CN104971360B - 一种超分子药物及其制备方法、药物组合物和制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，公开了一种灯盏花乙素超分子药物及其制备方法和应用。本发明灯盏花乙素超分子药物以丙三醇桥联‑α，γ‑双环糊精为主体分子，以灯盏花乙素为客体分子，主、客体分子通过分子识别、镶嵌及化学缩合作用而结合为一整体。本发明立足于超分子药物技术，选择与灯盏花乙素双向空间结构相匹配的丙三醇桥联‑α，γ‑双环糊精作为主体分子，与灯盏花乙素客体分子以非共价键分子识别以及共价键两种连接方式形成全新的超分子药物，解决了现有单环糊精包合灯盏花乙素溶解度低、稳定性差、生物利用度低的问题。

Description

一种超分子药物及其制备方法、药物组合物和制剂

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种超分子药物及其制备方法、药物组合物和制剂。

背景技术

灯盏花乙素，又称野黄岑苷，化学名为4’,5，6-三羟基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，其结构为：

现代药理研究表明，灯盏花乙素具有扩张血管、增加动脉流量、降低血液黏度、降低外周阻力、减少血小板计数和抑制血小板凝集等作用，临床主要用于治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血损伤及脑血栓形成。但是，灯盏花乙素存在如下缺陷：

一是溶解性差，导致口服不易吸收，生物利用率低。灯盏花乙素由于其化学结构上的特点，特别是B环受吡喃环羰基的立体阻碍影响，在空间上只能形成大的共轭体系而成为近似的平面结构，晶格排列紧密，刚性强，且5,6,4'-位上的三个酚羟基可形成分子间氢键，导致其脂溶性和水溶性均较差，因而口服给药很难被吸收，生物利用率低。

二是稳定性差，易氧化变质而失去生物活性，并产生毒副作用。灯盏花乙素为一多个酚羟基黄酮，其5,6,4'-位上的三个酚羟基即使在常温条件下也易被空气氧化，生成蒽、醌等杂质，导致产品颜色变深，生物活性降低，并产生一定的毒副作用。

由于上述两大问题，严重影响了灯盏花乙素在临床的推广使用。

为解决灯盏花乙素的溶解性和稳定性问题，目前最常采用的是环糊精包合技术。如中国专利CN1739537、CN1759842等采用α-环糊精，β-环糊精，γ-环糊精，以及各种环糊精衍生物对灯盏花乙素进行包合，以提高灯盏花乙素的溶解性和稳定性。

环糊精具有空腔结构，含有一个亲水性外表面和一个疏水性内孔洞，当药物分子被包合进入环糊精的内腔后，一方面由于环糊精的亲水性而使得被包合药物的水溶性提高，另一方面由于环糊精腔体的屏蔽作用，使得药物分子与外界环境相隔绝，因而提高了包合药物的化学稳定性；环糊精结构式如下：

但是，由于灯盏花乙素具有平面的和立体的双向结构，单环糊精与其在空间结构和尺寸方面匹配性差，难以形成稳定的包合物：灯盏花乙素在结构上可分为两部分，一部分为黄酮部分，具有近似平面的空间结构；另一部分为糖基部分，为一椅式的立体空间结构；两部分之间通过能够自由旋转的糖苷键相连。由于灯盏花乙素具有上述特殊的双向空间结构特点，而单环糊精如α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精及其衍生物只具有单一取向的空腔结构，因此单环糊精仅能将灯盏花乙素很少的一部分结构包合进入其空腔内部，无法形成稳定的包合体。实验测定，单环糊精对灯盏花乙素的包封比不足20％，包合作用弱，稳定性差，当温度、湿度及环境介质稍有变化，灯盏花乙素就很容易与环糊精解体分离而失去包合作用。因此，现有的药物包合技术仍未能有效解决灯盏花乙素的溶解性和稳定性问题，如何研究和采用更好的技术方法来解决该问题，仍然具有十分重要的现实意义。

超分子药物技术是当前药物改造领域的前沿技术之一。超分子化学药物是由具有某种生物活性的药物分子与特定结构的其它化学分子通过分子识别、镶嵌或化学作用而结合在一起的，具有高度空间结构匹配性和复杂性的整体。分子识别性、结构尺寸的空间匹配性和超分子的整体性是超分子化学药物的三大基本属性。在这个整体的超分子结构中，具有生物活性的药物分子常称为客体分子，而对其具有识别功能并与之相匹配的其它化学分子则称为主体分子，它们除保持其自身原有的一些理化性质、生物活性及药理作用外，同时又因彼此间的相互作用而表现出某些整体性的功能，如特殊的水溶性、稳定性和更高的药理活性。然而目前，尚无灯盏花乙素超分子药物方面的文献报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种超分子药物，使其显著提高灯盏花乙素的溶解性；

本发明的另一个目的在于提供一种超分子药物，使其显著提高灯盏花乙素的稳定性；

本发明的另一个目的在于提供一种超分子药物，使其显著提高灯盏花乙素的生物利用度；

本发明的另一个目的在于提供一种超分子药物的制备方法及其药物组合物和制剂。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种超分子药物，以丙三醇桥联-α，γ-双环糊精为主体分子，以灯盏花乙素为客体分子，客体分子灯盏花乙素的黄酮部分，以非共价键分子识别连接方式镶嵌进入主体分子一侧的α环糊精空腔内；客体分子灯盏花乙素的糖基部分，以非共价键分子识别连接方式镶嵌进入主体分子另一侧的γ环糊精空腔内；客体分子灯盏花乙素的糖上羧酸基与主体分子桥架上的醇羟基通过化学反应缩合成酯；

主体分子丙三醇桥联-α，γ-双环糊精具有如下列式I所示的结构：

其中，代表α-环糊精残基，代表γ-环糊精残基。

本发明针对现有技术中单环糊精包合灯盏花乙素的缺陷，选择丙三醇桥联-α，γ-双环糊精作为超分子药物中的主体分子来匹配客体分子的灯盏花乙素，以丙三醇桥联-α，γ-双环糊精特有的三维结构，契合灯盏花乙素平面的和立体的双向结构，实现溶解度、稳定性以及生物利用度的提高。

α、γ-环糊精分别是6个和8个D(+)―吡喃型葡萄糖组成的环状低聚物，其分子呈上宽下窄、两端开口、中空的筒状物，腔内部呈相对疏水性，而腔外部呈相对亲水性，为了方便表示其结构，在本领域一般按照以下方式表示：

本发明所述丙三醇桥联-α，γ-双环糊精以丙三醇、α-环糊精、γ-环糊精为主要反应物，通过丙三醇的羟基分别和α-环糊精、γ-环糊精的羟基缩合脱水而形成。在本发明中，其可按照如下方式制备获得：

步骤A、按摩尔比为:1.0：1.0：3.0～5.0：0.1～0.3的比例称取丙三醇、α-环糊精、二甲基亚砜(DMSO)和焦磷酸，置于反应容器中，冰浴控制温度-10～0℃搅拌反应8h，至TLC检测反应完全为止；

步骤B、步骤A反应完全后，反应液逐步缓慢升温至45℃，边搅拌边缓慢投加等摩尔比例的γ-环糊精，加毕，控制反应温度于40～60℃继续搅拌反应4～5h，至TLC检测反应完全；

步骤C、将步骤B的反应液降至室温，倒入其5～6倍体积量的快速搅拌的乙酸乙酯中，析出固体，过滤，干燥固体获得丙三醇桥联-α，γ-双环糊精。

同时，本发明还提供了所述超分子药物的制备方法，包括：

步骤1、称取丙三醇、α-环糊精、γ-环糊精制备获得丙三醇桥联-α，γ-双环糊精；

步骤2、称取灯盏花乙素、丙三醇桥联-α，γ-双环糊精和N,N-二甲基甲酰胺，搅拌反应并滴加磷酸氢二钠调节反应液pH至9～10，控制温度5-10℃继续搅拌反应2h；

然后滴加15％盐酸溶液调节pH2～4，然后控制温度70～80℃继续反应至TLC检测反应完全为止；反应体系降至室温后，倒入其8～10倍体积量的乙酸乙酯中搅拌，析出固体，过滤，固体干燥后获得所述灯盏花乙素超分子药物。

其中，作为优选，步骤1为：

步骤1.1、按摩尔比为1.0：1.0：3.0～5.0：0.1～0.3的比例称取丙三醇、α-环糊精、二甲基亚砜(DMSO)和焦磷酸，置于反应容器中，冰浴控制温度-10～0℃搅拌反应8h，至TLC检测反应完全为止；

步骤1.2、步骤1.1反应完全后，反应液逐步缓慢升温至45℃，边搅拌边缓慢投加等摩尔比例的γ-环糊精，加毕，控制反应温度于40～60℃继续搅拌反应4～5h，至TLC检测反应完全；

步骤1.3、将步骤1.2的反应液降至室温，倒入其5～6倍体积量的快速搅拌的乙酸乙酯中，析出固体，过滤，干燥固体获得丙三醇桥联-α，γ-双环糊精。

作为优选，步骤2为

按摩尔比为1.0:1.0：6.0～8.0的比例称取灯盏花乙素、丙三醇桥联-α，γ-双环糊精和N,N-二甲基甲酰胺，置于反应容器中，冰浴控制温度在-5℃以下，搅拌下滴加40％的磷酸氢二钠调节反应液pH值至9～10，控制温度5-10℃继续搅拌反应2h；

然后滴加15％盐酸溶液调节pH值为2～4，然后控制温度70～80℃继续反应4～5h,至TLC检测反应完全为止；

反应完全后，反应体系降至室温并倒入其8～10倍体积量的快速搅拌的乙酸乙酯中，析出固体，过滤，固体干燥获得本发明所述灯盏花乙素超分子药物。

本发明提供的灯盏花乙素超分子药物和灯盏花乙素、灯盏花乙素-α环糊精包合物、灯盏花乙素-β环糊精包合物、灯盏花乙素-γ环糊精包合物相比，在溶解度、稳定性以及生物利用度方面都表现出及其优异的性能，基于此，本发明提供所述超分子药物在制备灯盏花乙素临床制剂中的应用。

此外，本发明提供一种药物组合物，其包括本发明所述超分子药物和药学上可接受的辅料或载体。更优选地，所述组合物还可以包括其他可接受的活性药物成分。

本发明所述药学上可接受辅料指在制备临床各种具体剂型时所有被认可和接受的药用辅料或载体，本领域技术人员可根据要需要选择具体的剂型以及该剂型所需要的辅料或载体。

在本发明的一些具体实施方案中，所述药学上可接受辅料选自注射用水、氯化钠、淀粉、微晶纤维素、硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠、乙醇、甘露醇中的一种或两种以上。

而其他可接受的活性药物成分是指与灯盏花乙素可联合用药的一种或多种药物组分。

本发明还提供一种灯盏花乙素临床制剂，包含本发明所述药物组合物。

作为优选，所述临床制剂为口服制剂或注射制剂。

更优选地，所述口服制剂为片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂或膏剂；所述注射制剂为粉针剂或注射液。

本发明所提供的灯盏花乙素超分子药物具有溶解性和稳定性好，生物利用度高，安全高效的特点，便于制剂加工和临床使用，具有广阔的应用前景。本发明提供的灯盏花乙素超分子药物制备方法，工艺简单，反应条件温和，操作方便，原料易得，成本低廉，适合于工业化大规模生产。

由以上技术方案可知，本发明立足于超分子药物技术，选择与灯盏花乙素双向空间结构相匹配的丙三醇桥联-α，γ-双环糊精作为主体分子，与灯盏花乙素客体分子以非共价键分子识别以及共价键两种连接方式形成全新的超分子药物，解决了现有单环糊精包合灯盏花乙素溶解度低、稳定性差、生物利用度低的问题。

附图说明

图1所示为本发明所述灯盏花乙素超分子药物红外光谱谱图。

具体实施方式

本发明公开了一种超分子药物及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明范围内。本发明所述超分子药物、制备方法和应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

以下就本发明所提供的一种灯盏花乙素超分子药物及其制备方法和应用做进一步说明。

实施例1：主体分子丙三醇桥联-α，γ-双环糊精的制备

称取9.2g(0.1mol)丙三醇、97.3g(0.1mol)α环糊精、23.4g(0.3mol)二甲基亚砜和1.78g(0.01mol)焦磷酸，置于反应器中，冰浴控制温度-10～-5℃，搅拌反应8h。至TLC检测反应完全，将反应液逐步缓慢升温至45℃，边搅拌边缓慢投加129.7g(0.1mol)γ环糊精，加毕，控制反应温度于40～50℃继续搅拌反应5h左右。至TLC检测第二次反应完全后，将反应液降至室温，倾入5倍体积量的快速搅拌的乙酸乙酯中，有大量物质析出，过滤，于50℃真空干燥即得丙三醇桥联-α，γ-双环糊精225.8g，收率97.1％。

经质谱鉴定与预期结构一致，鉴定数据如下：FAB-MS m/z 2325[M-H]^-；HRESIMSm/z 2325.0196[M-H]^-(calcd for C₈₇H₁₄₃O₇₁,2325.0182).

实施例2：主体分子丙三醇桥联-α，γ-双环糊精的制备

称取46.0g(0.5mol)丙三醇、486.5g(0.5mol)α环糊精、195.0g(2.5mol)二甲基亚砜和26.7g(0.15mol)焦磷酸，置于反应器中，冰浴控制温度-5～0℃，搅拌反应8h。至TLC检测反应完全，将反应液逐步缓慢升温至45℃，边搅拌边缓慢投加648.5g(0.5mol)γ环糊精，加毕，控制反应温度于50～60℃继续搅拌反应5h左右。至TLC检测第二次反应完全后，将反应液降至室温，倾入6倍体积量的快速搅拌的乙酸乙酯中，有大量物质析出，过滤，于60℃真空干燥即得丙三醇桥联-α，γ-双环糊精1116.1g，收率96.0％。

经质谱鉴定与预期结构一致，鉴定数据如下：FAB-MS m/z 2325[M-H]^-；HRESIMSm/z 2325.0196[M-H]^-(calcd for C₈₇H₁₄₃O₇₁,2325.0182).

实施例3：灯盏花乙素超分子药物的制备

称取46.2g(0.1mol)灯盏花乙素、232.6g(0.1mol)丙三醇桥联-α，γ-双环糊精、43.8g(0.6mol)N,N-二甲基甲酰胺，置于反应器中，冰浴控制温度在-5℃以下，搅拌下滴加40％的磷酸氢二钠调节反应液pH至9～10，待灯盏花乙素全部溶解后，控制温度5-10℃继续搅拌2h，然后向反应液中滴加15％盐酸溶液调节pH至2～4，控制温度70～75℃反应5h。至TLC检测缩合反应完全，将反应液降至室温，倾入8倍体积量的快速搅拌的乙酸乙酯中，有大量物质析出，过滤，于50℃真空干燥，即得本发明所述超分子药物灯盏花乙素缩合丙三醇桥联-α，γ-双环糊精271.5g,收率98.0％。

所得化合物经紫外、红外(红外光谱图见图1)、质谱、核磁共振谱鉴定与预期结构一致，图谱数据如下：mp 290–292℃；UV(MeOH)λ_max(logε)286(4.08),335(4.21)nm；IR(KBr)ν_max 3492,2949,1732,1660,1605,1464,1354,1070,832,588；¹HNMR(500MHz,DMSO):12.72(s,5-OH in Scu),10.38(s,4'-OH in Scu),8.62(s,6-OH in Scu),7.90(d,C2'-H,C6'-Hin Scu,J＝8.8Hz),6.98(s,C8-H in Scu),6.91(d,C3'-H,C5'-H in Scu,J＝8.8Hz),6.81(s,C3-H in Scu),5.95,5.86,5.25(glu-OH),4.82,4.43,4.19(glu-H),3.68-3.63(m,glu-H),3.60-3.58(d,glu-H),3.29-3.42(m,glu-H)；FAB-MS m/z2769[M-H]^-；HRESIMS m/z2769.3637[M-H]^-(calcd for C₁₀₈H₁₅₉O₈₂,2769.3625).

实施例4：灯盏花乙素超分子药物的制备

称取231.0g(0.5mol)灯盏花乙素、1163.0g(0.1mol)丙三醇桥联-α，γ-双环糊精、292.0g(4.0mol)N,N-二甲基甲酰胺，置于反应器中，冰浴控制温度在-5℃以下，搅拌下滴加40％的磷酸氢二钠调节反应液pH至9～10，待灯盏花乙素全部溶解后，控制温度5-10℃继续搅拌2h，然后向反应液中滴加15％盐酸溶液调节pH至2～4，控制温度75～80℃反应4h。至TLC检测缩合反应完全，将反应液降至室温，倾入10倍体积量的快速搅拌的乙酸乙酯中，有大量物质析出，过滤，于60℃真空干燥，即得本发明所述超分子药物灯盏花乙素缩合丙三醇桥联-α，γ-双环糊精1354.2g,收率97.8％。

所得化合物经紫外、红外(红外光谱图见图1)、质谱、核磁共振谱鉴定与预期结构一致，图谱数据如下：mp 290–292℃；UV(MeOH)λ_max(logε)286(4.08),335(4.21)nm；IR(KBr)ν_max 3492,2949,1732,1660,1605,1464,1354,1070,832,588；¹HNMR(500MHz,DMSO):12.72(s,5-OH in Scu),10.38(s,4'-OH in Scu),8.62(s,6-OH in Scu),7.90(d,C2'-H,C6'-Hin Scu,J＝8.8Hz),6.98(s,C8-H in Scu),6.91(d,C3'-H,C5'-H in Scu,J＝8.8Hz),6.81(s,C3-H in Scu),5.95,5.86,5.25(glu-OH),4.82,4.43,4.19(glu-H),3.68-3.63(m,glu-H),3.60-3.58(d,glu-H),3.29-3.42(m,glu-H)；FAB-MS m/z2769[M-H]^-；HRESIMS m/z2769.3637[M-H]^-(calcd for C₁₀₈H₁₅₉O₈₂,2769.3625).

实施例5：溶解性和稳定性实验

1、供试药物样品

本发明灯盏花乙素超分子药物：按本发明实施例1-4的方法制备，经HPLC检测，纯度98.6％；

灯盏花乙素：经HPLC检测，纯度98.1％；灯盏花乙素-α环糊精包合物：经HPLC检测，纯度98.3％；灯盏花乙素-β环糊精包合物：经HPLC检测，纯度97.8％；灯盏花乙素-γ环糊精包合物：经HPLC检测，纯度98.5％；各药物均由昆明制药集团股份有限公司研究院提供。

2、实验仪器及试剂

Agilent 1100series型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；AB204-N型电子天平(瑞士Mettler公司)；数显恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公司)；DZ-2BC型恒温箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；

HPLC用甲醇、四氢呋喃，色谱纯；其他试剂均为分析纯，水为去离子水。

3、实验方法

3.1、含量测定方法

采用HPLC法测定各供试样品的灯盏花乙素含量，色谱条件为：色谱柱为PhenomenexC18(4.6mm×250mm，5m)；流动相为甲醇一四氢呋喃一水(23：10：67)；检测波长为335nm；流速为1.0ml/min；进样量为10μl；柱温：25℃。

3.2、溶解度测定方法

取过量的供试药物样品各两份,置于250m L烧杯中,分别加入乙醇、蒸馏水各100mL,温度控制在25℃，充分搅拌，制成饱和溶液，取上清液,经0.45μm微孔滤膜过滤，取1mL的滤液用流动相稀释至100mL，分别量取各溶液10μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，根据标准曲线计算各药物样品的溶解度。结果见表1。

3.3、固体状态下的供试样品热稳定性考察

根据《中国药典》2010版附录ⅩⅨC原料药与药物制剂稳定性试验指导原则，对固体状态下的供试样品进行高温加速试验，以考察各供试样品固体状态下的热稳定性能。

具体方法为：将呈固体粉末的供试样品适量，放入安剖瓶中，在40℃、相对湿度为(75±5)％条件下加速度实验6个月，分别于实验开始时和实验结束时取样进行HPLC检测含量，计算药物受热降解率。药物受热降解率(％)＝(实验开始时样品药物含量-实验结束时样品药物含量)/实验开始时样品药物含量×100％。药物受热降解率越高，表明药物的耐热稳定性越差。结果见表2。

3.4、水溶液状态下的供试样品热稳定性考察

称取各供试药物样品，用蒸馏水配成浓度为10m g/L的水溶液，置于60℃的恒温水浴中连续加热24h,分别于实验开始时和实验结束时取样进行HPLC检测含量，计算药物受热降解率。药物受热降解率(％)＝(实验开始时样品药物含量-实验结束时样品药物含量)/实验开始时样品药物含量×100％。药物受热降解率越高，表明药物的耐热稳定性越差。结果见表3。

3.5、水溶液状态下供试样品的耐酸稳定性考察

称取各供试药物样品，用pH2.0的缓冲液配成浓度为10m g/L的水溶液，置于60℃的恒温水浴中连续加热24h,分别于实验开始时和实验结束时取样进行HPLC检测含量，计算药物受热降解率。药物受热降解率(％)＝(实验开始时样品药物含量-实验结束时样品药物含量)/实验开始时样品药物含量×100％。在酸性条件下，药物受热降解率越高，表明药物的耐酸稳定性越差。结果见表4。

3.6、水溶液状态下供试样品的耐碱稳定性考察

称取各供试药物样品，用pH12.0的缓冲液配成浓度为10m g/L的水溶液，置于60℃的恒温水浴中连续加热24h，分别于实验开始时和实验结束时取样进行HPLC检测含量，计算药物受热降解率。药物受热降解率(％)＝(实验开始时样品药物含量-实验结束时样品药物含量)/实验开始时样品药物含量×100％。在碱性条件下，药物受热降解率越高，表明药物的耐碱稳定性越差。结果见表5。

4、实验结果

4.1、溶解度测定结果

各供试药物样品的溶解度测定结果见表1。

表1溶解度测定结果(25℃，mg/L)

序号	样品名称	乙醇中溶解度	水中溶解度
				1	本发明灯盏花乙素超分子药物	3827.7	2499.4
2	灯盏花乙素	135.2	64.5
				3	灯盏花乙素-α环糊精包合物	420.8	205.3
4	灯盏花乙素-β环糊精包合物	469.7	231.9
				5	灯盏花乙素-γ环糊精包合物	503.7	251.6

由上实验结果可见，本发明灯盏花乙素超分子药物具有优良的水溶性和醇溶性，其水溶性和醇溶性不仅优于灯盏花乙素，也远优于灯盏花乙素的各种环糊精包合物。

4.2固体状态下供试样品的热稳定性实验结果

固体状态下供试样品的热稳定性实验结果见表2。

表2固体状态下热稳定性实验结果(40℃加速度6个月)

序号	样品名称	降解率(％)
			1	本发明灯盏花乙素超分子药物	0.57
2	灯盏花乙素	11.7
			3	灯盏花乙素-α环糊精包合物	9.8
4	灯盏花乙素-β环糊精包合物	9.3
			5	灯盏花乙素-γ环糊精包合物	8.6

由上实验结果可见，固体状态下，本发明灯盏花乙素超分子药物具有良好的耐热稳定性，其耐热稳定性不仅优于灯盏花乙素，也远优于灯盏花乙素的各种环糊精包合物。

4.3水溶液状态下供试样品的热稳定性实验结果

水溶液状态下供试样品的热稳定性实验结果见表3.

表3水溶液状态下的热稳定性实验结果(蒸馏水，60℃加热24h)

序号	样品名称	降解率％
			1	本发明灯盏花乙素超分子药物	0.46
2	灯盏花乙素	10.9
			3	灯盏花乙素-α环糊精包合物	9.2
4	灯盏花乙素-β环糊精包合物	8.9
			5	灯盏花乙素-γ环糊精包合物	8.1

由上实验结果可见，水溶液状态下，本发明灯盏花乙素超分子药物具有良好的耐热稳定性，其水溶液中的耐热稳定性不仅优于灯盏花乙素，也远优于灯盏花乙素的各种环糊精包合物。

4.4水溶液状态下供试样品的耐酸稳定性实验结果

水溶液状态下供试样品的耐酸稳定性实验结果见表4.

表4水溶液状态下的耐酸稳定性实验结果(pH 2.0，60℃加热24h)

序号	样品名称	降解率(％)
			1	本发明灯盏花乙素超分子药物	0.62
2	灯盏花乙素	17.5
			3	灯盏花乙素-α环糊精包合物	13.9
4	灯盏花乙素-β环糊精包合物	12.3
			5	灯盏花乙素-γ环糊精包合物	10.6

由上实验结果可见，水溶液状态下，本发明灯盏花乙素超分子药物具有良好的耐酸稳定性，其水溶液状态下的耐酸稳定性不仅优于灯盏花乙素，也远优于灯盏花乙素的各种环糊精包合物。

4.5水溶液状态下供试样品的耐碱稳定性实验结果

水溶液状态下供试样品的耐碱稳定性实验结果见表5.

表5水溶液状态下的耐碱稳定性实验结果(pH 12.0，60℃加热24h)

序号	样品名称	降解率(％)
			1	本发明灯盏花乙素超分子药物	0.93
2	灯盏花乙素	26.8
			3	灯盏花乙素-α环糊精包合物	24.2
4	灯盏花乙素-β环糊精包合物	22.7
			5	灯盏花乙素-γ环糊精包合物	20.5

由上实验结果可见，水溶液状态下，本发明灯盏花乙素超分子药物具有良好的耐碱稳定性，其水溶液状态下的耐碱稳定性不仅优于灯盏花乙素，也远优于灯盏花乙素的各种环糊精包合物。

6、结论

本实验表明，本发明的灯盏花乙素超分子药物具有良好的溶解性和稳定性，其溶解性和稳定性不仅优于灯盏花乙素，也远优于各种灯盏花乙素的环糊精包合物。

实施例6：生物利用度实验

1、供试药物样品

本发明灯盏花乙素超分子药物：按本发明实施例1-4的方法制备，经HPLC检测，纯度98.6％；

灯盏花乙素：昆明制药集团股份有限公司药物研究院提供，经HPLC检测，纯度98.1％；

灯盏花乙素-α环糊精包合物：昆明制药集团股份有限公司研究院提供，经HPLC检测，纯度98.3％；

灯盏花乙素-β环糊精包合物：昆明制药集团股份有限公司研究院提供，经HPLC检测，纯度97.8％；

灯盏花乙素-γ环糊精包合物:昆明制药集团股份有限公司研究院提供，经HPLC检测，纯度98.5％；

2、实验动物

健康SD雄性大鼠，昆明医科大学实验动物中心提供，雄性，体重20.1士2.5g。实验前，禁食12h，可自由饮水。

3、实验仪器及试剂

Agilent 1100series型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；AB204-N型电子天平(瑞士Mettler公司)。

HPLC用甲醇、四氢呋喃，色谱纯；其他试剂均为分析纯，水为去离子水。

4、实验方法

4.1含量测定方法

采用HPLC法测定各供试样品的灯盏花乙素含量，色谱条件为：色谱柱为PhenomenexC18(4.6mm×250mm，5m)；流动相为甲醇一四氢呋喃一水(23：10：67)；检测波长为335nm；流速为1.0ml/min；进样量为10μl；柱温：25℃。

4.2生物利用度测定方法

健康雄性大鼠50只,随机分为5组：本发明灯盏花乙素超分子药物组(50mg/k g)、灯盏花乙素组(50mg/k g)、灯盏花乙素-α环糊精包合物组(50mg/k g)、灯盏花乙素-β环糊精包合物组(50mg/k g)、灯盏花乙素-γ环糊精包合物组(50mg/k g)，每组10只。禁食12h,不禁水。每只大鼠一侧尾静脉给药后,分别于0.125，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，12.0，16.0，24.0h在另一侧尾静脉取血0.5mL，置肝素化的离心管中离心分离，取血浆测定血浆样品中的药物浓度，绘制静脉给药的血药浓度-时间曲线，计算静脉给药下的AUC值。

健康雄性大鼠50只,随机分为5组：本发明灯盏花乙素超分子药物组(50mg/k g)、灯盏花乙素组(50mg/k g)、灯盏花乙素-α环糊精包合物组(50mg/k g)、灯盏花乙素-β环糊精包合物组(50mg/k g)、灯盏花乙素-γ环糊精包合物组(50mg/k g)，每组10只。禁食12h,不禁水。每只大鼠灌胃给药后,分别于0.125，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，12.0，16.0，24.0h在尾静脉取血0.5mL，置肝素化的离心管中离心分离，取血浆测定血浆样品中的药物浓度，绘制灌胃给药的血药浓度-时间曲线，计算灌胃给药下的AUC值。

按下式计算各供试药物的口服绝对生物利用度：绝对生物利用度(％)＝灌胃给药下的AUC值/静脉给药下的AUC值×100％。结果见表6。

5实验结果

各供试药物的口服绝对生物利用度实验结果见表6.

表6口服绝对生物利用度实验结果

序号	样品名称	口服绝对生物利用度(％)
			1	本发明灯盏花乙素超分子药物	54.61
2	灯盏花乙素	2.51
			3	灯盏花乙素-α环糊精包合物	3.18
4	灯盏花乙素-β环糊精包合物	4.59
			5	灯盏花乙素-γ环糊精包合物	5.87

由以上实验结果可见，本发明灯盏花乙素超分子药物具有良好的口服生物利用度，其口服生物利用度不仅优于灯盏花乙素，也远优于灯盏花乙素的各种环糊精包合物。

实施例7：药物组合物

粉碎后过筛，混合后即得。

实施例8：药物组合物

粉碎后过筛，混合后即得。

实施例9：片剂

将本发明超分子药物、淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和，混合后于压片机上压片，即得。

实施例10：胶囊

将本发明超分子药物、淀粉、微晶纤维素和硬脂酸镁，混合后填充入硬明胶胶囊中，即得。

实施例11：注射液

本发明超分子药物 0.5％

氯化钠 9％

注射用水 90.5％

将本发明超分子药物加氯化钠及适量注射用水，搅拌均匀，加入0.1％针用活性碳，吸附，过滤脱碳，补加注射用水至规定量，微孔过滤膜过滤，按2mL/支灌封，100℃湿热灭菌20min，经灯检合格，即得。

实施例12：冻干粉针剂

将本发明超分子药物加乙醇搅拌溶解，加甘露醇及适量注射用水，搅拌均匀，加入0.1％针用活性碳，吸附，过滤脱碳，补加注射用水至规定量，微孔过滤膜过滤，按5mL/支分装，冷冻干燥，封装，经检验合格，即得。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种超分子药物，其特征在于，以丙三醇桥联-α，γ-双环糊精为主体分子，以灯盏花乙素为客体分子，客体分子灯盏花乙素的黄酮部分，以非共价键分子识别连接方式镶嵌进入主体分子一侧的α环糊精空腔内；客体分子灯盏花乙素的糖基部分，以非共价键分子识别连接方式镶嵌进入主体分子另一侧的γ环糊精空腔内；客体分子灯盏花乙素的糖上羧酸基与主体分子桥架上的醇羟基通过化学反应缩合成酯；

主体分子丙三醇桥联-α，γ-双环糊精具有如下列式I所示的结构：

其中，代表α-环糊精残基，代表γ-环糊精残基。

2.权利要求1所述超分子药物的制备方法，其特征在于，包括：

步骤1：称取丙三醇、α-环糊精、γ-环糊精制备获得丙三醇桥联-α，γ-双环糊精；

步骤2：称取灯盏花乙素、丙三醇桥联-α，γ-双环糊精和N,N-二甲基甲酰胺，搅拌反应并滴加磷酸氢二钠调节反应液pH至9～10，控制温度5-10℃继续搅拌反应2h；

然后滴加15％盐酸溶液调节pH2～4，然后控制温度70～80℃继续反应至TLC检测反应完全为止；反应体系降至室温后，倒入其8～10倍体积量的乙酸乙酯中搅拌，析出固体，过滤，固体干燥后获得所述灯盏花乙素超分子药物。

3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤1为：

步骤1.1：按摩尔比:1.0：1.0：3.0～5.0：0.1～0.3的比例称取丙三醇、α-环糊精、二甲基亚砜(DMSO)和焦磷酸，置于反应容器中，冰浴控制温度-10～0℃搅拌反应8h，至TLC检测反应完全为止；

步骤1.2：步骤1.1反应完全后，反应液逐步缓慢升温至45℃，边搅拌边缓慢投加与丙三醇等摩尔比例的γ-环糊精，加毕，控制反应温度于40～60℃继续搅拌反应4～5h，至TLC检测反应完全；

步骤1.3：将步骤1.2的反应液降至室温，倒入其5～6倍体积量的快速搅拌的乙酸乙酯中，析出固体，过滤，干燥固体获得丙三醇桥联-α，γ-双环糊精。

4.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤2为

按摩尔比为1.0:1.0：6.0～8.0的比例称取灯盏花乙素、丙三醇桥联-α，γ-双环糊精和N,N-二甲基甲酰胺，置于反应容器中，冰浴控制温度在-5℃以下，搅拌下滴加40％的磷酸氢二钠调节反应液pH值至9～10，控制温度5-10℃继续搅拌反应2h；

然后滴加15％盐酸溶液调节pH值为2～4，然后控制温度70～80℃继续反应4～5h,至TLC检测反应完全为止；

反应完全后，反应体系降至室温并倒入其8～10倍体积量的快速搅拌的乙酸乙酯中，析出固体，过滤，固体干燥获得本发明所述灯盏花乙素超分子药物。

5.权利要求1所述超分子药物在制备灯盏花乙素临床制剂中的应用。

6.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1所述超分子药物和药学上可接受辅料或载体。

7.一种灯盏花乙素临床制剂，其特征在于，包含权利要求6所述药物组合物。

8.根据权利要求7所述临床制剂，其特征在于，所述临床制剂为口服制剂或注射制剂。

9.根据权利要求8所述临床制剂，其特征在于，所述口服制剂为片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂或膏剂。

10.根据权利要求8所述临床制剂，其特征在于，所述注射制剂为粉针剂或注射液。