内测定多糖的平均含量为5.18％。见表4。由于吸收度随着时间的增加，渐渐下降，故建议提取结束后4h内尽快测定。
表4苯酚硫酸法测多糖放置时间对多糖比色稳定性的影响
重复性：精密称取同一批号样品〔桑都桑黄〕6份，按正文方法测定，计算总多糖含量(％)，结果总多糖的平均含量为5.308％，RSD＝1.95％(n＝6)，见表5。
表5苯酚硫酸法测多糖重复性试验结果
加样回收率：精密称取已知含量样品〔桑都桑黄〕6份，按以上方法制备样品测定液，在测试液中精密加入葡萄糖对照品适量，按正文方法测定，计算含量，结果显示平均回收率为99.52％，RSD＝3.85％，见表6。
表6苯酚硫酸法测多糖回收率试验结果
表7苯酚硫酸法测样品多糖结果
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种桑黄的鉴定方法，其特征在于，具体步骤如下：
1）首先将桑黄研磨为粉末，过200目筛，取适量粉末于载玻片中央，滴1-2滴水合氯醛，搅匀；
2）将玻片放置酒精灯外焰，边加热边搅拌，沸即离火，勿烧干，烧焦，视玻片情况可重复2-5次；
3）稍冷后，加1-2滴甘油，搅匀，盖上盖玻片，吸走多余甘油，显微镜下观察，如果菌丝可见，且呈黄色或棕黄色，菌丝多分枝，直径1.9~4.2μm，可见菌丝横隔，无锁状联合，桑黄孢子呈卵圆形，淡黄色，直径在2.2μm-4.0μm之间，分散在菌丝团中，视野中无淀粉粒，微晶结构即可判断为桑黄。
2.根据权利要求1所述的一种桑黄的显微鉴定方法其特征在于，所述水合氯醛质量百分浓度为20%。
3.根据权利要求2所述的一种桑黄的鉴定方法，其特征在于，该鉴定方法还包括成分鉴定方法。
4.根据权利要求1所述的一种桑黄的鉴定方法，其特征在于，所述成分鉴定方法包括水分测定、灰分测定、水浸出物测定以及多糖测定。
5.根据权利要求4所述的一种桑黄的鉴定方法，其特征在于，所述水分测定方法步骤如下：取桑黄样品2-5g，平躺铺在扁形称量瓶里，平铺的高度要小于或等于5cm，疏松的样品要小于或等于1cm，进行精确地测定，将瓶盖拧开在100～105℃烘干，5h以后，重新将瓶盖拧紧，放置在干燥器中，30min之后，进行准确地称定，然后在100～105℃的温度下烘干1h，放冷后再进行称取，最后两次称取的重量范围差异在5mg以内，从损失的重量中测算出供试品的水量多少，如水分限度定的结果是小于或等于13.0％，即可判断为桑黄。
6.根据权利要求4所述的一种桑黄的鉴定方法，其特征在于，所述灰分测定方法步骤如下：将桑黄样品进行磨碎，使之能通过二号筛，混合得均匀，称取桑黄样品2-3g放置到坩埚中灼烧直到最后的重量不发生变化，到完全炭化时将温度提高到500～600℃，完全炭化至重量不变，从炭化的残渣的重量测算初总灰分的大小，总灰分限度定为小于或等于6.0％，即可判断为桑黄。
7.根据权利要求4所述的一种桑黄的鉴定方法，其特征在于，所述水浸出物测定方法步骤如下：在称量天平上精确称取4g的桑黄样品，放置在容量为250-300mL的锥形瓶里，慢慢加水50-100mL，密闭瓶塞，冷浸，振摇6h，在18h之内再静置，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，水浸出物限度定为小于或等于18.0％，即可判断为桑黄。
8.根据权利要求4所述的一种桑黄的鉴定方法，其特征在于，所述多糖测定方法采用苯酚硫酸法进行测定，糖含量超过2.5％，即可判断为桑黄。
9.根据权利要求8所述的一种桑黄的鉴定方法，其特征在于，所述苯酚硫酸法具体步骤如下：分别准确量取0 mL、0.1mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL的对照品溶液，放置10 mL具塞玻璃试管中，不足0.5mL的用蒸馏水补齐，然后向试液中加入0.5 mL5%的苯酚溶液，再快速加入2.5 mL浓硫酸，均匀混合后静置20分钟，用分光光度计在490 nm下测吸光度，以蒸馏水代替葡萄糖溶液为空白，纵坐标为吸光度，横坐标为葡萄糖浓度，制作标准曲线，桑黄多糖含量高于2.5%，即可判断为桑黄。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510472262.2A CN105004726A (zh) | 2015-08-04 | 2015-08-04 | 一种桑黄的鉴定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510472262.2A CN105004726A (zh) | 2015-08-04 | 2015-08-04 | 一种桑黄的鉴定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105004726A true CN105004726A (zh) | 2015-10-28 |
Family
ID=54377479
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510472262.2A Pending CN105004726A (zh) | 2015-08-04 | 2015-08-04 | 一种桑黄的鉴定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105004726A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106769306A (zh) * | 2016-12-19 | 2017-05-31 | 山东天博食品配料有限公司 | 一种改进的香辛料显微特征观察方法 |
| CN106811507A (zh) * | 2015-11-30 | 2017-06-09 | 江苏科技大学 | 一种桑黄快速鉴定方法 |
| CN114113080A (zh) * | 2021-10-11 | 2022-03-01 | 四川轻化工大学 | 一种白酒香型和品质的鉴定方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005341801A (ja) * | 2002-11-28 | 2005-12-15 | Air Green Co Ltd | フェヌグリーク種子（Ｆｅｎｕｇｒｅｅｋ）の分別と胚乳の精製及び胚乳と種皮の利用法 |
| CN104316699A (zh) * | 2014-09-26 | 2015-01-28 | 江西汇仁药业有限公司 | 一种蜜环菌浓缩液的质量控制方法 |
-
2015
- 2015-08-04 CN CN201510472262.2A patent/CN105004726A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005341801A (ja) * | 2002-11-28 | 2005-12-15 | Air Green Co Ltd | フェヌグリーク種子（Ｆｅｎｕｇｒｅｅｋ）の分別と胚乳の精製及び胚乳と種皮の利用法 |
| CN104316699A (zh) * | 2014-09-26 | 2015-01-28 | 江西汇仁药业有限公司 | 一种蜜环菌浓缩液的质量控制方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 回晶 等: "桑黄子实体与菌丝体营养成分的比较分析", 《特产研究》 * |
| 国家药典委员会: "《中华人民共和国药典 2010版一部》", 31 January 2010 * |
| 徐志祥等: "苯酚-硫酸法测定灵芝多糖含量的条件研究", 《食用菌》 * |
| 王英辉 等: "桑黄发酵菌粉与桑黄子实体成分分析比较", 《分析与检测》 * |
| 王超儀: ""桑黄"的生药学鉴定及抗肿瘤活性的对比研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106811507A (zh) * | 2015-11-30 | 2017-06-09 | 江苏科技大学 | 一种桑黄快速鉴定方法 |
| CN106769306A (zh) * | 2016-12-19 | 2017-05-31 | 山东天博食品配料有限公司 | 一种改进的香辛料显微特征观察方法 |
| CN106769306B (zh) * | 2016-12-19 | 2019-08-02 | 山东中质华检测试检验有限公司 | 一种改进的香辛料显微特征观察方法 |
| CN114113080A (zh) * | 2021-10-11 | 2022-03-01 | 四川轻化工大学 | 一种白酒香型和品质的鉴定方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102319364A (zh) | 一种铁皮石斛纯粉片的制作方法 | |
| CN105004726A (zh) | 一种桑黄的鉴定方法 | |
| Yuan et al. | Morphological and microscopic identification of three major medicinal Dendrobium species in Ta‐pieh Mountains area | |
| CN102266492B (zh) | 霍山石斛植株干品的加工方法 | |
| CN105079180B (zh) | 栀子饮片的炮制方法 | |
| Andini et al. | Standardization bark of Cinnamomum burmannii Nees Ex Bl. from five areas of Indonesia | |
| CN105769938B (zh) | 一株淡褐奥德蘑及其应用 | |
| CN105432343A (zh) | 一种提高银杏类黄酮含量的方法及金雀异黄素的应用 | |
| CN104535513A (zh) | 一种九节茶提取物及其制剂的检测方法 | |
| CN104770485B (zh) | 一种菊花免杀青的加工方法 | |
| CN112741866A (zh) | 一种半夏产地加工制备工艺及检测方法 | |
| CN108303491B (zh) | 一种香樟根药物质量检测方法 | |
| Tsukioka et al. | Comparison of growth in Hydrangea macrophylla var. thunbergii grown in different soil pH and quantitative analysis of its sweetness-related constituents | |
| CN114989986B (zh) | 一种富含多种活性成分的野生桑黄菌及其培养方法、应用 | |
| CN108548889B (zh) | 蒙药材金腰子的质量标准 | |
| CN109975465A (zh) | 一种凤凰单枞茶的质量分析评价方法及应用 | |
| Ganz et al. | Biosynthesis of radioactive nicotine | |
| Li et al. | Wine or Beer? A reinvestigation of residues from bronze vessels from the Beibai’e cemetery, Shanxi China | |
| CN111892828B (zh) | 一种红色系Lotos亚属睡莲色素及其提取方法和应用 | |
| CN112945872A (zh) | 一种金花三叶降糖茶中总黄酮含量测定方法 | |
| CN105902628A (zh) | 一种大黄的贮藏方法 | |
| CN107198708B (zh) | 一种葵花盘提取物及其制备方法和用途 | |
| CN105044271A (zh) | 一种桑黄的薄层色谱鉴定方法 | |
| Janoti et al. | Pharmacognostic evaluation of leaves of Meizotropis pellita wall. Ex hook, f & grew.(Patwa) | |
| Mendhekar et al. | Pharmacognostic, physicochemical and preliminary phytochemical investigation of Trapa natans linn. root |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20151028 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |