CN105002119A - 一种硝化细菌的半固体培菌方法 - Google Patents

一种硝化细菌的半固体培菌方法 Download PDF

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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

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Abstract

本发明公开了一种硝化细菌的半固体培菌方法，包括以下步骤：步骤一、将纯化后的氨氧化菌和亚硝酸盐氧化菌分别接种到三角瓶中并摇床保温培养12天；步骤二、将上述菌种分别接种到各自的种子罐内充气搅拌培养12天；步骤三、将上述菌种以百分之一的比例与各自的培养液混合，再和载体按1∶3的比例混合成半固体装入容器保温保湿培养20天；步骤四、升温并用排风扇吹干容器中半固体中的水分，进行粉碎；步骤五、将两类菌的半成品按1∶1的比例混合均匀，制得成品，本发明简单易行，生产成本低、产品质量稳定、制得的成品含菌量高达2亿每克以上，易于保藏和运输。

Description

一种硝化细菌的半固体培菌方法
技术领域
本发明涉及硝化细菌的半固体培菌方法。
背景技术
由于过度使用氮肥和高密度养殖，我国各种水体氮污染问题愈来愈严重，氨氮和亚硝酸盐氮是导致鱼、虾、蟹等各种水生动物致病的直接或间接因素；硝化细菌对水体中氨和亚硝酸盐具有较强的去除能力，在污水处理、水产养殖、观赏鱼行业中的应用越来越广泛。
但因为硝化细菌是自养型细菌，生长和繁殖极其缓慢，生产周期长，稳定性差，生产效率低下，生产成本高，价格昂贵，制约了其使用，现在市场上的产品主要是几家美国公司生产的。
发明内容
本发明目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种生产成本低、稳定性高的硝化细菌的半固体培菌方法。
本发明的技术方案是：一种硝化细菌的半固体培菌方法，包括以下步骤：
步骤一、将纯化后的氨氧化菌和亚硝酸盐氧化菌分别接种到已灭菌的装有对应培养液的三角瓶中，摇床保温培养12天，期间温度维持在28℃～30℃之间；
步骤二、将上述菌种分别接种到各自的种子罐内，充气搅拌培养12天，期间温度维持在28℃～30℃之间；
步骤三、将上述菌种以百分之一的比例分别与各自的培养液混合，再分别和载体按1∶3的比例混合成半固体，装入容器中上培养室铁架上保温保湿培养20天，期间温度维持在28℃～30℃之间，湿度维持在95％以上，每隔5天翻料一次；
步骤四、室内加温至35℃～40℃并用排风扇吹干容器中半固体中的水分，最后进行粉碎；
步骤五、将两类菌的半成品按1∶1的比例混合均匀，制得成品。
氨氧化菌的培养液主要组分及重量为：(NH4)2SO4 0.5g、NaCl0.3g、FeSO4·7H2O 0.03g、K2HPO4 1g、MgSO4·7H2O 0.3g、CaCl2 7.5g、蒸馏水1000mL。
亚硝酸盐氧化菌的培养液主要组分及重量为：(NaNO2 1g、MgSO4·7H2O 0.03g、MnSO4·4H2O 0.01g、K2HPO4 0.75g、Na2CO3 1g、NaH2PO4 0.25g、蒸馏水1000mL。
所述的载体由沸石粉土或膨润土原矿经300℃～500℃高温烘焙干燥粉碎而成。
本发明的有益效果是：本发明简单易行，生产成本低、产品质量稳定、制得的成品含菌量高达2亿每克以上，易于保藏和运输。
以高温烘焙过的沸石粉或膨润土作载体进行自养型细菌的培养生产还具备如下优点：
(1)没有有机物，排除了异养菌的干扰，从而使硝化细菌获得了稳定的生长繁殖介质；
(2)载体是很好的缓冲剂，能吸附生长繁殖期间不断产生的代谢产物，很大程度上排除了其对自身生长繁殖的抑制作用；
(3)半固体培养既保证了水分又能确保氧气的供给；
(4)能提供部分的矿物营养；
(5)使菌体能着床生长从而大大促进了硝化细菌的生长繁殖。
具体实施方式
下面通过实施例，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。
本发明中的硝化细菌实质上是由氨氧化菌和亚硝酸盐氧化菌两类菌组成，氨氧化菌的培养液主要组分及重量为：(药品用分析纯)(NH4)2SO4 0.5g、NaCl 0.3g、FeSO4·7H2O 0.03g、K2HPO4 1g、MgSO4·7H2O0.3g、CaCl2 7.5g、蒸馏水1000mL，亚硝酸盐氧化菌的培养液主要组分及重量为：(药品用分析纯)NaNO2 1g、MgSO4·7H2O 0.03g、MnSO4·4H2O0.01g、K2HPO4 0.75g、Na2CO3(无水)1g、NaH2PO4 0.25g、蒸馏水1000mL，载体由沸石粉土或膨润土原矿经300℃～500℃高温烘焙干燥粉碎而成。
培养时，分别将纯化的氨氧化菌和亚硝酸盐氧化菌从试管斜面种接种到已灭好菌的装有对应培养液的三角瓶中，摇床培养，28℃～30℃保温培养12天，镜检合格后分别接种到种子罐中，28℃～30℃充气搅拌培养12天，镜检合格后备用。
将上述菌种以百分之一的比例分别与各自的培养液混合，再分别和载体按1∶3的比例混合成半固体，装入洗干净的塑料淺盒中，上培养室铁架上保温保湿培养，期间温度维持在28℃～30℃之间，湿度维持在95％以上，每隔5天翻料一次；培养20天后室内加温至35℃到40℃，用排风扇吹干至能粉碎即可，期间需翻动数次，然后粉碎；用平板法检测菌数，合格后将两类菌的半成品按1∶1的比例混合均匀即可包装入库。

Claims (4)

1.一种硝化细菌的半固体培菌方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将纯化后的氨氧化菌和亚硝酸盐氧化菌分别接种到已灭菌的装有对应培养液的三角瓶中，摇床保温培养12天，期间温度维持在28℃～30℃之间；
步骤二、将上述菌种分别接种到各自的种子罐内，充气搅拌培养12天，期间温度维持在28℃～30℃之间；
步骤三、将上述菌种以百分之一的比例分别与各自的培养液混合，再分别和载体按1∶3的比例混合成半固体，装入容器中上培养室铁架上保温保湿培养20天，期间温度维持在28℃～30℃之间，湿度维持在95％以上，每隔5天翻料一次；
步骤四、室内加温至35℃～40℃并用排风扇吹干容器中半固体中的水分，最后进行粉碎；
步骤五、将两类菌的半成品按1∶1的比例混合均匀，制得成品。
2.根据权利要求1所述的一种硝化细菌的半固体培菌方法，其特征在于，氨氧化菌的培养液主要组分及重量为：(NH4)2SO4 0.5g、NaCl 0.3g、FeSO4·7H2O 0.03g、K2HPO4 1g、MgSO4·7H2O 0.3g、CaCl27.5g、蒸馏水1000mL。
3.根据权利要求1所述的一种硝化细菌的半固体培菌方法，其特征在于，亚硝酸盐氧化菌的培养液主要组分及重量为：NaNO2 1g、MgSO4·7H2O 0.03g、MnSO4·4H2O 0.01g、K2HPO4 0.75g、Na2CO3 1g、NaH2PO4 0.25g、蒸馏水1000mL。
4.根据权利要求1所述的一种硝化细菌的半固体培菌方法，其特征在于：所述的载体由沸石粉土或膨润土原矿经300℃～500℃高温烘焙干燥粉碎而成。
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